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Animal experiment and clinical study of effect of gamma-interferon on hepatic fibrosis 被引量:53
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作者 Hong Lei Weng Wei Min Cai Rong Hua Liu Institute of Infectious Diseases, First Affiliated Hospital. Medical School. Zhejiang University, Hangzhou 310003, Zhejiang Province. China 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2001年第1期42-48,共7页
AIM: To evaluate the antifibrotic effect of different doses of recombinant human Gamma-Interferon (IFN-gamma) in two rat models of hepatic fibrosis, and to observe its effect on moderate chronic hepatitis B virus fibr... AIM: To evaluate the antifibrotic effect of different doses of recombinant human Gamma-Interferon (IFN-gamma) in two rat models of hepatic fibrosis, and to observe its effect on moderate chronic hepatitis B virus fibrosis. METHODS: Hepatic fibrosis was successfully induced in 150 and 196 rats by subcutaneous injection of carbon tetrachloride (CCl4) and intraperitoneal injection of dimethylnitrosamine (DMN), respectively. Each of the two model groups was divided into: (1) fibrotic model group; (2) colchicine treatment group (0.1 mg/kg/day, gastrogavage for 8 weeks); (3) high-dose IFN-gamma group (15 MU/kg per day, i.m. for 8 weeks); (4) medium-dose IFN-gamma group (5 MU/kg daily, i.m. for 8 weeks); and (5) Y low-dose IFN-gamma group (1.67 MU/kg daily, i.m. for 8 weeks). Another group of 10 rats without any treatment was used as normal controls. At the end of the experiment, semi-quantitative histopathological scores of inflammation and fibrosis, liver alpha smooth muscle actin (alpha-SMA) expression level, liver hydroxyl proline content and serum hyaluronic acid levels were compared. And 47 medium chronic hepatitis B viral fibrosis patients were studied. They were given IFN-gamma treatment, 100 MU/day i.m. for the first three months and 100 MU qod i.m. for the next six months. Semi-quantitative pathological scores of inflammation and fibrosis and serum hepatic fibrosis indices were compared within the 9 months. RESULTS: In animal experiment, the pathological fibrosis scores and liver hydroxyl proline content were found to be significantly lower in rats treated with different doses of IFN-gamma as compared with rats in fibrotic model group induced by either CCl4 or DMN, in a dose-dependent manner. For CCl4-induced model, pathological fibrosis scores in high, medium and low doses IFN-gamma groups were 5.10 +/- 2.88, 7.70 +/- 3.53 and 8.00 +/- 3.30, respectively, but the score was 14.60 +/- 7.82 in fibrotic model group. Hydroxyl proline contents were 2.83 +/- 1.18, 3.59 +/- 1.22 and 4.80 +/- 1.62, in the three IFN-ga 展开更多
关键词 Animals Antineoplastic Agents dosage Biopsy Carbon Tetrachloride DIMETHYLNITROSAMINE Disease Models Animal Female Hepatitis B Chronic Humans Hyaluronic Acid HYDROXYPROLINE Interferon-gamma recombinant Liver Liver Cirrhosis Liver Function Tests Male RATS Rats Sprague-Dawley
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HIV分子流行病学研究和实践进展 被引量:56
2
作者 钟平 《新发传染病电子杂志》 2019年第3期137-144,共8页
