转胰岛素基因的人骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病 被引量：8

1

作者 陆洋 陆玉华 +1 位作者 王志伟 朱铭岩 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第5期708-711,共4页

目的通过基因转染构建分泌胰岛素的人骨髓间充质干细胞(IPhMSCs);移植IPhMSCs治疗大鼠糖尿病。方法将人胰岛素基因插入逆转录病毒载体pLNCX的多克隆位点中,构建重组表达载体pLNCX/hIns,经包装细胞PT67包装后转染人骨髓间充质干细胞(hMSC... 目的通过基因转染构建分泌胰岛素的人骨髓间充质干细胞(IPhMSCs);移植IPhMSCs治疗大鼠糖尿病。方法将人胰岛素基因插入逆转录病毒载体pLNCX的多克隆位点中,构建重组表达载体pLNCX/hIns,经包装细胞PT67包装后转染人骨髓间充质干细胞(hMSCs),经G418筛选出阳性克隆后培养,获得IPhMSCs。将IPhMSCs移植到链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾包膜下观察疗效。结果重组表达载体pLNCX/hIns转染hMSCs后,人胰岛素基因在hMSCs中稳定表达3周以上,但IPhMSCs体外葡萄糖刺激释放试验阴性。糖尿病大鼠在移植IPhMSCs后,血糖水平下降(P<0.05),体内胰岛素水平上升,体质量增加,糖尿病症状改善,生存时间延长,腹腔糖耐量试验(IPGTT)接近正常水平。结论通过基因工程技术可使外源性胰岛素基因在hMSCs中有效表达;构建的IPhMSCs能够降低糖尿病大鼠血糖,改善症状,延长生存时间。 展开更多

关键词 人骨髓间充质干细胞 重组逆转录病毒载体 糖尿病模型 干细胞移植

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乙型肝炎病毒(adr亚型)重组逆转录病毒包装及滴度测定

2

作者 王岚 杨世忠 +1 位作者 于志凤 赵颖 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1217-1219,共3页

目的包装乙型肝炎病毒(adr亚型)重组逆转录病毒并进行滴度测定,为下一步构建乙型肝炎病毒(adr亚型)转基因小鼠奠定基础。方法将乙型肝炎病毒(adr)全基因组插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了乙型肝炎(adr)重组逆转录病毒载体,鉴定正反向... 目的包装乙型肝炎病毒(adr亚型)重组逆转录病毒并进行滴度测定,为下一步构建乙型肝炎病毒(adr亚型)转基因小鼠奠定基础。方法将乙型肝炎病毒(adr)全基因组插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了乙型肝炎(adr)重组逆转录病毒载体,鉴定正反向后,脂质体转染PA317包装细胞,G418抗性压力下进行筛选得到阳性细胞克隆,扩大培养后进行滴度测定,选取产毒率高细胞克隆株,然后扩大培养、浓缩,进行滴度测定。结果分别获得HBV(adr)全基因组正向和反向插入的重组逆转录病毒。正连重组逆转录病毒载体经PA317细胞包装,经筛选、浓缩后滴度为106CFU/m l,反连重组逆转录病毒载体经PA317细胞包装,经筛选、浓缩后滴度为105CFU/m l。结论PA317细胞包装了含乙型肝炎病毒(adr)全基因组的重组逆转录病毒。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒(adr) 重组逆转录病毒载体 转染 包装 滴度测定

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活化Notch1信号下调Wnt信号抑制结肠癌细胞增生 被引量：10

