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利用pET-29b载体进行葡激酶基因表达与其产物的亲和纯化 被引量：3
1
作者 吴樱 黄鹤 +1 位作者 周加文 甘一如 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期865-867,877,共4页
目的 :探讨 6聚组氨酸序列与葡激酶基因序列融合表达及其表达产物的纯化方法。方法 :将葡激酶的c DNA序列连入 p ET- 2 9b质粒 ,转入 E.coli BL 2 1(DE3)进行表达。应用镍金属离子螯合层析及凝胶过滤层析法纯化表达产物 ,采用溶圈法对... 目的 :探讨 6聚组氨酸序列与葡激酶基因序列融合表达及其表达产物的纯化方法。方法 :将葡激酶的c DNA序列连入 p ET- 2 9b质粒 ,转入 E.coli BL 2 1(DE3)进行表达。应用镍金属离子螯合层析及凝胶过滤层析法纯化表达产物 ,采用溶圈法对纯化产物进行生物学活性测定。结果 :6聚组氨酸与葡激酶的可溶性融合蛋白在 BL 2 1(DE3)中的表达量约占菌体可溶性蛋白总量的 2 5 % ;螯合层析纯化后其纯度可达 90 %以上 ;再应用 Sephacryl S-2 0 0 HR可使其纯度提高到 98%以上 ;测得其比活性为 5 .0× 10 4 AU· m g- 1 。结论 :利用 p ET- 2 9b载体成功进行了重组葡激酶基因的表达及其表达产物的亲和纯化。 展开更多
关键词 葡糖激酶 重组蛋白质类 生物合成 重组融合蛋白质类 分离和纯化 组氨酸 色谱法 亲和 色谱法 凝胶
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重组人Tum-5融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定 被引量：1
2
作者 马楠 张英起 颜真 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第14期1279-1281,共3页
目的:构建人肿瘤抑素(tumstatin)活性片段Tum5的融合重组表达载体并对其进行诱导表达和蛋白纯化以获得大量重组融合蛋白.方法:人工合成Tum5基因,进行测序分析,将该基因克隆入原核表达载体pQE30中,转化感受态细胞DH5α,经IPTG诱导表达重... 目的:构建人肿瘤抑素(tumstatin)活性片段Tum5的融合重组表达载体并对其进行诱导表达和蛋白纯化以获得大量重组融合蛋白.方法:人工合成Tum5基因,进行测序分析,将该基因克隆入原核表达载体pQE30中,转化感受态细胞DH5α,经IPTG诱导表达重组融合蛋白,对表达产物进行TricineSDSPAGE电泳分析和WesternBlot检测分析.结果构建了重组融合表达质粒pQE30Tum5,表达的蛋白经TricineSDSPAGE电泳分析,在约Mr10×103处出现了一条新生的蛋白条带,经灰度扫描检测,表达量约占菌体总蛋白的40%,纯化后的蛋白灰度扫描检测,纯度为95%.结论:成功地构建了人Tum5基因的原核表达载体,并纯化了该基因的原核表达产物. 展开更多
关键词 TUMSTATIN Tum-5 重组融合蛋白质类/分离和提纯 pQE载体
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人源瞬时受体电位M2型通道Nudix水解酶9同源结构域的提取和纯化
3
作者 叶培武 余夏飞 +1 位作者 马骋 杨巍 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期5-11,共7页
目的:摸索人源瞬时受体电位M2型通道(TRPM2)羧基端Nudix水解酶9(NUDT9)同源结构域(NUDT9-H)的蛋白提取和纯化方法。方法:异丙基硫代半乳糖苷诱导表达的Rosetta(DE3)大肠埃希菌菌株经超声破碎和离心后,将收集到的上清液与GST磁珠结合并... 目的:摸索人源瞬时受体电位M2型通道(TRPM2)羧基端Nudix水解酶9(NUDT9)同源结构域(NUDT9-H)的蛋白提取和纯化方法。方法:异丙基硫代半乳糖苷诱导表达的Rosetta(DE3)大肠埃希菌菌株经超声破碎和离心后,将收集到的上清液与GST磁珠结合并用还原型谷胱甘肽洗脱以抽提GST-NUDT9-H融合蛋白,浓缩离心后再经分子排阻色谱层析纯化,最后经凝血酶酶切并与GST磁珠结合即得NUDT9-H蛋白。结果:含有0.5%的十二烷基-β-D-麦芽糖苷(DDM)裂解溶液体系和0.025%的DDM分子排阻层析色谱溶液体系能够提高GST-NUDT9-H融合蛋白的稳定性,再按每2 mg融合蛋白加入1 U凝血酶切割24 h,即获得高纯度NUDT9-H蛋白。结论:NUDT9-H蛋白稳定性较差,提取和纯化体系中需添加DDM以稳定其构象从而提高目的蛋白的产量和纯度。 展开更多
