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重组人骨形态发生蛋白－2成熟肽在大肠杆菌中的表达及其诱导成骨活性 被引量：79
1
作者 赵明 王会信 周廷冲 《生物化学杂志》 CSCD 1994年第3期319-324,共6页
报告了人骨形态发生蛋白－２（ＢＭＰ－２）成熟肽的基因克隆，及其在大肠杆菌中的表达。用ＡｆｌⅡ酶剪除ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ中的信号肽及前肽部分的序列，将编码成熟肽的ｃＤＮＡ３′端０．３６ｋｂ基因片段克隆于大肠杆菌表达载体ｐ... 报告了人骨形态发生蛋白－２（ＢＭＰ－２）成熟肽的基因克隆，及其在大肠杆菌中的表达。用ＡｆｌⅡ酶剪除ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ中的信号肽及前肽部分的序列，将编码成熟肽的ｃＤＮＡ３′端０．３６ｋｂ基因片段克隆于大肠杆菌表达载体ｐＭＸ－１质粒的ＡＴＧ下游，受控于ＰＬＰＲ启动子。重组子以大肠杆菌ＤＨ５α为宿主细胞进行温度诱导表达。工程菌经４２℃６ｈ诱导后，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一条新蛋白带，分子量约为１２ｋＤ，约占菌体总蛋白的２０％。主要以包涵体形式存在的表达产物经初步纯化后，可获得纯度较高的重组人骨形态发生蛋白－２成熟肽（ｒｈＢＭＰ－２ｍ）。小鼠肌肉植入试验发现。ｒｈＢＭＰ－２ｍ植入后的不同时间，在局部出现间质细胞的聚集和增生、软骨细胞及软骨基质的生成和硬质骨的形成，证明ｒｈＢＭＰ－２ｍ具有明显的诱导新骨形成的作用。 展开更多
关键词 人 骨形态发生 蛋白 dna 重组 表达
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Molecular biology and the diagnosis and treatment of liver diseases 被引量：24
2
作者 Howard J. Worman, Feng Lin, Naoto Mamiya and Paul J. Mustacchia 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 1998年第3期5-11,共7页
ＭｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙａｎｄｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅｓＨｏｗａｒｄＪ．Ｗｏｒｍａｎ，ＦｅｎｇＬｉｎ，ＮａｏｔｏＭａｍｉｙａａｎｄＰａｕｌＪ．Ｍｕｓｔａｃｃ... ＭｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙａｎｄｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅｓＨｏｗａｒｄＪ．Ｗｏｒｍａｎ，ＦｅｎｇＬｉｎ，ＮａｏｔｏＭａｍｉｙａａｎｄＰａｕｌＪ．ＭｕｓｔａｃｃｈｉａＳｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇ... 展开更多
关键词 LIVER disease MOLECULAR BIOLOGY VIRAL hepatitis metabolic DISEASES recombinant dna rational drug design gene therapy
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Baxα高表达PC12细胞系的建立及(-)黄皮酰胺抗细胞凋亡作用机制的研究 被引量：16
3
作者 王润生 张均田 《药学学报》 CSCD 北大核心 2000年第6期404-407,共4页
