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Isolation of mimotopes to the anti-human VEGF antibody Bevacizumab by mRNA display using random peptide libraries and the vaccination of a rabbit
1
作者 Teruaki Kobayash Tatsuro Shibui 《Advances in Bioscience and Biotechnology》 2011年第2期97-102,共6页
An mRNA display system using synthetic DNA cod-ing for random 10- and 20-amino-acid peptide li-braries was employed to isolate mimotopes that could substitute for the anti-human VEGF antibody Bevacizumab. After six ro... An mRNA display system using synthetic DNA cod-ing for random 10- and 20-amino-acid peptide li-braries was employed to isolate mimotopes that could substitute for the anti-human VEGF antibody Bevacizumab. After six rounds of affinity selection, three clones that bound to the antibody were isolated. Their random-peptide portions were chemically syn-thesized, and further characterized. All of the pep-tides showed clear specific binding to the antibody. Two of them were further conjugated with Keyhole limpet hemocyanin (KLH) to immunize a rabbit. Af-ter five immunizations biweekly, antibodies to the peptides were purified with a column conjugated with the peptides. The purified antibodies reacted specifically to the antibody’s original antigen, human VEGF. mRNA displays could be useful for the isola-tion of mimotopes for vaccines to substitute for ther-apeutic antibodies. 展开更多
关键词 random peptide mRNA Display MIMOTOPE ANTIGEN Antibody Vaccine
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Liddle综合征触发蛋白ENaC的PY模体突变型的结合肽段的筛选 被引量:1
2
作者 徐玉萍 方圆圆 赵志刚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期888-893,共6页
Liddle综合征是一种常染色体显性、盐敏感型的高血压综合征,其分子发病机制研究认为是上皮钠离子通道(epithelial Na+channel,ENaC)的β亚基或γ亚基的胞质侧羧基端区域低频率的点突变或缺失突变导致肾远曲小管钠离子重吸收增加.本研究... Liddle综合征是一种常染色体显性、盐敏感型的高血压综合征,其分子发病机制研究认为是上皮钠离子通道(epithelial Na+channel,ENaC)的β亚基或γ亚基的胞质侧羧基端区域低频率的点突变或缺失突变导致肾远曲小管钠离子重吸收增加.本研究提出了一种从分子水平上治疗Liddle综合征的设想,即构建一种可识别Liddle综合征患者中ENaC蛋白突变的PY模体的人工泛素连接酶E3,使其结合并降解突变的ENaC蛋白,从而使肾远曲小管上皮细胞膜上ENaC的表达数量和活性恢复.而识别PY突变体的E3,可通过用患者中的PY突变体筛选随机多肽文库获得与之结合的随机肽段,用其替换PY模体天然配体蛋白Nedd4的WW结构域,从而得到一个新的人工E3.本研究中以一种Liddle综合征突变型Y620H为诱饵蛋白,筛选新型随机多肽文库,获得了1个至少能与2种PY突变体(Y620H和P618L)特异性结合的随机肽段,为进一步构建可降解ENaC突变体的人工E3积累了重要的实验数据. 展开更多