本文系统地综述了近年来国内外艾滋病分子流行病学研究和实践方面的进展,主要从三个方面阐述了全球和中国HIV-1基因亚型和新型重组型病毒演变的现状、特点和趋势,以及正在发展的可助力于精准干预艾滋病流行的分子传播网络的最新研究进展... 本文系统地综述了近年来国内外艾滋病分子流行病学研究和实践方面的进展,主要从三个方面阐述了全球和中国HIV-1基因亚型和新型重组型病毒演变的现状、特点和趋势,以及正在发展的可助力于精准干预艾滋病流行的分子传播网络的最新研究进展,包括全球HIV-1亚型多样性和分布地域性、我国HIV-1亚型此消彼长、新型重组病毒频繁发生和HIV分子传播网络研究进入实践阶段。本文明确指出了HIV-1亚型和重组病毒多样性是阻碍遏制HIV流行的关键因素,并强调了基于分子簇的精准干预在助力控制艾滋病流行中的重要意义。本文将为从事艾滋病防治事业的公共卫生专业人员、医生以及实验室工作人员提供较新的信息,供读者进一步学习和参考。 展开更多
关键词 HIV/AIDS 分子流行病学 基因亚型 重组病毒 分子传播网络
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表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5的重组伪狂犬病毒TK^-/gG^-/GP5^+的构建及其生物学特性初步探讨 被引量:26
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作者 方六荣 肖少波 +3 位作者 江云波 牛传双 张辉 陈焕春 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期249-254,共6页
以伪狂犬病毒基因缺失标志疫苗株TK-/gG-/LacZ+为亲本株,通过同源重组,构建了表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要免疫原性蛋白GP5的重组伪狂犬病毒TK-/gG-/GP5+。经PCR、Southern杂交、Westernblot证实构建正确,并能表达GP5。同时,... 以伪狂犬病毒基因缺失标志疫苗株TK-/gG-/LacZ+为亲本株,通过同源重组,构建了表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要免疫原性蛋白GP5的重组伪狂犬病毒TK-/gG-/GP5+。经PCR、Southern杂交、Westernblot证实构建正确,并能表达GP5。同时,对重组病毒在PK-15细胞中的增殖特性进行了检测,结果与亲本株相比,增殖滴度无显著性差异。将重组病毒免疫BALB/c小鼠,2次免疫后4周,50%(3/6)小鼠产生了低水平的GP5特异性ELISA抗体,但中和抗体均小于1:4。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 猪繁殖与呼吸综合征 生物学特性 重组病毒 表达
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Isolation of recombinant field strains of Marek's disease virus integrated with reticuloendotheliosis virus genome fragments 被引量:24
4
作者 ZHANG Zhi CUI Zhizhong 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2005年第1期81-88,共8页
Two Marek's disease virus (MDV) field strains were isolated from chickens with tumors independently from Guangdong and Guangxi provinces, and it was confirmed that there were no co-infections with reticuloendothel... Two Marek's disease virus (MDV) field strains were isolated from chickens with tumors independently from Guangdong and Guangxi provinces, and it was confirmed that there were no co-infections with reticuloendotheliosis viruses (REV) in chicken embryo fibroblast cells (CEF) in indirect fluorescence antibody test (IFA) with REV-specific monoclonal antibodies. By dot blot hybridization and PCR of genomic DNA of MDV-infected CEF, it was indicated that LTR fragments of REV genome were integrated into genome of these two MDV field strains. To amplify and clone the integrated REV LTR with MDV sequence at the junction, 4 primers from REV LTR and 7 primers from MDV genome fragment with REV LTR insertion hot points were synthesized and 28 (4x7) pairs of primers (one from REV and another from MDV for each pair) were used in PCR while using the genomic DNA of both strains as the templates. The sequence data demonstrated that both recombinant field strains contained the same REV LTR inserted into MDV at the identical sites in US fragment of the genomes. From the above, it was speculated that both recombinant field MDVs were originated from a same recombinant virus and spread among chicken flocks in two provinces. 展开更多
关键词 RETICULOENDOTHELIOSIS virus Marek's disease viruses recombinant field strain.
