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基因重组抗原ELISA法在梅毒螺旋体抗体检测中的评价 被引量:26
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作者 傅均星 周潇 曾铁兵 《南华大学学报(医学版)》 2004年第3期305-306,314,共3页
目的 评价基因重组抗原ELISA法在梅毒螺旋体抗体检测中的意义。方法 用甲苯胺红不加热血清试验 (TRUST)、梅毒螺旋体重组抗原酶联免疫吸附试验 (ELISA)和梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)对 335份梅毒患者和非梅毒者的临床血清标本进行... 目的 评价基因重组抗原ELISA法在梅毒螺旋体抗体检测中的意义。方法 用甲苯胺红不加热血清试验 (TRUST)、梅毒螺旋体重组抗原酶联免疫吸附试验 (ELISA)和梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)对 335份梅毒患者和非梅毒者的临床血清标本进行检测。结果 以TPPA阳性者为标准 ,TRUST有 6份为假阴性 ,4份为假阳性 ;ELISA假阳性 1份 ,无假阴性。TRUST和ELISA的敏感性、特异性分别为 94.8%、98.2 %和 1 0 0 %、99.5 %。TRUST与TPPA的符合率为 97.0 % ,ELISA与TPPA的符合率为99 .7%。ELISA的敏感性、特异性都优于TRUST ,与TPPA符合率高。结论 重组抗原ELISA法检测梅毒螺旋体特异性抗体具有敏感性高、特异性好、结果客观、自动化程度高等优点 ,适用于梅毒初筛和确诊。 展开更多
关键词 梅毒 重组抗原 酶联免疫吸附试验 甲苯胺红不加热血清试验 梅毒螺旋体明胶凝集试验
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与人类关系密切的7种动物对戊型肝炎病毒易感性的初步研究 被引量:20
2
作者 丁福 孟继鸿 +5 位作者 张兰芳 程险峰 张汇东 贺星亮 杨志国 许家璋 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第1期52-55,共4页
目的 用双抗原夹心法ELISA (DS -ELISA)和逆转录巢式PCR法 (RT -nPCR)研究与人类生活关系密切的猪、犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔等 7种动物对戊型肝炎病毒 (HEV)的易感性。方法 用多基因型HEV重组蛋白建立检测HEV抗体的DS -ELISA ,并... 目的 用双抗原夹心法ELISA (DS -ELISA)和逆转录巢式PCR法 (RT -nPCR)研究与人类生活关系密切的猪、犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔等 7种动物对戊型肝炎病毒 (HEV)的易感性。方法 用多基因型HEV重组蛋白建立检测HEV抗体的DS -ELISA ,并用于 5 91份猪、警犬、家犬、宠物犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔等多种动物血清标本的HEV抗体检测 ;用HEV多基因型通用性引物RT -nPCR扩增 14 3份犬血清标本HEVRNA。结果 在猪、家犬和宠物犬血清标本中检测到HEV抗体 ,阳性率分别为 4 3 93%、15 19%和 4 6 5 % ,但在警犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔血清标本中未检测到HEV抗体 ;14 3份犬血清标本用RT -nPCR未扩增出HEVRNA。结论 用多基因型HEV重组蛋白建立的双抗原夹心法ELISA适用于多种动物血清标本HEV抗体的检测 ;猪和犬对HEV易感 ,在HEV传播中可能起重要作用。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 易感性 重组蛋自 双抗原夹心法ELISA 逆转录巢式PCR
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禽流感病毒重组核蛋白在琼扩诊断中的应用 被引量:13
3
