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表达H5亚型禽流感病毒HA基因重组火鸡疱疹病毒的构建 被引量：8
1
作者 高宏博 崔红玉 +9 位作者 石星明 赵妍 赵晓岩 全炎铭 董鹏 闫帅 黄婷婷 杨瑞 王玫 王云峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期329-333,共5页
为构建表达禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组疱疹病毒(HVT),本研究将AIV A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的HA基因克隆于真核表达质粒中,构建了转移载体pUAB-gpt-HA。通过同源重组及霉酚酸筛选技术,将HA基因表达盒插入到HVT US10基因... 为构建表达禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组疱疹病毒(HVT),本研究将AIV A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的HA基因克隆于真核表达质粒中,构建了转移载体pUAB-gpt-HA。通过同源重组及霉酚酸筛选技术,将HA基因表达盒插入到HVT US10基因区,构建了一株表达H5亚型AIV HA基因的重组病毒HVT(rHVT-US10-HA)。经PCR、间接免疫荧光、western blot及红细胞凝集试验鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的HA蛋白。rHVT-US10-HA的构建为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 重组火鸡疱疹病毒 HA基因
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含鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因重组火鸡疱疹病毒的构建 被引量：4
2
作者 刘长军 王端 +5 位作者 秦运安 鄢明华 王笑梅 代春铭 李刚 赵晓岩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期412-415,共4页
采用PCR方法 ,以传染性贫血病毒 (CIAV)DNA为模板 ,扩增并克隆了CIAV的VP1、VP2基因 ,并进行了序列分析。经基因修饰 ,将这两个基因分别加上表达元件后连接作为目的基因。通过同源重组技术 ,将目的基因插入到火鸡疱疹病毒 (HVT)gC基因... 采用PCR方法 ,以传染性贫血病毒 (CIAV)DNA为模板 ,扩增并克隆了CIAV的VP1、VP2基因 ,并进行了序列分析。经基因修饰 ,将这两个基因分别加上表达元件后连接作为目的基因。通过同源重组技术 ,将目的基因插入到火鸡疱疹病毒 (HVT)gC基因区 ,构建了一株含CIAVVP1、VP2基因表达单元的重组HVT(VP1VP2_rHVT)。体内、体外传代结果表明该重组病毒性状稳定。采用PCR扩增及Southernblot杂交检测 ,证实了CIAVVP1、VP2基因的插入。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 重组火鸡疱疹病毒 VP1、VP2基因
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共表达鸡传染性法氏囊病病毒LX株VP2基因及鸡新城疫病毒PX02/3株F基因的重组火鸡疱疹病毒的构建 被引量：5
3
作者 王子书 王萍 +3 位作者 许健 杨大为 李永清 江波 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第11期26-30,I0004,I0005,共7页
为构建表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP 2基因和鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组火鸡疱疹病毒(HVT)。本研究利用基因重组技术,在HVT基因组的非必需区UL45-46插入CMV启动子调控下的IBDV LX株的VP 2基因表达盒,然后在HVT基因组的非必需区US1... 为构建表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP 2基因和鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组火鸡疱疹病毒(HVT)。本研究利用基因重组技术,在HVT基因组的非必需区UL45-46插入CMV启动子调控下的IBDV LX株的VP 2基因表达盒,然后在HVT基因组的非必需区US1-10插入pec启动子调控下的NDV PX02/3株的F基因表达盒,成功构建并拯救出同时表达IBDV和NDV保护性抗原基因的重组HVT病毒(rHVT-VP2-F)。经PCR、Western Blot、IFA鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的VP2蛋白和F蛋白。本研究为研制rHVT-VP2-F活载体疫苗提供了科学依据。 展开更多
关键词 新城疫病毒 传染性法氏囊病病毒 重组火鸡疱疹病毒 F基因 VP 2基因
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表达禽流感病毒HA蛋白及传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建
4
作者 唐猛 陈普成 +5 位作者 高立 柳金雄 潘俊慧 王笑梅 姜永萍 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期865-869,共5页
为构建同时表达禽流感病毒(AIV)HA蛋白及传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(r HVT),本研究以本实验室构建的连续覆盖火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组的5个重组粘粒(p Fos A、p Fos B、p Fos C、p Fos D和p Fos E)为基础,利用... 为构建同时表达禽流感病毒(AIV)HA蛋白及传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(r HVT),本研究以本实验室构建的连续覆盖火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组的5个重组粘粒(p Fos A、p Fos B、p Fos C、p Fos D和p Fos E)为基础,利用猪捷申病毒2A蛋白的编码序列,将HA基因和VP2基因串联,并克隆于p CAGGs载体中,构建重组质粒p CA-HA-2A-VP2。利用Gateway LR克隆技术,将重组质粒中的HA-2A-VP2的表达盒(Pec-HA-2A-VP2-POLYA)插入到p Fos C粘粒中HVT片段的复制非必需区HVT053与HVT054基因之间,构建重组粘粒p Fos C-5354-HA-VP2。将p Fos A、p Fos B、p Fos D、p Fos E和p Fos C-5354-HA-VP2 5个重组粘粒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),制备表达HA蛋白及VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(r HVT-5354-HA-VP2)。将重组病毒在CEF中连续传至20代后,通过PCR、间接免疫荧光和western blot鉴定分析,结果显示HA与VP2基因能够在重组病毒中稳定存在并正确表达;生长动力学结果表明,重组病毒在CEF中的增殖效率与野生型病毒HVT无显著差异。该重组病毒的制备为研制AIV-IBDV-马立克病毒三联苗奠定了基础。 展开更多
关键词 重组粘粒 重组火鸡疱疹病毒 三联苗
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表达H5N1亚型禽流感HA-NA基因重组火鸡疱疹病毒的构建 被引量：4
5
作者 赵冬凤 高轩 +2 位作者 刘新文 胡潇 李明义 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第4期20-22,共3页
将禽流感病毒H5N1亚型具有免疫原性的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因,克隆于表达质粒Tmd-CMV-IRES-EGFP中,使其位于含细胞巨化病毒(CMV)早期启动子的调控下,并与增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)串联,将上述串联基因插入到火鸡疱疹病... 将禽流感病毒H5N1亚型具有免疫原性的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因,克隆于表达质粒Tmd-CMV-IRES-EGFP中,使其位于含细胞巨化病毒(CMV)早期启动子的调控下,并与增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)串联,将上述串联基因插入到火鸡疱疹病毒(HVT)基因的非必需区(US10)中,从而构建了带标记的重组转移质粒。将该转移载体质粒感染HVT的鸡胚成纤维细胞(CEF),利用脂质体共同转染CEF,待病毒蚀斑出现后,利用蚀斑筛选带有绿色荧光的重组病毒蚀斑,数轮蚀斑纯化,经荧光和PCR初步鉴定获得了重组火鸡疱疹病毒。 展开更多
关键词 禽流感病毒 HA-NA基因 重组火鸡疱疹病病毒
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