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两种不同基质对体外培养成骨细胞促贴壁生长的影响 被引量:5
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作者 李建瑛 许永华 +5 位作者 张东辉 许琴 是文辉 李佳佳 马娜 董翔 《实验动物科学》 2011年第5期19-21,共3页
目的比较多聚赖氨酸(PoLy lysine PLL)与鼠尾胶原对成骨细胞体外培养生长的影响。方法分别采用PLL和鼠尾胶原铺制培养皿,然后接种成骨细胞。于24 h、48 h、72 h镜下观察细胞形态及占培养皿面积的百分比。结果 24 h PLL组,细胞贴壁呈均... 目的比较多聚赖氨酸(PoLy lysine PLL)与鼠尾胶原对成骨细胞体外培养生长的影响。方法分别采用PLL和鼠尾胶原铺制培养皿,然后接种成骨细胞。于24 h、48 h、72 h镜下观察细胞形态及占培养皿面积的百分比。结果 24 h PLL组,细胞贴壁呈均匀分布状,贴壁面积比为(30.6±12.9)%;鼠尾胶原组细胞贴壁呈团状,贴壁面积比为(42.5±15.7)%,两者比较差异显著(P<0.05);48 h PLL组,细胞呈均匀分布生长,贴壁面积比为(43.8±14.5)%;鼠尾胶原组,细胞团相互连接,生长面积比为(61.3±17.1)%,差异极显著(P<0.01);72 h PLL组细胞相互连接生长面积比为(56.3±15.4)%;鼠尾胶原组,细胞连成片,生长面积比为(94.4±14.1)%,两者比较差异极显著(P<0.01)。结论对体外培养成骨细胞鼠尾胶原促贴壁生长比PLL更为适宜。 展开更多
关键词 成骨细胞 多聚赖氨酸(PLL) 鼠尾胶原 贴壁
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不同粘附剂对大鼠肝实质细胞体外培养的影响 被引量:1
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作者 谷若曦 杨珂 +6 位作者 张华伟 张佳妮 丁成成 彭甜甜 陈伟航 程硕 华茜 《现代生物医学进展》 CAS 2021年第15期2808-2811,共4页
目的:比较鼠尾胶与多聚赖氨酸对大鼠肝实质细胞体外培养的影响。方法:分别采用鼠尾胶与多聚赖氨酸包被同一块培养板,然后将从大鼠肝脏中分离出来的肝实质细胞,接种到包被好的培养板中。于接种前(0 h),接种后体外培养24 h、72 h显微镜下... 目的:比较鼠尾胶与多聚赖氨酸对大鼠肝实质细胞体外培养的影响。方法:分别采用鼠尾胶与多聚赖氨酸包被同一块培养板,然后将从大鼠肝脏中分离出来的肝实质细胞,接种到包被好的培养板中。于接种前(0 h),接种后体外培养24 h、72 h显微镜下观察细胞贴壁与形态变化情况。结果:接种前(0 h)可见新鲜分离的肝实质细胞呈圆形,明亮,有立体感,轮廓完整,层次清楚;体外培养24 h后两种粘附剂包被的同一块培养板中,均可观察到肝实质细胞正常生长,且细胞形态由圆形转变为多角形,并且融合聚集,胞体变平整,贴壁情况区别不大;培养72 h后细胞间开始出现连接,大部分肝细胞呈现出双核或多核,并且多聚赖氨酸包被的培养板中可见大量肝细胞呈岛屿状,已完全贴壁于培养板上。结论:多聚赖氨酸作为包被材料更有利于肝实质细胞贴壁生长以及保持细胞固有形态。 展开更多
关键词 肝实质细胞 鼠尾胶 多聚赖氨酸(PLL) 体外培养
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以鼠尾胶原为支架的真皮类似物的建立 被引量:13
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作者 张铁良 屠军波 +5 位作者 杨壮群 荔鹏 王正辉 邢喆 兰海龙 薛瑛 《中国美容医学》 CAS 2006年第2期131-133,i0001,共4页