作者 邓国华 邓国华 +3 位作者 唐秀英 田国彬 于康震 于康震 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期25-27,共3页
利用杆状病毒表达禽流感病毒型特异性抗原-核蛋白,并就重组核蛋白作为禽流感琼扩诊断抗原地特异性和敏感性及作为抗原的其它特性进行了研究,并与普通全病毒琼扩抗原进行了应用比较试验,对354份现地可疑血清样品进行了检测,结果... 利用杆状病毒表达禽流感病毒型特异性抗原-核蛋白,并就重组核蛋白作为禽流感琼扩诊断抗原地特异性和敏感性及作为抗原的其它特性进行了研究,并与普通全病毒琼扩抗原进行了应用比较试验,对354份现地可疑血清样品进行了检测,结果表明:该抗原可以特异性地定性检测出所有15个禽流感病毒亚型的抗血清,与普通全病毒琼扩抗原的检测结果一致,但沉淀线更细密、清晰,保存方便;与我国广泛流行的15种禽类其它病原体的抗血清没有任何交叉反应,表明该重组核蛋白作为禽流感琼扩抗原特异、敏感、生物安全性更可靠和生产成本更低廉,有利于进一步扩大禽流感疫情调查范围和加大监测力度。 展开更多
关键词 重组核蛋白 琼扩抗原 检测
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应用重组抗原预防猪囊虫病 被引量:13
4
作者 翟春生 唐雨德 顾志香 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期359-362,共4页
应用2种重组抗原分别制成免疫刺激复合体疫苗各接种试验猪2次,间隔14d。第2次接种后7d用有钩绦虫卵感染(2×104个/头)。感染后116d,9头对照猪共发现1067个囊虫,平均118.6个/头;免疫A组8头试验... 应用2种重组抗原分别制成免疫刺激复合体疫苗各接种试验猪2次,间隔14d。第2次接种后7d用有钩绦虫卵感染(2×104个/头)。感染后116d,9头对照猪共发现1067个囊虫,平均118.6个/头;免疫A组8头试验猪共发现囊虫510个,平均63.8个/头,减虫率为46.2%;免疫B组9头试验猪共发现囊虫83个,平均9.2个/头,减虫率为92.2%。在免疫B组猪体内发现的囊虫发育不全,虫体小,囊液少,囊膜较厚、不透明,呈乳白色,囊虫组织呈退行性病理变化,并伴有大量炎性细胞浸润。免疫动态监测发现,试验猪抗囊虫感染的免疫力主要取决于细胞免疫,而与体液免疫无关。试验猪血清循环抗原(CA)检测结果与剖检所见囊虫数量密切相关(P<0.01)。由此认为,CA检测是简便易行、效果可靠的现场实用技术。 展开更多
关键词 囊虫病 重组抗原 预防接种
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日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa重组抗原的免疫原性研究 被引量:16
5
作者 赵巍 苏川 +4 位作者 吴海玮 沈蕾 王荣芝 陈淑贞 张兆松 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第3期24-27,共4页
用日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa重组抗原(rSj22.6)免疫一批昆明小鼠,获得特异性免疫血清,其与22.6kDa重组抗原和日本血吸虫成虫抗原作免疫印迹试验(Westernblot),结果显示可特异地识别重组抗原和成虫抗原中22.6kDa分子... 用日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa重组抗原(rSj22.6)免疫一批昆明小鼠,获得特异性免疫血清,其与22.6kDa重组抗原和日本血吸虫成虫抗原作免疫印迹试验(Westernblot),结果显示可特异地识别重组抗原和成虫抗原中22.6kDa分子,而正常鼠血清则不能识别。实验中,血清经去除抗大肠杆菌抗体的处理后,其与大肠杆菌的非特异性反应条带被去除,特异性反应的条带则增强。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组抗原 单特异免疫血清
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日本血吸虫31/32kDa重组抗原对小鼠免疫保护性研究 被引量:14
6
作者 沈定文 罗金萍 +2 位作者 陈喜珪 覃金红 彭胜国 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期171-172,共2页
