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重组包涵体蛋白质的折叠复性 被引量：63
1
作者 冯小黎 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期482-485,共4页
综述了减少包涵体形成、包涵体分离和溶解以及包涵体折叠复性的策略及其最新进展 .详细讨论了包涵体蛋白质折叠复性的基本原则。
关键词 包涵体 重组蛋白质 折叠复性
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一个新的白血病相关基因LRP16全长cDNA的克隆、序列分析及表达特征 被引量：60
2
作者 韩为东 于力 +5 位作者 楼方定 王全顺 赵瑜 史子江 焦宏远 周建军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期209-214,共6页
克隆一个与白血病复发相关基因 (LRP1 6)的全长 c DNA序列 ,对其进行染色体定位、组织表达谱分析 ,并对该基因编码蛋白质进行原核表达 .首先用获得的一段 3kb DNA片段在 NCBI提供的 h ESTs数据库中进行电子杂交并对重叠克隆片段组装 ,... 克隆一个与白血病复发相关基因 (LRP1 6)的全长 c DNA序列 ,对其进行染色体定位、组织表达谱分析 ,并对该基因编码蛋白质进行原核表达 .首先用获得的一段 3kb DNA片段在 NCBI提供的 h ESTs数据库中进行电子杂交并对重叠克隆片段组装 ,再设计引物进行 c DNA末端快速扩增(RACE技术 ) .采用 Northern印迹方法进行组织表达分析 .以高通量基因组序列 (HTGS)数据库为基础进行染色体定位 .对构建的克隆菌用 IPTG诱导重组蛋白表达后进行 SDS- PAGE,同时对重组体测序确证 .钓取了该基因全长 c DNA、推导所编码的氨基酸序列 ,并将该基因定位于染色体1 1 q1 2 .2 .原核表达筛选获得了该基因重组子的一个缺失体 .对 LRP1 6基因全长 c DNA的序列分析提示 ,该基因可能编码两种 N端不同的蛋白质 ,且该基因的转录本可能存在一种丰度较低的剪接体 . 展开更多
关键词 白血病 相关基因 LRP16 重组蛋白 原核表达 CDNA 克隆 序列分析
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大肠杆菌表达系统的研究进展 被引量：42
3
作者 戎晶晶 刁振宇 周国华 《药物生物技术》 CAS CSCD 2005年第6期416-420,共5页
近年来利用基因调控、融合表达、共表达以及代谢工程、定向进化等策略对大肠杆菌系统的载体和宿主进行了合理的改进,使目的基因的表达水平以及产物蛋白的活性大大提高,尤其是对长期以来有关真核基因在原核细胞中表达所存在的糖基化、二... 近年来利用基因调控、融合表达、共表达以及代谢工程、定向进化等策略对大肠杆菌系统的载体和宿主进行了合理的改进,使目的基因的表达水平以及产物蛋白的活性大大提高,尤其是对长期以来有关真核基因在原核细胞中表达所存在的糖基化、二硫键形成等翻译后加工问题的研究取得了突破,使得大肠杆菌表达系统在研究和生产中的应用范围得到进一步拓宽。文章从表达载体和宿主细胞两个方面对大肠杆菌表达系统的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 大肠杆菌表达系统 表达载体 宿主细胞 重组蛋白
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蛋白的色谱复性及同时纯化 被引量：32
4
作者 郭立安 耿信笃 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期661-666,共6页
对近年来新发展的用液相色谱 (LC)进行蛋白质复性及同时纯化的方法做了评述 ,详细介绍了蛋白质在 4种液相色谱上的复性及同时纯化的方法、设备和影响因素 ,并对各自的优缺点进行了比较 ,为色谱法作为研究蛋白质折叠及用于基因工程生产... 对近年来新发展的用液相色谱 (LC)进行蛋白质复性及同时纯化的方法做了评述 ,详细介绍了蛋白质在 4种液相色谱上的复性及同时纯化的方法、设备和影响因素 ,并对各自的优缺点进行了比较 ,为色谱法作为研究蛋白质折叠及用于基因工程生产治疗蛋白质的复性及同时纯化技术的进一步应用提供依据。 展开更多
关键词 蛋白质 液相色谱 折叠 基因工程 纯化
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重组M蛋白-乳胶凝集试验检测PRRS病毒血清抗体的研究 被引量：21
5
作者 王忠 杨汉春 +1 位作者 郭鑫 陈艳红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2002年第7期11-13,共3页