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羊痘病毒载体研究进展 被引量:20
5
作者 朱学亮 张强 +1 位作者 杨帆 才学鹏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第5期98-101,共4页
羊痘病毒能引起山羊痘、绵羊痘和牛的结节性疹块病。羊痘病毒基因组较大,可容纳较大的外源基因。重组病毒载体是当今病毒基因工程研究的热点之一,目前以动物病毒为基础设计的基因克隆及表达载体主要有取代型的重组病毒载体和重组的病毒... 羊痘病毒能引起山羊痘、绵羊痘和牛的结节性疹块病。羊痘病毒基因组较大,可容纳较大的外源基因。重组病毒载体是当今病毒基因工程研究的热点之一,目前以动物病毒为基础设计的基因克隆及表达载体主要有取代型的重组病毒载体和重组的病毒-质粒载体。作者综述了羊痘病毒载体构建策略和羊痘病毒活载体疫苗研究的最新进展。 展开更多
关键词 羊痘病毒 转移载体 重组病毒 载体 疫苗
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猪流行性腹泻病毒S基因片段的原核表达及其表达产物的反应原性 被引量:16
6
作者 姜艳平 葛俊伟 +4 位作者 汪淼 乔薪瑗 唐丽杰 刘兆磊 李一经 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期602-607,共6页
为了筛选反应原性较好的猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因片段,利用生物学软件对PEDV S基因进行了抗原位点分析,在不破坏线性抗原位点的前提下将S基因分为连续的4段进行表达,Western-blot检测表明,S1、Ps420、S2、S3蛋白都有很好的抗原性。... 为了筛选反应原性较好的猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因片段,利用生物学软件对PEDV S基因进行了抗原位点分析,在不破坏线性抗原位点的前提下将S基因分为连续的4段进行表达,Western-blot检测表明,S1、Ps420、S2、S3蛋白都有很好的抗原性。纯化这4种蛋白,并免疫家兔,分别制备了S1、Ps420、S2、S3抗血清,间接ELISA检测结果显示,这4种抗血清都能识别细胞培养的PEDV,其中S1抗血清的反应性最好,其P/N值达到8.01,其次为Ps420抗血清。免疫荧光试验表明,S1、Ps420抗血清能识别天然的PEDV病毒粒子。提示,S1、Ps420抗血清在病原检测诊断中有一定的潜在应用价值。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 重组蛋白 病毒检测 诊断试剂
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乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒的构建 被引量:12
7
作者 徐高原 王祥 +4 位作者 陈焕春 徐晓娟 李自力 何启盖 吴斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期192-197,共6页
设计1对引物从含有乙型脑炎病毒NS1基因的质粒pNS1上亚克隆NS1基因,将NS1基因插入到中间转移载体pUSK中,获得重组中间转移质粒pUSK NS1。将pUSK NS1与伪狂犬病毒Ea株TK /gG /LacZ+突变株基因组共转染真核细胞IBRS 2,通过空斑纯化得到了... 设计1对引物从含有乙型脑炎病毒NS1基因的质粒pNS1上亚克隆NS1基因,将NS1基因插入到中间转移载体pUSK中,获得重组中间转移质粒pUSK NS1。将pUSK NS1与伪狂犬病毒Ea株TK /gG /LacZ+突变株基因组共转染真核细胞IBRS 2,通过空斑纯化得到了乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒株TK /gG /NS1+。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的NS1蛋白。该重组病毒可作为猪乙型脑炎和伪狂犬病双价基因工程疫苗用毒株。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 NS1基因重组 伪狂犬病毒 中间转移载体
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表达狂犬病毒糖蛋白基因复制缺陷型重组腺病毒的构建及其特性 被引量:8
8
作者 李文辉 张云 +2 位作者 王树惠 刘力 杨帆 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期650-654,共5页
目的构建表达狂犬病毒CVS-N2C毒株糖蛋白(GP)基因的复制缺陷型重组腺病毒,作为筛选狂犬病毒基因工程疫苗的基础。方法用大肠杆菌细胞内同源重组技术构建重组病毒;NorthernblotWesternblot和免疫荧光抗体等方法鉴定重组病毒。结果重组病... 目的构建表达狂犬病毒CVS-N2C毒株糖蛋白(GP)基因的复制缺陷型重组腺病毒,作为筛选狂犬病毒基因工程疫苗的基础。方法用大肠杆菌细胞内同源重组技术构建重组病毒;NorthernblotWesternblot和免疫荧光抗体等方法鉴定重组病毒。结果重组病毒具有典型的病毒形态;病毒基因组稳定;GP基因可被转录;重组病毒表达的GP蛋白相对分子质量为66000,与天然GP相对分子质量相符表达的GP蛋白可被兔抗狂犬病毒免疫血清特异性识别;小鼠免疫-攻击试验可保护87.5%~100%动物。结论成功地构建了表达狂犬病毒CVS-N2C毒株GP基因的复制缺陷型重组腺病毒,并表现了良好的免疫效果。 展开更多