目的:探寻建立真皮类似物的培养方法。方法:原代培养人皮肤成纤维细胞,制备鼠尾胶原,将鼠尾胶原溶液、浓缩培养基、NaOH溶液和以血清重悬的成纤维细胞溶液在适当的比例下混合后形成凝胶构建真皮类似物。结果:形成的真皮类似物中成纤维... 目的:探寻建立真皮类似物的培养方法。方法:原代培养人皮肤成纤维细胞,制备鼠尾胶原,将鼠尾胶原溶液、浓缩培养基、NaOH溶液和以血清重悬的成纤维细胞溶液在适当的比例下混合后形成凝胶构建真皮类似物。结果:形成的真皮类似物中成纤维细胞生长状态良好,并且组织块具有一定弹性和抗拉伸能力。结论:①利用鼠尾胶原可以构建真皮类似物,该模型是进行皮肤器官型培养和制作复合皮的关键与基础;②成纤维细胞胶原凝胶复合物有着良好的生物学特性,它是研究成纤维细胞与细胞外基质之间以及细胞之间相互作用的良好模型。 展开更多
关键词 成纤维细胞 鼠尾胶原 真皮类似物
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鼠尾胶原为底物的人鼻腔纤毛上皮细胞培养模式的建立 被引量:10
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作者 宋晓红 张罗 +4 位作者 韩德民 范尔钟 王鸿 王奎吉 李颖 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 北大核心 2007年第2期107-111,共5页
目的建立以鼠尾胶原为贴附底物的人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式,为人鼻腔黏液纤毛运输系统的研究提供科学有效的方法。方法制备鼠尾胶原并铺片,以鼠尾胶原为贴附底物组织块培养法培养人鼻腔纤毛上皮细胞,培养7天时进行HE染色及扫描... 目的建立以鼠尾胶原为贴附底物的人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式,为人鼻腔黏液纤毛运输系统的研究提供科学有效的方法。方法制备鼠尾胶原并铺片,以鼠尾胶原为贴附底物组织块培养法培养人鼻腔纤毛上皮细胞,培养7天时进行HE染色及扫描电镜和透射电镜观察细胞形态和结构,应用高速摄像技术测量纤毛摆动频率。结果鼠尾胶原要平坦均匀,平均厚度约为1mm;HE染色可见上皮细胞呈单层向周围爬开;扫描电镜下见纤毛上皮细胞呈不规则多角形,纤毛周围可见微绒毛;透射电镜下可见纤毛上皮细胞间为紧密连接;同一细胞任意两点纤毛摆动频率是相同的;同一来源体外培养的钩突和下鼻甲的纤毛摆动频率是相同的。结论以鼠尾胶原为贴附底物人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式的成功建立,为今后研究鼻内用药对纤毛清除功能的影响提供了良好的方法和途径。 展开更多
关键词 人类 鼻腔 上皮细胞 细胞培养技术 鼠尾胶原
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鼠尾胶为贴黏剂的微血管内皮细胞培养 被引量:5
5
作者 蔡莉蓉 李玉珍 刘秀华 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2005年第6期464-465,共2页
目的:以鼠尾胶为贴黏剂,建立一种成本低且生长状态良好的微血管内皮细胞体外培养体系。方法:无菌条件下制作鼠尾胶,并均匀铺在培养皿中。分离收集脑微血管段,接种于铺有鼠尾胶的培养皿中进行培养。用内皮细胞的两种重要标记物VIII因子... 目的:以鼠尾胶为贴黏剂,建立一种成本低且生长状态良好的微血管内皮细胞体外培养体系。方法:无菌条件下制作鼠尾胶,并均匀铺在培养皿中。分离收集脑微血管段,接种于铺有鼠尾胶的培养皿中进行培养。用内皮细胞的两种重要标记物VIII因子相关抗原和γ-谷氨酰转酞酶(-γglutamyl-transpeptidase,γ-GT)鉴定细胞,并以3H-TdR掺入法观察培养细胞对血清刺激的增殖反应性。结果:显微镜观察从脑微血管段生长出的细胞具有内皮细胞生长特性:单层“卵石样”排列特征和接触生长抑制;VIII因子免疫组织化学染色呈阳性;培养上清含有大量的γ-谷氨酰转酞酶[(5.01±0.07)IU/L];证实鼠尾胶做为贴黏剂获得的是内皮细胞。10%胎牛血清刺激后3H-TdR掺入率较对照组增加87.5%(P<0.05)。结论:本研究用鼠尾胶做为贴黏剂,降低微血管内皮细胞培养成本,且细胞生长状态良好,表明该方法是一种比较经济可靠的微血管内皮细胞培养体系。 展开更多
