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梅迪-维斯纳病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:2
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作者 张太翔 凌宗帅 +8 位作者 孙涛 袁涛 徐彪 梁成珠 刘文鹏 孙军 王洪兵 肖越强 杨慧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期163-165,共3页
为建立检测梅迪-维斯纳病毒(MVV)的TaqMan实时荧光定量PCR方法,本研究根据MVV核苷酸保守序列设计引物和探针。以梯度稀释的含有MVV目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示:5.0×105~5.0×101拷贝范围内定... 为建立检测梅迪-维斯纳病毒(MVV)的TaqMan实时荧光定量PCR方法,本研究根据MVV核苷酸保守序列设计引物和探针。以梯度稀释的含有MVV目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示:5.0×105~5.0×101拷贝范围内定量PCR均有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为50拷贝。对羊的其他病毒核酸均无扩增反应。本研究建立的实时定量PCR方法,灵敏度高,特异性好,在MVV的快速检测中具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 梅迪-维斯纳病毒 实时荧光定量pcr TAQMAN探针
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在水稻纹枯病菌菌核形成中5个基因的表达差异分析 被引量:7
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作者 王伟 杨惠 +1 位作者 王政逸 陈卫良 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期18-25,共8页
以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1IA)菌株GD118不同生长时期的总RNA为材料,以18SrRNA作为内参基因,根据实验室抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)已获得的立枯丝核菌基因片段的表达序列标签(expressed seq... 以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1IA)菌株GD118不同生长时期的总RNA为材料,以18SrRNA作为内参基因,根据实验室抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)已获得的立枯丝核菌基因片段的表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)设计引物,采用实时定量RT-PCR检测A、B、C、E、F基因(分别为双组分反应调节子、激活巨噬细胞糖蛋白、胞外金属弹力蛋白酶、亲环蛋白、内质网囊泡蛋白ERV29)的表达,以期找到水稻纹枯病菌菌核形成中的差异表达基因。结果表明:从菌核开始形成到菌核成熟的过程中,这5个基因的表达量逐渐降低,且菌核在成熟时表达量最低,但成熟后这些基因的表达量迅速恢复到之前的水平,之后表达量基本保持不变。提示这5个基因在水稻纹枯病菌菌核形成的不同时期的表达有显著差异,说明这5个基因可能受菌核形成过程中胁迫条件的诱导表达。 展开更多
关键词 水稻纹枯病菌 菌核形成 实时荧光定量rt pcr 基因差异表达
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一种新颖简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法的建立 被引量:129
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作者 张驰宇 徐顺高 黄新祥 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期883-888,共6页
为建立一种新颖、简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法,根据实时定量标准曲线,推导出相对定量基因表达的公式.公式显示相对表达指数只与CT值和标准曲线的斜率相关.构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得,实验过程繁琐.当人为成... 为建立一种新颖、简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法,根据实时定量标准曲线,推导出相对定量基因表达的公式.公式显示相对表达指数只与CT值和标准曲线的斜率相关.构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得,实验过程繁琐.当人为成比例增减标准品各个稀释度的具体拷贝数时,标准曲线的斜率并不改变,说明标准曲线斜率与标准品的具体拷贝数无关.因此,新的相对定量方法可以用任何一个待测样品的总RNA(或cDNA),经系列稀释后作为标准品,来构建相对定量标准曲线,获得斜率.与绝对定量法比较,新方法获得了基本相同的斜率和非常一致的定量结果(差异小于4%),而传统的2-#$CT法却表现出较大的定量误差.这些结果表明,新的相对定量方法是一种简便、准确和高效的定量基因表达的方法. 展开更多
