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猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗的稳定性研究 被引量：5
1
作者 江楠 杨凤娇 周必英 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第2期148-150,共3页
目的研究猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗的稳定性。方法将猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18电穿孔转化入卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG),获得猪带绦虫重组BCG-TSOL18菌株,实验设野生型BCG对照,连续培养10d,用分光光度计测定600nm处吸... 目的研究猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗的稳定性。方法将猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18电穿孔转化入卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG),获得猪带绦虫重组BCG-TSOL18菌株,实验设野生型BCG对照,连续培养10d,用分光光度计测定600nm处吸光度A值,绘制生长曲线;人工传代10次,通过PCR分析其稳定性。结果同期培养的野生型BCG与重组BCG-TSOL18第1~7d为对数生长期。培养10d时野生型菌株A600由0.09升至1.24,重组型菌株A600由0.11升至1.28。此后分别进入平台期,且略有下降,其A600分别降至1.12和1.15。重组BCG-TSOL18第1~10代菌落均经PCR检测到TSOL18目的基因,未发生TSOL18基因丢失。结论重组BCGTSOL18对数生长期为前7d,且能稳定遗传至少10代,为猪带绦虫重组BCG疫苗的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪带绦虫 重组bcg-tsol18疫苗 稳定性
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猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗诱导小鼠免疫应答的动态观察 被引量：4
2
作者 杨凤娇 江楠 +3 位作者 周泠 刘晖 王灵军 周必英 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期878-883,共6页
目的观察猪带绦虫重组（r）BCG-TSOL18疫苗免疫小鼠后，诱导产生体液和细胞免疫应答的变化。方法按体质量采用随机数字表法将80只昆明小鼠分为4组：rBCG．TSOL18腹腔注射组f用5X10。克隆形成单位（CFU）猪带绦虫rBCG-TSOL18疫苗腹腔注... 目的观察猪带绦虫重组（r）BCG-TSOL18疫苗免疫小鼠后，诱导产生体液和细胞免疫应答的变化。方法按体质量采用随机数字表法将80只昆明小鼠分为4组：rBCG．TSOL18腹腔注射组f用5X10。克隆形成单位（CFU）猪带绦虫rBCG-TSOL18疫苗腹腔注射免疫小鼠]、rBCC-TSOL18口服灌胃组（用4×10^8CFU猪带绦虫rBCC-TSOL18疫苗口服灌胃免疫小鼠）；卡介苗（BCG）对照组[用5×10^6CFU的BCG腹腔注射免疫小鼠]；磷酸缓冲液（PBS）对照组（PBS腹腔注射小鼠），每组20只。在免疫后0、2、4、6、8周采集小鼠（n=4）眼静脉血．分离血清，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清特异性I如和IgG2a水平；无菌取脾，制备脾淋巴细胞悬液，收集脾淋巴细胞培养上清液，采用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖水平；ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清液白细胞介素（IL）．2和IL-4水平。结果rBCG-TSOL18腹腔注射组和rBCG—TSOL18口服灌胃组小鼠血清特异性IgG水平在免疫后2—8周升高，6周时两组达较高水平（0．310±0．022、0．356±0．026），与同组0周时及同时间BCG和PBS对照组（0．054±0．005、0．057±0．006、0．093±0．014、0．085±0．010）比较，差异有统计学意义（P均〈0．05）；IgG2a水平在免疫后2～8周升高，6周时两组达较高水平（0．965±0．031、1．144±0．049），与同组0周时及同时间BCG和PBS对照组（0．102±0．014、0．093±0．012、0．115±0．012、0．103±0．013）比较，差异有统计学意义（P均〈0．05）；小鼠脾淋巴细胞增殖水平在免疫后2～8周升高，6周时两组达较高水平（0．524±0．032、0．755±0．016），与同组0周时及同时间BCG和PBS对照组（0．301±0．018、0．305±0．020、0．362±0．033、0．334±0．027）比较，差异有统计学意义（P均〈0．05）；脾淋巴细胞上清液中IL-2和IL-4水平分别在免疫后2～8周和4，6周升高，分别在6� 展开更多
关键词 猪带绦虫 重组bcg—tsol18疫苗 免疫应答
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猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗构建及其表达 被引量：5
