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重组腺相关病毒介导的大鼠脂联素载体的构建与鉴定 被引量:2
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作者 李强翔 钟惠菊 +4 位作者 盛杰 李果 张颖 申道君 王敏 《现代生物医学进展》 CAS 2008年第3期430-432,444,共4页
目的:克隆大鼠脂联素基因(Acrp30),并对载有脂联素的重组腺相关病毒(AAV)载体进行构建及鉴定。方法:根据Acrp30的基因序列设计引物,上游引入EcoRⅠ位点,下游引入SalⅠ位点,以EX-A0242-M01-Acrp30为模板扩增目的基因。将Acrp30基因克隆入... 目的:克隆大鼠脂联素基因(Acrp30),并对载有脂联素的重组腺相关病毒(AAV)载体进行构建及鉴定。方法:根据Acrp30的基因序列设计引物,上游引入EcoRⅠ位点,下游引入SalⅠ位点,以EX-A0242-M01-Acrp30为模板扩增目的基因。将Acrp30基因克隆入pUC19载体中,获得重组质粒pUC19-Acrp30。然后用EcoRⅠ与SalⅠ酶切pUC19-Acrp30及质粒pSNAV,回收酶切片段,T4DNA连接酶16℃过夜,转化大肠杆菌DH5α感受肽细胞,筛选阳性克隆获得pSNAV-Acrp30,EcoRⅠ/Sal双酶切鉴定,并行全基因测序。结果:PCR电泳及酶切鉴定表明,pSNAV-Acrp30重组成功,基因测序显示装入pSNAV质粒中的Acrp30基因正确。结论:脂联素病毒载体成功构建,可以满足脂联素基因研究和治疗的需要。 展开更多
关键词 基因 脂联素 腺相关病毒
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NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因重组腺相关病毒载体的构建及鉴定 被引量:1
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作者 汤小江 平宝华 +2 位作者 潘承恩 杨广笑 王全颖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1143-1146,共4页
目的:设计构建融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒表达载体。方法:应用非对称引物/模板法,PCR技术制备Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片段,通过连接pGEM-T-Easy载体及PBV220-NT4质粒,转化感受态细胞,获得NT4-Ant-Shepherdin... 目的:设计构建融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒表达载体。方法:应用非对称引物/模板法,PCR技术制备Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片段,通过连接pGEM-T-Easy载体及PBV220-NT4质粒,转化感受态细胞,获得NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因,连接腺相关病毒穿梭质粒pSSHG-CMV,采用磷酸钙沉淀法三质粒共转染HEK-293细胞获取重组腺相关病毒,Dot-blot法测定重组病毒滴度,MTT比色法观察重组腺相关病毒对A549细胞存活率的影响。结果:合成Ant-Shepherdin[79-87]基因,连接PBV220-NT4,经克隆、酶切,琼脂糖凝胶电泳证实获得321bp的NT4-Ant-Shepherdin[79-87]目的基因;得到高滴度的(3.4×1013pfu/L)重组腺相关病毒表达载体;带有融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒对A549细胞具有强烈的诱导凋亡作用。结论:成功构建了NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因的重组腺相关病毒表达载体,为进一步研究针对Survivin的靶向抗肿瘤作用奠定了基础。 展开更多
关键词 SURVIVIN ANT NT4 融合基因 重组腺相关病毒
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Neuropeptide Y gene transfection inhibits post-epileptic hippocampal synaptic reconstruction 被引量:2
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作者 Fan Zhang Wenqing Zhao +5 位作者 Wenling Li Changzheng Dong Xinying Zhang Jiang Wu Na Li Chuandong Liang 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2013年第17期1597-1605,共9页
Exogenous neuropeptide Y has antiepileptic effects; however, the underlying mechanism and optimal administration method for neuropeptide Y are still unresolved. Previous studies have used intracerebroventricular injec... Exogenous neuropeptide Y has antiepileptic effects; however, the underlying mechanism and optimal administration method for neuropeptide Y are still unresolved. Previous studies have used intracerebroventricular injection of neuropeptide Y into animal models of epilepsy. In this study, a recombinant adeno-associated virus expression vector carrying the neuropeptide Y gene was injected into the lateral ventricle of rats, while the ipsilateral hippocampus was injected with kainic acid to establish the epileptic model. After transfection of neuropeptide Y gene, mossy fiber sprouting in the hippocampal CA3 region of epileptic rats was significantly suppressed, hippocampal synaptophysin (p38) mRNA and protein expression were inhibited, and epileptic seizures were reduced. These experimental findings indicate that a recombinant adeno-associated virus expression vector carrying the neuropeptide Y gene reduces mossy fiber sprouting and inhibits abnormal synaptophysin expression, thereby suppressing post-epileptic synaptic reconstruction. 展开更多
关键词 neural regeneration gene therapy neural plasticity NEURODEGENERATION recombinantadeno-associated virus vector neuropeptide Y epilepsy kainic acid synaptic remodeling mossyfiber sprouting hippocampus SYNAPTOPHYSIN NEUROREGENERATION
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