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白细胞介素6重组逆转录病毒载体的构建及鉴定
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作者 张赟 毕杨 +2 位作者 龚敏 李廷玉 陈洁 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第1期21-25,共5页
目的 构建特异性过表达大鼠IL-6基因的重组逆转录病毒载体，并在大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞和人胚肾HEK293细胞中检测IL-6的表达。方法以大鼠骨髓间充质干细胞mRNA为模板，经PCR获得目的基因IL-6，将其定向克隆到逆转录病毒载体pSEB-3H中... 目的 构建特异性过表达大鼠IL-6基因的重组逆转录病毒载体，并在大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞和人胚肾HEK293细胞中检测IL-6的表达。方法以大鼠骨髓间充质干细胞mRNA为模板，经PCR获得目的基因IL-6，将其定向克隆到逆转录病毒载体pSEB-3H中，构建重组逆转录病毒质粒pSEB—IL-6，经脂质体分别转染到PC12细胞和HEK293细胞中，应用Real—timePCR和ELISA的方法在mRNA和蛋白质水平检测IL-6的表达变化。继而用HEK293细胞中包装获得的含有pSEB—IL-6的病毒颗粒进一步感染PC12细胞，Real—timePCR检测，IL-6mRNA的表达水平变化。结果PCR电泳及酶切鉴定证实目的基因正确克隆至逆转录病毒载体中，其基因序列与Genbank报道一致；Real—timePCR和ELISA结果均显示，逆转录病毒质粒pSEB—IL-6转染PC12细胞和HEK293细胞后，IL-6的表达水平较对照组显著上调；经pSEB—IL-6逆转录病毒颗粒感染的PC12细胞中，IL-6mRNA表达水平较对照组提高4倍。结论成功构建了特异性表达大鼠儿-6基因的重组逆转录病毒载体pSEB—IL-6，并获得了具有感染能力的逆转录病毒颗粒，感染真核细胞后可高表达IL-6，为进一步研究IL-6的功能及其在多种疾病中的免疫调节机制提供重要的分子手段。 展开更多
关键词 白细胞介素6 逆转录病毒载体pseb-3h PC12细胞 hEK293细胞
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