关键词 荧光实时定量rt-pcr 相对定量 绝对定量 标准曲线 mRNA定量 斜率
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四步法消除SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR中引物二聚体的影响 被引量:47
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作者 张驰宇 张高红 +1 位作者 杨敏 贲昆龙 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期387-392,共6页
为建立一种新的SYBRgreenⅠ实时定量RT PCR方法 ,使之能够有效消除引物二聚体 (PDs)对实时定量结果的影响 .对RT PCR特异性扩增产物和PDs分别进行了凝胶电泳检测和熔解曲线分析 .依据PDs和扩增产物的熔解温度 (Tm)特点 ,在通用的三步法... 为建立一种新的SYBRgreenⅠ实时定量RT PCR方法 ,使之能够有效消除引物二聚体 (PDs)对实时定量结果的影响 .对RT PCR特异性扩增产物和PDs分别进行了凝胶电泳检测和熔解曲线分析 .依据PDs和扩增产物的熔解温度 (Tm)特点 ,在通用的三步法的延伸步骤之后 ,增加一个短暂的 (5s)恒温和荧光检测步骤 ,使这个步骤的温度高于PDs的Tm,但低于扩增产物的Tm,简称该法为四步法 .PDs的Tm 通常高于 72℃ ,但低于扩增产物的Tm .将四步法第四步的温度设置在高于PDs的Tm ,但低于扩增产物的Tm 时 ,四步法能够有效地消除PDs的影响 .对三步法和四步法SYBRgreenⅠ实时定量RT PCR进行了比较 ,发现三步法根本不能用于RNA的实时定量 ,而四步法能够实现包括低丰度RNA在内的RNA的定量 .选择Tm 值尽可能小的引物 ,使PDs与扩增产物Tm 值之间有足够的差距 ,将更有利于四步法的应用 。 展开更多
关键词 引物二聚体 荧光实时定量rt-pcr SYBR green 四步法 RNA定量
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猪生殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:44
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作者 宋志军 宋长绪 +6 位作者 杨增岐 朱道中 武占银 蒋智勇 林志雄 刘燕玲 张福良 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期98-102,共5页
根据GenBank登录的PRRSV保守基因序列设计合成了引物和探针,并对其进行了筛选;对荧光定量PCR的反应条件进行了优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。同时用建立的检测方法对组织病料进行了检测,并与常规RT-PCR做了对比。结果显示,... 根据GenBank登录的PRRSV保守基因序列设计合成了引物和探针,并对其进行了筛选;对荧光定量PCR的反应条件进行了优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。同时用建立的检测方法对组织病料进行了检测,并与常规RT-PCR做了对比。结果显示,所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法灵敏度可达5.0×100拷贝/μL,比常规RT-PCR灵敏度高100倍。用该方法对东莞、增城、湛江等地的猪血清和多种组织样品进行了检测。结果,该方法与常规RT-PCR检测方法的阳性符合率为100%。用该方法对3份不同的组织样品进行了重复检测,结果表明,该方法具有良好的重复性,可满足当前PRRS的诊断需要。 展开更多
关键词 猪生殖与呼吸综合征病毒 实时定量rt-pcr TaqMan荧光探针
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高温胁迫下B型烟粉虱热激蛋白基因hsp70表达量的变化 被引量:24
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作者 崔旭红 谢明 万方浩 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1087-1091,共5页
为了探讨热激蛋白在B型烟粉虱Bemisiatabaci B-biotype抵抗高温中的作用,以含有B型烟粉虱热激蛋白基因hsp70片段的质粒为模板,用TaqMan-MGB探针和特异性引物构建了B型烟粉虱hsp70实时荧光定量RT-PCR检测体系,并检测了37℃-45℃高温胁迫... 为了探讨热激蛋白在B型烟粉虱Bemisiatabaci B-biotype抵抗高温中的作用,以含有B型烟粉虱热激蛋白基因hsp70片段的质粒为模板,用TaqMan-MGB探针和特异性引物构建了B型烟粉虱hsp70实时荧光定量RT-PCR检测体系,并检测了37℃-45℃高温胁迫及气温变化时B型烟粉虱成虫体内hsp70表达的情况。结果表明:缓和的高温对B型烟粉虱成虫hsp70表达具有诱导作用,在37℃-41℃范围内,hsp70的表达量随着温度的升高从8.78×10^5±6.41×10^4拷贝数上升到1.99×10^7±1.45×10^5拷贝数,在41℃时达到最高峰;而当温度升高到43℃和45℃,hsp70表达量迅速降低。B型烟粉虱成虫hsp70的表达与昼夜气温变化有关,当上午气温从34℃上升到41℃时,hsp70的表达量从1.16×10^5±1.48×10^4拷贝数上升到6.29×10^6±1.80×10^5拷贝数;当傍晚气温下降到33℃时,hsp70表达量也下降到2.32×10^5±7.69×10^3拷贝数。因此推测,hsp70在B型烟粉虱抵抗高温胁迫方面可能具有重要作用。 展开更多