关键词 LIDDLE综合征 上皮钠离子通道(ENaC) PY突变体 泛素连接酶(E3) 随机肽段
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噬菌体表达短肽模拟血吸虫致弱尾蚴特异性抗原表位的研究 被引量:16
3
作者 周东明 曾宪芳 +2 位作者 王敏 Larry McReynold 易新元 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第1期30-32,共3页
目的 从噬菌体随机肽库中筛选模拟血吸虫致弱尾蚴特异性抗原表位的噬菌体克隆 ,并探讨其免疫保护效果。方法 用紫外线致弱尾蚴免疫兔血清IgG筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体外壳蛋白Ⅲ表达的随机 7肽库 ,三轮免疫筛选后获得的噬菌体... 目的 从噬菌体随机肽库中筛选模拟血吸虫致弱尾蚴特异性抗原表位的噬菌体克隆 ,并探讨其免疫保护效果。方法 用紫外线致弱尾蚴免疫兔血清IgG筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体外壳蛋白Ⅲ表达的随机 7肽库 ,三轮免疫筛选后获得的噬菌体克隆经皮下免疫小鼠 3次 ,攻击感染 45d后剖杀 ,观察减虫和减卵效果。结果 经三轮筛选 ,特异性结合的噬菌体富集增加了 10 0多倍 ,随机挑取 2 4个噬菌体克隆经ELISA测定 ,有 2 2个克隆能与致弱尾蚴免疫兔血清IgG特异性反应。混合噬菌体克隆免疫小鼠试验的减虫率与减卵率分别为 33.5 7%和 5 6 .0 7% (P均 <0 .0 0 1)。结论 采用噬菌体随机肽库技术可获得模拟致弱尾蚴特异性抗原表位的短肽分子 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 噬菌体随机肽库 免疫筛选 分子模拟 表位
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从随机噬菌体肽库中筛选抗草鱼出血病病毒多肽的研究 被引量:11
4
作者 王冰 柯丽华 +2 位作者 江红 田波 李传昭 《中国病毒学》 CSCD 1998年第4期351-357,共7页
从随机噬菌体九肽表位库中筛选出抑制草鱼出血病病毒(GrasCarpHemorhageVirus,GCHV873)感染的多肽分子。采用完整、生物素化的草鱼出血病病毒颗粒作为受体,与以融合蛋白形式在丝状噬菌体fUSE5的... 从随机噬菌体九肽表位库中筛选出抑制草鱼出血病病毒(GrasCarpHemorhageVirus,GCHV873)感染的多肽分子。采用完整、生物素化的草鱼出血病病毒颗粒作为受体,与以融合蛋白形式在丝状噬菌体fUSE5的外壳蛋白Ⅲ的N端表达的随机九肽库作用。经三轮体外亲和筛选(Biopanning)及ELISA法检测后,从肽库中筛选出16个与病毒高亲和力结合的噬菌体克隆,其中六个阳性克隆能有效地抑制病毒在CIK细胞中的复制,并使病毒的半数组织培养感染剂量(TCID50)下降五个数量级。表明噬菌体肽库技术完全能够应用于抗病毒研究,为研制抗病毒短肽制剂打基础。 展开更多
关键词 噬菌体九肽库 草鱼出血病毒 抗病毒多肽
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HIV蛋白质优势B细胞抗原表位的筛选、重组表达与抗原性鉴定 被引量:6
5
作者 杜勇 徐静 +2 位作者 李敬云 侯利华 王海涛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期270-276,共7页