3

作者 钱翠娟 姚军 谭诗云 《医学研究杂志》 2009年第3期16-19,F0003,共5页

目的构建重组反转录病毒载体pCLNRX-ICN,研究过度活化Notch1信号对人结肠癌细胞HT-29细胞增生的影响作用及机制。方法将人Notch1基因胞内区(ICN)克隆至反转录病毒载体pCLNRX中,与包装载体pCL-10A1共转染293细胞,制备重组病毒上清,检测... 目的构建重组反转录病毒载体pCLNRX-ICN,研究过度活化Notch1信号对人结肠癌细胞HT-29细胞增生的影响作用及机制。方法将人Notch1基因胞内区(ICN)克隆至反转录病毒载体pCLNRX中,与包装载体pCL-10A1共转染293细胞,制备重组病毒上清,检测病毒效价。MTT法检测稳定表达外源性ICN对细胞生长的影响,RT-PCR及Western Blot检测c-Myc、β-catenin表达水平。结果成功构建重组反转录病毒载体pCLNRX-ICN,通过共转染获得了具有较高效价的重组反转录病毒。通过表达外源性ICN而过度活化Notch1抑制HT-29的生长,并下调Wnt信号途径关键调控分子β-catenin的蛋白表达水平,但对β-catenin的mRNA水平未见明显影响。而且过度活化Notch1对c-Myc的蛋白及mRNA表达水平均无明显影响。结论过度活化Notch1信号部分通过下调Wnt信号而抑制HT-29的生长,且该作用不依赖c-Myc的抑制。 展开更多

关键词 人结肠癌细胞 Notch1(ICN) 重组反转录病毒载体 β—catenin

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原发性肝癌基因治疗研究—含人TNF基因重组逆转录病毒转移系统的构建与表达 被引量：8

4

作者 陆云飞 林进令 +2 位作者 邱庆明 黎乐群 廖清华 《广西医科大学学报》 CAS 1997年第4期1-3,共3页

将人ＴＮＦα基因克隆到重组逆转录病毒载体ｐＲＵＦｎｅｏ，构建了含人ＴＮＦ基因重组逆转录病毒载体ＲＵＦ－ＴＮＦ。将ＲＵＦ－ＴＮＦ转染包装细胞ＦｌｙＡ１３，经药物筛选获得稳定分泌含人ＴＮＦ基因重组逆转录病毒的细胞株Ｆｌｙ... 将人ＴＮＦα基因克隆到重组逆转录病毒载体ｐＲＵＦｎｅｏ，构建了含人ＴＮＦ基因重组逆转录病毒载体ＲＵＦ－ＴＮＦ。将ＲＵＦ－ＴＮＦ转染包装细胞ＦｌｙＡ１３，经药物筛选获得稳定分泌含人ＴＮＦ基因重组逆转录病毒的细胞株ＦｌｙＲＵＦＮ１４。ＦｌｙＲＵＦＮ１４产生的病毒上清液能直接转染靶细胞Ｓａｏｓ－２。本研究建立的逆转录病毒介导的ＴＮＦ基因转移系统为肝癌及其他恶性肿瘤的基因治疗提供了条件。 展开更多

关键词 TNFΑ基因 重组逆转录病毒 基因治疗 肝肿瘤

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可溶性TGF-β_1Ⅱ型受体逆转录病毒表达载体的构建 被引量：1

5

作者 高巍 周永兴 +1 位作者 张惠中 聂青和 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第6期760-765,共6页

目的:构建表达人TGF—β1Ⅱ型受体细胞外结合区和人IgG1 Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础. 方法:以RT—PCR方法扩增目的基因TβRⅡ-IgG1 Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEM—T—Easy,挑取阳性克... 目的:构建表达人TGF—β1Ⅱ型受体细胞外结合区和人IgG1 Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础. 方法:以RT—PCR方法扩增目的基因TβRⅡ-IgG1 Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEM—T—Easy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测序;利用重组DNA 技术,将TβRⅡ-IgG1 Fc基因亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,测定病毒滴度. 结果:经测序、限制性酶切分析及PCR方法鉴定,载体插入基因序列、大小、位置均正确,并用PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的感染性重组病毒产生细胞系. 结论:成功构建了重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN, 可望为肝纤维化的基因治疗提供有效途径. 展开更多