关键词 B型烟粉虱 高温胁迫 热激蛋白基因hsp70 表达量 实时荧光定量rt-pcr TAQMAN-MGB探针
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实时定量RT-PCR检测鱼类传染性造血器官坏死病毒方法的建立与应用 被引量:26
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作者 岳志芹 刘荭 +4 位作者 梁成珠 高宏伟 徐彪 邓明俊 江育林 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期91-95,共5页
建立了Taqman实时定量RT-PCR方法检测传染性造血器官坏死病毒(IHNV)。选取IHNV病毒的N蛋白基因保守序列,利用PrimerExpress2.0软件设计引物和探针。以梯度稀释的含有IHNV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量RT-PCR反应以确定检测灵... 建立了Taqman实时定量RT-PCR方法检测传染性造血器官坏死病毒(IHNV)。选取IHNV病毒的N蛋白基因保守序列,利用PrimerExpress2.0软件设计引物和探针。以梯度稀释的含有IHNV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量RT-PCR反应以确定检测灵敏度。病毒浓度在5×106—5个拷贝,共7个数量级的范围内,定量RT-PCR反应有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为5个拷贝。根据病毒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。该方法具有特异性,对鲤春血症病毒(SVCV)、病毒性出血性败血症(VHSV)、传染性胰脏坏死病毒(IPNV)、草鱼呼肠孤病毒(GCRV)、流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、EPC细胞系、牙鲆的核酸都没有扩增反应。在50批待检样品中,有3批鱼类感染IHNV,利用标准曲线进行了定量分析。实时定量RT-PCR检测IHNV方法,灵敏度高,特异性好,可以进行定量分析,在鱼病的快速检测上具有重要意义。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病毒(IHNV) 实时定量rt-pcr TAQMAN探针
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凋亡相关基因Livin、Smac/DIABLO在胃癌组织中的表达及其意义 被引量:24
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作者 赵毅 邓鑫 王强 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第6期593-601,共9页
背景与目的:作为一种促凋亡基因,Smac/DIABLO与凋亡抑制基因Livin相互作用,共同参与调控细胞癌变的起始及发展。本研究检测凋亡抑制蛋白Livin及线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO在胃癌组织中的表达,观察其表达水平与胃癌各临床病理因素的关... 背景与目的:作为一种促凋亡基因,Smac/DIABLO与凋亡抑制基因Livin相互作用,共同参与调控细胞癌变的起始及发展。本研究检测凋亡抑制蛋白Livin及线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO在胃癌组织中的表达,观察其表达水平与胃癌各临床病理因素的关系。方法:应用实时荧光定量PCR SYBR Green荧光染料法检测75例手术切除的胃癌组织、20例癌旁组织及正常胃组织中Livin mRNA和Smac/DIABLO mRNA的表达,Western blot结合及免疫组化SP法检测两种蛋白的表达及组织学定位。结果:正常胃组织及癌旁组织中均无Livin mRNA表达,胃癌组织中Livin mRNA表达显著上调,相对表达量为6.374±4.759,低分化胃腺癌组织及有淋巴结转移组的相对表达量显著高于中高分化胃腺癌组织(P<0.05),其表达与肿瘤大小、浸润深度及TNM分期无关,Livin蛋白的表达结果与之相符;胃癌组织中Smac/DIABLO mRNA的表达(0.731±0.420)低于正常胃组织(1.104±0.276)及癌旁组织(1.061±0.737),但差异无统计学意义(P>0.05),Smac/DIABLO mRNA表达水平与胃癌各临床病理因素无关;Smac/DIABLO蛋白表达与mRNA表达存在差异。Smac/DIABLO在肠型胃癌(84.38%)与弥漫型胃癌(60.65%)中的表达有一定差异(P<0.05)。结论:Livin与Smac/DIABLO在不同阶段和不同病理类型胃癌中的表达及相关性存在差异,Livin基因高表达与胃癌的发生及分化转移密切相关。 展开更多