设计了一种新的病原体蛋白质B细胞抗原表位的筛选和重组表达方法。不须使用抗原 ,而通过交替用病人血清IgG抗体“淘洗”(biopanning)随机肽库和用正常人血清IgG反向吸附 ,来获得特异抗原表位资料。用HIV病人血清的IgG抗体淘洗噬菌体递... 设计了一种新的病原体蛋白质B细胞抗原表位的筛选和重组表达方法。不须使用抗原 ,而通过交替用病人血清IgG抗体“淘洗”(biopanning)随机肽库和用正常人血清IgG反向吸附 ,来获得特异抗原表位资料。用HIV病人血清的IgG抗体淘洗噬菌体递呈随机十二肽库 ,再以正常人IgG抗体吸附 ,筛选到了能和HIV病人血清发生特异反应的噬菌体克隆 ,经ELISA、DNA测序等 ,成功地筛选出了位于HIVgp41外膜蛋白、高亲和力、构型特异的优势B细胞抗原表位 ( 60 2 GCSGKLICTTNV61 3)。用大肠杆菌硫氧还蛋白作为骨架 ,在其活性部位以“内融合”形式重组表达了该抗原表位 ,纯化的重组蛋白具有良好的抗原性 ,能与HIV( + )IgG抗体及艾滋病人血清呈特异反应 ,表明本技术路线可以有效地进行HIV蛋白质的B细胞抗原表位筛选和重组表达。此方法也可移植于其它病原微生物抗原或自身抗原的表位研究 ,继而为基于抗原表位水平的特异诊断试剂的研制、疫苗的设计提供依据。 展开更多
关键词 HIV 抗原表位 随机肽质 重组表达 ELISA
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用随机6肽库筛选HGVE2抗原表位 被引量:8
6
作者 柯屾 戚中田 +3 位作者 施明 王建安 姚志建 沈倍奋 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第4期533-536,共4页
利用抗 HGV E2区的 3株单克隆抗体 M6、M1 3、M30作为筛选配基 ,对随机 6肽库进行亲和筛选 . 3轮筛选的投入产出比逐轮升高至 3.5× 1 0 -3、假阳性率逐轮降低至 0 .4% ,提示具有良好的富集效果 .从第 3轮随机挑出 1 2个克隆进行功... 利用抗 HGV E2区的 3株单克隆抗体 M6、M1 3、M30作为筛选配基 ,对随机 6肽库进行亲和筛选 . 3轮筛选的投入产出比逐轮升高至 3.5× 1 0 -3、假阳性率逐轮降低至 0 .4% ,提示具有良好的富集效果 .从第 3轮随机挑出 1 2个克隆进行功能鉴定 ,结果表明 8个克隆与 M6抗体有较强的特异性结合力并有较好的竞争抑制作用 ,测序发现它们的外源肽具有核心序列 :WA( W/Y) WXH,该序列与 HGV同源性低 ;用外源肽与核心序列相似的噬菌体克隆 P6GC9做竞争抑制试验 ,约 3×1 0 10个噬菌体即可较好地抑制 M6单抗与 HGV抗原结合 .该多肽可能是 HGV E2区识别 M6单抗并具有一定功能的模拟表位 . 展开更多
关键词 噬菌体随机肽库 抗原表位 HGV
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单纯疱疹病毒糖蛋白模拟位的研究 被引量:8
7
作者 杨乔欣 马文煜 余颖 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期146-148,152,共4页
目的为了充分认识单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白的抗原表位,寻找HSV多组分疫苗和新型基因工程疫苗更有效的小片段短肽作为该病毒疫苗的备选免疫原。方法利用有动物保护活性的抗HSV糖蛋白C(gC)单克隆抗体(McAb)1A12淘筛噬菌体随机12肽库... 目的为了充分认识单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白的抗原表位,寻找HSV多组分疫苗和新型基因工程疫苗更有效的小片段短肽作为该病毒疫苗的备选免疫原。方法利用有动物保护活性的抗HSV糖蛋白C(gC)单克隆抗体(McAb)1A12淘筛噬菌体随机12肽库,经4轮筛选后进行ELISA检测,随机挑取14个阳性克隆进行序列测定,序列比较后得到保守序列,做ELISA阻断实验进一步鉴定筛选结果并与相关天然蛋白HSV gC进行序列比较。结果获得保守序列-SG(L)RHII-和其侧翼辅助序列-AK-、-VW-,其与天然相关蛋白HSV gC 114~116位氨基酸十分相似。携有此短肽的噬菌体可以与McAb特异结合,并可部分阻断抗体与HSV囊膜抗原的反应。结论所筛选到的保守序列可模拟McAb针对的抗原表位,可能是HSV的替代抗原。这一研究方法有望使短肽替代庞大的糖蛋白全长氨基酸序列,为研制更有效及更广谱的基因工程疫苗提供依据,也使研制基于抗原表位水平的特异诊断试剂成为可能。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 糖蛋白 噬菌体随机肽库 模拟位 抗原表位 ELISA 疫苗