利用纯化的 PRRS病毒重组 M蛋白致敏乳胶制成乳胶抗原 ,成功地建立了一种检测 PRRS病毒血清抗体的乳胶凝集试验 (L AT)诊断方法。用制备的乳胶 M抗原分别检测猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病、猪弓形体病、猪衣原体病、猪乙型脑炎阳性血... 利用纯化的 PRRS病毒重组 M蛋白致敏乳胶制成乳胶抗原 ,成功地建立了一种检测 PRRS病毒血清抗体的乳胶凝集试验 (L AT)诊断方法。用制备的乳胶 M抗原分别检测猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病、猪弓形体病、猪衣原体病、猪乙型脑炎阳性血清 ,结果均为阴性 ,无交叉反应 ,说明建立的 L AT方法具有良好的特异性。用建立的乳胶凝集试验方法与国外IDEXX公司 PRRS病毒抗体检测试剂盒同时对 76份猪血清样本进行检测 ,结果表明建立的 L AT方法的特异性和敏感性均为 95 % ,两种方法的总符合率为 87% ,检出率基本一致。研究结果表明 L AT方法具有操作简便、快速、敏感性高、特异性强、价格低廉且可用于现场检测等优点 ,是一种适合基层兽医单位用于 展开更多
关键词 PRRS病毒 重组M蛋白 乳胶凝集试验 抗体检测
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猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达 被引量：32
6
作者 陈建飞 冯力 +3 位作者 时洪艳 孙东波 白兴华 佟有恩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期856-860,895,共6页
应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777... 应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%;推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%。以阳性质粒为模板,用分别含有BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF,其PCR产物经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到pET-30a载体,构建的重组质粒命名为pET-30a-PN;将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4Ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%;Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫学活性。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 N蛋白基因 序列同源性 重组蛋白 免疫学活性
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不同基因型戊型肝炎病毒重组蛋白的抗原性分析 被引量：30
7
作者 孟继鸿 戴星 +2 位作者 窦晓光 YE KHUDYAKOV H A FIELDS 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2002年第1期31-35,共5页
目的 :探讨不同基因型和亚型戊型肝炎病毒 (HEV)重组蛋白氨基酸序列的变化对HEV抗原性的影响 ,筛选出最佳的HEV抗原用于戊型肝炎的免疫诊断。方法 :用已知序列的HEV基因工程表达蛋白作为包被抗原 ,对已知血清标本进行酶联免疫吸附试验... 目的 :探讨不同基因型和亚型戊型肝炎病毒 (HEV)重组蛋白氨基酸序列的变化对HEV抗原性的影响 ,筛选出最佳的HEV抗原用于戊型肝炎的免疫诊断。方法 :用已知序列的HEV基因工程表达蛋白作为包被抗原 ,对已知血清标本进行酶联免疫吸附试验测定。结果 :6种不同抗原对 3 0份正常献血者血清无抗原性 ,对 17份急性戊型肝炎病人血清和 5份实验感染动物血清均呈阳性反应 ,但血清抗体滴度的高低与所用抗原的基因型有关 ,尤其是受到该抗原第 76位氨基酸变化的影响。结论 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 基因型 重组蛋白 抗原性
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外源蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中高效表达的策略 被引量：16
8
作者 刘国奇 王海涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第5期496-500,共5页
高效表达外源蛋白 ,在生物制药中有重要意义 .中国仓鼠卵巢细胞 (Chinesehamsterovarycell)是表达外源蛋白的最佳真核表达系统之一 .影响外源蛋白在CHO细胞表达的因素甚多 ,主要包括载体、宿主细胞和外源基因几方面 .深入了解和灵活运... 高效表达外源蛋白 ,在生物制药中有重要意义 .中国仓鼠卵巢细胞 (Chinesehamsterovarycell)是表达外源蛋白的最佳真核表达系统之一 .影响外源蛋白在CHO细胞表达的因素甚多 ,主要包括载体、宿主细胞和外源基因几方面 .深入了解和灵活运用它们之间的关系 。 展开更多
