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亲和层析纯化重组人源性抗HBsAg Fab抗体 被引量：5
1
作者 邓宁 陈文吟 +2 位作者 向军俭 饶桂荣 唐勇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期575-577,共3页
目的 :纯化酵母发酵产生的重组人源性抗HBsAgFab抗体 ,建立稳定、适于生产应用的纯化工艺。方法 :以原核表达的重组人源性抗HBsscFv免疫BALB/c小鼠 ,经杂交瘤技术制备大量分泌mAb的杂交瘤细胞株 14F7。将该细胞株注入小鼠腹腔制备mAb腹... 目的 :纯化酵母发酵产生的重组人源性抗HBsAgFab抗体 ,建立稳定、适于生产应用的纯化工艺。方法 :以原核表达的重组人源性抗HBsscFv免疫BALB/c小鼠 ,经杂交瘤技术制备大量分泌mAb的杂交瘤细胞株 14F7。将该细胞株注入小鼠腹腔制备mAb腹水 ,经辛酸沉淀纯化后 ,制备亲和层析柱 ,纯化酵母发酵产生的重组人源性抗HBsAgFab抗体。结果 :用抗scFvmAb亲和层析柱纯化的重组人源性抗HBsAgFab的纯度可达 95 %以上 ,回收率可达 70 %～ 85 %。结论 :人源性抗HBsscFv制备mAb作为亲和层析的介质 ,可有效地从酵母发酵上清中纯化重组人源性抗HBsAgFab,适用于大规模生产重组人源性抗HBsAgFab。 展开更多
关键词 HBSAG 重组fab 抗scFv单克隆抗体 亲和层析
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重组人源性抗HBsAg Fab抗体纯化方法的比较研究 被引量：3
2
作者 邓宁 向军俭 +1 位作者 饶桂荣 陈文吟 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期884-889,共6页
抗HBsAgFab抗体被认为在预防和治疗HBV引起的肝病中具有重要的作用。为了建立稳定的、适于生产应用的重组人源性抗HBsAgFab抗体的纯化工艺 ,本实验对不同纯化方法进行了比较研究。比较了抗Fab抗体亲和层析、ScFv单克隆抗体亲和层析和离... 抗HBsAgFab抗体被认为在预防和治疗HBV引起的肝病中具有重要的作用。为了建立稳定的、适于生产应用的重组人源性抗HBsAgFab抗体的纯化工艺 ,本实验对不同纯化方法进行了比较研究。比较了抗Fab抗体亲和层析、ScFv单克隆抗体亲和层析和离子交换层析等 3套纯化工艺在酵母发酵生产的重组人源性抗HBsAgFab抗体纯化中的效率。结果显示 ,抗Fab抗体亲和层析柱纯化酵母表达的重组Fab ,纯度为 96 8% ,但回收率偏低 ,只有30 %～ 4 0 %。ScFv单克隆抗体亲和层析纯化的重组Fab ,纯度为 97 5 % ,回收率达 75 %～ 85 %。该工艺能很好的适应较小规模的生产应用。离子交换层析纯化的重组Fab ,纯度为 97% ,回收率为 75 %～ 85 %。该工艺能很好的适应较大规模的生产应用。以上结果表明 ,应用ScFv单克隆抗体亲和层析和离子交换层析纯化技术均能很好的纯化出重组人源性抗HBsAgFab抗体 ,这两种纯化工艺不仅大大节约纯化成本 ,且纯化效率和回收率有很大提高。 展开更多
关键词 HBSAG 重组fab 纯化方法 毕赤酵母
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人源性抗HBsAg Fab抗体的发酵生产研究 被引量：2
3
作者 邓宁 向军俭 +3 位作者 陈文吟 熊盛 王珣章 粟宽源 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期800-804,共5页
为了适应工业生产的需要 ,利用fed batch方法 ,重组人源性抗HBsAgFab抗体酵母工程菌在 30L发酵罐中进行了高密度发酵 ,发酵最适温度 30℃ ,pH值范围 5 0～ 5 3,溶氧范围 2 0 %～ 30 %。发酵液OD6 0 0 值达到 30 0时开始诱导 ,甲醇最... 为了适应工业生产的需要 ,利用fed batch方法 ,重组人源性抗HBsAgFab抗体酵母工程菌在 30L发酵罐中进行了高密度发酵 ,发酵最适温度 30℃ ,pH值范围 5 0～ 5 3,溶氧范围 2 0 %～ 30 %。发酵液OD6 0 0 值达到 30 0时开始诱导 ,甲醇最佳诱导浓度为 1 0mL L。重组人源性抗HBsAgFab抗体经离子交换层析纯化 ,纯化产品经SDS PAGE、Westernblot进行分析和ELISA方法进行活性测定。结果显示 ,重组Fab抗体在Fed batch发酵系统中可高效表达 ,经过 1 92h的发酵生产 ,重组人源性抗HBsAgFab抗体的表达量可达 4 1 2mg L。发酵上清经过离子交换层析纯化 ,获得纯度为 95 %的重组Fab抗体 ,该Fab抗体经ELISA分析具有较高的HBsAg抗原亲和力和特异性。结果证实可以通过高密度发酵毕赤酵母工程菌来高效生产重组人源性抗HBsAgFab抗体 ,为后续的工业化生产应用奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 HBsAgfab 抗体 发酵 毕赤酵母 生物制品 表面抗原