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用噬菌体展示技术筛选日本血吸虫免疫原的模拟短肽 被引量:7
8
作者 王敏 易新元 +6 位作者 曾宪芳 周东明 张顺科 章洁 李忠杰 王庆林 袁仕善 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期295-298,共4页
目的 从噬菌体随机 12肽库免疫筛选出大鼠对血吸虫天然抗性的模拟靶表位 ,探讨其抗日本血吸虫的免疫保护效果。方法 用粗提大鼠血清IgG作固相配体筛选噬菌体 12肽库 ,按吸附 洗脱 扩增的淘洗过程进行 3轮筛选 ;随机挑取噬菌体克隆用E... 目的 从噬菌体随机 12肽库免疫筛选出大鼠对血吸虫天然抗性的模拟靶表位 ,探讨其抗日本血吸虫的免疫保护效果。方法 用粗提大鼠血清IgG作固相配体筛选噬菌体 12肽库 ,按吸附 洗脱 扩增的淘洗过程进行 3轮筛选 ;随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ,并对其中的 2个克隆进行测序 ;用混合噬菌体克隆免疫小鼠 3次 ,分别在 0、1、3周进行 ,第 5周每鼠经腹部感染 4 0± 1条日本血吸虫尾蚴 ,4 5d后剖杀冲虫 ,计虫数及肝卵数。结果 经 3轮筛选 ,特异性结合噬菌体富集增加了 2 0 0多倍 ,随机挑取 2 0个噬菌体克隆经ELISA鉴定 ,有 19个克隆能与大鼠血清呈特异性反应。自动测序仪测序的 2个克隆的序列与GenBank的已知序列无同源性。与对照组相比 ,混合噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率为 33.6 % ,减卵率为 5 9.8%。结论 利用噬菌体展示技术可获得天然抗血吸虫抗性的短肽 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 模拟短肽 免疫筛选 噬菌体随机肽库
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利用噬菌体随机15肽库确定SLE相关多肽的研究 被引量:9
9
作者 施明 柯屾 +4 位作者 陶永涛 唐福林 张奉春 姚志建 沈倍奋 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期275-277,共3页
目的 利用噬菌体随机 15肽库确定SLE相关多肽。方法 从系统性红斑狼疮 (SLE)病人血清中纯化抗dsDNA多克隆抗体 ,以此为筛选配基 ,对噬菌体随机 15肽库进行亲和筛选。结果经 3轮筛选 ,每轮的投入 /产出比逐轮升高 ,提示筛选具有良好的... 目的 利用噬菌体随机 15肽库确定SLE相关多肽。方法 从系统性红斑狼疮 (SLE)病人血清中纯化抗dsDNA多克隆抗体 ,以此为筛选配基 ,对噬菌体随机 15肽库进行亲和筛选。结果经 3轮筛选 ,每轮的投入 /产出比逐轮升高 ,提示筛选具有良好的富集效果。第 3轮筛选后选其中 18个克隆进行结合试验 ,结果显示有 6个仅与SLE病人血清反应而不与正常人血清反应 ,经DNA序列测定 ,发现其中 5个克隆序列相同 ,通过该序列推出插入的外源短肽序列 ,合成并纯化该肽段。用此肽段分别与 2 0例SLE病人及 2 0例正常人血清反应 ,结果差异有显著性。结论 该肽段可能是与SLE相关的抗原多肽。 展开更多
关键词 噬菌体 随机肽库 抗体 系统性红斑狼疮 发病机制
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一种稳定、易于操作的噬菌体随机肽库载体的构建 被引量:5
10
作者 万瑛 代佳平 +1 位作者 王燕 刘昕 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期256-258,共3页
目的:拟将噬菌粒pCOMB3改建为更为稳定、高拷贝且易于操作的噬菌体随机肽库载体。方法:对常用噬菌体抗体库呈现载体pCOMB3序列进行点矩阵作图分析(Dot-Plot分析),切除其中重复区,纠正其多代培养后自删除特性... 目的:拟将噬菌粒pCOMB3改建为更为稳定、高拷贝且易于操作的噬菌体随机肽库载体。方法:对常用噬菌体抗体库呈现载体pCOMB3序列进行点矩阵作图分析(Dot-Plot分析),切除其中重复区,纠正其多代培养后自删除特性。原克隆位点63bp的填充序列增加到1435bp以便于酶切鉴定和电泳回收。结果:构建了命名为pTMB2的噬菌粒载体。结论:pTMB2的噬菌粒载体更为稳定且易于操作。 展开更多