关键词 凋亡抑制蛋白 线粒体促凋亡蛋白 胃肿瘤 实时荧光定量 Western BLOT 免疫组化
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荧光定量RT-PCR技术快速检测SARS病毒核酸 被引量:24
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作者 冯燕 卢亦愚 +5 位作者 严菊英 史雯 李敏红 龚黎明 葛琼 周敏 《中国病毒学》 CSCD 2005年第3期228-231,共4页
建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RTPCR方法用于检测严重急性呼吸道综合症病毒(severeacuterespiratorysyndromeassociatecoronavirus,SARSCoV)核酸。筛选针对SARS病毒基因保守区域设计的引物与TaqMan探针,并对荧光定量RTPC... 建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RTPCR方法用于检测严重急性呼吸道综合症病毒(severeacuterespiratorysyndromeassociatecoronavirus,SARSCoV)核酸。筛选针对SARS病毒基因保守区域设计的引物与TaqMan探针,并对荧光定量RTPCR反应体系与反应条件进行优化,验证本方法的特异性、敏感度与重复性。实验结果表明:本方法对SARS病毒核酸的检测具有高度特异性,与甲1型、甲3型、乙型流感病毒、禽流感病毒H5N1、麻疹及其他呼吸道病毒均无交叉反应;检测灵敏度达0.1TCID50;从病毒核酸提取至检测完成仅需3h左右,且操作简便,重复性好。本研究建立的TaqMan荧光定量RTPCR方法特异、敏感、快速,适合于临床实验室进行SARS病毒的早期快速检测。 展开更多
关键词 荧光定量rt-pcr TAQMAN探针 SARS病毒
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荧光定量RT-PCR快速检测手足口病病原研究 被引量:25
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作者 何雅青 何丽芸 +3 位作者 姚相杰 杨洪 房师松 舒柏华 《中国热带医学》 CAS 2008年第10期1675-1677,共3页
目的建立荧光定量RT-PCR技术用于检测手足口病的肠道病毒。方法利用TaqMan技术,设计一对共引物及探针,建立、优化反应体系后,构建质粒标准品,利用10倍稀释法建立相对定量标准曲线,根据TCID50倍比稀释,建立灵敏度曲线。特异性检验后利用... 目的建立荧光定量RT-PCR技术用于检测手足口病的肠道病毒。方法利用TaqMan技术,设计一对共引物及探针,建立、优化反应体系后,构建质粒标准品,利用10倍稀释法建立相对定量标准曲线,根据TCID50倍比稀释,建立灵敏度曲线。特异性检验后利用临床标本与传统的RT-PCR法进行比较。结果定量标准曲线的灵敏度为105/μl(R2=0.999),PCR扩增效率为94%。灵敏度曲线显示检测到的最低浓度值为5.0TCID50/ml(R2=0.99),PCR扩增效率为97.6%。荧光RT-PCR检出率为80.9%,显著高于RT-PCR(检出率为62.92%)。结论研究建立的荧光定量RT-PCR方法检测肠道病毒敏感性高、特异性好、效率高,可以作为肠道病毒的快速检测方法。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒 荧光定量rtpcr
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菊花FT类似基因的克隆与表达分析 被引量:20
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作者 潘才博 张启翔 +1 位作者 潘会堂 孙明 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期769-776,共8页
以地被菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)'七月桃花'为材料,利用同源基因克隆法结合RACE技术克隆了光周期调控开花重要基因FLOWERING LOCUS T(FT)的类似基因(基因登陆号GQ925916,命名为CmFT)。该基因开放阅读框有525bp,可编... 以地被菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)'七月桃花'为材料,利用同源基因克隆法结合RACE技术克隆了光周期调控开花重要基因FLOWERING LOCUS T(FT)的类似基因(基因登陆号GQ925916,命名为CmFT)。该基因开放阅读框有525bp,可编码174个氨基酸。蛋白比对发现,CmFT所推测的氨基酸序列包含FT类蛋白保守基序和两个关键性氨基酸残基。通过系统遗传进化树分析进一步表明CmFT属于FT亚家族成员。SYBR GREEN法实时荧光定量RT-PCR表达分析结果表明CmFT在花芽的表达量最高,茎的表达量次之,叶片表达量最低。在短日条件下,该基因的表达量呈昼夜节律表达型,在光照期间呈下降趋势,在夜间逐渐上升,光照前4h时达到最高水平。在长日条件下,其相对表达量显著低于短日条件下且趋于零。由此推测,该基因主要与菊花光周期敏感性密切相关,可能在光周期促进开花中发挥一定的作用。 展开更多
