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脊髓灰质炎疫苗重组株病毒在我国的循环及其致病性 被引量：84
1
作者 张礼璧 侯晓辉 +4 位作者 朱晖 郑红 叶绪芳 徐闻 李杰 《中国计划免疫》 2001年第3期125-128,共4页
我国自 1994年 10月以后已无脊髓灰质炎 (脊灰 )本土野病毒引起的病例。现在从急性弛缓性麻痹病例粪便标本中分离到的脊灰病毒都是 3个血清型的疫苗衍生株 ,并以Ⅱ型为主。近几年每年Ⅱ型分离株的数量均多于同年Ⅰ型株加Ⅲ型株之和。 1... 我国自 1994年 10月以后已无脊髓灰质炎 (脊灰 )本土野病毒引起的病例。现在从急性弛缓性麻痹病例粪便标本中分离到的脊灰病毒都是 3个血清型的疫苗衍生株 ,并以Ⅱ型为主。近几年每年Ⅱ型分离株的数量均多于同年Ⅰ型株加Ⅲ型株之和。 1997～ 1999年从贵州、云南省分离到的Ⅱ型疫苗株中 ,除了疫苗变异株外 ,还发现了不同血清型间的重组株 ,如VP1片段来自SabinⅡ ,而 3D片段分别来自SabinⅢ (S2 ×S3 )和SabinⅠ (S2 ×S1) ,它们的基因序列与脊灰疫苗株SabinⅡ型有差异。能从未服苗儿童的粪便标本中分离到这类毒株 ,表明在外环境中有这类毒株在循环。这些毒株可以致病 ,其致病性与该儿童是否接受了疫苗全程免疫有很大的相关性。重组株的发现提示我们 ,它们在自然环境中已有循环。从贵州省Ⅱ型病例发生时间和区域上看 ,病例有聚集分布的趋势 ,但目前尚处于小范围的循环中 ,其原因与对策有待进一步研究。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎病毒 疫苗衍生株 重组株 全程计划免疫
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产harpin的成团泛菌工程菌的构建 被引量：10
2
作者 赵立平 申泉 +5 位作者 李艳琴 宁红秀 张晋丹 董汉松 徐文联 段明星 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期142-146,共5页
梨火疫病菌（ Ｅｒｗｉｎｉａ ａｍｙｌｏｖｏｒａ） 产生的胞外蛋白ｈａｒｐｉｎ 是引发其非寄主植物过敏反应的因子。ｈａｒｐｉｎ 蛋白还具有诱导植物抗性的功能。成团泛菌（ Ｐａｎｔｏｅａ ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）３０８Ｒ 对链... 梨火疫病菌（ Ｅｒｗｉｎｉａ ａｍｙｌｏｖｏｒａ） 产生的胞外蛋白ｈａｒｐｉｎ 是引发其非寄主植物过敏反应的因子。ｈａｒｐｉｎ 蛋白还具有诱导植物抗性的功能。成团泛菌（ Ｐａｎｔｏｅａ ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）３０８Ｒ 对链格胞属（ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ） 的真菌具有拮抗活性，是一株抗利福霉素的自发突变株，对壮观霉素敏感。本文通过电击转化法将带有梨火疫病菌ｈｒｐ 基因簇的重组质粒ｐＣＰＰ４３０ 导入３０８Ｒ。所得转化子具有ｐＣＰＰ４３０ 的壮观霉素抗药性标记，在番茄上引起过敏反应；从转化子中提取到与ｐＣＰＰ４３０ 大小一样的质粒，其酶切物理图谱也与ｐＣＰＰ４３０ 完全相同；用地高辛标记的ｈａｒｐｉｎ 的结构基因ｈｒｐＮ 为探针对转化子中的质粒进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 分析，结果在转化子中得到信号明显的杂交片段，而受体菌３０８Ｒ 中未出现杂交信号；提取细菌的外壁的蛋白质进行ＰＡＧＥ 分析，在大约４４ ｋｄ 的位置上３０８Ｒ（ｐＣＰＰ４３０） 比３０８Ｒ 明显多出１ 条带。这些结果表明成团泛菌能够表达梨火疫病菌的ｈｒｐ 基因簇，所产ｈａｒｐｉｎ 展开更多
关键词 成团泛菌 HARPIN 工程菌 植物过敏反应
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全国2002年脊髓灰质炎实验室网络会议在京召开 被引量：13
3
作者 张勇 张礼璧 +4 位作者 侯晓辉 秦明辉 凌华 叶绪芳 祝双利 《中国计划免疫》 2002年第3期121-125,共5页
关键词 脊髓灰质炎 脊髓灰质炎病毒 核苷酸序列分析 3D区内重组位点 四川 重庆 贵州 脊髓灰质炎疫苗
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采用多基因联合方法鉴定福建长乐和福清产区马铃薯Y病毒株系组成 被引量：12