关键词 重组腺病毒 狂犬病毒 CVS-N2C 复制缺陷型
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带BAC质粒的重组伪狂犬病毒的构建及其体外生长特性研究 被引量:15
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作者 彭金美 王瑜 +4 位作者 田志军 周艳君 陈瑾 安同庆 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期10-15,共6页
本研究通过基因克隆技术以伪狂犬病病毒(PRV)弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源重组序列,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记,构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载... 本研究通过基因克隆技术以伪狂犬病病毒(PRV)弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源重组序列,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记,构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载体pUCTK-EGFP-BACII。将PRV基因组和转移载体共转染Vero细胞,利用同源重组在Bartha K61株的TK基因中插入了BAC质粒和绿色荧光蛋白筛选标记,经过11轮噬斑纯化和鉴定证实获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC。通过噬斑试验和一步生长曲线测定等方法对重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC的生长特性进行研究,结果发现带有BAC质粒及筛选标记的重组病毒rv-PRVBAC在体外细胞培养中的增殖速度与亲本毒Bartha K61株相比没有明显差别,说明大的基因片段的插入没有影响重组病毒在体外的繁殖速度。重组病毒rv-PRVBAC在Vero细胞上盲传18代,其绿色荧光蛋白仍能够稳定表达,通过PCR鉴定可以检测到插入的外源片段和插入位点两侧的病毒基因序列,表明所获得的重组病毒rv-PRVBAC得到了稳定遗传。本研究成功获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC,为进一步开展PRV的细菌人工染色体的构建奠定了基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 Bartha K61株 BAC 重组病毒
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粉纹夜蛾核型多角体病毒(TnNPV)p35基因功能的研究 被引量:11
10
作者 施先宗 王珣章 +4 位作者 龙綮新 吴文言 李迎秋 曲士芮 陈曲侯 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期78-83,共6页
细胞凋亡(Apoptosis)或细胞程序性死亡(Programmedceldeath,PCD),最早被定义为一种有秩序、受控制并按某种预定程序发展的生理性自然死亡过程〔1〕。诱导细胞发生凋亡的因素很多,而病毒感染是常... 细胞凋亡(Apoptosis)或细胞程序性死亡(Programmedceldeath,PCD),最早被定义为一种有秩序、受控制并按某种预定程序发展的生理性自然死亡过程〔1〕。诱导细胞发生凋亡的因素很多,而病毒感染是常见的导致细胞凋亡的重要因素之一。由... 展开更多
关键词 TnNPV P53基因 重组病毒
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表达小鹅瘟病毒VP2蛋白重组鸭瘟病毒的构建及其生物学特性 被引量:14
11
作者 陈柳 余斌 +4 位作者 倪征 华炯钢 叶伟成 云涛 张存 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第14期2813-2821,共9页
【目的】鸭瘟和小鹅瘟是番鸭和鹅的两种重要传染病,鸭瘟最主要的防治措施是定期接种鸭瘟病毒减毒活疫苗。根据2012年国际病毒分类委员会(ICTV)的报告,DEV被归为疱疹病毒科的α疱疹病毒亚科马立克氏病毒属。疱疹病毒如伪狂犬病毒、马立... 【目的】鸭瘟和小鹅瘟是番鸭和鹅的两种重要传染病,鸭瘟最主要的防治措施是定期接种鸭瘟病毒减毒活疫苗。根据2012年国际病毒分类委员会(ICTV)的报告,DEV被归为疱疹病毒科的α疱疹病毒亚科马立克氏病毒属。疱疹病毒如伪狂犬病毒、马立克氏病毒、火鸡疱疹病毒等已广泛用于病毒活载体的研究,而近几年也有关于鸭瘟病毒(DEV)作为疫苗活载体的报道。为了为免疫防控鸭瘟和小鹅瘟提供新手段,本研究拟在鸭瘟病毒疫苗株感染性克隆的基础上,构建表达小鹅瘟病毒(GPV)主要免疫原蛋白VP2的重组病毒rDEV-VP2,并研究其生物学特性,进而探讨重组病毒rDEV-VP2作为防治DEV和GPV的二联重组活载体疫苗的可能性。