目的 探讨日本血吸虫 31/ 32kDa重组抗原 (rSj31/ 32 )抗血吸虫感染的免疫效果。方法 日本血吸虫 31/32kDa单克隆抗体免疫筛选的阳性克隆 312经IPTG诱导表达 ,表达产物rSj31/ 32加福氏佐剂免疫小鼠后进行攻击感染实验。结果 与对照... 目的 探讨日本血吸虫 31/ 32kDa重组抗原 (rSj31/ 32 )抗血吸虫感染的免疫效果。方法 日本血吸虫 31/32kDa单克隆抗体免疫筛选的阳性克隆 312经IPTG诱导表达 ,表达产物rSj31/ 32加福氏佐剂免疫小鼠后进行攻击感染实验。结果 与对照组相比较 ,rSj31/ 32可诱导小鼠产生 30 1%的减虫率 ,6 3 2 %的减卵率 (P <0 0 1) ,虫卵肉芽肿平均面积和周长均明显降低 ,rSj31/ 32免疫能诱导一定水平的抗血吸虫抗体。 结论 结果表明 ,rSj31/ 32可诱导小鼠产生一定程度的保护免疫力 ,有可能作为血吸虫疫苗候选抗原分子。 展开更多
关键词 日本血吸虫 31/32KDA 重组抗原 保护性免疫 血吸虫疫苗
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鸡球虫重组疫苗的研究进展 被引量:6
7
作者 韩红玉 黄兵 《生物技术通报》 CAS CSCD 2000年第6期18-23,共6页
球虫病是由艾美耳球虫引起的一种对家禽危害极为严重的全球性寄生虫病 ,目前仍以药物防治为主。由于球虫抗药株的不断出现、研制新药的费用昂贵和药物残留的日趋严重 ,使得球虫疫苗研究成为近年的热点。采用DNA重组技术获得的重组疫苗... 球虫病是由艾美耳球虫引起的一种对家禽危害极为严重的全球性寄生虫病 ,目前仍以药物防治为主。由于球虫抗药株的不断出现、研制新药的费用昂贵和药物残留的日趋严重 ,使得球虫疫苗研究成为近年的热点。采用DNA重组技术获得的重组疫苗逐渐受到人们的重视 ,发展很快。综述近年来家禽球虫重组疫苗的研究情况 ,探讨重组疫苗的利用前景、存在问题和解决途径。 展开更多
关键词 重组抗原 艾美耳球虫 基因克隆 重组疫苗
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日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因克隆及特性鉴定 被引量:10
8
作者 胡雪梅 吴海玮 +8 位作者 张兆松 苏川 赵巍 沈蕾 王荣芝 马磊 周吉礼 陈淑贞 吴观陵 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期220-223,共4页
[目的 ]探索研制血吸虫病疫苗的新路径 ,对日本血吸虫线粒体相关蛋白进行基因克隆及特性鉴定。[方法 ]分析本室筛选日本血吸虫成虫cDNA文库获得的 1个cDNA片段 (Sj338 2 4)的开读框序列 ,在其上下游分别设计引物A和B ,并以该cDNA片段为... [目的 ]探索研制血吸虫病疫苗的新路径 ,对日本血吸虫线粒体相关蛋白进行基因克隆及特性鉴定。[方法 ]分析本室筛选日本血吸虫成虫cDNA文库获得的 1个cDNA片段 (Sj338 2 4)的开读框序列 ,在其上下游分别设计引物A和B ,并以该cDNA片段为模板进行PCR扩增后 ,将该片段重组于pGEM T中并进行DNA测序鉴定及检索。再经酶切后将该基因片段亚克隆入表达载体pGEX 6P 1,并进行蛋白表达、纯化及抗原性鉴定。 [结果 ]该目的基因PCR产物全长共 487bp ,其开读框由 45 9bp组成 ,编码 15 3个氨基酸经残基组成的多肽。DNA序列同源性分析发现Sj338克隆基因与人及褐鼠的线粒体外膜蛋白的部分编码基因较高度同源。重组质粒pPEX 6P 1 Sj338能高效融合表达 ,理论蛋白的分子量为 17kDa。SDS PAGE和Westernblotting检测结果表明 ,重组蛋白rSj338具有良好的抗原性。 [结论 ]Sj338可能为日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因 ,重组蛋白有望成为新的疫苗候选分子。 展开更多
关键词 日本血吸虫 线粒体 基因克隆 线粒体相关蛋白
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重组质粒pGEX-6P-1/Sj-FABPc的构建及在大肠杆菌中的表达 被引量:11
9