4
作者 沈林林 邹文超 +1 位作者 高芳銮 詹家绥 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第20期3918-3926,共9页
【目的】马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是马铃薯生产上危害较为严重的病毒,也是制约马铃薯可持续发展的主要病毒之一。论文旨在开发一套简便、准确、快速的PVY分子鉴定技术,并采用该技术及时查明福建省部分产区PVY病害的发生、分布及... 【目的】马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是马铃薯生产上危害较为严重的病毒,也是制约马铃薯可持续发展的主要病毒之一。论文旨在开发一套简便、准确、快速的PVY分子鉴定技术,并采用该技术及时查明福建省部分产区PVY病害的发生、分布及PVY株系组成。【方法】采用ELISA方法对采自福建省长乐市、福清市马铃薯种植区疑似受PVY感染的样品进行检测,并根据文献报道的PVY P1、VPg和CP基因保守区设计3对简并引物,对ELISA检测后的阳性样品进行基因扩增、克隆,并将获得的序列进行核苷酸序列一致性、重组位点、基因型分布和系统发育分析。【结果】ELISA检测结果表明,17份样品中有13个样品与PVY抗体呈阳性反应,其他呈阴性反应。13个阳性样品均能成功扩增出3个与P1、VPg和CP基因预期大小一致的特异片段。BLAST比对分析显示P1、VPg和CP基因与文献报道的已知PVY分离物的核苷酸序列一致性分别为72%—99%、85%—99%和88%—99%。P1、VPg和CP 3个基因联合序列分析显示,FQ01分离物与PVY^(N-Wi)株系的核苷酸序列一致性最高,FQ08分离物与PVYE株系的核苷酸序列一致性最高,CL01、CL02、CL05和CL13 4个分离物与PVY^(NTN-NW)株系SYR-I型的核苷酸序列一致性最高,CL03、CL04、FQ02、FQ06、FQ09、FQ11和CL12 7个分离物与PVY^(NTN-NW)株系SYR-II型的核苷酸序列一致性最高。重组分析显示,除CP基因外,长乐市和福清市两个产区的PVY分离物的P1和VPg基因中均检测到显著的重组信号。基因型统计分析结果显示,长乐产区的P1基因为N型(60%)和N×O重组型(40%),VPg基因均为N×O重组型,而CP基因均为O型,而福清产区的P1基因为N型(25%)和N×O重组型(75%),VPg基因为N×O重组型(87.5%)和O型(12.5%),而CP基因除了一个分离物为N型外,其他均为O型。系统发育分析显示分离物FQ01与PVYN-Wi株系聚为一簇,FQ08与PVYE株系聚为一簇,CL01、CL02、CL05和CL13与PVY^ 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 ELISA 多基因联合序列 系统发育 重组株系
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福建省脊髓灰质炎Ⅱ型疫苗重组株病毒特性与分析 被引量：11
5
作者 潘伟毅 郑金凤 +4 位作者 侯晓辉 郑红 方勇 蔡志坤 杨秀惠 《中国计划免疫》 2002年第3期126-128,共3页
对福建省脊髓灰质炎 (脊灰 )Ⅱ型病毒基因的VP1区和 3D区进行PCR -RFLP分析 ,结果有 5株为脊灰Ⅱ型疫苗重组株病毒 ,均表现为VP1区为Ⅱ型疫苗株 ,3D区为Ⅲ型疫苗株 ,有 4株在VP1区出现不同于标准脊灰Ⅱ型疫苗株病毒的变异。流行病学资... 对福建省脊髓灰质炎 (脊灰 )Ⅱ型病毒基因的VP1区和 3D区进行PCR -RFLP分析 ,结果有 5株为脊灰Ⅱ型疫苗重组株病毒 ,均表现为VP1区为Ⅱ型疫苗株 ,3D区为Ⅲ型疫苗株 ,有 4株在VP1区出现不同于标准脊灰Ⅱ型疫苗株病毒的变异。流行病学资料揭示 ,分离出脊灰Ⅱ型重组株病毒的急性弛缓性麻痹 (AFP)病例大多具有脊灰的症状 ,且发病表现出明显的季节性 ;而从“零”剂次免疫儿童或近 6个月从未服过脊灰疫苗儿童的粪便标本中 ,只分离到此病毒。这表明福建省自然环境中存在脊灰Ⅱ型疫苗重组株病毒循环 ,此病毒可能是这类AFP病例的致病因子。在我国保持无脊灰状态下如何控制脊灰Ⅱ型重组株病毒的致病 ,适时采取相应对策对今后的工作提出了新的挑战。 展开更多
关键词 福建 脊髓灰质炎Ⅱ型疫苗重组株病毒 脊髓灰质炎病毒 流行病学 PCR-RFLP分析 脊髓灰质炎疫苗