关键词 TGF-β1Ⅱ型受体 逆转录病毒表达载体 逆转录病毒载体 可溶性 重组DNA技术 PA317细胞 PCR方法 病毒滴度测定 基因治疗 肝纤维化 TβRⅡ 重组质粒 人IgG1 PLXSN 脂质体介导 限制性酶切 构建表达 融合蛋白 目的基因 产物纯化

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Transduction of primary rat hepatocytes with bicistronic retroviral vector 被引量：1

6

作者 Qing Xie Dan Liao +2 位作者 Xia Qiu Zhou Shu Bing Qian Shi Shu Cheng 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2000年第5期725-729,共5页

INTRODUCTIONHepatocellular transplantation (HCT) could providea therapeutic alternative to orthotopic livertransplantation(OLT) in the treatment of hepaticmetabolic defects and experimental hepaticfailure.Under approp... INTRODUCTIONHepatocellular transplantation (HCT) could providea therapeutic alternative to orthotopic livertransplantation(OLT) in the treatment of hepaticmetabolic defects and experimental hepaticfailure.Under appropriate conditions,theengrafted liver cells can continue to express liver-specific functions for an indefinite period of time. 展开更多

关键词 primary HEPATOCYTE recombinant retroviral vector genetic markers gene transfer HEPATOCELLULAR transplantation POLYMERASE chain reaction

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稳定表达可诱导共刺激分子CHO细胞株的筛选及其生物学活性鉴定 被引量：2

7

作者 丁庆莉 刘梦蕾 +1 位作者 龙宪连 沈茜 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期254-258,共5页

目的:构建携带人可诱导共刺激分子(inducible costimulator molecule,ICOS)基因的重组逆转录病毒载体,筛选稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株,并对其生物学活性进行鉴定。方法:RT-PCR法从人PBMC中获取ICOScDNA,定向克隆到逆转录病毒载体上,... 目的:构建携带人可诱导共刺激分子(inducible costimulator molecule,ICOS)基因的重组逆转录病毒载体,筛选稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株,并对其生物学活性进行鉴定。方法:RT-PCR法从人PBMC中获取ICOScDNA,定向克隆到逆转录病毒载体上,制备逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS;经病毒包装细胞包装后抗性筛选出产高滴度病毒的细胞株,用高滴度病毒上清感染CHO细胞,抗性筛选出稳定表达细胞株。将CHO-ICOS细胞和PBMC以不同比例(1:1、1:2、1:5、1:10)共培养,加入亚刺激剂量(200ng/ml)的抗人CD3抗体,采用3H-TdR掺入法检测PBMC的增殖,流式细胞仪检测T细胞表面活化分子CD25表达情况,并以CHO-pMSCV细胞和PBMC以1:1比例共培养作为阴性对照以及未处理的PBMC作为空白对照。结果:成功构建逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS,筛选出稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株。3H-TdR掺入法和流式细胞仪检测结果表明,与阴性对照及空白对照相比,CHO-ICOS细胞与PBMC共培养能抑制CD3抗体诱导的PBMC增殖及活化(P<0.05或P<0.01),细胞比例为1:1时抑制率最大,分别为(68±5.9)%、(44.08±3.26)%。结论:成功建立具有生物学活性的膜稳定表达人ICOS蛋白的CHO细胞株,为今后研究奠定了基础。 展开更多

关键词 可诱导共刺激分子 重组逆转录病毒载体 转染

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逆转录病毒载体介导的端粒酶抑制基因促进肝癌细胞凋亡 被引量：2

8

作者 马进财 刘吉勇 刘绍玲 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第10期989-992,共4页