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人源中和性抗甲型肝炎病毒抗体Fab段基因的序列分析及可溶性表达 被引量：1
4
作者 曹经瑗 梁米芳 +3 位作者 郭可謇 孟庆玲 纪燕 詹美云 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期221-224,共4页
在用噬菌体表面呈现系统获得人源抗甲型肝炎 (甲肝 )病毒中和性基因工程Fab抗体的基础上 ,对所获得的 4株中和性Fab抗体轻重链可变区基因进行了序列分析、可溶性表达及生物学特性鉴定。 4株Fab抗体重链可变区拥有 99%同源的核苷酸序列... 在用噬菌体表面呈现系统获得人源抗甲型肝炎 (甲肝 )病毒中和性基因工程Fab抗体的基础上 ,对所获得的 4株中和性Fab抗体轻重链可变区基因进行了序列分析、可溶性表达及生物学特性鉴定。 4株Fab抗体重链可变区拥有 99%同源的核苷酸序列和相同的CDR区氨基酸序列 ,属于VHⅢ基因家族。而轻链可变区核苷酸序列同源性为 95 %和相似的CDR区氨基酸序列 ,属于VL5基因家族。这些重组抗体都能与人甲肝恢复期血清及具有中和活性的鼠抗甲肝单克隆抗体产生竞争抑制反应 。 展开更多
关键词 重组fab抗体 甲肝病毒 序列分析 可溶性表达 人源中和抗体
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重组人Fab金属螯合层析法纯化条件的研究 被引量：4
5
作者 朱迎春 王琰 +2 位作者 刘群英 化冰 高荣凯 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1997年第2期136-139,共4页
在重组人Fab (rhFab)表达载体的羧基端插入六个组氨酸 ,使其对金属螯合层析介质产生特异性吸附 ,可用金属螯合亲和层析法进行分离纯化 .采用自制金属 (铜、锌金属离子 )螯合层析介质 ,以 pH和咪唑两种洗脱方法 ,对rhFab段的纯化效果进... 在重组人Fab (rhFab)表达载体的羧基端插入六个组氨酸 ,使其对金属螯合层析介质产生特异性吸附 ,可用金属螯合亲和层析法进行分离纯化 .采用自制金属 (铜、锌金属离子 )螯合层析介质 ,以 pH和咪唑两种洗脱方法 ,对rhFab段的纯化效果进行了探讨 .结果显示 :铜离子螯合层析介质比锌离子螯合层析介质对rhFab的亲和能力更强 ;pH洗脱方法的重复性优于咪唑法 ;金属铜离子螯合层析法对rhFab进行一步纯化可得到纯度大于 展开更多
关键词 组氨酸 重组人fab 金属螯合层析
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抗人IL-2Rα基因工程抗体Fab的构建和表达
6
作者 李佳莉 朱迅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期305-308,共4页
目的：构建和表达抗人IL-2Rα基因工程抗体Fab片段，并测定该抗体片段的生物学活性。方法：采用连续PCR方法构建抗人 IL-2Rα抗体 Fab克隆载体5G1-pA22，并通过限制性酶切反应将抗人 IL-2Rα抗体 Fab基因从克隆载体 5G1-pA22重组人表达... 目的：构建和表达抗人IL-2Rα基因工程抗体Fab片段，并测定该抗体片段的生物学活性。方法：采用连续PCR方法构建抗人 IL-2Rα抗体 Fab克隆载体5G1-pA22，并通过限制性酶切反应将抗人 IL-2Rα抗体 Fab基因从克隆载体 5G1-pA22重组人表达载体pET-28b，并在大肠杆菌BL21（DE3）中用IPTG诱导以包含体形式高效表达，该表达产物约占菌体蛋白20％以上。经超声破碎、洗涤、变性和复性后，采用双抗体夹心ELISA法及体外抗体竞争抑制试验鉴定表达产物的生物学活性。结果：抗人IL-2Rα基因工程抗体Fab成功构建，并以包含体形式表达，表达产物的产量达1mg/ml。双抗体夹心ELISA法试验表明抗体 Fab段与 IL-2Rα有特异的结合能力，体外抗体竞争抑制实验表明 Fab段可桔抗 IL-2与活化T细胞表面 IL-2Rα有特异的结合，抑制T细胞活化，增殖，抑制率达90％以上。结论：成功地构建了抗人IL-2Rα抗体Fh段，并获得高效表达，其具有较好的生物学活性。 展开更多
关键词 IL-2RΑ 基因工程抗体 fab 基因表达
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