关键词 噬菌体随机肽库 pCOMB3 Dot-Plot分析 载体
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利用噬菌体展示筛选结合水稻条叶枯病毒S蛋白的短肽 被引量:2
11
作者 张宏伟 万由衷 +3 位作者 曲志才 张晓宁 叶鸣明 沈大棱 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期695-696,共2页
利用噬菌体展示技术在随机 7肽库中筛选到结合水稻条叶枯病毒 (ricestripevirus ,RSV)病害特异蛋白(stripedisease specificprotein ,S蛋白 )的 6个短肽 ,并进行了序列测定 .ELISA结果表明 ,6个短肽和S蛋白具有一定的亲和能力 .筛选到... 利用噬菌体展示技术在随机 7肽库中筛选到结合水稻条叶枯病毒 (ricestripevirus ,RSV)病害特异蛋白(stripedisease specificprotein ,S蛋白 )的 6个短肽 ,并进行了序列测定 .ELISA结果表明 ,6个短肽和S蛋白具有一定的亲和能力 .筛选到的短肽对今后S蛋白功能分析、转基因抗RSV和水稻条叶枯病的诊断提供了条件 . 展开更多
关键词 噬菌体展示 随机短肽库 S蛋白 水稻条叶枯病毒 序列测定
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噬菌体展示短肽模拟脂多糖结合蛋白抗炎功能位点的研究 被引量:6
12
作者 徐德斌 钱桂生 +3 位作者 侯一峰 赵晓利 陈维中 李淑萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期573-575,共3页
目的 应用噬菌体随机 12肽库筛选脂多糖结合蛋白 (lipopolysaccharidebindingprotein ,LBP)具有抗炎作用的肽序列。方法 以LPS为目标分子 ,对噬菌体十二肽库进行亲合筛选 ,4轮筛选后 ,检测随机挑取的噬菌体克隆的结合活性和抑制活性 ... 目的 应用噬菌体随机 12肽库筛选脂多糖结合蛋白 (lipopolysaccharidebindingprotein ,LBP)具有抗炎作用的肽序列。方法 以LPS为目标分子 ,对噬菌体十二肽库进行亲合筛选 ,4轮筛选后 ,检测随机挑取的噬菌体克隆的结合活性和抑制活性 ,对可与LBP竞争性结合LPS的噬菌体克隆行细胞因子生成抑制实验和LPS内化抑制实验 ,对获得的阳性克隆进行DNA序列测定 ,推导外源肽氨基酸序列 ,并与LBP序列比较 ,确定LBP的抗炎功能位点。结果 随机挑取的 10 0个噬菌体克隆中 16个可与LBP竞争性结合LPS ,其中 7个噬菌体克隆对LBP的增敏LPS刺激PBMC分泌TNF α功能无作用 ,对这 7个克隆进行LPS内化抑制实验 ,其中 3个克隆可以抑制LBP增强LPS内化作用。测序发现这 3个阳性克隆融合多肽的序列均为FHTRWNYWPYLH ,与LBP一级结构氨基酸序列同源性低。结论 该 展开更多
关键词 噬菌体随机肽库 脂多糖结合蛋白 功能位点
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应用噬菌体随机肽库技术研究干扰素-α2b抗原表位 被引量:4
13
作者 田旺 李正赫 +2 位作者 曹学琳 杨文博 白钢 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期578-582,共5页
目的应用噬菌体随机肽库技术,研究干扰素-α2b高抗原性表位。方法利用结合有干扰素-α2b多克隆抗体的免疫磁性微球,对噬菌体随机肽库进行生物淘筛,以ELISA方法鉴定阳性克隆。阳性克隆测序后与干扰素氨基酸序列进行了同源性分析,研究干扰... 目的应用噬菌体随机肽库技术,研究干扰素-α2b高抗原性表位。方法利用结合有干扰素-α2b多克隆抗体的免疫磁性微球,对噬菌体随机肽库进行生物淘筛,以ELISA方法鉴定阳性克隆。阳性克隆测序后与干扰素氨基酸序列进行了同源性分析,研究干扰素-α2b分子中高抗原性表位。结果经4轮淘筛后噬菌体克隆的阳性率为57.6%,据随机挑选的12个阳性克隆的同源性分析结果将其分为3组,分别对应干扰素-α2b3个高抗原性表位与预测的结果吻合,其中第2组与干扰素受体结合区AB环接近。结论利用噬菌体随机肽库技术,成功筛选出3个与抗原性预测相符合的干扰素-α2b抗原表位,为研究干扰素分子的作用机理、制备抗特定表位的单克隆抗体以及设计和开发干扰素的小分子模拟肽奠定了基础。 展开更多