关键词 重组蛋白 CHO细胞 真核表达系统 生物制药
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人β_2-微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达 被引量：24
9
作者 何贤辉 徐丽慧 +1 位作者 刘毅 曾耀英 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期99-103,共5页
β2 微球蛋白 (β2 m)是主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ类分子的轻链部分 ,为制备MHCⅠ类分子四聚体的必要成分。根据已报道的序列设计特异引物 ,利用RT PCR方法从人白细胞中克隆了 β2 m基因 ,并构建了成熟β2 m的原核表达载体 ,在大... β2 微球蛋白 (β2 m)是主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ类分子的轻链部分 ,为制备MHCⅠ类分子四聚体的必要成分。根据已报道的序列设计特异引物 ,利用RT PCR方法从人白细胞中克隆了 β2 m基因 ,并构建了成熟β2 m的原核表达载体 ,在大肠杆菌中得到高效表达。表达的β2 m大部分在包涵体中 ,经洗涤、变性和复性 ,并以强阴离子交换柱层析纯化 ,获得SDS PAGE纯的人重组 β2 m ,Western印迹法分析表明该蛋白具有与抗人天然 β2 m抗体反应的特性。此工作为制备MHCⅠ类分子四聚体奠定基础。 展开更多
关键词 β2-微球蛋白基因 克隆 大肠杆菌 表达 基因克隆 重组蛋白 包涵体
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非洲猪瘟病毒p30基因的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：29
10
作者 吴竞 王西西 +2 位作者 吴映彤 任肖 郭晓宇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第12期3555-3562,共8页
为建立检测血清中非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的间接ELISA方法,本试验将ASFVp30基因进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blotting方法对重组蛋白进行表达鉴定和免疫原性分析,随后以纯化的重组蛋白为包被抗原,经... 为建立检测血清中非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的间接ELISA方法,本试验将ASFVp30基因进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blotting方法对重组蛋白进行表达鉴定和免疫原性分析,随后以纯化的重组蛋白为包被抗原,经条件优化、特异性试验、敏感性试验和重复性试验,建立一种血清中ASFV抗体的检测方法。结果显示,ASFVp30基因成功克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得pET-32a-p30重组质粒;转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,得到P30重组蛋白,重组蛋白大小约为42ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果显示,纯化后的蛋白具有良好的免疫原性;以纯化的P30重组蛋白为包被抗原,建立了检测ASFV抗体的间接ELISA方法,通过方阵试验对间接ELISA方法进行优化,最终确定了抗原最佳包被浓度为1.2μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,最佳封闭液为1%BSA,酶标抗体最佳稀释度为1∶4 000,以此建立的ASFV间接ELISA方法临界值为0.322。本方法仅与ASFV阳性血清发生特异性反应,与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型及猪流行性腹泻病毒阳性血清均无交叉反应,具有较强的特异性。该方法检测ASFV阳性血清灵敏度可达到1∶1 600;批内重复性和批间重复性变异系数均<10%。本试验建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可初步应用于ASFV抗体的检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟(ASFV) P30基因 原核表达 重组蛋白 间接ELISA
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重组肝再生增强因子对大鼠肝纤维化的保护作用 被引量：23
11
作者 邱德凯 沈敏 +1 位作者 熊伍军 陈颖 《肝脏》 2002年第1期14-16,共3页