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能产生植物抗性诱导蛋白harpin的自生固氮工程菌的构建 被引量：10
6
作者 李艳琴 赵春贵 +2 位作者 梁丽韫 申泉 赵立平 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2000年第7期20-23,共4页
通过三亲交配的方法 ,把带有梨火疫欧文氏杆菌hrp基因簇的重组粘粒pCPP4 30接合转移进入固氮菌催娩克氏菌X2R中。经质粒提取检测、PCR专一扩增、Southernblotting分析和生物测定结果表明 ,工程菌X2R( pCPP4 30 )构建成功。该菌诱发过敏... 通过三亲交配的方法 ,把带有梨火疫欧文氏杆菌hrp基因簇的重组粘粒pCPP4 30接合转移进入固氮菌催娩克氏菌X2R中。经质粒提取检测、PCR专一扩增、Southernblotting分析和生物测定结果表明 ,工程菌X2R( pCPP4 30 )构建成功。该菌诱发过敏反应的能力是大肠杆菌DH5( pCPP4 30 )的 10倍以上。在温室小区用X2R(pCPP4 30 )菌液处理番茄 ,番茄早疫病的感染指数比出发菌降低 13.0 9% ,果实数量和单果重分别比对照增加 2 2 .31%和 2 0 .0 8% ,本工作表明 :hrp基因簇在自身固氮菌中可以表达和分泌harpin。 展开更多
关键词 过敏反应 工程菌 固氮菌 植物病害
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β-甘露聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达 被引量：11
7
作者 刘项羽 徐美娟 +2 位作者 杨套伟 张显 饶志明 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期672-677,共6页
从Bacillus subtilis JNA 3-10中克隆出β-甘露聚糖酶基因成熟肽链编码序列manA1和含信号肽的β-甘露聚糖酶基因manA2,在B.subtilis 168中克隆表达,分别筛选获得高效分泌表达β-甘露聚糖酶的重组菌株BPM1001(pMA5-manA1/B.subtilis 168)... 从Bacillus subtilis JNA 3-10中克隆出β-甘露聚糖酶基因成熟肽链编码序列manA1和含信号肽的β-甘露聚糖酶基因manA2,在B.subtilis 168中克隆表达,分别筛选获得高效分泌表达β-甘露聚糖酶的重组菌株BPM1001(pMA5-manA1/B.subtilis 168)和BPM1002(pMA5-manA2/B.subtilis 168),结果表明菌株BPM1002总酶活力是菌株BPM1001的9.65倍,是原始菌株的13.1倍.在基因manA2下游引入His序列克隆出β-甘露聚糖酶基因manA3,获得枯草芽孢杆菌168重组菌株BPM1003.采用Ni-NTA柱纯化重组菌株BPM1003分泌表达的β-甘露聚糖酶,并研究其酶学性质,该酶促反应的最适pH为6.5,最适温度为65℃,在37℃条件下保存一个月酶活力依然保留有77.8%.5 L发酵罐放大实验结果表明魔芋粉对于产β-甘露聚糖酶具有明显的诱导作用,酶活力最高可达2 748.82 U/mL. 展开更多
关键词 Β-甘露聚糖酶 枯草芽孢杆菌 信号肽 克隆 表达 重组菌株 酶学性质
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坛紫菜与Pyropia radi种间杂交重组优良品系的选育与特性分析 被引量：11
8
作者 吴宏肖 严兴洪 +3 位作者 宋武林 刘燕飞 刘长军 王铁杆 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1079-1088,共10页
为获得具明显杂交重组优势的紫菜优良品系,实验以印度产紫菜Pyropia radi野生型品系（Pr-WT01,特点：藻体厚、生长慢、韧性好、壳孢子放散量多）为父本,坛紫菜诱变品系（Ph-HMC5,特点：藻体薄、生长快、韧性差、壳孢子放散量少）为母本... 为获得具明显杂交重组优势的紫菜优良品系,实验以印度产紫菜Pyropia radi野生型品系（Pr-WT01,特点：藻体厚、生长慢、韧性好、壳孢子放散量多）为父本,坛紫菜诱变品系（Ph-HMC5,特点：藻体薄、生长快、韧性差、壳孢子放散量少）为母本进行种间杂交,从杂合丝状体产生的F1叶状体中选出4个综合性状优良的杂交重组品系,HR-6品系为其中的最优良品系。