关键词 鼠尾胶 黏着剂 毛细血管 细胞培养
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鼠尾胶原蛋白提取、分离、纯化方法的建立及鉴定 被引量:6
6
作者 任海涛 钟志勇 +4 位作者 郑佳琳 饶子亮 邝少松 王刚 唐小江 《中国比较医学杂志》 CAS 2012年第11期50-53,共4页
目的建立一种高效提取、分离、纯化鼠尾胶原蛋白的方法。方法通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化。超纯水透析... 目的建立一种高效提取、分离、纯化鼠尾胶原蛋白的方法。方法通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化。超纯水透析除去无机盐类获得纯化的鼠尾胶原蛋白。通过SDS-PAGE蛋白质电泳、氨基酸含量分析等技术手段鉴定。结果本研究建立的方法可以获得高纯度的鼠尾胶原蛋白,纯度达到电泳纯。与国外进口的商业化鼠尾胶原蛋白产品相比无差异。研究了提取、分离、纯化参数对得率、纯度的影响,建立了最优的鼠尾胶原蛋白提取条件,胃蛋白酶用量:1∶500,酶解时间:72 h,盐析浓度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05mol/L醋酸溶液。结论为鼠尾胶原蛋白的扩大化生产提供了合适的工艺参数,为大量获得鼠尾胶原蛋白并进行更深层次的功效方面研究提供了理论支持和实践基础。 展开更多
关键词 鼠尾胶原 蛋白质提取 蛋白质分离 蛋白质纯化 蛋白质鉴定
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外周血来源内皮祖细胞三维血管新生模型的建立及其特性分析 被引量:6
7
作者 施森 何延政 +6 位作者 刘勇 葛红卫 胡波 文雪刚 曾宏 钟武 杨辉 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2009年第2期119-123,共5页
目的观察内皮祖细胞(EPC)在血管新生中的作用及其生物学特性。方法取大鼠外周血分离出EPC,观察其在体外的培养和扩增情况,对培养的EPC进行检测,同时建立三维立体模型并分析。结果成功分离出外周血中的EPC,在平面培养时,各时间点经VEGF... 目的观察内皮祖细胞(EPC)在血管新生中的作用及其生物学特性。方法取大鼠外周血分离出EPC,观察其在体外的培养和扩增情况,对培养的EPC进行检测,同时建立三维立体模型并分析。结果成功分离出外周血中的EPC,在平面培养时,各时间点经VEGF诱导的EPC(实验组)其增殖情况均优于无VEGF诱导的EPC(对照组),P<0.01。在由鼠尾胶原凝胶制成的三维基质中EPC向胶原基质内生长,1d内即可出现向胶原内的出芽及浸润,并逐渐形成分支样结构;实验组生长快,向胶原基质内浸润速度快、出芽快,管状结构粗大;而对照组生长慢、出芽慢,管状结构细小,向胶原内浸润的深度浅,网状结构稀疏,不完整;实验组各时相三维基质中新生血管数目均多于对照组(P<0.01)。结论鼠尾胶原凝液可以诱导EPC参与血管新生的迁移、增殖、发芽等步骤;EPC三维基质模型可用于新生血管的研究。VEGF能动员和诱导EPC促进血管新生。 展开更多
关键词 内皮祖细胞 三维血管新生模型 血管内皮细胞生长因子 鼠尾胶原凝液
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鼠尾胶原在原代培养耳蜗血管纹边缘细胞中的应用 被引量:4