关键词 瞬时受体电位通道 焦磷酸酶类/药理学 重组融合蛋白质类/分离和提纯 谷胱甘肽转移酶
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乳源抗菌-免疫调节融合蛋白原核表达和纯化 被引量：2
4
作者 江良梁 秦宜德 +2 位作者 周艳 王超 刘滋康 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2008年第3期260-263,共4页
目的构建乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)与免疫调节肽(PGPIPN)融合肽表达质粒,并在大肠杆菌BL21中表达及纯化。方法采用重叠延伸PCR技术获得融合肽基因片段,并构建到原核表达载体pGEX-KG中,挑选阳性重组子,经限制性内切酶鉴定后转化到大肠杆菌B... 目的构建乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)与免疫调节肽(PGPIPN)融合肽表达质粒,并在大肠杆菌BL21中表达及纯化。方法采用重叠延伸PCR技术获得融合肽基因片段,并构建到原核表达载体pGEX-KG中,挑选阳性重组子,经限制性内切酶鉴定后转化到大肠杆菌BL21,然后用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白。用Glutathione Sepharose4B亲和层析方法纯化融合蛋白。结果成功构建原核表达质粒pGEX-KG-FP,并在大肠杆菌BL21中诱导其高表达。SDS-PAGE及Western-blot分析显示,特异性的抗GST单克隆抗体所识别的融合蛋白分子量与理论值相近。经Glutathione Sepharose4B纯化后,得到较纯的GST-FP融合蛋白。结论构建了原核表达的融合蛋白质粒,并高效表达和纯化了该融合蛋白。 展开更多
关键词 大肠杆菌 肽类/遗传学 基因表达 重组融合蛋白 质类
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重组人C22orf37融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定
5
作者 叶星明 姜昌丽 张英起 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第12期1057-1059,共3页
目的:构建人C22orf37基因的原核表达载体,表达并纯化C22orf37重组蛋白.方法:应用PCR方法从人外周血白细胞cDNA文库中获得人C22orf37基因,成功构建人C22orf37融合表达载体,诱导表达His-C22orf37融合表达蛋白并对表达产物进行SDS-PAGE电... 目的:构建人C22orf37基因的原核表达载体,表达并纯化C22orf37重组蛋白.方法:应用PCR方法从人外周血白细胞cDNA文库中获得人C22orf37基因,成功构建人C22orf37融合表达载体,诱导表达His-C22orf37融合表达蛋白并对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western Blot鉴定.应用镍螯合层析法纯化重组融合蛋白,并对纯化产物进行纯度分析.结果:成功构建了人C22orf37重组融合载体pQE30-C22orf37,工程菌pQE30-C22orf37/DH5α经IPTG诱导后的菌体蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在Mr约18 000处出现了一条新生的蛋白条带,Western Blot结果显示该条带能够与His抗体特异性结合.应用Ni-NTA层纯化出目的蛋白,纯化后的蛋白经Primer Premier软件分析纯度约80%.结论:成功构建了人C22orf37的融合蛋白原核表达载体并成功表达与纯化了人C22orf37的融合蛋白,为下一步的C22orf37 mAb的制备和C22orf37蛋白表达的组织分布及功能研究奠定了基础. 展开更多
关键词 人C22orf37基因 原核表达 重组融合蛋白质类/分离和提纯
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