作者 赵巍 苏川 +6 位作者 吴海玮 胡雪梅 沈蕾 王荣芝 马磊 陈淑贞 张兆松 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2000年第5期261-264,共4页
目的 构建基因工程菌株 ,获得重组蛋白 Sj- FABPc(日本血吸虫脂肪酸结合蛋白 )。方法 用 PCR法从日本血吸虫 c DNA文库中扩增 Sj- FABPc基因片段 ,再将该片段重组于 p GEM- T中并进行 DNA测序鉴定 ,经酶切后将目的片段构建成重组质粒 ... 目的 构建基因工程菌株 ,获得重组蛋白 Sj- FABPc(日本血吸虫脂肪酸结合蛋白 )。方法 用 PCR法从日本血吸虫 c DNA文库中扩增 Sj- FABPc基因片段 ,再将该片段重组于 p GEM- T中并进行 DNA测序鉴定 ,经酶切后将目的片段构建成重组质粒 p GEX- 6 P- 1/ Sj- FABPc,转化于大肠杆菌 BL2 1 ,IPTG诱导表达。用 Glutathione Sepharose TM 4B亲和层析柱对表达产物进行纯化 ,Pre Scission TMProtease酶对融合蛋白进行解离 ,获得纯化的 14k Da Sj- FABPc。SDS- PAGE和 West-ern Blot方法对表达产物进行鉴定。结果 获得 p GEX- 6 P- 1/ Sj- FABPc菌株 ,分离纯化出 14k Da Sj-FABPc,表达量为 10 .5 2 m g/ L。Western Blot显示 ,表达蛋白能被日本血吸虫免疫兔血清识别。结论 重组蛋白 Sj- FABPc可高效表达并有良好的抗原性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 脂肪酸结合蛋白 基因克隆 重组抗原
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旋毛虫抗原的研究进展 被引量:11
10
作者 马鸣旺 申丽洁 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第8期631-634,共4页
旋毛虫抗原分为表面抗原、排泄-分泌抗原(ES抗原)、虫体抗原和杆细胞颗粒相关抗原,本文综述了其分类、化学组成及其功能、免疫保护性和重组抗原的研究情况。
关键词 旋毛虫抗原 磷酸胆碱 泰威糖 免疫保护性 重组抗原 综述
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日本血吸虫特异性IgE相关抗原编码基因的克隆和鉴定 被引量:6
11
作者 王勇 苏川 +7 位作者 张兆松 胡雪梅 沈蕾 刘丰 王荣芝 陈淑贞 李春林 吴观陵 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期272-275,共4页
目的 从日本血吸虫成虫cDNA文库中筛选并克隆日本血吸虫特异性IgE相关抗原编码基因。 方法 用ABC ELISA法从日本血吸虫病流行区筛选出高水平抗血吸虫成虫抗原IgE抗体的个体 15人 ,采集血清并混合。混合血清经Protein G柱吸收后 ,用... 目的 从日本血吸虫成虫cDNA文库中筛选并克隆日本血吸虫特异性IgE相关抗原编码基因。 方法 用ABC ELISA法从日本血吸虫病流行区筛选出高水平抗血吸虫成虫抗原IgE抗体的个体 15人 ,采集血清并混合。混合血清经Protein G柱吸收后 ,用于日本血吸虫成虫cDNA文库的免疫学筛选。PCR扩增阳性克隆插入cDNA片段。序列分析后 ,于该序列第一开读框两端设计引物并分别引入EcoRⅠ和NotⅠ位点 ,PCR扩增并纯化目的基因片段后克隆入质粒载体pGME T ,再亚克隆入表达载体pGEX 6p 1。经IPTG诱导表达 ,对表达产物进行SDS PAGE和Westernblotting鉴定。 结果 阳性克隆插入片段约 12 0 0bp ,第一开读框长 5 0 7bp ,编码 16 9个氨基酸 ,理论分子量为 19 3kDa。DNA序列分析显示 ,与已知序列同源性小于 4 0 %。重组质粒pGEX 6p 1/Sj4 3B能高效表达融合蛋白 ,且能被日本血吸虫特异性IgE抗体识别。 结论 成功构建的重组质粒pGEX 6p 1/Sj4 3B ,Sj4 展开更多
关键词 日本血吸虫 IGE 基因克隆 重组抗原 融合蛋白 鉴定
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可溶性重组日本血吸虫26 kDa GST的优化表达 被引量:10