目的　用Baxα高表达的PC12细胞研究了 (- )黄皮酰胺的抗细胞凋亡作用。方法　先将BaxαcDNA从原核载体 pBluescriptSK克隆到真核载体 pcDNA3。用脂质体转染的方法将 pcDNA3 Baxα导入PC12细胞。以 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)诱导Baxα高... 目的　用Baxα高表达的PC12细胞研究了 (- )黄皮酰胺的抗细胞凋亡作用。方法　先将BaxαcDNA从原核载体 pBluescriptSK克隆到真核载体 pcDNA3。用脂质体转染的方法将 pcDNA3 Baxα导入PC12细胞。以 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)诱导Baxα高表达PC12细胞的凋亡。结果　 (- )黄皮酰胺 (0 1～ 10 μmol·L-1)可使细胞凋亡率显著降低。结论　 (- )黄皮酰胺可以抑制细胞凋亡 。 展开更多
关键词 细胞凋亡 BAX基因 黄皮酰胺 神经退行性病变
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生长抑制激素基因在大肠杆菌中的表达 被引量：14
4
作者 曾义祥 杜念兴 汤锦炎 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1991年第3期282-288,共7页
从pSom5中提纯生长抑制激素基因片段,在体外与大肠杆菌pBD_2质粒DNA重组连接,转化受体细胞D_2A_1,获得7株工程菌,在IPTG诱导下进行表达。采用β-半乳糖苷酶底物亲和层析法纯化,得到一纯净的分子量为50000道尔顿左右的蛋白质。对此蛋白... 从pSom5中提纯生长抑制激素基因片段,在体外与大肠杆菌pBD_2质粒DNA重组连接,转化受体细胞D_2A_1,获得7株工程菌,在IPTG诱导下进行表达。采用β-半乳糖苷酶底物亲和层析法纯化,得到一纯净的分子量为50000道尔顿左右的蛋白质。对此蛋白质及其经CNBr化学裂解的产物进行放射免疫分析,证实化学合成的生长抑制激素基因已在大肠杆菌D_2,A_1中成功地表达,每升培养基中获得生长抑制激素41.69mg,占菌体总蛋白质的0.71%。 展开更多
关键词 基因表达 生长抑制激素 大肠杆菌
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重组人骨形成蛋白-3羧基端肽在大肠杆菌中表达及其诱骨活性 被引量：15
5
作者 崔有宏 陈苏民 +2 位作者 刘新平 陈南春 薛泳涛 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第5期513-519,共7页
以双顺反子表达载体，在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达了人骨形成蛋白－３羧基端肽段（ｈＢＭＰ－３Ｃ），表达量占菌体总蛋白量的１８．５％．目的蛋白为２５ｋＤ、含ｈＢＭＰ－３Ｃ端２１５个氨基酸残基组成的肽段，包括ｈＢＭＰ－３... 以双顺反子表达载体，在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达了人骨形成蛋白－３羧基端肽段（ｈＢＭＰ－３Ｃ），表达量占菌体总蛋白量的１８．５％．目的蛋白为２５ｋＤ、含ｈＢＭＰ－３Ｃ端２１５个氨基酸残基组成的肽段，包括ｈＢＭＰ－３成熟肽和一部分前肽．表达产物以包涵体的形式存在，用含ＴｒｉｔｏｎＸ－１００的洗涤液和５ｍｏｌ／Ｌ以下脲溶液连续洗涤，可获得较高纯度的重组人骨形成蛋白－３Ｃ端肽．经复性处理成可溶性蛋白，植入小鼠肌肉内，第１４ｄ组织切片显示有软骨细胞和软骨基质形成，第２１ｄ可见成骨细胞和骨基质形成．将ｒｈＢＭＰ－３Ｃ与脱矿去免疫原性异种骨粒复合后作小鼠肌肉植入试验，２１ｄ组织切片上可见硬质骨形成．结果表明：大肠杆菌表达的ｈＢＭＰ－３Ｃ经复性后具有诱骨活性，糖基化并非ＢＭＰ－３活性所必需． 展开更多
关键词 人骨形成蛋白 3羧基多肽 基因表达 诱骨活性
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DNA重组hGH的生物测定方法的探讨　Ⅰ．去垂体大鼠体重增加法 被引量：10
6
作者 李湛君 阎安庄 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期3-7,共5页