【方法】将密码子优化的GPV VP2基因通过常规基因克隆的方法插入转移载体p EP-BGH-end,构建含有GPV VP2表达框p CMV-VP2-BGH-p A的重组表达质粒。在鸭瘟病毒(DEV)疫苗株细菌人工染色体克隆pDEV-EF1的基础上,通过"Red E/T"两步重组法将GPV VP2基因表达框插入到DEV US7和US8基因之间构建了突变体克隆pDEV-VP2。利用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)拯救获得重组病毒rDEV-VP2和删除Bac质粒序列的rDEV-VP2-Cre,并对重组病毒细胞体外生长曲线、蚀斑大小和VP2蛋白表达情况进行测定。将rDEV-VP2接种番鸭,在不同时间采集血清,采用间接ELISA法检测血清中GPV VP2抗体产生情况。【结果】间接免疫荧光检测和Western blot分析表明,外源蛋白VP2在CEFs细胞成功表达。病毒生长曲线和蚀斑大小测定结果显示,rDEV-VP2在CEFs细胞上的增殖滴度与亲本株相比无显著差异,表明外源基因VP2的插入不影响rDEV重组病毒的增殖。动物试验结果表明,7日龄雏番鸭接种rDEV-VP2可以诱导产生针对GPV VP2的抗体,免疫后3周抗体阳性率为50%(4/8)。【结论】将小鹅瘟病毒的主要免疫原基因VP2插入到DEV疫苗株基因组的US7和US8基因间 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 鹅细小病毒 VP2 重组病毒
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表达H5N1亚型禽流感病毒HA和NA基因的重组鸭瘟病毒的构建 被引量:11
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作者 胡潇 高轩 +2 位作者 王明杰 赵冬凤 李明义 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第5期22-25,共4页
利用PCR技术扩增出鸭瘟病毒(DPV)生长非必需的TK基因(约1.1kb),将其克隆入pGEM-Teasy载体获得载体pGTK。根据已知的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1的序列设计了一对引物,PCR扩增出pEGFP-C1上含CMV启动子、EGFP及其多克隆位点的完整的基因表... 利用PCR技术扩增出鸭瘟病毒(DPV)生长非必需的TK基因(约1.1kb),将其克隆入pGEM-Teasy载体获得载体pGTK。根据已知的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1的序列设计了一对引物,PCR扩增出pEGFP-C1上含CMV启动子、EGFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入pGTK的TK上,获得质粒pGTK-EGFP。根据Genbank已发表的H5N1亚型禽流感病毒的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因序列,设计了两对引物,分别从pT-HA和pT-NA两个质粒上扩增出HA和NA基因,克隆到pGTK-EGFP的表达盒的多克隆位点Kpn2I与SmaI之间,构建含EGFP及HA和NA基因的转移质粒载体pGTK-EGFP-HA-NA。将这质粒载体与DPV34F2疫苗毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过荧光方法筛选,获得了表达HA和NA基因的重组DPV(rDPV-HA-NA)。 展开更多
关键词 禽流感病毒 鸭瘟病毒 TK基因 HA和NA基因 重组病毒
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表达猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因的重组猪伪狂犬病病毒的免疫原性 被引量:13
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作者 钞安军 付朋飞 +3 位作者 郭晓庆 高晓云 崔保安 陈红英 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期211-217,共7页
【目的】为研制预防猪圆环病毒II型(PCV2)感染的重组伪狂犬病病毒(PRV)活载体疫苗。【方法】将PCV2 ORF2基因插入到PRV通用载体pG中,利用脂质体LipofectamineTM2000试剂盒将重组转移质粒pGO与猪PRV弱毒HB98株DNA共转染猪睾丸(ST)细胞,通... 【目的】为研制预防猪圆环病毒II型(PCV2)感染的重组伪狂犬病病毒(PRV)活载体疫苗。【方法】将PCV2 ORF2基因插入到PRV通用载体pG中,利用脂质体LipofectamineTM2000试剂盒将重组转移质粒pGO与猪PRV弱毒HB98株DNA共转染猪睾丸(ST)细胞,通过3轮蚀斑纯化重组病毒。将重组病毒、商品化PCV2灭活苗及DMEM培养液分别免疫6周龄雌性昆明小鼠,4周后加强免疫1次,首免后第8周用PCV2强毒NY株对小鼠进行攻毒。【结果】成功获得表达ORF2基因的重组病毒PGO,首免重组病毒后小鼠体内抗PCV2的ELISA抗体水平很低,二免后小鼠PCV2特异的ELISA抗体水平明显升高,并且重组病毒组能够激发PCV2特异的淋巴细胞增殖效应。攻毒试验表明重组病毒组和PCV2灭活疫苗组均能有效抵抗PCV2强毒攻击。【结论】表明表达ORF2基因的重组病毒PGO具有良好免疫原性。 展开更多