父本品系叶状体的绝对生长率最大值为0.39 cm/d,母本品系为5.24 cm/d,而HR-6品系高达9.27 cm/d,在日龄30~50 d期间,它的平均绝对生长率比母本品系的最大生长率还大。日龄60 d的叶状体平均体长父本品系为13.18 cm,母本品系为85.67 cm,而HR-6品系已达218.57 cm,分别是父、母本品系的16.58倍和2.55倍。日龄35 d的HR-6品系叶状体的叶绿素a含量高达9.43 mg/g,比父、母本品系分别增加了50%和20%;另外,它的总藻胆蛋白含量高达99.62 mg/g,分别是父、母本品系的2.18倍和1.74倍。日龄35 d的HR-6品系的叶状体平均厚度为26.22μm,比父本品系降低了37%,比母本品系增加了30%,叶状体的韧性明显增加。HR-6品系的壳孢子放散总量达167.72万个/贝,分别为父、母本品系的1.13和2.65倍。上述研究结果表明,HR-6品系具有生长快、品质好、壳孢子放散量大等优良性状,表现出良好的生产适用性。 展开更多
关键词 坛紫菜 Pyropia radi 种间杂交 重组品系 生长率 光合色素
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碱性淀粉酶的发酵生产及其应用研究进展 被引量：9
9
作者 杨海泉 刘龙 +2 位作者 李江华 堵国成 陈坚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期432-439,共8页
碱性淀粉酶是诸多碱性酶中的一种,指的是其最适稳定及反应pH值在碱性范围内,在碱性环境中可以保持稳定且可高效催化降解淀粉。碱性淀粉酶在纺织、洗涤剂、医药、食品等领域具有广泛应用。利用嗜碱微生物可以生产碱性淀粉酶。以下综述了... 碱性淀粉酶是诸多碱性酶中的一种,指的是其最适稳定及反应pH值在碱性范围内,在碱性环境中可以保持稳定且可高效催化降解淀粉。碱性淀粉酶在纺织、洗涤剂、医药、食品等领域具有广泛应用。利用嗜碱微生物可以生产碱性淀粉酶。以下综述了碱性淀粉酶的发酵生产及其应用的研究进展。 展开更多
关键词 碱性淀粉酶 生产 分子改造 重组菌 应用
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2010~2012年广西壮族自治区HIV-1流行株pol基因亚型的分布情况 被引量：9
10
作者 王洪 梁冰玉 +9 位作者 周波 蒋俊俊 黄颉刚 陈荣风 赵芳凝 王敏连 刘洁 李汶蔚 叶力 梁浩 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期79-84,共6页
目的分析广西壮族自治区（广西）HIV-1流行株poz基因亚型的分布情况。方法于2010年1月1日至2012年12月31日，采用方便抽样的方法，在广西11个城市开展调查，通过问卷调查收集调查对象的流行病学资料。纳入标准为：Westernblot确证HIV-1... 目的分析广西壮族自治区（广西）HIV-1流行株poz基因亚型的分布情况。方法于2010年1月1日至2012年12月31日，采用方便抽样的方法，在广西11个城市开展调查，通过问卷调查收集调查对象的流行病学资料。纳入标准为：Westernblot确证HIV-1阳性、病毒载量〉1000拷贝／ml、〉18岁及无特殊重大疾病。共招募到调查对象152例。采集每例调查对象5ml外周血并提取病毒基因组RNA，采用巢式RT—PCR扩增病毒pol区全长基因并测序；对所得序列修正后用Genotyping进行初步分型；采用MEGA5．03软件构建系统进化树对pol序列分型进行验证；采用RIP及jpHMMatGOBICS程序分析未知重组毒株的重组断点。结果152例HIV-1感染者共成功扩增出137例pof区全长基因，共获得127例HIV一1亚型判定，其中CRF01_AE占55．9％（71例），CRF08-BC占29．9％（38例），CRF07-BC占10．2％（13例），B（B’）占2．4％（3例），未知重组型占1．6％（2例）。广西11个城市以CRF01-AE亚型流行为主；异性性传播和注射毒品传播感染HIV-1者间CRF01_AE亚型分布差异有统计学意义（X2=15．07，P〈O．001），其比例分别为67．4％（58／86）和34．1％（14／41）；21～35、36～60和〉60岁HIV．1感染者中，CRF01_AE亚型所占比例分别为43．6％（17／39）、57．6％（38／66）、77．3％（17／22），CRF_08BC亚型所占比例分别为43．6％（17／39）、28．8％（19／66）、9．1％（2／22），差异有统计学意义（X2=8．48，P=0．014）。2株未知重组型毒株的模式分别为CRF01_AE／B（B’）和CRF01_AE／C／B（B’）重组型。结论2010--2012年广西HIV-1流行株pol基因主要流行亚型为CRF01_AE，以异性性传播为主；出现的未知重组型毒株是由CRF01_AE与CRF_BC重组产生的。 展开更多