为用于ＤＮＡ重组ｈＧＨ的生物测定，本文探讨了未成年去垂体大鼠体重增加法。实验表明：牛生长激素ｂＧＨ在０．００４～０．５００ＩＵ／鼠、ｄ，人生长激素ｈＧＮ在０．０１５～０．１３５ＩＵ／鼠、ｄ剂量范围内ｌｏｇ剂量（Ｘ）与... 为用于ＤＮＡ重组ｈＧＨ的生物测定，本文探讨了未成年去垂体大鼠体重增加法。实验表明：牛生长激素ｂＧＨ在０．００４～０．５００ＩＵ／鼠、ｄ，人生长激素ｈＧＮ在０．０１５～０．１３５ＩＵ／鼠、ｄ剂量范围内ｌｏｇ剂量（Ｘ）与反应（Ｙ）呈直线关系。６０～８０ｇ去垂体大鼠，每天给药２次，连续给药４ｄ或６ｄ为最佳实验条件。通过多批进口和国产ＤＮＡ重组ｈＧＨ产品的生物测定，说明用该法检测ｒｈＧＨ是颇为实用的方法之一。 展开更多
关键词 生长激素 dna重组 生物测定 BWG
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禾谷类作物外源基因导入及表达的研究进展 被引量：8
7
作者 褚启人 叶承道 《上海农业学报》 CSCD 1991年第1期90-96,共7页
本文就国际上八十年代植物重组DNA在单子叶作物上的研究作了综述。介绍了水稻、小麦、玉米等不同物种的转基因系统。阐述了化学导入法(PEG)、电穿孔法、注射法,粒子轰击法、花粉管萌导法及使用其它载体系统的成功实例。评价了上述技术... 本文就国际上八十年代植物重组DNA在单子叶作物上的研究作了综述。介绍了水稻、小麦、玉米等不同物种的转基因系统。阐述了化学导入法(PEG)、电穿孔法、注射法,粒子轰击法、花粉管萌导法及使用其它载体系统的成功实例。评价了上述技术在外源基因导入单子叶作物的利弊。 展开更多
关键词 禾谷类作物 外源基因导入 PEG
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DNA重组hGH的生物测定方法的探讨　Ⅱ．胫骨法 被引量：8
8
作者 李湛君 阎安庄 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期8-11,共4页
本文对ＤＮＡ重组ｈＧＨ的另一生物测定方法即未成年去垂体大鼠胫骨骨骺软骨增宽法进行了探讨，摸索了胫骨染色切片后软骨宽度测量方法。实验结果表明在一定剂量范围内ｌｏｇ剂量与胫骨反应呈直线关系，胫骨法（λ＝０．２８）比体重法... 本文对ＤＮＡ重组ｈＧＨ的另一生物测定方法即未成年去垂体大鼠胫骨骨骺软骨增宽法进行了探讨，摸索了胫骨染色切片后软骨宽度测量方法。实验结果表明在一定剂量范围内ｌｏｇ剂量与胫骨反应呈直线关系，胫骨法（λ＝０．２８）比体重法（λ＝０．４５）更精密。通过对多批进口和国产ｒｈＧＨ产品用胫骨法进行生物测定，得出本法具有灵敏、精密、成功率高等优点。 展开更多
关键词 生长激素 dna重组 生物测定 胫骨法
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减蛋综合征病毒末端片段的克隆及细胞内DNA重组 被引量：4
9
作者 向华 章金刚 +4 位作者 宣华 李茂祥 王国庆 刘振润 万遂如 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期226-229,共4页
采用９～１０日龄非免疫鸭胚增殖的减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＡＡ－２毒株，经差速离心法浓缩纯化后，提取病毒基因组ＤＮＡ。采用碱变性法除去病毒基因组共价结合的末端蛋白（ＴＰ）。用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ水解纯化的ＥＤＳＶ基... 采用９～１０日龄非免疫鸭胚增殖的减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＡＡ－２毒株，经差速离心法浓缩纯化后，提取病毒基因组ＤＮＡ。采用碱变性法除去病毒基因组共价结合的末端蛋白（ＴＰ）。用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ水解纯化的ＥＤＳＶ基因组ＤＮＡ。经低熔点琼脂糖凝胶电泳后，回收Ｃ、Ｄ、Ｅ片段。克隆到ｐＵＣ１９载体的ＨｉｎｄⅢ和ＳｍａⅠ双酶切位点及ＨｉｎｄⅢ位点上，经蓝白斑筛选和单、双酶切鉴定，获得了ｐＵＨＣ、ｐＵＨＤ、ｐＵＨＥ重组质粒，其中ｐＵＨＣ含有末端片段。将ＥＤＳＶＳａｌⅠ水解产生并回收的大片段与ｐＵＨＣ在９５℃水浴中变性，６５℃复性后，用钙离子介导法，共转染５０％～７０％的单层鸭胚成纤维细胞，转染后３６ｈ开始产生细胞病变（ＣＰＥ）。４８ｈ后将病变细胞反复冻融，经尿囊腔接种９～１０日龄鸭胚，回收的尿囊液能凝集鸡红细胞，这种血凝性能被ＥＤＳＶ高免血清抑制，电镜下观察到腺病毒样颗粒。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 末端蛋白 末端片段 重组 dna