关键词 猪圆环病毒II型 ORF2基因 伪狂犬病病毒 重组病毒 免疫效力
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含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒的构建 被引量:11
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作者 罗燕 郭万柱 +5 位作者 徐志文 刘艳丽 殷华平 王新 王小玉 苟琳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1064-1068,共5页
将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2.EGFP中,构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2.EGFP.VP2。采用磷酸钙转染系统,将pPI-2.EGFP.VP2DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察... 将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2.EGFP中,构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2.EGFP.VP2。采用磷酸钙转染系统,将pPI-2.EGFP.VP2DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察、Dot-blot核酸杂交筛选得到几株重组病毒,将其中一株(命名为SA215-B)DNA用BamHⅠ酶切和Southern转印杂交进一步验证重组病毒构建成功,并通过SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹检测表明PPV VP2基因在重组病毒内获得表达,产生大小约93 ku的融合蛋白,同时融合蛋白中的PPV VP2结构蛋白仍然保持了原有的反应原性,表明成功构建了含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 猪细小病毒 VP2基因 EGFP 重组病毒
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应用Cre-loxP系统构建伪狂犬病病毒gE/TK双缺失株 被引量:12
15
作者 梁苑燕 胡艳芬 +3 位作者 张小荣 陈素娟 彭大新 刘秀梵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1802-1809,共8页
为了构建无报告基因的猪伪狂犬病病毒(PRV)gE/TK双缺失株,以PRV-JSZ株为亲本毒株,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,先构建出带有loxP位点的rPRV-gE-/GFP,通过Cre重组酶处理后,获得剔除EG-FP的gE单缺失株rPRV-gE-;再以rPRV-gE-为母本... 为了构建无报告基因的猪伪狂犬病病毒(PRV)gE/TK双缺失株,以PRV-JSZ株为亲本毒株,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,先构建出带有loxP位点的rPRV-gE-/GFP,通过Cre重组酶处理后,获得剔除EG-FP的gE单缺失株rPRV-gE-;再以rPRV-gE-为母本,以相同方法构建gE/TK双缺失株rPRV-gE-/TK-。荧光检测和PCR结果显示成功构建了gE单缺失株和gE/TK双缺失株;病毒生长曲线测定可见rPRV-gE-在PK15细胞上的增殖速度与野生株相似,而rPRV-gE-/TK-较为缓慢;rPRV-gE-/TK-对小鼠的半数致死量大于1×105 TCID50,显著高于rPRV-gE-和野生株;缺失株免疫小鼠强毒攻击后能提供80%的保护。这些结果表明以Cre/loxP系统可重复使用构建伪狂犬病病毒多基因缺失株,为研制伪狂犬病病毒基因缺失苗和载体疫苗提供了快速筛选的技术平台。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 GE基因 TK基因 重组病毒
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带有REV-LTR片段的马立克氏病病毒重组野毒株与超强毒株致病性和横向传播性比较 被引量:12
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作者 许晓云 孙爱军 +1 位作者 崔言顺 崔治中 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期540-543,共4页