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作者 鄢开胜 罗凌惠 +2 位作者 付勇 陈广理 龚树生 《临床耳鼻咽喉科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期463-465,共3页
目的:建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。方法:制作鼠尾胶原,并观察利用自制的鼠尾胶原所培养出大鼠耳蜗边缘细胞的效果。结果:自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞,细胞角蛋白18表达阳性,免疫组织化学结果... 目的:建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。方法:制作鼠尾胶原,并观察利用自制的鼠尾胶原所培养出大鼠耳蜗边缘细胞的效果。结果:自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞,细胞角蛋白18表达阳性,免疫组织化学结果和扫描电镜证实所培养的细胞具有典型的分泌上皮细胞特征。结论:成功建立了利用自制鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法,并且制作简便,成本低廉。 展开更多
关键词 耳蜗血管纹 细胞培养 鼠尾胶原
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鼠尾胶原蛋白海绵止血作用研究 被引量:5
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作者 任海涛 钟志勇 +5 位作者 严家荣 饶子亮 黄红坤 黄小琼 武昕 唐小江 《转化医学杂志》 2013年第2期70-72,共3页
目的制备一种高纯度的鼠尾胶原蛋白海绵,研究鼠尾胶原海绵的止血作用。方法用制备的鼠尾胶原蛋白海绵对新西兰兔耳缘静脉、耳缘动脉、肝脏、股动脉创面止血,观察其止血时间、敷料与创面的黏合情况、再出血、渗血和吸收及伤口愈合情况。... 目的制备一种高纯度的鼠尾胶原蛋白海绵,研究鼠尾胶原海绵的止血作用。方法用制备的鼠尾胶原蛋白海绵对新西兰兔耳缘静脉、耳缘动脉、肝脏、股动脉创面止血,观察其止血时间、敷料与创面的黏合情况、再出血、渗血和吸收及伤口愈合情况。结果鼠尾胶原海绵组、胶原蛋白海绵组耳缘动脉、肝脏、股动脉创面止血时间与对照组比较明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05);同时,鼠尾胶原海绵组在肝脏、股动脉创面止血时间比胶原蛋白海绵组缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。鼠尾胶原蛋白海绵在对创面的修复性能上优于胶原蛋白。结论鼠尾胶原蛋白及其冻干海绵可以作为人工皮肤及创伤敷料研究的首选材料,同时也为鼠尾胶原蛋白海绵用于止血、创面修复及进一步研究其止血机制提供事实依据。 展开更多
关键词 鼠尾胶原 止血 动物实验 新西兰兔
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鸡小黄卵泡颗粒细胞的培养条件优化
10
作者 祝梦琦 王丹 +1 位作者 黄思嘉 魏泽辉 《家畜生态学报》 北大核心 2023年第5期65-70,共6页
为了研究禽类颗粒细胞的功能,建立一套良好的颗粒细胞培养体系至关重要。该研究分离培养了产蛋高峰期母鸡的6~8 mm小黄卵泡颗粒细胞,在细胞基质、不同物种血清、血清浓度上进行优化。结果表明,鼠尾胶原比明胶预铺更能促进颗粒细胞生长,... 为了研究禽类颗粒细胞的功能,建立一套良好的颗粒细胞培养体系至关重要。该研究分离培养了产蛋高峰期母鸡的6~8 mm小黄卵泡颗粒细胞,在细胞基质、不同物种血清、血清浓度上进行优化。结果表明,鼠尾胶原比明胶预铺更能促进颗粒细胞生长,细胞传代至4代才发生死亡。2.5%鸡血清与2.5%FBS(fetal calf serum)、2.5%鸡血清+2.5%FBS相比,2.5%鸡血清传代后细胞形态优于其他组。显微镜观察和EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)检测表明,随着鸡血清浓度的增加,颗粒细胞增殖增加。该研究建立了在预铺鼠尾胶原作为胞外基质,采用含5%鸡血清的培养体系,使得鸡小黄卵泡颗粒细胞传代后仍能保证其增殖特性。 展开更多