关键词 HIV-1 基因 感染 重组毒株
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2009～2013年广西H1N1和H3N2亚型猪流感病毒血清学调查 被引量：8
11
作者 陈樱 於庆雄 +9 位作者 银凤桂 薛辉 李法凯 莫彦宁 肖雄 杨文娟 韦祖樟 刘芳 蹇慧 黄伟坚 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期155-159,共5页
摘要：【目的】了解广西H1N1和H3N2亚型猪流感病毒（SIV）的存在形势及其流行规律，为下一步有效监测和防控猪流感（SI）提供理论依据和原始溯源。【方法】对2009～2013年于广西11个地级市的屠宰场、规模化养猪场和个体养殖户采集的117... 摘要：【目的】了解广西H1N1和H3N2亚型猪流感病毒（SIV）的存在形势及其流行规律，为下一步有效监测和防控猪流感（SI）提供理论依据和原始溯源。【方法】对2009～2013年于广西11个地级市的屠宰场、规模化养猪场和个体养殖户采集的1170份猪血清进行血凝抑制（Hr）试验检测，统计欧洲禽源H1N1（EA．H1N1）亚型和新型人源重组H3N2（Hu．H3N2）亚型4株毒株（LB144和BB2、NNXD和JGB4）的抗体阳性率，并分析H1N1和H3N2亚型毒株的存在形势及其流行规律。【结果】2009-2013年，EA．H1N1亚型LB144毒株的平均抗体阳性率高达20．68％，且保持稳定，是广西地区主要的流行毒株；Hu．H3N2亚型JGB4毒株从2010年开始流行，且呈逐渐蔓延的趋势，平均抗体阳性率为19．96％。广西北海、南宁、玉林、贺州、桂林、贵港和柳州市受到EA—H1N1和Hu—H3N2亚型毒株多重感染，且感染程度较严重；百色、河池和防城港市的感染程度相对较低。育肥猪最易感染SIV，尤其是BB2和JGB4毒株，其抗体阳性率分别达66．00％和40．00％。EA—H1N1亚型毒株间的交叉感染阳性率（21．52％）略低于Hu—H3N2亚型毒株间的交叉感染阳性率（27．45％），而两株不同亚型毒株交叉感染时以BB2与JGB4毒株的交叉感染阳性率最高（16．23％），3株交叉感染时以BB2、NNXD和JGB4毒株间的交叉感染阳性率最高（11．60％），4株同时交叉感染阳性率也有6．96％。【结论】广西猪群已普遍存在EA-H1N1和Hu．H3N2亚型毒株混合感染的现象，尤其是地处两省边界上的地级市感染更严重，并以育肥猪和保育猪较易感。因此在sI防控工作中，除做好哺乳仔猪和种猪的日常管理外，还应减少保育猪的外来应激，适当调整育肥猪的饲养密度，以减少新型SIV重组毒株的产生。 展开更多
关键词 猪流感病毒(SIV) H1N1亚型 H3N2亚型 血清学调查 重组毒株
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利用两种工程菌共培养生产聚羟基烷酸的研究 被引量：5
12
作者 贾振华 马宏 +3 位作者 张霞 宋水山 邱健 李承光 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第2期61-63,共3页
方法:主要是将携带生产P(3HB)基因的工程菌E.coliXL1-Blue(pKSABC)和携带4-羟基丁酸辅酶A转移酶和PHA合成酶基因的工程菌E.coliXL1-Blue(pKSSE5.3)共培养,以葡萄糖为唯一碳源来生产含有3HB和4HB的聚合物的研究。结果:培养48h后,结果表明... 方法:主要是将携带生产P(3HB)基因的工程菌E.coliXL1-Blue(pKSABC)和携带4-羟基丁酸辅酶A转移酶和PHA合成酶基因的工程菌E.coliXL1-Blue(pKSSE5.3)共培养,以葡萄糖为唯一碳源来生产含有3HB和4HB的聚合物的研究。结果:培养48h后,结果表明,两种工程菌共培养能够获得韧性更强和强度更大的PHA,PHA的积累量占总生物量的44.4%。 展开更多
关键词 共培养 葡萄糖 工程菌
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重组大肠杆菌转化富马酸生产L-丙氨酸 被引量：8
13
作者 徐友强 马玉岳 +5 位作者 姚粟 姜增妍 张奇 张露 裴疆森 程池 《生物加工过程》 CAS 2016年第2期7-11,共5页