目的:探讨逆转录病毒载体介导的反义端粒酶抑制基因对肝癌细胞系BEL-7402的凋亡诱导作用.方法:用电穿孔的方法把正、反义端粒酶抑制基因导入包装细胞,包装出完整的病毒,用此病毒感染肝癌细胞系BEL-7402,绘制细胞生长曲线来研究其抗肿瘤... 目的:探讨逆转录病毒载体介导的反义端粒酶抑制基因对肝癌细胞系BEL-7402的凋亡诱导作用.方法:用电穿孔的方法把正、反义端粒酶抑制基因导入包装细胞,包装出完整的病毒,用此病毒感染肝癌细胞系BEL-7402,绘制细胞生长曲线来研究其抗肿瘤疗效.应用MTT、流式细胞术研究细胞凋亡情况.结果:肿瘤细胞感染逆转录病毒后,肿瘤生长受到明显抑制,转染反义hTR病毒组BEL-7402细胞凋亡率显著高于转染正义hTR病毒和生理盐水组(61.32%±2.24%vs23.02%±2.13%,4.11%±1.00%,P<0.01),转染反义hTR与5-FU联用细胞凋亡率更高,为71.71%±2.53%.结论:反义端粒酶抑制基因能明显抑制肿瘤细胞的体外生长,与抗肿瘤药物5-FU有协同作用,联合用药可以增强疗效,具有明显抗肿瘤作用. 展开更多

关键词 重组逆转录病毒载体 基因疗法 肝细胞癌 反义HTR

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萤火虫荧光素酶报告基因重组逆转录病毒载体的构建及鉴定 被引量：1

9

作者 边素艳 盖鲁粤 +5 位作者 叶平 杨月峰 王荣亮 王华 郭子宽 王立生 《组织工程与重建外科杂志》 2009年第2期75-78,共4页

目的构建含萤火虫荧光素酶报告基因的逆转录病毒载体,为进一步研究生物发光活体动物体内光学成像奠定基础。方法利用重组DNA技术,将荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic双酶切得到的目的基因fluc+亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(... 目的构建含萤火虫荧光素酶报告基因的逆转录病毒载体,为进一步研究生物发光活体动物体内光学成像奠定基础。方法利用重组DNA技术,将荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic双酶切得到的目的基因fluc+亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(fluc)SN在脂质体介导下"乒乓"转染GP+E86和PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆。扩大培养,测定病毒滴度,并检测荧光素酶活性。结果经限制性酶切分析鉴定,载体插入基因大小、位置均正确,并用GP+E86和PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的重组逆转录病毒fluc细胞系,该细胞可高效表达荧光素酶。结论成功构建了重组质粒pL(fluc)SN,为标识干细胞进行基础研究提供了一种检测方法和平台。 展开更多

关键词 荧光素酶报告基因载体 pGL3-Basic 重组逆转录病毒载体 PLXSN 构建

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AKT1S1-pBABE重组逆转录病毒载体的构建及其稳定过表达细胞系的筛选

10

作者 廖生洁 万象殊 +4 位作者 李林强 何文熙 陈雨露 王晓珂 吕先凤 《湖北理工学院学报》 2020年第2期55-58,共4页

AKT Substrate 1 (AKT1S1)又名富含脯氨酸AKT1底物蛋白(proline-rich AKT1 substrate of 40 kDa,PRAS40)。作为经典的AKT1激酶底物,其在肿瘤生成过程中发挥着重要功能。为研究AKT1S1具体的相互作用蛋白以及作用通路,通过逆转录的方法获... AKT Substrate 1 (AKT1S1)又名富含脯氨酸AKT1底物蛋白(proline-rich AKT1 substrate of 40 kDa,PRAS40)。作为经典的AKT1激酶底物,其在肿瘤生成过程中发挥着重要功能。为研究AKT1S1具体的相互作用蛋白以及作用通路,通过逆转录的方法获得了来自293T细胞的cDNA库。通过基因克隆的方法,成功克隆到AKT1S1基因,并将该基因插入至重组逆转录病毒载体pBABE-Flag质粒中,构建了Flag-AKT1S1-pBABE质粒。在辅助质粒的帮助下,在p293T细胞中包装病毒,侵染293T细胞,使用嘌呤霉素筛选目标细胞,经过蛋白质免疫印迹试验鉴定,获得了Flag-AKT1S1-pBABE稳定过表达细胞系,为下一步开展AKT1S1相互作用蛋白的质谱鉴定及其在肿瘤发生中的研究打下坚实基础。 展开更多