12
作者 余光清 蒋诗琴 李雍龙 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期770-773,共4页
目的探讨在大肠杆菌中表达可溶性重组日本血吸虫谷胱甘肽S-转移酶(rSj26 GST)的优化条件。方法用含有Sj26基因的原核表达载体pGEX-3X转化大肠杆菌BL21(DE3),将影响可溶性rSj26 GST表达的4个因素,即温度、诱导剂IPTG浓度、诱导时细菌的... 目的探讨在大肠杆菌中表达可溶性重组日本血吸虫谷胱甘肽S-转移酶(rSj26 GST)的优化条件。方法用含有Sj26基因的原核表达载体pGEX-3X转化大肠杆菌BL21(DE3),将影响可溶性rSj26 GST表达的4个因素,即温度、诱导剂IPTG浓度、诱导时细菌的密度和诱导时间进行正交设计,确定其优化表达条件并大量表达,采用谷胱甘肽亲和层析法纯化表达的蛋白,测定酶活性,通过Western blot鉴定免疫活性。结果正交设计的直观分析和方差分析结果显示:可溶性rSj26GST最佳表达条件为温度25℃,IPTG的浓度1 mmol/L,诱导前细菌的生长密度0.9,诱导表达时间8 h。可溶性rSj26 GST纯化的产量为16 mg/L,Western blot证实rSj26 GST具有良好免疫原性和免疫反应性。结论通过正交设计确定了可溶性rSj26 GST在大肠杆菌中表达的优化条件。 展开更多
关键词 日本血吸虫 日本血吸虫谷胱甘肽 S-转移酶 蛋白表达 正交设计 大肠杆菌
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戊型肝炎病毒抗体双抗原夹心法ELISA的建立与初步应用 被引量:8
13
作者 何志强 葛胜祥 +5 位作者 邱艳 彭耿 陈毅歆 何水珍 张军 夏宁邵 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第6期18-21,共4页
目的 建立抗戊型肝炎病毒 (HEV)抗体检测的双抗原夹心ELISA(DS -ELISA) ,并应用于多种动物血清的检测。方法 将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物酶 (HRP)标记 ,利用 5份阳性血清和 4 0份阴性血... 目的 建立抗戊型肝炎病毒 (HEV)抗体检测的双抗原夹心ELISA(DS -ELISA) ,并应用于多种动物血清的检测。方法 将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物酶 (HRP)标记 ,利用 5份阳性血清和 4 0份阴性血清建立双抗原夹心ELISA ;用 4 0 0份义务献血员血清比较双抗原夹心ELISA与间接法IgG抗体ELISA的符合情况 ;用 3只HEV感染猴系列血清比较双抗原夹心ELISA试剂和Genelabs公司HEVIgG试剂 ;用双抗原夹心ELISA试剂检测新疆地区的部分牛、绵羊、山羊、猪血清和上海地区的部分鸡血清中的HEV抗体。结果 建立了检测HEV抗体的双抗原夹心ELISA方法 ,对 4 0 0份义务献血员血清的检测表明其与间接法IgG抗体ELISA试剂的符合情况良好 ,并且有更高的s/co比值 ;与Genelabs公司HEVIgG试剂的比较表明双抗原夹心ELISA试剂的检出更早 ,尤其是持续时间及强度明显优于Genelabs试剂 ;在所检测的各种动物中均发现了HEV抗体 ,其中猪抗体的阳性率最高 ,表明双抗原夹心ELISA试剂可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。结论 利用大肠杆菌表达的HEV重组抗原建立了双抗原夹心法ELISA ,并可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。 展开更多
关键词 戊型肝炎 抗体检测 双抗原夹心法ELISA 重组抗原 HEV
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抗恶性疟重组复合抗原的免疫血清对恶性疟原虫体外生长的抑制作用 被引量:9
14
作者 李全贞 毕惠祥 +3 位作者 李英杰 谢毅 任大明 徐秉锟 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期209-213,共5页