关键词 菊花 光周期敏感性 FT类似基因 实时定量rt-pcr
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TaqMan荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立与初步应用 被引量:22
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作者 刘邓 袁秀芳 +4 位作者 冉多良 徐丽华 牛登元 王朝文 王一成 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第1期28-34,共7页
根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒Ⅳ基因序列,设计了一对特异性引物和探针,扩增长度为186bp的片段。以克隆Ⅳ基因的质粒作为阳性标准品,建立了一种快速检测猪流行腹泻病毒含量的TaqMan荧光定量PCR方法。该方法在10^9-10^1copies... 根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒Ⅳ基因序列,设计了一对特异性引物和探针,扩增长度为186bp的片段。以克隆Ⅳ基因的质粒作为阳性标准品,建立了一种快速检测猪流行腹泻病毒含量的TaqMan荧光定量PCR方法。该方法在10^9-10^1copies/μL范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中10copies/μL的质粒DNA,以猪圆环病毒、猪乙脑病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒为模板时,均检测不到荧光信号,而重复性实验中其变异系数均小于2%,表明此方法具有很好的特异性和重复性。应用此方法对采集的60份,陆床样品进行检测,其阳性检出率为92%,而用常规RT-PCR方法进行检测,阳性检出率仅为80%。表明荧光定量RT-PCR方法的敏感性明显高于常规PcR检测方法。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 荧光定量rt-pcr TaqMan荧光探针
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定量RT-PCR及其在植物学研究中的应用 被引量:15
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作者 胡丹丹 顾金刚 +1 位作者 姜瑞波 董金皋 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期520-525,共6页
定量RT-PCR(Quantitative reverse transcriptase-PCR)是在反转录和定量PCR的基础上发展起来的一种特异性检测基因表达的技术。主要包括相对定量RT-PCR(Relative quantitative RT-PCR)、竞争性定量RT-PCR(Competitive quan-titative RT-... 定量RT-PCR(Quantitative reverse transcriptase-PCR)是在反转录和定量PCR的基础上发展起来的一种特异性检测基因表达的技术。主要包括相对定量RT-PCR(Relative quantitative RT-PCR)、竞争性定量RT-PCR(Competitive quan-titative RT-PCR)、比较定量RT-PCR(Comparative quantitative RT-PCR)和实时定量RT-PCR(Real time quantitative RT-PCR)四种。目前定量RT-PCR在植物学研究中的应用越来越广泛,如植物营养学研究、植物发育学研究、植物抗逆机理研究、转基因植物的检测、病原菌的检测、植物与微生物互作机理研究、植物抗病性检测等方面。本文综述了定量RT-PCR的原理及在植物学中的应用。 展开更多
关键词 相对定量rtpcr 竞争性定量rt-pcr 比较定量rt-pcr 实时定量rt-pcr 植物学
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实时定量RT-PCR监测慢性粒细胞白血病患者造血干细胞移植后bcr-abl mRNA水平 被引量:19
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作者 秦亚溱 李金兰 +9 位作者 主鸿鹄 阮国瑞 李玲娣 张艳 许兰平 刘代红 黄晓军 陈珊珊 陆道培 刘艳荣 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期511-514,共4页