关键词 AKT1S1 重组逆转录病毒载体 肿瘤发生

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转hLIF基因逆转录病毒载体饲养层细胞的建立及其对脐血CD34^+造血干/祖细胞的扩增作用

11

作者 井莹莹 杨吉成 +6 位作者 盛伟华 胡志清 郁心 包婉蓉 张日 朱南康 缪竞诚 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第3期415-418,F0003,共5页

目的建立转人白血病抑制因子(hLIF)基因逆转录病毒载体的饲养层细胞,并观察其对CD34+造血干/祖细胞(HSPC)的扩增作用。方法建立转hLIF基因逆转录病毒载体的饲养层细胞,并用RT-PCR法和ELISA法鉴定目的基因的表达;采用免疫磁珠法分离脐带... 目的建立转人白血病抑制因子(hLIF)基因逆转录病毒载体的饲养层细胞,并观察其对CD34+造血干/祖细胞(HSPC)的扩增作用。方法建立转hLIF基因逆转录病毒载体的饲养层细胞,并用RT-PCR法和ELISA法鉴定目的基因的表达;采用免疫磁珠法分离脐带血CD34+HSPC,流式细胞术检测其纯度;将CD34+HSPC与饲养层细胞共培养,流式细胞术检测各组增殖效果。结果建立的转基因饲养层细胞均有绿色荧光,RT-PCR法和ELISA法证实均有目的基因表达,免疫磁珠法分离的CD34+HSPC纯度可达(95.6±2.58)%,与饲养层细胞共培养后CD34+HSPC可扩增8.74倍,表面黏附分子CXCR4和CD54表达量仍较高。结论建立的转hLIF基因饲养层细胞对CD34+HSPC有一定的扩增作用,且延缓其分化。 展开更多

关键词 人白血病抑制因子 逆转录病毒 脐带血 造血干/祖细胞

原文传递

白细胞介素6重组逆转录病毒载体的构建及鉴定

12

作者 张赟 毕杨 +2 位作者 龚敏 李廷玉 陈洁 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第1期21-25,共5页

目的 构建特异性过表达大鼠IL-6基因的重组逆转录病毒载体，并在大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞和人胚肾HEK293细胞中检测IL-6的表达。方法以大鼠骨髓间充质干细胞mRNA为模板，经PCR获得目的基因IL-6，将其定向克隆到逆转录病毒载体pSEB-3H中... 目的 构建特异性过表达大鼠IL-6基因的重组逆转录病毒载体，并在大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞和人胚肾HEK293细胞中检测IL-6的表达。方法以大鼠骨髓间充质干细胞mRNA为模板，经PCR获得目的基因IL-6，将其定向克隆到逆转录病毒载体pSEB-3H中，构建重组逆转录病毒质粒pSEB—IL-6，经脂质体分别转染到PC12细胞和HEK293细胞中，应用Real—timePCR和ELISA的方法在mRNA和蛋白质水平检测IL-6的表达变化。继而用HEK293细胞中包装获得的含有pSEB—IL-6的病毒颗粒进一步感染PC12细胞，Real—timePCR检测，IL-6mRNA的表达水平变化。结果PCR电泳及酶切鉴定证实目的基因正确克隆至逆转录病毒载体中，其基因序列与Genbank报道一致；Real—timePCR和ELISA结果均显示，逆转录病毒质粒pSEB—IL-6转染PC12细胞和HEK293细胞后，IL-6的表达水平较对照组显著上调；经pSEB—IL-6逆转录病毒颗粒感染的PC12细胞中，IL-6mRNA表达水平较对照组提高4倍。结论成功构建了特异性表达大鼠儿-6基因的重组逆转录病毒载体pSEB—IL-6，并获得了具有感染能力的逆转录病毒颗粒，感染真核细胞后可高表达IL-6，为进一步研究IL-6的功能及其在多种疾病中的免疫调节机制提供重要的分子手段。 展开更多