本文初步观察了兔抗两种重组恶性疟复合抗原(C和CAC)的免疫血清对恶性疟原虫的体外抑制作用。实验结果显示:抗C和抗CAC两种免疫血清对疟原虫体外生长均有明显抑制作用,但抗CAC血清的抑制效果更明显(P<0.05)。抑制程度随培养物... 本文初步观察了兔抗两种重组恶性疟复合抗原(C和CAC)的免疫血清对恶性疟原虫的体外抑制作用。实验结果显示:抗C和抗CAC两种免疫血清对疟原虫体外生长均有明显抑制作用,但抗CAC血清的抑制效果更明显(P<0.05)。抑制程度随培养物中免疫血清浓度的增高及作用时间的延长而增强,其中抗CAC免疫血清在1%、10%和20%浓度时对疟原虫第2增殖周期(72h)的抑制率分别可达15%、54%和82%。免疫血清作用后较多原虫呈现发育不良及裂殖子凝集和成熟原虫退变现象,提示可能与复合抗原中的多个保护性抗原位点所产生的多功能抗体有关。 展开更多
关键词 疟原虫 重组蛋白 抗原 体外抑制试验 免疫血清
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弓形虫多表位基因重组抗原在弓形虫免疫检测中的应用 被引量:8
15
作者 杨培梁 李华 +3 位作者 周晓红 彭鸿娟 吴焜 陈晓光 《热带医学杂志》 CAS 2007年第9期853-855,共3页
目的评价弓形虫多表位基因重组抗原在弓形虫感染诊断中的效果,探索多表位抗原在弓形虫免疫检测中的应用前景。方法以Ni-NTA Agarose和割胶电渗两步纯化法,获取弓形虫多表位基因的原核表达纯化产物rMAG,以适宜浓度的rMAG包被ELISA微孔板... 目的评价弓形虫多表位基因重组抗原在弓形虫感染诊断中的效果,探索多表位抗原在弓形虫免疫检测中的应用前景。方法以Ni-NTA Agarose和割胶电渗两步纯化法,获取弓形虫多表位基因的原核表达纯化产物rMAG,以适宜浓度的rMAG包被ELISA微孔板,分别检测弓形虫急性和慢性感染血清,评价试剂盒检测的敏感性和特异性。结果经Ni-NTAAgarose和割胶纯化,得到了纯度为95.86%的弓形虫多表位重组可溶性抗原。以3!g/ml的抗原浓度包被ELISA微孔板,对兔和小鼠的急慢性弓形虫感染血清进行了检测。结果检测小鼠血清141份,其中慢性感染弓形虫小鼠血清117份、正常小鼠血清24份,检测体系的敏感性为88.88%,特异性为91.67%,一致性为89.36%。检测兔血清24份,其中急性感染弓形虫兔血清18份,正常兔血清6份,阳性血清检出率为94.4%,总一致性为91.5%。结论以弓形虫多表位重组抗原构建的ELISA试剂盒既可以检测弓形虫急性感染血清,又可以检测弓形虫慢性感染血清,具有一定的应用前景。 展开更多
关键词 弓形虫 多表位基因 重组抗原 免疫诊断 ELISA试剂盒
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旋毛虫新生幼虫T668重组抗原对小鼠的保护性免疫 被引量:9
16
作者 牛廷献 刘明远 +2 位作者 卢强 付宝权 Pascal Boireau 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期20-22,共3页
目的 研究旋毛虫新生幼虫T6 6 8重组抗原的免疫原性 ,制备基因工程疫苗。方法 以旋毛虫新生幼虫期特异性基因T6 6 8在大肠杆菌中的表达蛋白为抗原免疫小鼠 ,每间隔 10d免疫 1次 ,共免疫 3次。末次免疫后 10d ,每只小鼠攻击感染 2 0 0... 目的 研究旋毛虫新生幼虫T6 6 8重组抗原的免疫原性 ,制备基因工程疫苗。方法 以旋毛虫新生幼虫期特异性基因T6 6 8在大肠杆菌中的表达蛋白为抗原免疫小鼠 ,每间隔 10d免疫 1次 ,共免疫 3次。末次免疫后 10d ,每只小鼠攻击感染 2 0 0条旋毛虫感染性肌幼虫 ,感染后 5周用消化法检查肌幼虫 (ML)负荷。结果 T6 6 8重组抗原免疫组肌幼虫减虫率明显高于佐剂组和对照组。结论 T6 6 8重组抗原能诱导小鼠产生一定程度的保护性免疫 ,且可激发特异性体液免疫。 展开更多
关键词 旋毛虫新生幼虫 重组抗原 保护性免疫
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细粒棘球蚴病诊断抗原研究进展 被引量:8
17
作者 安晓雪 余华 +1 位作者 严玉宝 杨光友 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第4期85-89,共5页