目的　观察重组肝再生增强因子 (rALR)对大鼠肝纤维化的保护作用。方法　构建表达ALR的质粒 ,将得到的rALR用于CCl4 致肝纤维化的大鼠 ,观察rALR对肝纤维化动物模型肝功能、血清细胞外基质水平及肝组织纤维化程度的影响。结果　rALR可... 目的　观察重组肝再生增强因子 (rALR)对大鼠肝纤维化的保护作用。方法　构建表达ALR的质粒 ,将得到的rALR用于CCl4 致肝纤维化的大鼠 ,观察rALR对肝纤维化动物模型肝功能、血清细胞外基质水平及肝组织纤维化程度的影响。结果　rALR可显著改善CCl4 肝纤维化模型大鼠肝功能 ,降低血清细胞外基质水平和肝组织纤维化程度。结论　rALR对实验大鼠肝功能具有显著的改善作用 ,对抗肝纤维化亦有一定的作用。 展开更多
关键词 肝再生增强因子 重组蛋白 肝纤维化
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一株高水平表达重组蛋白昆虫细胞系的建立 被引量：13
12
作者 洪华珠 彭建新 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期276-281,共6页
报道了一株来自粉纹夜蛾Trichoplusiani脂肪体的传代细胞系 ,在辅以 5%胎牛血清的商品无血清培养基Excell 4 0 0中 ,细胞群体倍增时间为 2 2 9h ,最高密度可达 2 2× 10 6 mL ,该细胞对苜蓿丫纹夜蛾多粒包埋型多角体病毒 (AcMNPV... 报道了一株来自粉纹夜蛾Trichoplusiani脂肪体的传代细胞系 ,在辅以 5%胎牛血清的商品无血清培养基Excell 4 0 0中 ,细胞群体倍增时间为 2 2 9h ,最高密度可达 2 2× 10 6 mL ,该细胞对苜蓿丫纹夜蛾多粒包埋型多角体病毒 (AcMNPV)极为敏感 ,增殖AcMNPV多角体平均每个细胞达86个 ,表达由AcMNPV构建的重组蛋白的水平较高 ,β 半乳糖苷酶的表达水平为 ( 2 2 5 5± 13 4 )IU mL ;碱性磷酸酶的表达水平为 ( 4 7± 0 61)IU mL ,是一株高水平表达重组蛋白的传代细胞系 ,命名为HNU Tn FB1。 展开更多
关键词 粉纹夜蛾 细胞系 重组蛋白 昆虫
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融合标签技术及其应用 被引量：20
13
作者 李永进 陈媛媛 毕利军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期523-527,共5页
融合标签最初是作为一种有效的工具用于纯化重组蛋白质,近几年的研究表明,融合标签的作用并不局限于此。本文综述了融合标签技术的发展及在生命科学研究中的各种应用,包括重组蛋白质的纯化;目的蛋白质的检测、定向固定;体内生物事件的... 融合标签最初是作为一种有效的工具用于纯化重组蛋白质,近几年的研究表明,融合标签的作用并不局限于此。本文综述了融合标签技术的发展及在生命科学研究中的各种应用,包括重组蛋白质的纯化;目的蛋白质的检测、定向固定;体内生物事件的可视化;提高重组蛋白质的产量;增强重组蛋白质的可溶性及稳定性。 展开更多
关键词 融合标签 重组蛋白质 定向固定 可视化 可溶性
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金标免疫渗滤法(DIGFA)快速检测血吸虫循环抗原的研究 被引量：22
14
作者 沈丽英 干小仙 +2 位作者 丁建祖 沈慧英 樊晋江 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第1期12-14,共3页
目的　建立一种简便、快速的血吸虫病诊断方法。方法　在已建立的检测血吸虫抗体的ＤＩＧＦＡ基础上，以抗血吸虫重组蛋白ＳＶＬＢＰ多抗为捕捉抗体，金标抗ＳＥＡ多抗为覆盖抗体，建立快速检测病人血清中血吸虫循环抗原的双夹心ＤＩＧ... 目的　建立一种简便、快速的血吸虫病诊断方法。方法　在已建立的检测血吸虫抗体的ＤＩＧＦＡ基础上，以抗血吸虫重组蛋白ＳＶＬＢＰ多抗为捕捉抗体，金标抗ＳＥＡ多抗为覆盖抗体，建立快速检测病人血清中血吸虫循环抗原的双夹心ＤＩＧＦＡ。结果　用该法检测了急性血吸病人血清３０ 人份和慢性血吸病人血清３８ 人份，其阳性检出率分别为１００ ％ 和５２－６ ％ ；１２０ 人份流行区健康人血清全为阴性；１００ 人份非流行区健康人群血清的阴性符合率为１００％ ，与１０ 例华支睾病人血清无交叉反应；１５ 例肺吸虫病人血清有１ 例阳性，交叉反应率为６－７ ％ ；与双夹心ＥＬＩＳＡ的符合率为９７－４％ ，经χ２ 检验表明两法检测效果无显著性差异。结论　用ＤＩＧＦＡ检测血吸虫循环抗原具有较高的敏感性和特异性，并且方法简便、快速、不需特殊仪器设备，有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 血吸虫病 循环抗原 金标免疫渗滤法
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棉铃虫普通气味结合蛋白Ⅱ基因的表达及鉴定 被引量：14
15
作者 王桂荣 郭予元 吴孔明 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期285-289,共5页