关键词 颗粒细胞 血清 鼠尾胶原 明胶
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鼠尾胶原在培养鼠下切牙颈环上皮细胞中的应用 被引量:3
11
作者 胡孝丽 王铎 +1 位作者 冷卫东 罗志晓 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期51-54,共4页
目的:建立用自制鼠尾胶原为贴附底物的大鼠颈环上皮细胞的体外培养模式。方法:制作鼠尾胶原,观察用自制的鼠尾胶原培养出大鼠颈环上皮细胞的效果,并对纯化的上皮细胞进行免疫组织化学染色鉴定。结果:自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠... 目的:建立用自制鼠尾胶原为贴附底物的大鼠颈环上皮细胞的体外培养模式。方法:制作鼠尾胶原,观察用自制的鼠尾胶原培养出大鼠颈环上皮细胞的效果,并对纯化的上皮细胞进行免疫组织化学染色鉴定。结果:自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠颈环上皮细胞,呈多角形,克隆状生长,β1整合素和角蛋白免疫组织化学染色阳性。结论:鼠尾胶原可作大鼠颈环上皮细胞的体外培养贴附底物,为今后研究牙齿发育机制提供简便的方法和途径。 展开更多
关键词 颈环 上皮细胞 细胞培养 鼠尾胶原
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Ⅰ型鼠尾胶原三维培养模型对树突状细胞形态及分泌能力的影响 被引量:2
12
作者 黄文竹 胡文慧 曾柱 《贵州医科大学学报》 CAS 2017年第9期993-997,1002,共6页
目的:通过构建Ⅰ型鼠尾胶原三维(3D)培养模型,探索细胞外力学微环境对DCs产生的影响。方法:取健康人外周血来源的CD14+单核细胞,利用重组人白介素-4(rh IL-4)和重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)共同诱导5 d,获得未成熟DCs(im... 目的:通过构建Ⅰ型鼠尾胶原三维(3D)培养模型,探索细胞外力学微环境对DCs产生的影响。方法:取健康人外周血来源的CD14+单核细胞,利用重组人白介素-4(rh IL-4)和重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)共同诱导5 d,获得未成熟DCs(im DCs),再利用重组人干扰素-γ(rh IFN-γ)和脂多糖(LPS)诱导im DCs为成熟DCs(mDCs);再利用鼠尾肌腱提取Ⅰ型鼠尾胶原体外培养DCs;FITC-Annexin-V和碘化丙啶(PI)标记细胞,检测DCs的凋亡率;酶联免疫吸附测定法检测DC的白细胞介素-12(IL-12)、IL-18和IL-1β的分泌水平。结果:与对照组相比,3D力学环境处理后细胞形态发生改变,细胞早期凋亡率降低,IL-18和IL-1β的分泌能力发生下调(P<0.05)。结论:细胞外3D力学微环境能够调控DCs的免疫功能。 展开更多
关键词 树突状细胞 Ⅰ型鼠尾胶原 三维培养模型 凋亡 白细胞介素 免疫功能
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小鼠皮肤组织原代黑色素细胞培养条件的优化
13
作者 马悦悦 朱芷葳 +2 位作者 蓝吴涛 李慧锋 张利环 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第17期20-23,182-183,共5页