关键词 噬菌体随机肽库 免疫磁性微球 抗原表位 干扰素-Α2B 噬菌体随机肽库技术 ELISA方法 多克隆抗体 同源性分析 阳性克隆 氨基酸序列
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NF-κB p65亚基DNA结合域相互作用多肽的筛选及功能鉴定 被引量:4
14
作者 徐祥 梁华平 +5 位作者 刘昕 李生茂 史海水 刘东擘 吴强 王正国 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期132-136,共5页
目的以NF-κB p65亚基DNA结合域为诱饵蛋白,筛选能够与其发生相互作用的多肽,并鉴定这些多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应。方法首先利用PCR搭桥扩增方法获取NF-κB p65亚基DNA结合域的基因片段,后将其克隆到酵母双杂交pGBKT7DNA-BD... 目的以NF-κB p65亚基DNA结合域为诱饵蛋白,筛选能够与其发生相互作用的多肽,并鉴定这些多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应。方法首先利用PCR搭桥扩增方法获取NF-κB p65亚基DNA结合域的基因片段,后将其克隆到酵母双杂交pGBKT7DNA-BD载体上,与GAL4DNA-BD融合,形成GAL4DNA-BD/p65BD融合蛋白;再以GAL4DNA-BD/p65BD融合蛋白为诱饵蛋白行酵母双杂交实验,自16肽随机肽库中筛选与NF-κB p65亚基DNA结合域相互作用的多肽;最后选择性人工合成筛选获得的多肽,并进行EMSA实验检测相互作用多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应。结果扩增获得了NF-κB p65亚基DNA结合域的基因片段,并成功构建pGBKT7DNA-BD/p65BD载体。自1.28×107个酵母转化子中最终筛选获得5个阳性克隆,测序结果和同源氨基酸序列比对表明5个阳性多肽为p65BD新型相互作用多肽,其中4条多肽拥有一个共同的基序。EMSA实验结果表明合成的两条多肽对NF-κB的DNA结合活性均具有一定的抑制效应。结论经初筛、复选和假阳性鉴定,自16肽库中获得5个能与NF-κB p65亚基发生相互作用的新型多肽,并已证实其中两条多肽对NF-κB的DNA结合活性具有抑制效应。 展开更多
关键词 NF-ΚB P65 酵母双杂交系统 随机多肽库
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酵母双杂交随机肽库的设计及构建 被引量:3
15
作者 胡承香 徐祥 +3 位作者 梁华平 王付龙 罗艳 王正国 《动物医学进展》 CSCD 2003年第2期61-63,共3页
构建一个含16个氨基酸的酵母双杂交随机肽库,设计合成编码16肽的随机DNA片段,PCR扩增随机DNA片段,经限制性内切酶BamHI和EcoRI酶切后克隆入酵母表达质粒pGADT7GH,构建酵母双杂交随机肽库质粒pGADT7GH-RP并检验其库容。结果表明,扩增获... 构建一个含16个氨基酸的酵母双杂交随机肽库,设计合成编码16肽的随机DNA片段,PCR扩增随机DNA片段,经限制性内切酶BamHI和EcoRI酶切后克隆入酵母表达质粒pGADT7GH,构建酵母双杂交随机肽库质粒pGADT7GH-RP并检验其库容。结果表明,扩增获得编码16肽的随机DNA片段,并成功将随机DNA片段克隆入酵母表达质粒pGADT7GH,与GAL4AD形成融合蛋白,其库容为1.28×107。从而成功地构建了酵母双杂交随机肽库。 展开更多
关键词 酵母双杂交随机肽库 设计 构建 酵母双杂交肽库筛选系统 蛋白质
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鼻咽癌患者血清抗体相关抗原优势表位的筛选 被引量:3
16
作者 张颖 肖锡宾 +4 位作者 张昌卿 李经略 孙韻 叶永照 冯凯涛 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第9期999-1004,共6页