通过PCR扩增的方法获得了棉铃虫普通气味结合蛋白Ⅱ (GOBP2 Harm)基因成熟蛋白阅读框序列 ,构建了GOBP2 Harm原核表达载体pGEX GOBP2 Harm ,并成功地在大肠杆菌中进行了表达。SDS PAGE分析表明 :大部分GOBP2 Harm重组蛋白形成不溶... 通过PCR扩增的方法获得了棉铃虫普通气味结合蛋白Ⅱ (GOBP2 Harm)基因成熟蛋白阅读框序列 ,构建了GOBP2 Harm原核表达载体pGEX GOBP2 Harm ,并成功地在大肠杆菌中进行了表达。SDS PAGE分析表明 :大部分GOBP2 Harm重组蛋白形成不溶性的包涵体 ,超声波破碎大肠杆菌细胞后 ,在上清液中能检测到少量的可溶性GOBP2 Harm蛋白。为了获得大量纯化的可溶性目的蛋白 ,我们对包涵体进行了溶解和重折叠 ,并通过亲合层析法进行了纯化。纯化产物能与多音天蚕(Antheraeapolyphemus)GOBP抗血清发生交叉反应 ,证实表达产物属于昆虫普通气味结合蛋白。 展开更多
关键词 棉铃虫 普通气味结合蛋白Ⅱ PCR扩增 原核表达 重组蛋白 亲合层析
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pET15b-EGFP原核表达载体的构建及其表达和纯化 被引量：19
16
作者 董晓 王家宁 +1 位作者 黄永章 郭凌郧 《郧阳医学院学报》 2005年第6期321-325,F0003,共6页
目的:利用中间载体pGEM-T easy vector构建表达型载体pET15b-EGFP,在大肠杆菌中高效表达可溶性蛋白EGFP并将其纯化。方法:以质粒pLEGFP-C1为模板采用聚合酶链反应(PCR)的方法特异性扩增EGFP cD-NA序列,利用Taq DNA聚合酶的非模板依赖性... 目的:利用中间载体pGEM-T easy vector构建表达型载体pET15b-EGFP,在大肠杆菌中高效表达可溶性蛋白EGFP并将其纯化。方法:以质粒pLEGFP-C1为模板采用聚合酶链反应(PCR)的方法特异性扩增EGFP cD-NA序列,利用Taq DNA聚合酶的非模板依赖性末端转移酶活性催化PCR扩增的EGFP序列和三磷酸脱氧腺苷(dATP)反应,在EGFP序列两3’端加“A”,将纯化后的EGFP序列与中间载体pGEM-T easy vector连接后转化感受态大肠杆菌DH5α,经蓝白筛选,挑取白色单菌落进行扩增、酶切鉴定,正确重组的质粒命名为pGEM-T-EGFP。用XhoI和BamH I分别双酶切pGEM-T-EGFP和pET15b,低熔点琼脂糖回收EGFP cDNA和线性化的pET15b片段后将两片段相连,转化感受态大肠杆菌DH5α并对重组质粒进行酶切鉴定和DNA测序,获取正确重组的表达型质粒并命名为pET15b-EGFP。将正确重组的质粒pET15b?EGFP转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。利用表达蛋白N端的组氨酸“标签”(H is-tag)进行N i2+-树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE和W estern b lotting鉴定纯化蛋白质。结果:经测序证实重组质粒pET15b-EGFP中的EGFP cDNA序列与从C lontech公司购买的质粒pLEGFP-C1中的EGFP cDNA序列完全一致,从而成功构建了表达型重组质粒pET15b-EGFP。pET15b-EGFP转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)并经诱导后得到高效表达,表达量可达66 mg/100 m l菌液,SDS-PAGE和W estern b lotting显示纯化蛋白为目的蛋白EGFP。结论:表达型重组质粒pET15b-EGFP的成功构建和表达、纯化为细胞穿透肽-EGFP融合蛋白穿透细胞能力的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 TA克隆载体 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 重组质粒 蛋白表达 蛋白纯化
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重组蛋白复性技术研究进展 被引量：11
17
作者 于德强 何询 《生物技术通讯》 CAS 2004年第1期67-69,共3页
本文对近年来重组蛋白复性技术的研究进行了评述。比较分析了液相和固相复性的各种方法,提出了复性优化的方案,介绍了在化学复性基础上发展物理复性如高压复性法的新思路。
关键词 表达 重组蛋白 包涵体 液相复性 固相复性 高压复性
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柔嫩艾美球虫间接ELISA检测方法的建立 被引量：15
18
作者 秦睿玲 张西臣 +3 位作者 李建华 徐占云 尹继刚 扬举 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第7期60-63,共4页