通过克隆来源于睾丸酮丛毛单胞菌的L-天冬氨酸-β-脱羧酶基因,在一株具有L-天冬氨酸酶生产能力的大肠埃希氏菌CICC 11022S中异源表达,构建转化富马酸生产L-丙氨酸的重组工程菌。结果发现:重组工程菌9 h转化富马酸产生112.7 g/L的L-丙氨... 通过克隆来源于睾丸酮丛毛单胞菌的L-天冬氨酸-β-脱羧酶基因,在一株具有L-天冬氨酸酶生产能力的大肠埃希氏菌CICC 11022S中异源表达,构建转化富马酸生产L-丙氨酸的重组工程菌。结果发现:重组工程菌9 h转化富马酸产生112.7 g/L的L-丙氨酸,生产速率12.5 g/(L·h),转化率93.8%。富马酸价格较低,有效降低L-丙氨酸生产的原料成本。通过构建重组工程菌,以富马酸为底物,高效生产L-丙氨酸,结果表明该方法具有较好的工业应用潜力。 展开更多
关键词 L丙氨酸 L-天冬氨酸酶 L天冬氨酸-β-脱羧酶 重组工程菌
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酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae重组菌株木糖醇发酵的初步研究 被引量：3
14
作者 鲍晓明 郑华军 +3 位作者 秦玉静 汪天虹 高东 李在禄 《工业微生物》 CAS CSCD 2000年第2期13-18,共6页
木糖还原酶催化木糖为木糖醇的反应 ,是木糖代谢的第一步。将木糖还原酶的基因XYL1引入酿酒酵母中 ,构建得到高效表达XYL1基因的重组酿酒酵母菌株HYEX2 ,该重组菌株的木糖还原酶比活力为 7.47U/mg。研究表明 ,该菌株获得转化木糖产生木... 木糖还原酶催化木糖为木糖醇的反应 ,是木糖代谢的第一步。将木糖还原酶的基因XYL1引入酿酒酵母中 ,构建得到高效表达XYL1基因的重组酿酒酵母菌株HYEX2 ,该重组菌株的木糖还原酶比活力为 7.47U/mg。研究表明 ,该菌株获得转化木糖产生木糖醇的能力 ,当辅助碳源葡萄糖的浓度为 2 % ,并在发酵 30h左右添加木糖 ,木糖醇的转化率可达到 0 .94g/ g。 展开更多
关键词 木糖还原酶基因 木糖醇 酿酒酵母 甜味剂 重组菌
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6株K亚群禽白血病病毒分离株的全基因组测序及遗传进化分析 被引量：3
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作者 游广炬 阿热阿依·海依拉提 +5 位作者 李炜 李晓齐 高丽 曹红 王永强 郑世军 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第6期116-126,共11页
为研究目前中国临床流行的ALV毒株特征,我们采集临床上ALV P27阳性的鸡的血浆,接种DF-1细胞进行病毒分离,分离出6株外源性ALV毒株,并进一步对分离毒株进行前病毒全基因组测序。结果表明,6个ALV分离株的基因组结构均为典型的复制完整型C... 为研究目前中国临床流行的ALV毒株特征,我们采集临床上ALV P27阳性的鸡的血浆,接种DF-1细胞进行病毒分离,分离出6株外源性ALV毒株,并进一步对分离毒株进行前病毒全基因组测序。结果表明,6个ALV分离株的基因组结构均为典型的复制完整型C型逆转录病毒,缺乏病毒致癌基因,分离株DT190901基因组全长为7473 bp;DT190902和DT190905为7467 bp;DT190903和DT190906为7481 bp;DT190904为7493 bp,分离株间基因组序列同源性较高(98.6%~99.9%)。对6个ALV分离株与其他ALV毒株进行序列比较和遗传进化分析,结果表明,分离株的LTR、gag、pol及gp37基因与内源性ALV相比具有较高同源性(>93.8%),gp85基因与ALV-K一致性较高(>95.4%),属于新型ALV亚群(K亚群)遗传分支。分离株的LTR序列与内源性ALV相似,比其他外源性ALV亚群缺少一个CAAT Box、PRE Box、Y Box及CArG Box等转录调控元件。结果表明这6个分离株属于ALV-K亚群,为ALV-K与内源性ALV的重组毒株,其LTR序列与内源性ALV接近可能导致其复制能力及致病性降低。遗传进化分析表明,ALV-K已经在我国局部流行,并出现基因重组和突变毒株,应该引起重视并改进净化防控措施控制ALV-K流行。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 K亚群 重组毒株 全基因组测序 遗传进化分析