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mtHSP70/HSV-tk重组沙门菌抗小鼠黑色素瘤的作用 被引量：8
10
作者 曾曙光 刘启才 +3 位作者 王素文 彭细毛 章锦才 张积仁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期101-105,共5页
目的研究携带结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)、人单纯疱疹病毒一胸苷激酶(HSV-TK)双基因的重组沙门菌瘤内注射抗小鼠黑色素瘤的抑瘤效应。方法构建重组沙门菌SL7207/PCMV-mtHSP70-IRES-TK,建立小鼠黑色素瘤动物模型,瘤内注射重组沙门菌... 目的研究携带结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)、人单纯疱疹病毒一胸苷激酶(HSV-TK)双基因的重组沙门菌瘤内注射抗小鼠黑色素瘤的抑瘤效应。方法构建重组沙门菌SL7207/PCMV-mtHSP70-IRES-TK,建立小鼠黑色素瘤动物模型,瘤内注射重组沙门菌观察其抑瘤效应、荷瘤鼠的生存期并进行安全性评估。结果瘤内注射重组沙门菌,实验组抑瘤率显著高于对照组,延长荷瘤鼠生存期,重组菌治疗后荷瘤小鼠的生存状态良好,无腹泻,治疗期间体质量无明显改变。结论减毒沙门菌携带的mtHSP70/HSV-TK双基因真核共表达质粒瘤内注射对B16肿瘤细胞具有显著抑制作用。 展开更多
关键词 重组dna 黑色素瘤 沙门氏菌 结核杆菌热休克蛋白70 人单纯疱疹病毒一胸苷激酶
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λ噬菌体和cosmid重组DNA克隆的快速限制性内切酶图谱分析方法 被引量：6
11
作者 柴建华 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1990年第2期136-142,共7页
cosmld克隆的线性化用λcos末端酶来完成,线性的cosmid或λDNA经部份限制性内切酶酶解后,分别与已标记的cos顺序探针杂交(探针为分别与λ的左端或右端的cos顺序互补的12核苷酸单链片段),杂交后的部份酶解片段经电泳分离和自显影后,酶切... cosmld克隆的线性化用λcos末端酶来完成,线性的cosmid或λDNA经部份限制性内切酶酶解后,分别与已标记的cos顺序探针杂交(探针为分别与λ的左端或右端的cos顺序互补的12核苷酸单链片段),杂交后的部份酶解片段经电泳分离和自显影后,酶切点位置可直接在X-底片上读出。在本实验室条件下,可一次完成二个克隆包括5—6种限制性内切酶的图谱分析,分析和作图可通过计算机或手工进行。 展开更多
关键词 Λ噬菌体 重组dna 克隆 酶图谱
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转基因抗虫棉花重组DNA在土壤中分布的实时定量PCR分析 被引量：4
12
作者 李刚 修伟明 +5 位作者 赵建宁 王丽娟 王慧 刘红梅 宋晓龙 杨殿林 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1933-1940,共8页