关键词 白细胞介素6 逆转录病毒载体pSEB-3H PC12细胞 HEK293细胞

原文传递

B细胞活化因子B7-1cDNA的克隆及其在白血病细胞的表达 被引量：3

13

作者 黄贵清 李成荣 +2 位作者 杨锡强 蒋利萍 王莉佳 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 1998年第2期137-139,共3页

利用ＲＴ－ＰＣＲ方法从ＥＢＶ转化Ｂ淋巴细胞中扩增出Ｂ７－１ｃＤＮＡ、酶切Ｂ７－１基因和逆转录病毒载体ＰＬＸＳＮ，连结、克隆ＰＬＢ７－１ＳＮ到大肠杆菌Ｍｃ１０６１。扩增纯化质粒ＰＬＢ７－１ＳＮ。用ＰＡ３１７细胞包装病毒... 利用ＲＴ－ＰＣＲ方法从ＥＢＶ转化Ｂ淋巴细胞中扩增出Ｂ７－１ｃＤＮＡ、酶切Ｂ７－１基因和逆转录病毒载体ＰＬＸＳＮ，连结、克隆ＰＬＢ７－１ＳＮ到大肠杆菌Ｍｃ１０６１。扩增纯化质粒ＰＬＢ７－１ＳＮ。用ＰＡ３１７细胞包装病毒，ＮＩＨ３Ｔ３细胞筛查病毒滴度，获得高效价的Ｂ７－１病毒上清，病毒感染人白血病细胞株Ｋ５６２和ＨＬ６０，获得稳定表达Ｂ７－１分子的肿瘤细胞。 展开更多

关键词 B7-1基因 白血病 克隆 B细胞 CDNA

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胰岛素基因增强结合蛋白1基因修饰的神经干细胞向胆碱能神经元分化的实验研究 被引量：1

14

作者 刘佳梅 陈东 孟晓婷 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期144-147,共4页

目的探讨大鼠胰岛素基因增强结合蛋白1(Islet-1)基因是否有诱导神经干细胞(NSCs)向胆碱能运动神经元分化的能力。方法用Islet-1基因重组逆转录病毒载体转导NSCs后,用免疫荧光组织化学染色方法检测Islet-1在NSCs内的表达;体内、体外实验... 目的探讨大鼠胰岛素基因增强结合蛋白1(Islet-1)基因是否有诱导神经干细胞(NSCs)向胆碱能运动神经元分化的能力。方法用Islet-1基因重组逆转录病毒载体转导NSCs后,用免疫荧光组织化学染色方法检测Islet-1在NSCs内的表达;体内、体外实验观察导入Islet-1基因的NSCs向乙酰胆碱转移酶(ChAT)阳性细胞分化的情况。结果在体外分化实验中观察到,转导Islet-1基因的NSCs向胆碱能运动神经元分化的细胞数明显多于对照组;体内移植实验发现,导入Islet-1基因的NSCs在体内可以向ChAT阳性细胞分化。结论Islet-1基因有诱导NSCs向胆碱能运动神经元分化的能力。 展开更多

关键词 胰岛素基因增强结合蛋白1基因 神经干细胞 重组逆转录病毒载体 胆碱能神经元 基因转导 大鼠

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含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因的假型逆转录病毒的构建及包装