【目的】GX0101是一株插入了禽网状内皮组织增生症病病毒(REV)-LTR片段的马立克氏病病毒(MDV)重组野毒株,本文将其致病性、致肿瘤性和横向传播能力与超强毒参考株(vvMd5)进行比较。【方法】利用MDV特异性核酸探针对同罩饲养的对照鸡的... 【目的】GX0101是一株插入了禽网状内皮组织增生症病病毒(REV)-LTR片段的马立克氏病病毒(MDV)重组野毒株,本文将其致病性、致肿瘤性和横向传播能力与超强毒参考株(vvMd5)进行比较。【方法】利用MDV特异性核酸探针对同罩饲养的对照鸡的羽毛囊DNA进行检测。【结果】在经抗MDV疫苗免疫的SPF鸡攻毒试验中表明,GX0101株的致死率28.6%和致肿瘤率7.1%均低于超强毒参考株Md5的致死率63.1%和致肿瘤率19.0%。但是,利用MDV特异性核酸探针对同罩饲养的对照鸡的羽毛囊DNA检测表明,GX0101从攻毒后第28天就有6/15的比例从羽毛囊中检出MDV,而与vvMd5接种鸡同一隔离罩的对照鸡,在35d时才在2/14的个体中检出MDV,即GX0101的横向传播能力大于超强毒株。这一结果表明,MDV的致病性不一定与横向传播力相平行。【结论】由此推测,显著增高的横向传播能力可能就是这一整合进REV-LTR的重组病毒株能在鸡群中逐渐流行开来的选择性竞争优势之一。 展开更多
关键词 马立克氏病毒 重组病毒 致病性 横向传播 斑点杂交
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Specific cellular immune responses in mice immunized with DNA,adeno-associated virus and adenoviral vaccines of Epstein-Barr virus-LMP2 alone or in combination 被引量:10
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作者 WANG Zhan YANG SongMei +3 位作者 ZHOU Ling DU HaiJun MO WuNing ZENG Yi 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2011年第3期263-266,共4页
Cellular immune responses,particularly those associated with CD3+CD8+ cytotoxic T lymphocytes (CTL),are critical factors in controlling viral infection.Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is closely associated with persist... Cellular immune responses,particularly those associated with CD3+CD8+ cytotoxic T lymphocytes (CTL),are critical factors in controlling viral infection.Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is closely associated with persistent Epstein-Barr virus (EBV) infection.NPC vaccine studies have focused on enhancing specific antiviral CTL responses.In this study,three vaccines capable of expressing the EBV-latent membrane protein 2 (LMP2) (a DNA vector,an adeno-associated virus (AAV) vector,and a replication-defective adenovirus serotype 5 (Ad5) vector) were respectively used to immunize female Balb/c mice (4-6 weeks old) at weeks 0,2 and 4,either alone or in combination.Our results suggest that combined immunization with DNA,AAV,and adenovirus vector vaccines induced specific cellular immunity more effectively than any of these vectors alone or a combination of two of the three,constituting a sound vaccine strategy for the prevention and treatment of NPC. 展开更多
关键词 EBV-LMP2 DNA vaccine recombinant adenovirus vaccine recombinant adeno-associated virus vaccine combinatorial immunization specific cell-mediated immune responses
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伪狂犬病毒UL14基因缺失突变株的构建及其生物学特性研究 被引量:10
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作者 张辉 方六荣 +4 位作者 赵骞 薛念波 江云波 肖少波 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期369-375,共7页