为了优化小鼠原代黑色素细胞培养条件,试验以出生1 d的小鼠背部皮肤组织为材料,在培养过程中分别比较不同消化时间、是否向培养基中添加鼠尾胶原蛋白、首次换液时间对原代黑色素细胞培养的影响,通过观察黑色素细胞形态和生长状态以及台... 为了优化小鼠原代黑色素细胞培养条件,试验以出生1 d的小鼠背部皮肤组织为材料,在培养过程中分别比较不同消化时间、是否向培养基中添加鼠尾胶原蛋白、首次换液时间对原代黑色素细胞培养的影响,通过观察黑色素细胞形态和生长状态以及台盼蓝染色计数细胞研究小鼠黑色素细胞的原代培养条件。结果表明:小鼠原代黑色素细胞的培养条件为消化时间10 min、培养基使用含鼠尾胶原蛋白的培养基、首次换液时间24 h,可以获得大量处于良好生长状态的黑色素细胞。说明小鼠原代黑色素细胞培养条件优化成功。 展开更多
关键词 皮肤组织 鼠尾胶原蛋白 条件优化 小鼠黑色素细胞 细胞培养 原代细胞
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不同基质对兔气管纤毛上皮细胞贴壁生长的影响
14
作者 王鸿 张伟 +2 位作者 矫健 金善哲 张罗 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2010年第5期604-609,共6页
目的比较几种不同培养基质对兔气管纤毛上皮细胞贴壁生长的影响,探讨兔气管纤毛上皮细胞体外培养最佳生长基质。方法用组织块法比较兔气管纤毛上皮细胞分别在新鲜配制鼠尾胶原、市售鼠尾胶原、多聚赖氨酸和明胶4种基质上的贴壁和生长状... 目的比较几种不同培养基质对兔气管纤毛上皮细胞贴壁生长的影响,探讨兔气管纤毛上皮细胞体外培养最佳生长基质。方法用组织块法比较兔气管纤毛上皮细胞分别在新鲜配制鼠尾胶原、市售鼠尾胶原、多聚赖氨酸和明胶4种基质上的贴壁和生长状况。结果兔气管黏膜上皮组织在4种基质上的贴壁率分别为:新鲜配制胶原89.1%,市售胶原43.5%,多聚赖氨酸36.9%,明胶21.7%;贴壁组织的单细胞层最大生长半径分别为:新鲜配制胶原(1 432.2±383.2)μm,市售胶原(928.9±390.3)μm,多聚赖氨酸(889±229.2)μm,明胶(651±221.2)μm;纤毛摆动最大频率及持续时间分别为:新鲜配制胶原(10.0±1.5)Hz 11 d,市售胶原(8.5±0.6)Hz 5 d,多聚赖氨酸(8.9±0.5)Hz 3 d,明胶(5.9±0.3)Hz 2 d。扫描电镜下新鲜配制鼠尾胶原纤维成条索状,相互交织成网,利于组织贴壁和细胞生长。结论在常用的4种培养基质中,新鲜配制的鼠尾胶原是兔气管纤毛上皮细胞体外培养的最佳生长基质,是纤毛功能研究的可靠保证。 展开更多
关键词 细胞外基质 纤毛 上皮细胞 鼠尾胶原
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Ⅰ型鼠尾胶原三维培养模型对乳腺癌细胞耐药性的影响研究
15
作者 刘惠芬 张月 +5 位作者 米坤 辜翠容 王浩 魏阳 蒋文军 黄建鸣 《西部医学》 2019年第11期1663-1667,共5页
目的探讨基质材料Ⅰ型鼠尾胶原三维(3D)培养对乳腺癌细胞MCF-7耐药性的影响。方法根据细胞培养方法的差异将细胞分为2D组及3DⅠ型鼠尾胶原培养组。CCK8实验检测MCF-7在2D和3D组中对顺铂和紫杉醇的药物敏感性;采用流式细胞术检测MCF-7在... 目的探讨基质材料Ⅰ型鼠尾胶原三维(3D)培养对乳腺癌细胞MCF-7耐药性的影响。方法根据细胞培养方法的差异将细胞分为2D组及3DⅠ型鼠尾胶原培养组。CCK8实验检测MCF-7在2D和3D组中对顺铂和紫杉醇的药物敏感性;采用流式细胞术检测MCF-7在各组中的干性表面标记CD44^+/CD24^-细胞亚群比例及细胞周期分析;荧光定量PCR(qPCR)检测各组MCF-7的肿瘤细胞干性标记SOX2和KLF4的表达,以及耐药性相关ABC转运蛋白ABCC1和ABCB1的表达。结果与2D组相比较,MCF-7在3DⅠ型鼠尾胶原培养模型中的耐药性显著增强;同时,流式细胞结果显示3D组CD44^+/CD24^-亚群细胞比例高于2D组,且细胞周期出现G1期阻滞。qPCR结果显示较2D组细胞,3D胶原组细胞的干性相关指标SOX2和KLF4,耐药相关ABC转运蛋白ABCC1和ABCB1 mRNA的表达显著提高。结论Ⅰ型鼠尾胶原3D培养后乳腺癌细胞MCF-7干性增加,细胞周期G1期阻滞,耐药性增强。Ⅰ型鼠尾胶原可望作为新的3D药物筛选模型并用于抗耐药性肿瘤细胞意义重大。 展开更多