根据转基因抗虫棉花35S启动子与Cry1A(c)基因以及35S启动子与nptⅡ基因之间的构建特异性序列分别设计引物和探针,建立荧光定量PCR检测方法,并对采集于3个生长时期(播种后40、50d和60d)的不同根区(根表、根际和非根际)土壤中35S-Cry1A和3... 根据转基因抗虫棉花35S启动子与Cry1A(c)基因以及35S启动子与nptⅡ基因之间的构建特异性序列分别设计引物和探针,建立荧光定量PCR检测方法,并对采集于3个生长时期(播种后40、50d和60d)的不同根区(根表、根际和非根际)土壤中35S-Cry1A和35S-nptⅡ片段进行定量分析。结果表明,所建立的荧光定量PCR方法最低能够检测到10个拷贝数的外源重组DNA片段,定量标准曲线相关系数均达到0.998以上,具有很好的重复性。实时定量PCR分析表明,同一生长时期不同根区土壤中35S-Cry1A和35S-nptⅡ片段拷贝数变化情况均为根表土>根际土>非根际土,即转基因抗虫棉花重组DNA片段主要分布于根表土壤中,其次为根际土壤和非根际土壤。在60d生长期内,土壤中35S-Cry1A和35S-nptⅡ片段的拷贝数随生长时期的推进均呈现上升趋势,其分布范围逐渐扩大。土壤中35S-nptⅡ片段拷贝数均高于同一生长时期相应根区中35S-Cry1A片段的拷贝数。转基因抗虫棉花对环境可能存在潜在影响。 展开更多
关键词 转基因抗虫棉花 重组dna 实时定量PCR 根盒法 分布
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质粒pRSVTH的重组和在体外培养骨骼肌内的表达 被引量：1
13
作者 郑少鹏 田竟生 +4 位作者 赵春礼 王珂 王元身 鲁强 徐群渊 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期157-160,共4页
用新生的ＳＤ大鼠骨骼肌进行原代培养，采用阳离子脂质体介导的方法，分别用含报告基因β－半乳糖苷酶基因的质粒ｐＲＳＶ－ＬａｃＺ和新重组的酪氨酸羟化酶基因的质粒ｐＲＳＶＴＨ转染上述培养细胞。结果表明，所培养的骨骼肌细胞能在... 用新生的ＳＤ大鼠骨骼肌进行原代培养，采用阳离子脂质体介导的方法，分别用含报告基因β－半乳糖苷酶基因的质粒ｐＲＳＶ－ＬａｃＺ和新重组的酪氨酸羟化酶基因的质粒ｐＲＳＶＴＨ转染上述培养细胞。结果表明，所培养的骨骼肌细胞能在阳离子脂质体介导下被转入外源性基因，用组织化学和免疫组织化学方法检测证明其能表达外源性基因。因此骨骼肌细胞可作为对帕金森病进行基因治疗的运载细胞。 展开更多
关键词 骨骼肌细胞 原代培养 酪氨酸羟化酶 质粒sRSVTH
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结核分枝杆菌Ag85A DNA的克隆与原核表达 被引量：3
14
作者 姜燕 Azuma Kalu +1 位作者 吕昌龙 单风平 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期16-20,共5页
抗原85(Ag85)复合体是BCG合成分泌的可刺激机体产生细胞免疫和体液免疫应答。Ag85A是抗原85复合体组成成分之一,可显著刺激细胞免疫功能增强。研究构建了高效表达的pTrcHisB-Ag85A基因重组质粒,并将其转化至大肠埃希菌TOP10中进行重组... 抗原85(Ag85)复合体是BCG合成分泌的可刺激机体产生细胞免疫和体液免疫应答。Ag85A是抗原85复合体组成成分之一,可显著刺激细胞免疫功能增强。研究构建了高效表达的pTrcHisB-Ag85A基因重组质粒,并将其转化至大肠埃希菌TOP10中进行重组蛋白的表达,筛选转化物,SDS-PAGE进行蛋白表达的分子量检测,并通过Western Blotting方法,应用抗Ag85A的单克隆抗体进一步确认重组Ag85A蛋白的表达,建立了Ag85A的原核表达体系,为进一步制备出有效的重组Ag85A疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 重组dna AG85A 结核分枝杆菌 表达载体
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土壤环境中转基因植物重组DNA持留与水平转移研究进展 被引量：4
15
作者 吴元凤 李刚 +4 位作者 冀国桢 宋晓龙 赵建宁 杨殿林 修伟明 《生态学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期878-884,共7页