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一株新城疫重组强毒的分离鉴定与分子特性分析 被引量：4
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作者 谭雷涛 秦卓明 +2 位作者 马保臣 徐怀英 崔治中 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1217-1223,共7页
从患病蛋鸡中分离出1株新城疫病毒（NDV）SRZ/03,经蚀斑纯化后接种40日龄SPF鸡可诱发典型ND病变。蚀斑纯化前、后,MDT分别为55.2和51 h,ICPI为1.7和2.0,IVPI为1.91和2.79,表明属强毒。对其F和HN基因分别克隆测序,进行F基因分型。结果表... 从患病蛋鸡中分离出1株新城疫病毒（NDV）SRZ/03,经蚀斑纯化后接种40日龄SPF鸡可诱发典型ND病变。蚀斑纯化前、后,MDT分别为55.2和51 h,ICPI为1.7和2.0,IVPI为1.91和2.79,表明属强毒。对其F和HN基因分别克隆测序,进行F基因分型。结果表明SRZ/03属基因Ⅱ型,F蛋白氨基酸裂解位点的序列为^112R-R-Q-K-R-F^117,与强毒基序完全相同。结合GenBank中发表的其他NDV参考株序列,对F和HN基因推导氨基酸序列进行比较。SRZ/03株与基因Ⅱ型LaSota/46、B1/47、Bingham/87和Texas/48的同源性分别为93.1%、93.0%、94.4%和94.4%;与基因Ⅶ型Taiwan/95、SGM/01和SKY/03的同源性分别为92.2%、92.8%和92.8%;与基因Ⅲ型F48E9/48的同源性为91.2%。然而,SRZ/03株F蛋白前210个氨基酸与基因Ⅱ型LaSota/46和Texas/48的同源性较高,达96.7%和98.1%,后343个氨基酸则与Taiwan/95、SGM/01等毒株的同源性较高,达95.7%-97.4%,推测该株为重组株。此外,SRZ/03株与Taiwan/95、SGM/01等毒株的HN氨基酸同源性高达95.8%-97.6%,显著高于与LaSota/46、B1/47、Bingham/87、Texas/48和F48E9/48的87.2%-89.2%。 展开更多
关键词 新城疫病毒 毒力 F基因 HN基因 重组株
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猪繁殖与呼吸综合征病毒重组毒株GX-C4CG6致病性探究
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作者 王东东 李春梅 +5 位作者 罗小飞 叶敏慧 田小艳 欧阳海平 潘永飞 何晓明 《中国动物检疫》 CAS 2024年第5期104-109,共6页
为评估猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组毒株GX-C4CG6对小猪的致病性,选择PRRSV抗原、抗体均为阴性的小猪进行攻毒试验,然后通过攻毒后猪只体温变化及死亡情况、临床症状评分、血清抗体变化、攻毒后平均日增重、解剖后肺脏眼观及显微... 为评估猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组毒株GX-C4CG6对小猪的致病性,选择PRRSV抗原、抗体均为阴性的小猪进行攻毒试验,然后通过攻毒后猪只体温变化及死亡情况、临床症状评分、血清抗体变化、攻毒后平均日增重、解剖后肺脏眼观及显微病理变化、血清/肺脏病毒拷贝数等指标,对该毒株致病性进行评估。结果显示:GX-C4CG6毒株攻毒组有4头猪出现发烧,平均体温在攻毒后第12、13天大于40℃,最高体温达40.4℃,未出现死亡;被攻毒猪仅表现轻微减料,未表现出明显的呼吸障碍;攻毒后7 d,攻毒组猪只抗体开始转阳,至攻毒后14 d,攻毒组猪只ELISA抗体S/P平均值达最高;攻毒组在攻毒后第1周和对照组平均日增重差异不显著,至第2周差异显著(P<0.05),攻毒组显著低于对照组;被攻毒猪出现肺脏间质性肺炎,血清和肺脏病毒拷贝数浓度较高,分别达9.2×10^(5)和1.6×10^(7)copies/mL。结果表明,PRRSV GX-C4CG6毒株对小猪表现温和致病性。本研究为PRRSV重组毒株流行的控制提供了基础资料。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 重组毒株 致病性 小猪
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朱黄青霉α-葡聚糖酶在毕赤酵母中的高效表达 被引量：6