细粒棘球蚴病严重危害人畜健康,给畜牧业造成巨大经济损失。该病的早期诊断有很重要的意义。囊液抗原、原头节抗原和囊壁抗原等天然抗原是用于该病诊断的主要抗原,但存在敏感性差、特异性弱等缺点。近年来,人们合成了AgB、Ag5、EpC1、Eg... 细粒棘球蚴病严重危害人畜健康,给畜牧业造成巨大经济损失。该病的早期诊断有很重要的意义。囊液抗原、原头节抗原和囊壁抗原等天然抗原是用于该病诊断的主要抗原,但存在敏感性差、特异性弱等缺点。近年来,人们合成了AgB、Ag5、EpC1、EgTPx等重组抗原,将其用于诊断,并获得了较高的敏感性和特异性。论文将用于诊断的天然抗原和重组抗原进行了综述。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴病 诊断抗原 囊液抗原 重组抗原
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安氏隐孢子虫热休克蛋白编码基因的克隆、表达和分析 被引量:9
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作者 刘海鹏 曹建平 +5 位作者 李小红 卢潍媛 沈玉娟 徐馀信 臧炜 刘述先 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期163-170,共8页
目的克隆、表达和分析安氏隐孢子虫Mr70000热休克蛋白(CaHSP70)的部分编码基因。方法依据公布的CaHSP70基因序列设计引物,以江苏徐州安氏隐孢子虫(XZ-BOV)总RNA为模板,反转录PCR(RT-PCR)扩增目的编码基因。PCR产物经TA克隆后,亚克隆入pE... 目的克隆、表达和分析安氏隐孢子虫Mr70000热休克蛋白(CaHSP70)的部分编码基因。方法依据公布的CaHSP70基因序列设计引物,以江苏徐州安氏隐孢子虫(XZ-BOV)总RNA为模板,反转录PCR(RT-PCR)扩增目的编码基因。PCR产物经TA克隆后,亚克隆入pET28a原核表达载体,构建重组质粒pET28a-CaHSP70,转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并获得纯化的重组蛋白(简称为rCaHSP70)。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(Western blotting)和ELISA对该重组蛋白进行分析和鉴定。采用相关生物信息学软件对序列进行分析。结果根据克隆的目的基因序列推导的氨基酸序列与GenBank登录的CaHSP70一致。SDS-PAGE和Western blotting分析显示,重组蛋白(rCaHSP70)Mr约为43000(含6个组氨酸),以包涵体的形式存在,可被辣根过氧化物酶标记的抗组氨酸抗体、安氏隐孢子虫感染的小鼠血清、微小隐孢子虫感染的儿童血清和rCaHSP70免疫小鼠血清识别。rCaHSP70存在多个功能位点和潜在的抗原决定簇。种系发生分析表明XZ-BOV与安氏隐孢子虫进化关系最近。ELISA检测结果表明,rCaHSP70免疫的C57BL/6小鼠与BALB/c小鼠血清特异性抗体滴度均显著高于免疫前。结论XZ-BOVHSP70部分编码基因的克隆获得成功,研究获得的重组蛋白具有一定的免疫原性和免疫反应性。 展开更多
关键词 安氏隐孢子虫 热休克蛋白 重组抗原 表位分析
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几种结核分支杆菌重组蛋白诱发豚鼠迟发型超敏反应的研究 被引量:8
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作者 张灵霞 吴雪琼 +2 位作者 史迎昌 梁建琴 张俊仙 《中国防痨杂志》 CAS 北大核心 2002年第3期116-118,共3页
目的 了解结核分支杆菌重组抗原ESAT6 (E)、MPT6 4 (M )、Ag85A(A)及两两混合物诱发豚鼠产生迟发型超敏 (DTH)反应的能力。方法 常规皮肤实验法 :灭活H3 7Rv全菌体致敏豚鼠 ,皮肤试验以生理盐水为阴性对照 ,5UPPD标准品为阳性对照 ,0... 目的 了解结核分支杆菌重组抗原ESAT6 (E)、MPT6 4 (M )、Ag85A(A)及两两混合物诱发豚鼠产生迟发型超敏 (DTH)反应的能力。