背景与目的:EB病毒与鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)密切相关。可应用多种血清学方法检测鼻咽癌患者血清EBV抗体,本研究利用鼻咽癌患者血清中纯化的EB病毒相关多抗,从噬菌体展示的随机肽库中筛选相关的优势抗原表位,在表位水平为... 背景与目的:EB病毒与鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)密切相关。可应用多种血清学方法检测鼻咽癌患者血清EBV抗体,本研究利用鼻咽癌患者血清中纯化的EB病毒相关多抗,从噬菌体展示的随机肽库中筛选相关的优势抗原表位,在表位水平为鼻咽癌患者血清抗体的检测寻找新的检测抗原。方法:以B95-8细胞EBV蛋白为抗原,从鼻咽癌患者血清中洗脱EB病毒相关多抗,对噬菌体展示的随机12肽库进行三轮生物淘洗。用夹心ELISA法和竞争抑制实验筛选阳性克隆,对这些阳性克隆进行测序,并将其展示的外源多肽与EB病毒蛋白的抗原性区域进行同源序列比对分析。结果:从第三轮的淘洗洗脱液中随机挑取64个噬菌体克隆,用夹心ELISA法筛选到25个阳性克隆,阳性率为39.06%,选取其中13个克隆进行竞争ELISA实验,有11个克隆出现抑制现象,抑制率在18.09%~65.94%之间。选取吸光度(A)值和抑制率均较高的5个克隆为阳性克隆,它们所展示的外源多肽序列分别为-A-T-S-H-L-H-V-R-L-P-W-T-(d15/d18)、-G-S-T-H-K-H-N-H-F-N-K-T-(d19)、-K-P-I-H-E-H-P-H-R-F-K-S-(e8)、-H-T-H-K-I-K-I-P-L-P-I-Q-(e23)。这些多肽序列分别与EB病毒膜蛋白(d15/d18)、EB病毒胸苷激酶(d19)、EB病毒主要壳蛋白(e8,e23)抗原区域的氨基酸存在序列相似性。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 抗原表位 随机多肽文库 多克隆抗体
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应用噬菌体肽库筛选Endoglin的结合肽 被引量:6
17
作者 毕仙民 梁志清 侍立峰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期582-584,共3页
目的利用噬菌体12肽库筛选可与Endoglin结合的活性小分子肽。方法以rhEndoglin为靶分子,对噬菌体12肽库进行亲和筛选。经过3轮筛选,随机挑取16个克隆,双夹心ELISA法鉴定其亲和性,测定亲和力高的阳性噬菌体克隆的DNA序列,推断出与噬菌体... 目的利用噬菌体12肽库筛选可与Endoglin结合的活性小分子肽。方法以rhEndoglin为靶分子,对噬菌体12肽库进行亲和筛选。经过3轮筛选,随机挑取16个克隆,双夹心ELISA法鉴定其亲和性,测定亲和力高的阳性噬菌体克隆的DNA序列,推断出与噬菌体外壳蛋白融合的氨基酸序列,竞争抑制实验检测优势克隆的特异性。结果竞争性ELISA显示6个噬菌体克隆与rhEndoglin有较强的结合活性,经测序获得5种不同的多肽序列,其中2个克隆的氨基酸序列为:AHKHVHHVPVRL。结论噬菌体随机肽库技术可以获得Endoglin结合肽的蛋白质序列。 展开更多
关键词 噬菌体随机肽库 ENDOGLIN 结合肽
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从噬菌体随机肽库筛选庚型肝炎病毒E2抗原表位 被引量:3
18
作者 柯屾 戚中田 +4 位作者 施明 赵平 王建安 姚志建 沈倍奋 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期838-841,共4页
目的 :筛选能识别庚型肝炎病毒 (HGV) E2区的单克隆抗体和有竞争抑制活性的多肽。方法 :利用抗 HGV E2区的3株单克隆抗体 M6 ,M13,M30作为筛选配基 ,对构象限制性的随机环 9肽库进行亲和筛选 ,并对阳性噬菌体克隆进行功能鉴定。结果 :... 目的 :筛选能识别庚型肝炎病毒 (HGV) E2区的单克隆抗体和有竞争抑制活性的多肽。方法 :利用抗 HGV E2区的3株单克隆抗体 M6 ,M13,M30作为筛选配基 ,对构象限制性的随机环 9肽库进行亲和筛选 ,并对阳性噬菌体克隆进行功能鉴定。结果 :证实亲和筛选具有良好的富集效果后 ,随机挑出 16个噬菌体克隆进行交叉结合实验 ,有 14个克隆与 M6抗体有较强的特异结合 ;其中 10个克隆在竞争抑制实验中抑制率大于 5 0 %。 DNA测序表明 9个克隆具有氨基酸核心序列 GYAPL S,该序列与 HGV E2区第 30 6~ 311位氨基酸有较好的同源性。用合成肽与核心序列相似的噬菌体克隆 P9GC5和 P9GC11进行HGV E2抗原抗体实验 ,显示它们的 IC5 0 分别为 4.5和 7.2 nmol/ L。结论 :从噬菌体随机肽库中筛选到能与 HGV E2抗体特异性结合的 HGV抗原表位 ,并确定与合成了具有活性的核心多肽序列。 展开更多