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作者 黄曾慰 梁达奉 +3 位作者 曾练强 吴兆鹏 马步 常国炜 《广西科学》 CAS 2014年第6期614-618,共5页
【目的】提高朱黄青霉(Penicillium minioluteum)α-葡聚糖酶(Dextranase)基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达水平。【方法】根据毕赤酵母的密码子偏爱对酶基因进行优化与合成。优化后的基因片段与载体pGAPZαA连接,转化毕赤酵母K... 【目的】提高朱黄青霉(Penicillium minioluteum)α-葡聚糖酶(Dextranase)基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达水平。【方法】根据毕赤酵母的密码子偏爱对酶基因进行优化与合成。优化后的基因片段与载体pGAPZαA连接,转化毕赤酵母KM71H。【结果】获得组成型分泌表达α-葡聚糖酶的工程菌KM71H/pGAPZαA-dex。发酵工艺试验中,摇瓶培养144h,酶活为153U/mL。6.8L发酵罐补料分批培养92h,酶活达到1218U/mL。【结论】该工程菌以甘油作为碳源,发酵调控简单,产酶水平较高,具有适用于大规模生产的潜力。 展开更多
关键词 α-葡聚糖酶 密码子优化 毕赤酵母 重组菌
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碱性果胶酯裂解酶基因工程菌Pichia pastoris诱导表达条件初步优化 被引量：4
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作者 诸葛斌 堵国成 +1 位作者 诸葛健 陈坚 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期539-543,共5页
在摇瓶水平上,采用单因素试验方法,对影响碱性果胶酯基因工程菌Pichia pastoris表达的主要因素进行研究,确定初始甲醇浓度、甲醇补加量和氮源酵母氮基(YNB)浓度3个主要影响因素的初步优化结果为5%、0.8%和1.3%.在此基础上,利用响应面分... 在摇瓶水平上,采用单因素试验方法,对影响碱性果胶酯基因工程菌Pichia pastoris表达的主要因素进行研究,确定初始甲醇浓度、甲醇补加量和氮源酵母氮基(YNB)浓度3个主要影响因素的初步优化结果为5%、0.8%和1.3%.在此基础上,利用响应面分析法进一步优化.经优化,表达条件为初始甲醇浓度4.35%、甲醇补加量0.75%以及YNB浓度1.31%,优化后碱性果胶酯裂解酶(PL)表达量达到40.6U/mL,较初始培养条件提高约2.3倍.同时,利用SDS-PAGE电泳对优化前后基因工程菌表达情况进行分析,结果同样表明胞外目标蛋白PL表达量有明显增加,进一步证实条件优化后对目标蛋白PL分泌表达具有十分明显的促进作用. 展开更多
关键词 碱性果胶酯裂解酶 基因工程菌 PICHIA PASTORIS 表达 优化
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均匀设计法优化廉价型牛凝乳酶工程菌发酵培养基 被引量：5
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作者 袁伟 惠丰立 +2 位作者 柯涛 程民杰 赵金梅 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第7期258-261,共4页
为了获得生产用廉价型牛凝乳酶工程菌发酵培养基,通过单因素试验考察发酵培养基中各组分对产酶的影响。结果显示:葡萄糖、玉米浆、酵母提取物、尿素质量浓度对产酶影响显著。以上述因素作为随机因子,进行均匀设计试验,采用逐步回归方法... 为了获得生产用廉价型牛凝乳酶工程菌发酵培养基,通过单因素试验考察发酵培养基中各组分对产酶的影响。结果显示:葡萄糖、玉米浆、酵母提取物、尿素质量浓度对产酶影响显著。以上述因素作为随机因子,进行均匀设计试验,采用逐步回归方法对试验结果进行分析。结果表明:在葡萄糖45g/L、玉米浆17g/L、酵母提取物6g/L、尿素12g/L的条件下,凝乳酶活性达342.86SU/mL,比优化前提高了1.22倍。所得培养基为重组牛凝乳酶的高效低成本生产提供了参考。 展开更多
关键词 凝乳酶 工程菌 均匀设计 培养基
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