基因水平转移(horizontal gene transfer,HGT)是转基因植物环境风险评估的重要内容之一。转基因植物重组DNA通过根系分泌、花粉、残体等方式向土壤环境释放。已有研究表明,外源重组DNA很可能被土壤微生物通过同源重组的方式整合到基因组... 基因水平转移(horizontal gene transfer,HGT)是转基因植物环境风险评估的重要内容之一。转基因植物重组DNA通过根系分泌、花粉、残体等方式向土壤环境释放。已有研究表明,外源重组DNA很可能被土壤微生物通过同源重组的方式整合到基因组中,直接或间接地造成微生物群落结构和功能的改变,这将造成土壤生态环境系统的改变。本文论述了转基因植物重组DNA在土壤环境中的持留、水平转移及其影响因素和相关检测方法,讨论了转基因植物重组DNA在土壤环境中持留和水平转移的研究重点,并对其研究方法进行比较分析,提出今后的重点研究方向和方法,以期为转基因植物风险评估和安全管理提供技术支撑。 展开更多
关键词 转基因植物 重组dna 基因水平转移 土壤生态系统 环境风险
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血管内皮生长因子重组DNA的构建及体外表达 被引量：3
16
作者 贾晓晶 刘丽 +1 位作者 龚守良 刘树铮 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期11-13,共3页
目的 :以质粒 PCNDA3.0为载体 ,研究血管内皮生长因子 ( VEGF)目的基因在体外真核细胞中的表达。方法 :将编码人可溶性 VEGF165的目的基因克隆于带有 CMV启动子 /增强子的PCNDA3.0载体上 ,重组为 PCNDA3.0 - VEGF165质粒载体。直接以质... 目的 :以质粒 PCNDA3.0为载体 ,研究血管内皮生长因子 ( VEGF)目的基因在体外真核细胞中的表达。方法 :将编码人可溶性 VEGF165的目的基因克隆于带有 CMV启动子 /增强子的PCNDA3.0载体上 ,重组为 PCNDA3.0 - VEGF165质粒载体。直接以质粒 DNA形式应用脂质体介导的方法转染人脐静脉内皮细胞 ECV30 4 ,收取细胞上清 ,用 ELISA和 Western blot方法检测上清中 VEGF165可溶性表达产物。结果 :VEGF165基因在 CMV启动子 /增强子的调控下 ,可在ECV30 4细胞高效表达 ,且在转染后 72 h表达量明显高于转染后 48h的表达。结论 :以质粒PCNDA3.0为载体 ,VEGF165基因可以在体外真核细胞中表达 。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 基因表达 质粒 重组dna
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基因工程与外源DNA导入技术
17
作者 刘国安 《西北师范大学学报（自然科学版）》 CAS 1999年第4期110-114,共5页
基因工程是把目的基因与适当的载体相连接形成重组ＤＮＡ， 并引入到适当的寄主细胞中进行复制和表达； 外源ＤＮＡ 导入技术是将供体总ＤＮＡ的片段， 在自花受粉后一定时期内， 使其沿着花粉管通道或其他方法进入胚囊， 转化受精卵或... 基因工程是把目的基因与适当的载体相连接形成重组ＤＮＡ， 并引入到适当的寄主细胞中进行复制和表达； 外源ＤＮＡ 导入技术是将供体总ＤＮＡ的片段， 在自花受粉后一定时期内， 使其沿着花粉管通道或其他方法进入胚囊， 转化受精卵或其前后的细胞． 基因工程方法思路清晰、原理清楚、目的明确， 但操作繁琐， 费用高； 外源ＤＮＡ导入技术简便易行， 费用低， 但目的性不强， 工作量大． 如将两种方法结合使用， 可降低费用， 提高整合率． 展开更多
关键词 基因工程 外源dna技术 dna重组技术
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华支睾吸虫成虫转录辅激活因子基因在原核细胞中的克隆、表达及其生物功能分析 被引量：3
18
作者 张咏莉 余新炳 +2 位作者 吴德 吴忠道 毕惠祥 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期18-23,共6页