关键词 噬菌体随机肽库 E2蛋白 抗原表位 庚型肝炎 HGV
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随机肽库筛选弓形虫特异性抗原表位诱导保护性免疫的研究 被引量:4
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作者 吴翔 蒋立平 +3 位作者 蔡力汀 舒衡平 张祖萍 沈杰 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第4期42-44,共3页
目的 从噬菌体随机肽库中筛选出模拟弓形虫特异性抗原表位的短肽分子 ,并探讨其对弓形虫的保护性效果。方法 以纯化的弓形虫免疫兔血清IgG为配基 ,亲和筛选法富集特异性噬菌体 ,随机挑取噬菌体克隆用夹心ELISA法和Dot-ELISA法检测其... 目的 从噬菌体随机肽库中筛选出模拟弓形虫特异性抗原表位的短肽分子 ,并探讨其对弓形虫的保护性效果。方法 以纯化的弓形虫免疫兔血清IgG为配基 ,亲和筛选法富集特异性噬菌体 ,随机挑取噬菌体克隆用夹心ELISA法和Dot-ELISA法检测其特异性 ,混合 4个阳性克隆免疫小鼠 ,1月后攻击感染 ,观察小鼠发病时间和死亡时间。结果 经 3轮筛选 ,特异性噬菌体得到了有效富集 ,第 3轮洗脱噬菌体的产量为第 1轮的 16 7倍 ,随机挑取 2 7个噬菌体经Dot -Bloting和夹心ELISA法检测 ,有 2 4个能与弓形虫免疫兔血清及单克隆抗体特异反应。用致死量弓形虫攻击感染经阳性克隆免疫的小鼠 ,存活时间明显长于对照组。结论 免疫筛选噬菌体随机多肽库可获得具有保护性的弓形虫抗原表位 ,为弓形虫疫苗研制提供了新途径。 展开更多
关键词 随机肽库 筛选 弓形虫 特异性抗原 表位 诱导 保护性免疫
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猪O型口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗原模拟表位的筛选 被引量:4
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作者 何玉龙 伍晓雄 +3 位作者 赵娜 袁芳艳 聂芬 龙良启 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期793-798,共6页
口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3ABC与FMDV复制有关,感染FMDV的动物产生的NSP 3ABC抗体可在体内存留较长时间,是鉴别诊断动物接种疫苗与自然感染口蹄疫的可靠指标。本文从猪FMDV-NSP3ABC阳性抗血清中分离和纯化IgG,以此为固相筛选分子... 口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3ABC与FMDV复制有关,感染FMDV的动物产生的NSP 3ABC抗体可在体内存留较长时间,是鉴别诊断动物接种疫苗与自然感染口蹄疫的可靠指标。本文从猪FMDV-NSP3ABC阳性抗血清中分离和纯化IgG,以此为固相筛选分子,对噬菌体随机十二肽库进行4轮吸附-洗脱-扩增的富集筛选后,随机挑取20个噬菌斑进行扩增,用ELISA方法分别检测扩增后的噬菌体抗原性,其中有8个噬菌体克隆与纯化的IgG有较强的特异性结合能力;对得到的阳性克隆提取ssDNA进行测序,分析所递呈的氨基酸序列,其中的7个噬菌体展示肽的氨基酸片段具有较高的保守性;进一步分别以8个阳性噬菌体克隆为固相捕获分子,对22份疑似FMD病猪血清进行检测,结果显示,有5个噬菌体克隆检测结果与试剂盒检测有较高的符合率。本研究为FMDV-NSP 3ABC抗原表位结构进一步研究和建立猪自然感染FMDV快速鉴别诊断新方法奠定了基础。 展开更多
关键词 FMDV NSP 3ABC 模拟表位 噬菌体随机肽库
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