目的评价实时定量 RT-PCR(Q-PCR)技术用于监测慢性粒细胞白血病(CML)患者异基因造血干细胞移植(HSCT)疗效的意义。方法采用基于 TaqMan 探针的 Q-PCR 技术检测112例CML 患者 HSCT 后不同时间共316份骨髓标本 bcr-abl mRNA 的表达。bcr-a... 目的评价实时定量 RT-PCR(Q-PCR)技术用于监测慢性粒细胞白血病(CML)患者异基因造血干细胞移植(HSCT)疗效的意义。方法采用基于 TaqMan 探针的 Q-PCR 技术检测112例CML 患者 HSCT 后不同时间共316份骨髓标本 bcr-abl mRNA 的表达。bcr-abl mRNA 水平以内参基因abl 进行归一化。采用荧光原位杂交法(FISH)评估 HSCT 后是否达细胞遗传学完全缓解(CCyR)。结果 Q-PCR 实验可重复敏感度为5个拷贝。abl 及 bcr-abl 基因C_T 值的批内差及批间差均<2.0%。HSCT 后1个月开始持续处于 CCyR 状态的101例患者,中位跟踪时间为12(6~60)个月的289份标本表现为 HSCT 后各时间段均有一定数量患者可检测出 bcr-abl mRNA,总体上随着 HSCT 时间延长,中位水平逐渐降低。HSCT 后1个月中位 bcr-abl 水平为0.035%(0~0.406%),较本室资料初治 CML 慢性期患者中位水平降低3个对数级,3个月时为0.006%(0~0.683%),6个月开始降至0%(0~0.225%),移植6个月后标本最高 bcr-abl 水平为0.068%。8例患者 HSCT 后未达 CCyR 或遗传学复发时 bcr-abl 水平为0.12%~13.45%,其中5例患者遗传学复发前的1份标本(复发前1~2个月) bcr-abl 水平为0.09%~3.42%。9例持续 CCyR 患者 bcr-abl 水平曾经>0.090%,但随后均下降至0。2例急变期患者 HSCT 后1.6和3个月内持续 CCyR,但分别于1个月和1.5个月后进展为血液学复发,bcr-abl 水平亦从0及0.140% 分别急剧增至46.900% 和75.900%。结论 Q-PCR 技术精确、可靠,对CML 患者 HSCT 后有必要定期系列监测 bcr-abl 水平,以及时了解病情变化。对急变期患者需要更密切的监测。 展开更多
关键词 白血病 髓样 慢性 造血干细胞移植 融合蛋白类 BCR-ABL 聚合酶链反应
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DD3 mRNA在前列腺癌组织中定量表达分析 被引量:15
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作者 陶志华 毛晓露 +10 位作者 王彩虹 陈晓东 余凯远 翁志梁 胡元平 张筱骅 谢辉 王瓯晨 宋其同 李澄棣 陈占国 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期130-133,共4页
目的:探讨DD3基因在前列腺组织中表达的临床意义。方法:用荧光定量RT-PCR方法对21例前列腺癌(PCa)组织、27例非前列腺部位的肿瘤组织、39例良性前列腺增生(BPH)组织和15例正常前列腺组织中的DD3的表达进行了定量分析,用ROC曲线对DD3 mRN... 目的:探讨DD3基因在前列腺组织中表达的临床意义。方法:用荧光定量RT-PCR方法对21例前列腺癌(PCa)组织、27例非前列腺部位的肿瘤组织、39例良性前列腺增生(BPH)组织和15例正常前列腺组织中的DD3的表达进行了定量分析,用ROC曲线对DD3 mRNA诊断PCa的性能进行了分析。结果:27例非前列腺组织中均未检测到DD3基因的表达。DD3在PCa组、BPH组和正常前列腺组表达量的中位数分别为7.2×106、2.5×104、1.5×104拷贝/mg组织。PCa组较BPH组和正常前列腺组DD3的表达量显著增高(P<0.01),而BPH组和正常前列腺组间则差异无显著性(P>0.05)。DD3表达量与临床分期和分化程度之间均无明显相关性。DD3 mRNA曲线下面积(AUC-ROC)为0.937(95%CI:0.879~0.995)。当临界值为1.4×105拷贝/mg组织时,灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、阳性拟然比(+LR)、阴性拟然比(-LR)分别为90.5%、85.0%、86.7%、76.0%、94.3%、6.03和0.11。结论:DD3 mRNA的表达仅限于前列腺组织,具有良好的组织特异性。DD3 mRNA表达在PCa组织中显著升高,在正常前列腺和BPH组织中差异无显著性。DD3 mRNA可作为PCa诊断的良好标志物,在PCa早期诊断、微转移诊断、预后判断、指导治疗等方面也具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 前列腺癌 DD3基因 实时荧光定量rt-pcr 前列腺组织
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大黄素对乏氧鼻咽癌细胞的放射增敏性与DNA修复基因的关系 被引量:15
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作者 刘瑛 侯华新 +2 位作者 黎丹戎 程道海 罗艳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期348-352,共5页
目的研究广西何首乌中大黄素(emodin)对乏氧状态鼻咽癌CNE-1细胞KU70/80表达的影响,探讨其放射增敏作用与DNA修复基因的关系。方法通氮乏氧条件下,应用实时荧光定量PCR技术检测放射增敏实验组和对照组鼻咽癌细胞中乏氧诱导因子(HIF-1α)... 目的研究广西何首乌中大黄素(emodin)对乏氧状态鼻咽癌CNE-1细胞KU70/80表达的影响,探讨其放射增敏作用与DNA修复基因的关系。方法通氮乏氧条件下,应用实时荧光定量PCR技术检测放射增敏实验组和对照组鼻咽癌细胞中乏氧诱导因子(HIF-1α)和DNA双链断裂修复基因(KU70/KU80)mRNA的表达水平。结果乏氧作用不同时间后HIF-1αmRNA表达都明显升高,而单独药物组HIF-1α表达无明显变化;单纯放疗组能诱导KU70/KU80 mRNA表达上调,放疗联合乏氧组对KU70/KU80的上调作用比单纯放疗组更明显;而在乏氧情况下进行加药和照射处理后KU70/KU80 mRNA表达明显降低。结论在乏氧环境下,大黄素联合放疗能有效下调HIF-1α和DNA双链断裂修复基因(KU70/KU80)mRNA的表达水平,这可能是其增敏作用的分子机制。 展开更多