15

作者 任圣俊 许秀兰 +1 位作者 顾峻 顾健人 《上海医科大学学报》 CSCD 1997年第3期163-166,共4页

研究将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）基因应用于基因治疗。构建、包装含CD基因的假型逆转录病毒。构建含CD基因的逆转录病毒重组表达载体pLCDSN基础上，以重组表达载体pLCDSN转染包装细胞PA317，pLCDSN整合入PA317染色体中。结果：CD基因... 研究将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）基因应用于基因治疗。构建、包装含CD基因的假型逆转录病毒。构建含CD基因的逆转录病毒重组表达载体pLCDSN基础上，以重组表达载体pLCDSN转染包装细胞PA317，pLCDSN整合入PA317染色体中。结果：CD基因获得表达且包装出具有感染能力的假型逆转录病毒。以该假型逆转录病毒感染NIH／3T3细胞，逆转录病毒重组表达载体pLCDSN整合入NIH／3T3细胞染色体中，CD基因获得表达。5－FC对有CD基因表达的包装细胞PA317（pLCDSN）和NIH／3T3（pLCDSN）产生杀伤毒性。结论：我们已成功地构建、包装了含重组逆转录病毒载体pLCDSN且具有感染能力的假型逆转录病毒。该工作为以逆转录病毒介导的CD基因应用于肿瘤基因治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 大肠杆菌 胞嘧啶脱氨酶 基因载体 逆转录病毒

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Islet-1基因逆转录病毒表达载体的构建

16

作者 刘佳梅 陈东 孟晓婷 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期831-833,共3页

目的:分离大鼠胰岛素基因增强结合蛋白1(Islet-1)基因,构建plEGFP-C1-Islet-1逆转录病毒表达载体。方法:利用RT-PCR技术钓取大鼠Islet-1基因,克隆到测序载体PGET-1TA中,测序后再亚克隆到逆转录病毒载体plEGFP-C1中,通过脂质体2000将其... 目的:分离大鼠胰岛素基因增强结合蛋白1(Islet-1)基因,构建plEGFP-C1-Islet-1逆转录病毒表达载体。方法:利用RT-PCR技术钓取大鼠Islet-1基因,克隆到测序载体PGET-1TA中,测序后再亚克隆到逆转录病毒载体plEGFP-C1中,通过脂质体2000将其导入包装细胞PA317中,经G418筛选后,获得阳性克隆。结果:RT-PCR产物为1050bp条带,经测序鉴定与GenBank中Islet-1基因的序列相同;构建的plEGFP-C1-Islet-1载体经酶切鉴定,证实Islet-1基因片段正确插入逆转录表达载体中。用共聚焦激光扫描显微镜观察导入Islet-1基因的PA317细胞,可见细胞发出绿色荧光。结论:分离得到了大鼠Islet-1基因并成功构建了plEGFP-C1-Islet-1表达载体。 展开更多

关键词 胰岛素基因增强结合蛋白1基因 克隆 重组逆转录病毒载体

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Islet-1基因变异体的发现及其在神经干细胞内的表达

17

作者 刘佳梅 陈东 孟晓婷 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期495-497,共3页

目的:构建大鼠Islet-1基因逆转录病毒表达载体,利用此载体将Islet-1基因转导入神经干细胞(NSC)内。方法:利用RT-PCR技术钓取大鼠Islet-1基因,将其插入到逆转录病毒载体plEGFP-C1中,利用包装细胞PA317将Islet-1基因转导入NSC内,观察Isle... 目的:构建大鼠Islet-1基因逆转录病毒表达载体,利用此载体将Islet-1基因转导入神经干细胞(NSC)内。方法:利用RT-PCR技术钓取大鼠Islet-1基因,将其插入到逆转录病毒载体plEGFP-C1中,利用包装细胞PA317将Islet-1基因转导入NSC内,观察Islet-1基因在NSC内的表达。结果:经PCR、酶切及荧光检测等证实,成功构建了plEGFP-C1-Islet-1表达载体,并应用免疫组化技术证明Islet-1在NSC内有表达。在实验中首次发现了Islet-1基因的变异体。结论:重组Islet-1基因逆转录病毒载体的构建为进一步探讨Islet-1基因是否参与NSC向运动神经元分化及其可能的作用机制奠定了坚实的实验基础。 展开更多

关键词 Islet-1基因 克隆 重组逆转录病毒载体 变异体

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