将已构建的原核表达载体pET Mzp5 7在大肠埃希氏菌中诱导表达 ,以融合重组蛋白为包被抗原 ,以HRP标记的鼠抗鸡IgG为二抗 ,建立了检测柔嫩艾美球虫抗体的间接ELISA方法。经筛选 ,该方法的最佳反应条件是 :λMzp5 7重组蛋白最佳包被量为... 将已构建的原核表达载体pET Mzp5 7在大肠埃希氏菌中诱导表达 ,以融合重组蛋白为包被抗原 ,以HRP标记的鼠抗鸡IgG为二抗 ,建立了检测柔嫩艾美球虫抗体的间接ELISA方法。经筛选 ,该方法的最佳反应条件是 :λMzp5 7重组蛋白最佳包被量为 1.0 μg/孔 ,10 0mL/L胎牛血清封闭 ,二抗的最佳工作浓度为 1∶16 0 ,用正常大肠埃希氏菌裂解上清液稀释待检血清。结果表明 ,建立的间接ELISA方法可用于监测柔嫩艾美球虫抗体 ,且具有快速、简便。 展开更多
关键词 λMzp5-7基因 重组蛋白 间接ELISA
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猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用 被引量：18
19
作者 张朝霞 刘长明 +2 位作者 危艳武 袁婧 黄立平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期548-551,578,共5页
利用纯化的重组杆状病毒表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原,建立一种间接ELISA方法用于血清抗体检测。昆虫细胞株(Sf-21)接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化,制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7%... 利用纯化的重组杆状病毒表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原,建立一种间接ELISA方法用于血清抗体检测。昆虫细胞株(Sf-21)接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化,制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7%左右;Ni2+亲和层析柱纯化获得重组蛋白纯度为90.1%;重组蛋白可被特异性抗体识别,具有良好的免疫活性。用建立的ELISA法对30份已知阴性血清样本检测临界OD405nm值为0.343;ELISA与IPMA对150份血清进行平行检测符合率为95.3%,特异性为91.2%,敏感性为96.5%;与其他几种常见猪病毒参考血清无交叉反应。组装的试剂盒批内和批间变异系数分别为4.0%～4.8%和8.9%～9.9%;置-20℃保存12个月稳定。试剂盒对人工感染猪血清检测结果,接种后第5周抗体阳转,第8周～9周抗体水平达到高峰;对来自黑龙江、吉林、河北、上海等地猪场1085份血清抗体检测,阳性率为73.6%。研制的ELISA试剂盒为临床PCV2血清抗体检测及疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 重组蛋白 间接ELISA 抗体检测试剂盒
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人表皮生长因子的基础和应用研究 被引量：14
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作者 黄秉仁 蔡良婉 +1 位作者 向绪传 Xiang-Xu-zhuan 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期176-180,共5页
本文报道了有关人表皮生长因子（ hEGF）及其受体（ EGFR）的基础研究结果，以及在此基础上进行新药开发的有关工作： hEGF的基因合成、表达载体的构建和转化宿主细胞、表达产物的纯化和中试规模三批样品的生产和检验等的有关研究结果、... 本文报道了有关人表皮生长因子（ hEGF）及其受体（ EGFR）的基础研究结果，以及在此基础上进行新药开发的有关工作： hEGF的基因合成、表达载体的构建和转化宿主细胞、表达产物的纯化和中试规模三批样品的生产和检验等的有关研究结果、 hEGF滴眼液的动物实验和临床实验等新药研制过程。有关基础研究表明，编码 51个氨基酸的 hEGF可以在α因子前导肽的引导下在酵母体系中分泌性表达，表达产物可促进角膜缘上皮细胞的增殖，可促进角膜碱烧伤的愈合，可用于口腔溃疡和皮肤烧伤的治疗，可对大鼠十二指肠溃疡有预防作用等 ,并用之制备了抗血清以测定血尿中 EGF的浓度。研究表明 EGF在大于 10 ng/ml浓度下对神经胶质瘤细胞株 BT325和人阴道上皮癌细胞株 A431的生长具有抑制作用，并用差异显示方法对此现象进行了分子机制的探讨。研究肾癌 EGFR表达和 DNA含量检测具有临床意义。对 EGF的晶体进行了初步的结构分析。中试产品检测表明 hEGF相对分子质量为 6000、等电点为 4.6、氨基端 15个氨基酸顺序正确、具有 EGF的免疫原性和生物活性。产品中无酵母细胞的残余 DNA。动物实验表明 EFG在体内无蓄积，有明确的促进角膜上皮细胞增殖的作用，无急毒和长毒副作用，对眼无刺激和局部毒性作用。在四家医院进行的多中? 展开更多
关键词 表皮生长因子 受体 重组蛋白 滴眼液 基因工程药
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