关键词 大黄素 乏氧 修复基因 实时荧光定量rtpcr 鼻咽癌
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外源水杨酸调控水稻化感抑草作用及其分子生理特性 被引量:10
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作者 邱龙 王海斌 +4 位作者 熊君 方长旬 吴文祥 何海斌 林文雄 《应用生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期330-336,共7页
为了探讨外源水杨酸(SA)调控水稻化感抑草效应的可行性,研究了不同浓度的外源SA对强化感水稻PI312777抑草效应的影响及其生理生化特性,并运用实时定量RT-PCR(FQ-PCR)技术检测SA介导的关键酶苯丙氨酸解氨酶基因(ZB8)的相对表达量.结果表... 为了探讨外源水杨酸(SA)调控水稻化感抑草效应的可行性,研究了不同浓度的外源SA对强化感水稻PI312777抑草效应的影响及其生理生化特性,并运用实时定量RT-PCR(FQ-PCR)技术检测SA介导的关键酶苯丙氨酸解氨酶基因(ZB8)的相对表达量.结果表明:外源SA能够诱导水稻化感抑草效应增强,而且这种诱导效应与SA的浓度和处理时间相关.叶面喷施SA后,PI312777对稗草的抑制率显著提高,其根系活力、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性增强,过氧化氢酶(CAT)活性降低;而伴生杂草稗草的相应生理指标的变化趋势则相反.PI312777植株中的苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性增强,总酚含量升高.0.2mmol.L-1的SA诱导水稻化感抑草效应最显著,该浓度下目的基因ZB8的相对表达丰度随处理时间先上调后下调,在24h达到表达高峰. 展开更多
关键词 水杨酸 化感水稻 实时定量rtpcr苯丙氨酸解氨酶
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实时荧光定量RT-PCR法检测手足口病患儿大便标本中肠道病毒71型 被引量:15
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作者 刘丽艳 叶颖子 +2 位作者 王建设 俞蕙 朱启镕 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期142-145,共4页
目的了解2008年手足口病流行期间住院手足口病患儿是否存在EV71病毒感染,并探讨实时荧光定量RT-PCR法对手足口病患儿大便标本中EV71病毒载量进行定量检测的可行性。方法采用RT-PCR荧光探针体外扩增法对47例住院的手足口病患儿大便标本... 目的了解2008年手足口病流行期间住院手足口病患儿是否存在EV71病毒感染,并探讨实时荧光定量RT-PCR法对手足口病患儿大便标本中EV71病毒载量进行定量检测的可行性。方法采用RT-PCR荧光探针体外扩增法对47例住院的手足口病患儿大便标本中抽提的RNA进行抽样检测。结果22例(46.81%)手足口病患儿大便标本中EV71的病毒载量大于103copies/ml,最高者达1.03×107copies/ml。实时荧光定量RT-PCR法其标准曲线显示,Ct值与病毒拷贝数的对数(log10)之间的相关系数为1.000,相关性较好。结论2008年手足口病流行期间入住儿科医院的手足口病患儿近半数为EV71病毒感染。实时荧光定量RT-PCR法对大便标本中的EV71RNA定量检测较方便快捷,结果直观,为进一步研究病毒载量与临床表现之间的关系打下了基础。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒71型 实时荧光定量rtpcr 病毒载量
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Down-Regulated Expression of RACK1 Gene by RNA Interference Enhances Drought Tolerance in Rice 被引量:15
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作者 LI Da-hong LIU Hui +2 位作者 YANG Yan-li ZHEN Ping-ping LIANG Jian-sheng 《Rice science》 SCIE 2009年第1期14-20,共7页