关键词 乳腺癌MCF-7细胞 Ⅰ型鼠尾胶原 三维培养 耐药性 干性
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关于三维共培养体系中血管化的研究 被引量:2
16
作者 杨逸禧 杨波 +9 位作者 娄爱菊 张铮 林启旺 何可人 蔡梓红 尹飚 黎双庆 杨富国 郭元 王簕 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期1880-1884,共5页
目的探讨人脐静脉内皮细胞(hUVECs)与人骨髓间充质干细胞(BMSCs)在三维共培养体系中成类血管网状结构的可行性。方法分别用绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白转染第4代hUVECs和第4代人骨髓间充质干细胞,将标记后的细胞植入Ⅰ型鼠尾胶原... 目的探讨人脐静脉内皮细胞(hUVECs)与人骨髓间充质干细胞(BMSCs)在三维共培养体系中成类血管网状结构的可行性。方法分别用绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白转染第4代hUVECs和第4代人骨髓间充质干细胞,将标记后的细胞植入Ⅰ型鼠尾胶原于培养皿内共培养。添加含有体积分数为5%胎牛血清的内皮细胞培养基(ECM)1 ml。共培养2、4、7 d及单纯细胞培养7 d后用激光扫描共聚焦显微镜观察两种细胞相互成网的状态及其两者生长情况。通过MetaXpress软件系统中血管生成分析模块(Angiogenesis)计算出生成的类血管网状结构的长度值,并利用DNA萃取法分析细胞的活力与增殖水平,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测与Western blot分析血管内皮生长因子(VEGF) mRNA水平及VEGF蛋白水平。结果共培养2 d后BMSCs明显开始拉伸,呈长梭状,细胞之间无聚集趋势;hUVECs拉伸情况不明显,仅有少数细胞有轻微拉伸。4 d后BMSCs持续拉伸状态并有明显聚集趋势,hUVECs拉伸情况明显并有开始有聚集趋势,但两种细胞之间联系不明显,可见类血管状结构形成。7 d后两种细胞均拉伸、聚集,两者相互交错并有管状结构形成。DNA含量测定显示细胞数量在7 d内有明显增殖,增殖幅度与单纯培养的凝胶支架差异无统计学意义。共培养后2、4、7 d对共培养的材料支架进行RT-PCR检测与Western blot分析,结果显示,相对于2 d,4 d与7 d VEGF mRNA相对表达量分别增长(2.1±0.1)倍及(5.2±0.2)倍;7 d后单纯hUVECs及共培养的VEGF mRNA相对表达量分别为单纯BMSCs培养的(2.4±0.1)倍及(8.8±0.2)倍。结论被荧光蛋白标记后的hUVECs和BMSCs在Ⅰ型鼠尾胶原内可保持其荧光并存活,两者在此共培养体系中可进行三维生长与自由拉伸。7 d后可见其明显的相互作用并形成类血管网状结构。可见使用此共培养体系是� 展开更多
关键词 人脐静脉内皮细胞 人骨髓间充质干细胞 Ⅰ型鼠尾胶原 类血管网状结构
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涎腺腺样囊性癌细胞侵袭鼠尾胶原的实验观察
17
作者 史宏男 何荣根 周晓健 《口腔颌面外科杂志》 CAS 1998年第1期20-22,共3页