方法 常规皮肤实验法 :灭活H3 7Rv全菌体致敏豚鼠 ,皮肤试验以生理盐水为阴性对照 ,5UPPD标准品为阳性对照 ,0 .8μgE、0 .8μgM、0 .8μgA、0 .4 μgA + 0 .4 μgM、0 .4 μgA + 0 .4 μgE、0 .4 μgE + 0 .4 μgM分别于背部皮内注射 ,注射后 2 4、4 8、72h分别测量硬结反应横、纵直径 (mm ) ,取二者的平均值。皮肤试验轮圈法 :生理盐水、5UPPD及 0 .8μgE、0 .8μgM、0 .8μgA、0 .4 μgA + 0 .4 μgM、0 .4 μgA + 0 .4 μgE、0 .4 μgE + 0 .4 μgM ,以轮圈法注射于同一只豚鼠背部两侧 ,每批 6只 ,共 3批。注射后 2 4、4 8、72h分别测量硬结反应横、纵直径 (mm) ,取二者的平均值。结果 常规皮肤试验 0 .8μgM、A、M +E及E +A诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,而 0 .8μgE抗原及M +A诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比有显著性差异(P <0 .0 5 )。时间效应 :重组抗原及其混合物诱发豚鼠DTH的平均直径 2 4h平均直径显著高于 4 8h平均直径 (P <0 .0 5 ) ,2 4h测量效果较好。轮圈法皮肤试验排除个体差异后 ,结果与常规皮肤试验结果一致。结论 从试验结果? 展开更多
关键词 结核分支杆菌 重组结核分支杆菌蛋白抗原 迟发超敏反应
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免疫刺激序列增强日本血吸虫DNA疫苗的免疫保护作用 被引量:6
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作者 赵松 朱荫昌 +7 位作者 D.A.Harn 司进 任建功 殷旭仁 何伟 梁幼生 徐明 许永良 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期1-5,共5页
目的 探讨免疫刺激序列在日本血吸虫Mr 2 3 0 0 0膜蛋白 (SjC2 3 )DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗血吸虫感染中的作用。 方法 将SjC2 3基因片段克隆到增加了免疫刺激序列的真核表达质粒 pcDNA3 1 CpG中 ,构建pcDNA3 1 SjC2 3 /CpG。 40... 目的 探讨免疫刺激序列在日本血吸虫Mr 2 3 0 0 0膜蛋白 (SjC2 3 )DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗血吸虫感染中的作用。 方法 将SjC2 3基因片段克隆到增加了免疫刺激序列的真核表达质粒 pcDNA3 1 CpG中 ,构建pcDNA3 1 SjC2 3 /CpG。 40只雌性BALB/c小鼠随机分为 4组 ,① pcDNA3 1对照组 ;②pcDNA3 1 SjC2 3组 ;③ pcD NA3 1 CpG组 ;④ pcDNA3 1 SjC2 3 /CpG组。每鼠经两侧股四头肌注射质粒DNA共 10 0 μg ,隔 2周加强免疫 1次 ,共 3次。末次免疫后 4周经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴 45条 /鼠 ,45d后计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前和感染前 2d分别经尾静脉采血 ,检测IgG及IgG1、IgG2a。末次免疫后 3周取小鼠脾细胞 ,检测经伴刀豆球蛋白和SjC2 3重组蛋白刺激后小鼠白细胞介素 2 (IL 2 )、白细胞介素 4(IL 4)和γ干扰素 (IFN γ)。用51Cr释放法检测经SjC2 3重组蛋白刺激后脾细胞对小鼠淋巴瘤细胞的杀伤作用。 结果 ②组和④组减虫率分别为 2 8 1%和 3 5 1% ,减卵率分别为 2 1 6%和 2 6 5 %。④组减虫率显著高于②组 (P <0 0 5 )。这两组均检测到特异性IgG ,IgG2a/IgG1比值分别为 10 1和 12 2。脾细胞经伴刀豆球蛋白和SjC2 3重组蛋白刺激后的IL 2水平 ,②组较①组、④组较③组均有升高。②组脾? 展开更多
关键词 免疫刺激序列 PCDNA3 脾细胞 DNA疫苗 日本血吸虫 免疫保护作用 小鼠 白刺 刀豆 成虫
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