The receptor for activated C-kinase 1 (RACK1) is a highly conserved scaffold protein with versatile functions, and plays important roles in the regulation of plant growth and development. Transgenic rice plants, in ... The receptor for activated C-kinase 1 (RACK1) is a highly conserved scaffold protein with versatile functions, and plays important roles in the regulation of plant growth and development. Transgenic rice plants, in which the expression of RACK1 gene was inhibited by RNA interference (RNAi), were studied to elucidate the possible functions of RACK1 in responses to drought stress in rice. Real-time PCR analysis showed that the expression of RACK1 in transgenic rice plants was inhibited by more than 50%. The tolerance to drought stress of the transgenic rice plants was higher as compared with the non-transgenic rice plants. The peroxidation of membrane and the production of malondialdehyde were significantly lower and the superoxide dismutase activity in transgenic rice plants was significantly higher than those in non-trangenic rice plants It is suggested that RACK1 negatively regulated the redox system-related tolerance to drought stress of rice plants. 展开更多
关键词 Oryza sativa receptor for activated C-kinase 1 gene RNA interference transgenic plant drought stress real-time quantitative rt-pcr gene expression
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慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞Tim-3表达的检测及意义 被引量:15
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作者 高西阳 李搀 +3 位作者 潘修成 李莉 傅涓涓 姚伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期739-743,共5页
目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单核细胞中T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)的表达及对其炎症因子生成的影响。方法利用多色流式技术和荧光实时定量PCR(qRT-PCR),分别检测不同状态的CHB患者外周血单核细胞亚群表面Tim-3分子... 目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单核细胞中T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)的表达及对其炎症因子生成的影响。方法利用多色流式技术和荧光实时定量PCR(qRT-PCR),分别检测不同状态的CHB患者外周血单核细胞亚群表面Tim-3分子和Tim-3 mRNA表达水平。给予重组人galectin-9和脂多糖(LPS)共刺激CHB活动期患者外周血单核细胞,用ELISA检测培养上清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平。结果慢乙肝免疫耐受期患者(IT)外周血单核细胞表面Tim-3表达水平显著高于健康对照组(HC)和免疫活动期患者(IA)(P<0.01),其中IT患者CD14+CD16-和CD14+CD16+单核细胞亚群中Tim-3的表达均高于IA患者,差异均有统计学意义。qRT-PCR结果进一步证实IA患者外周血单核细胞中Tim-3 mRNA的表达高于HC(P=0.040)。IA患者CD14+单核细胞上Tim-3的表达与血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平呈正相关(r=0.362,P=0.028)。重组人galectin-9和LPS共刺激IA患者外周血单核细胞比单独使用LPS刺激分泌更高水平的TNF-α,IL-1,IL-6。结论 CHB患者外周血单核细胞Tim-3表达上调,与血清ALT水平呈正相关,Tim-3/galectin-9通路能够促进LPS诱导的单核细胞的炎症因子的分泌。 展开更多
关键词 TIM-3 单核细胞 慢性乙型肝炎 荧光实时定量rt-pcr
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