为了研究涎腺腺样囊性癌对I型胶原的侵袭能力,本实验利用鼠尾胶原作培养基,接种涎腺腺样囊性癌细胞系ACC2和高转移细胞株ACCM,以研究其侵袭能力。结果发现,肿瘤细胞紧密粘附胶原上,部分形成单层或复层,高转移细胞(AC... 为了研究涎腺腺样囊性癌对I型胶原的侵袭能力,本实验利用鼠尾胶原作培养基,接种涎腺腺样囊性癌细胞系ACC2和高转移细胞株ACCM,以研究其侵袭能力。结果发现,肿瘤细胞紧密粘附胶原上,部分形成单层或复层,高转移细胞(ACCM)形成侵袭灶,并形成类似腺管样结构,说明高转移细胞株对I型胶原具有更强的侵袭能力。 展开更多
关键词 涎腺肿瘤 腺样囊性癌 侵袭 鼠尾胶原 实验
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ECV304细胞用于三维血管新生的研究 被引量:14
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作者 李明焕 田铧 +3 位作者 刘执玉 宋涛 李贵宝 田广平 《中国现代普通外科进展》 CAS 2004年第3期165-167,共3页
目的 :采用ECV30 4细胞 (人脐静脉内皮细胞株 )构建体外血管新生的三维模型 ,为ECV30 4细胞应用于体外血管新生的研究提供依据。方法 :制作鼠尾胶原三维凝胶 ,在凝胶表面种植ECV30 4细胞 ,培养至接近汇合状态 ,换用含碱性成纤维细胞生... 目的 :采用ECV30 4细胞 (人脐静脉内皮细胞株 )构建体外血管新生的三维模型 ,为ECV30 4细胞应用于体外血管新生的研究提供依据。方法 :制作鼠尾胶原三维凝胶 ,在凝胶表面种植ECV30 4细胞 ,培养至接近汇合状态 ,换用含碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的培养液继续培养 3~ 12d ,用倒置相差显微镜观察内皮细胞株向凝胶内迁移、生长状况。结果 :bFGF组ECV30 4细胞迁移到凝胶内不同层次 ,形成细胞条索并吻合成网 ;垂直切面上可见ECV30 4细胞从凝胶表面的单细胞层向凝胶内发芽生长 ,形成树枝状毛细血管样结构。结论 :ECV30 4细胞在三维胶原凝胶基质培养模型中 ,在适当的因子诱导下 ,能够表现出血管新生中的增殖、迁移、发芽等步骤 ,可以作为内皮工具来研究体外血管新生。 展开更多
关键词 ECV304细胞·鼠尾胶原·三维模型·新生血管化 生理性
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以鼠尾胶为贴黏剂的小鼠淋巴管内皮细胞培养体系的建立 被引量:8
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作者 章必成 王俊 +3 位作者 赵勇 高建飞 郭燕 陈正堂 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第5期390-393,共4页
目的:建立一个简便、廉价和稳定的小鼠淋巴管内皮细胞(LEC)培养体系.方法:应用不完全弗氏佐剂诱导小鼠腹腔淋巴管瘤形成,消化法分离获得LEC,置于自制的鼠尾胶包被的培养瓶(板)中培养.以免疫荧光化学法检测LEC特异性标记物VEGFR-3和LYVE-... 目的:建立一个简便、廉价和稳定的小鼠淋巴管内皮细胞(LEC)培养体系.方法:应用不完全弗氏佐剂诱导小鼠腹腔淋巴管瘤形成,消化法分离获得LEC,置于自制的鼠尾胶包被的培养瓶(板)中培养.以免疫荧光化学法检测LEC特异性标记物VEGFR-3和LYVE-1的表达,以3H-TdR掺入率测定和细胞倍增时间检测LEC的增殖活力,以淋巴管形成试验判定LEC能否形成淋巴管样结构.结果:不完全弗氏佐剂能诱导小鼠腹腔淋巴管瘤形成,所获LEC活细胞数大于98%.免疫荧光化学检测表明,LEC表达VEGFR-3和LYVE-1.在鼠尾胶包被的培养瓶(板)中,LEC生长状况良好,3H-TdR掺入率明显增加,倍增时间为(42.7±3.2)h;在鼠尾胶凝胶中,LEC能形成淋巴管样结构.结论:鼠尾胶为贴黏剂的体系是一种简便、廉价和稳定的小鼠LEC培养体系. 展开更多
关键词 鼠尾胶 贴黏剂 内皮 淋巴管 细胞培养
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