UL14在α-疱疹病毒中相当保守,但其在伪狂犬病毒中的功能尚不清楚。本研究以伪狂犬病毒鄂A株(PRV-Ea)为亲本株,通过同源重组,将编码EGFP的真核表达盒插入到伪狂犬病毒基因组的UL14基因中,PCR检测和荧光观察证实获得了能稳定表达EGFP的U... UL14在α-疱疹病毒中相当保守,但其在伪狂犬病毒中的功能尚不清楚。本研究以伪狂犬病毒鄂A株(PRV-Ea)为亲本株,通过同源重组,将编码EGFP的真核表达盒插入到伪狂犬病毒基因组的UL14基因中,PCR检测和荧光观察证实获得了能稳定表达EGFP的UL14插入失活突变株PRV-UL14D。将PRV-UL14D感染IBRS-2细胞,发现该突变株较PRV-Ea野毒株增殖缓慢,而且PRV-UL14D突变株感染细胞后形成的蚀斑也明显小于PRV-Ea野毒株,但在稳定表达UL14的IBRS-2细胞系中,PRV-UL14D与PRV-Ea野毒株的增殖速度、形成的蚀斑大小均无明显差异。进一步将PRV-UL14D感染BALB/c小鼠,发现与相同剂量的PRV-Ea野毒株感染相比,小鼠平均死亡时间明显延缓。上述研究结果表明,UL14并非伪狂犬病毒增殖必需的,但其缺失可延缓病毒增殖,推测UL14可能与病毒粒子在细胞间的扩散有关。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 UL14 突变株 生物学特性
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重组猪瘟病毒C株E2蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建及鉴定 被引量:10
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作者 高飞 曲泽慧 +7 位作者 姜一峰 李丽薇 虞凌雪 周艳君 杨莘 夏天奇 郑海红 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第5期1-9,共9页
本研究在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)弱毒株(Hu N4-F112)感染性克隆的基础上,在其基因组ORF1b和ORF2之间插入(classical swine fever,CSF)疫苗毒C株的E2基因,并在E2基因3'... 本研究在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)弱毒株(Hu N4-F112)感染性克隆的基础上,在其基因组ORF1b和ORF2之间插入(classical swine fever,CSF)疫苗毒C株的E2基因,并在E2基因3'端下游插入PRRSV的转录调控序列6(transcription regulatory sequence 6,TRS6),构建成重组全长感染性克隆(p A-C-E2)。用SwaI线性化该质粒,并体外转录后,将RNA转染MARC-145细胞并传代1次,即可拯救出重组病毒vA-C-E2,在至少20代的传代过程中能够保持遗传稳定性。重组病毒与亲本病毒vHu N4-F112在病毒滴度、空斑形态、蛋白表达等方面没有明显差异;多步生长曲线结果显示,该重组病毒与亲本毒具有相似的生长特性。间接免疫荧光(indirect immunofl uorescence,IFA)结果显示,重组病毒不仅能够表达PRRSV N蛋白,也可以表达猪瘟病毒E2蛋白。本研究结果为研制CSF和PRRS新型基因重组疫苗奠定了坚实物质基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 重组病毒 E2蛋白
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猪伪狂犬病毒浙江株感染性细菌人工染色体克隆的构建 被引量:9
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作者 尹文玲 尹龙勃 +5 位作者 叶伟成 孙学强 姚火春 张淼涛 王一成 张存 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期330-335,共6页
通过同源重组将携带细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)载体和GFP表达框的pHA2质粒序列插入到PRV病毒的UL23(TK)基因内,获得了重组病毒rPRV-HA2;将该重组病毒的环状基因组电转化到感受态细胞EscherichiacoliDH10B,筛... 通过同源重组将携带细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)载体和GFP表达框的pHA2质粒序列插入到PRV病毒的UL23(TK)基因内,获得了重组病毒rPRV-HA2;将该重组病毒的环状基因组电转化到感受态细胞EscherichiacoliDH10B,筛选到病毒的感染性克隆PRV BAC(pPRV)。pPRV转染VeroE6细胞可以重新启动病毒的生产性感染,该拯救病毒的细胞病变和体外增殖特性与rPRV-HA2一致。病毒生长曲线表明TK基因的部分删除和BAC载体的插入不会影响病毒在体外的复制。PRV感染性BAC克隆的成功构建,将方便在大肠杆菌内对病毒基因组进行快速、准确的操作,为进一步开展PRV基因功能和病毒载体研究奠定基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 细菌人工染色体 感染性克隆 重组病毒
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