目的　构建华支睾吸虫成虫转录辅激活因子 (transcriptionalcoactivator ,TC)基因 (TC基因 )原核重组质粒 ,进行原核表达、鉴定及生物功能分析。　方法　根据TC基因已知序列设计 1对引物 ,从华支睾吸虫成虫cDNA文库中扩增TC基因片段 ;... 目的　构建华支睾吸虫成虫转录辅激活因子 (transcriptionalcoactivator ,TC)基因 (TC基因 )原核重组质粒 ,进行原核表达、鉴定及生物功能分析。　方法　根据TC基因已知序列设计 1对引物 ,从华支睾吸虫成虫cDNA文库中扩增TC基因片段 ;将目的基因进行聚合酶链反应 (PCR) ,其产物和空质粒 pGEX 4T 1、pET3 0a (+ )同时用限制性内切酶BamHⅠ、SalⅠ双酶切 ,纯化回收后连接并转化大肠埃希菌 (E .coliBL2 1)。将构建的重组质粒pGEX 4T 1 TC和 pET3 0a (+ ) TC分别经双酶切、PCR及测序鉴定后在大肠埃希菌BL2 1中诱导表达。用十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹法 (Westernblotting)鉴定其表达效果 ,用亲和层析法纯化重组质粒pET3 0a (+ ) TC表达产生的组氨酸重组蛋白 (His TC)。　结果　构建了TC基因原核重组质粒pGEX 4T 1 TC和 pET3 0a (+ ) TC。SDS PAGE结果表明TC基因在大肠埃希菌BL2 1系统获得高效表达 ,其重组蛋白分子量与理论值相符。Westernblotting结果表明重组质粒 pGEX 4T 1 TC表达的谷胱甘肽硫转移酶 (GST)重组蛋白(GST TC)可被华支睾吸虫免疫兔血清识别 ,具有免疫反应性。纯化的TC基因的组氨酸 (His)重组蛋白 (His TC)经SDS PAGE显示单一条带。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 TC 基因 ET 大肠埃希菌 表达 重组质粒 辅激活因子 转录 重组蛋白
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人乳头瘤病毒16型E7基因的克隆和表达 被引量：3
19
作者 齐凤菊 徐钤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1992年第4期273-277,共5页
用分子克隆技术在大肠杆菌中表达HPV16 E7基因。用限制性内切酶DdeⅡ将含有大部分E7基因的191bp片段从HPV16基因组中切出。将此片段与含有色氨酸操纵子的启动子的表达载体pATH10连接成重组DNA,用以转化E.coliDH5a,并筛选出阳性重组子。... 用分子克隆技术在大肠杆菌中表达HPV16 E7基因。用限制性内切酶DdeⅡ将含有大部分E7基因的191bp片段从HPV16基因组中切出。将此片段与含有色氨酸操纵子的启动子的表达载体pATH10连接成重组DNA,用以转化E.coliDH5a,并筛选出阳性重组子。还进行了限制酶酶切分析和蛋白质SDS-PAGE分析。表达的新蛋白质带的分子量与预期的分子量相符。我们认为表达的新蛋白质是TrpE和E7蛋白的融合蛋白。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 细胞转化 克隆 表达
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重组DNA技术在代谢调控中的应用——代谢工程研究进展 被引量：2
20
作者 周跃钢 全学军 +1 位作者 林治华 冷波 《重庆工学院学报》 2003年第1期18-21,共4页
综述了代谢工程在微生物和植物领域中的应用研究进展,包括代谢工程研究的目的、设计思路和基本研究程序;在微生物领域中的应用,如氨基酸、聚酮类抗生素、PHB等的生物合成,副产物乙酸合成的抑制,提高半乳糖的利用率等;在植物领域中的应用... 综述了代谢工程在微生物和植物领域中的应用研究进展,包括代谢工程研究的目的、设计思路和基本研究程序;在微生物领域中的应用,如氨基酸、聚酮类抗生素、PHB等的生物合成,副产物乙酸合成的抑制,提高半乳糖的利用率等;在植物领域中的应用,如棉纤维品质的改进,紫杉醇生物合成等。 展开更多
关键词 代谢调控 代谢工程 重组dna 基因工程
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