3
作者 杨凤娇 周必英 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期952-956,962,共6页
目的构建猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗,研究TSOL18基因在BCG中的表达情况。方法通过酶切的方法从重组质粒pGEX-TSOL18获取猪带绦虫TSOL18基因,将其定向克隆到大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV261中,构建猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18,... 目的构建猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗,研究TSOL18基因在BCG中的表达情况。方法通过酶切的方法从重组质粒pGEX-TSOL18获取猪带绦虫TSOL18基因,将其定向克隆到大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV261中,构建猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18,进行酶切、PCR和测序鉴定;再将其电穿孔转化入BCG,构建猪带绦虫重组BCGTSOL18疫苗,进行PCR鉴定;SDS-PAGE和Western blot分析TSOL18基因在BCG中的表达情况。结果通过酶切成功获得了393bp的TSOL18基因片段;酶切、PCR和测序鉴定证明成功构建了猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18;PCR鉴定证实猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18成功转入BCG中,提示猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗构建成功;SDS-PAGE分析发现在相对分子质量(Mr)约为14.7kD处有明显的TSOL18目的蛋白条带,Western blot证实表达的TSOL18目的蛋白能被兔抗血清和囊虫病猪血清所识别。结论成功构建了猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗,TSOL18基因能够在BCG中成功表达,表达的TSOL18重组蛋白具有特异的抗原性,为该疫苗的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪带绦虫 重组bcgtsol18疫苗 构建 表达
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猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗诱导仔猪的保护性免疫应答 被引量：1
4
作者 周必英 杨凤娇 +4 位作者 刘美辰 周泠 贾启 江楠 王灵军 《现代免疫学》 CSCD 北大核心 2017年第5期399-403,共5页
研究猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗免疫仔猪,猪带绦虫卵攻击后诱导其保护性免疫应答的情况。将12头40d龄健康仔猪均分为3组:分别为1011 CFU重组BCG-TSOL18疫苗灌胃组、BCG对照组和PBS对照组。每2周免疫1次,共免疫2次。于末次免疫4周后用... 研究猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗免疫仔猪,猪带绦虫卵攻击后诱导其保护性免疫应答的情况。将12头40d龄健康仔猪均分为3组:分别为1011 CFU重组BCG-TSOL18疫苗灌胃组、BCG对照组和PBS对照组。每2周免疫1次,共免疫2次。于末次免疫4周后用猪带绦虫卵进行攻击感染,3月后剖杀仔猪,分离囊尾蚴,计算减蚴率;取前腔静脉血,分离血清和制备外周血单个核细胞(peripheral blood monouclear cell,PBMC)。采用ELISA法检测血清IgG、IgG1及IgG2a水平以及PBMC培养上清液中IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-10的水平;MTT比色法检测PBMC增殖水平。重组BCG-TSOL18疫苗免疫组猪带绦虫卵攻击后诱导仔猪获得79.44%的保护力。与BCG和PBS对照组比较,重组BCG-TSOL18疫苗组血清IgG、IgG2a水平显著升高(t=13.026,P=0.000;t=13.253,P=0.000;t=7.284,P=0.000;t=8.453,P=0.000),IgG1水平显著降低(t=-9.118,P=0.000;t=-10.372,P=0.000);抗原刺激下PBMC显著增殖(t=14.929,P=0.000;t=14.665,P=0.000);PBMC培养上清液IL-2、IFN-γ水平显著升高(t=9.768,P=0.000;t=10.496,P=0.000;t=22.504,P=0.000;t=23.204,P=0.000),IL-4和IL-10水平显著降低(t=-18.659,P=0.000;t=-19.495,P=0.000;t=-26.258,P=0.000;t=-27.402,P=0.000)。猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗可诱导仔猪产生Th1型的保护性免疫应答,从而抵抗猪带绦虫卵的感染攻击。 展开更多
关键词 猪带绦虫 重组bcg-tsol18疫苗 保护性免疫应答 仔猪
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