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新型番鸭呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及其抗原特性 被引量：11
1
作者 陈海鹏 云涛 +4 位作者 张存 余斌 倪征 华炯钢 崔言顺 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期1448-1452,共5页
新型番鸭呼肠孤病毒是近年来新发现的一种引起鸭严重疾病的病原,该病毒与经典MDRV主要在病毒宿主范围、体外培养特性、临床致病性和免疫保护特性上存在显著的差异。通过RT-PCR扩增新型呼肠孤病毒σC基因,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切处理,插入... 新型番鸭呼肠孤病毒是近年来新发现的一种引起鸭严重疾病的病原,该病毒与经典MDRV主要在病毒宿主范围、体外培养特性、临床致病性和免疫保护特性上存在显著的差异。通过RT-PCR扩增新型呼肠孤病毒σC基因,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切处理,插入到p ET-28a(+)原核表达载体,获得重组质粒p ET-28a(+)-σC。将重组阳性质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达后经SDS-PAGE电泳对σC蛋白进行初步分析,蛋白分子量约为36 k Da。重组蛋白经纯化后免疫实验兔,获得抗σC蛋白的高效免疫血清。通过Western Blot与间接免疫荧光实验初步表明,新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白具有良好的反应活性。 展开更多
关键词 新型呼肠孤病毒 σC基因 原核表达 兔抗血清
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水貂生长激素的原核表达及特异性抗血清制备
2
作者 苏俊 刘曼 +2 位作者 王吉贵 孙燕 刘维全 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第4期866-872,共7页
本研究旨在建立水貂生长激素(mink growth hormone,mGH)的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清。将已构建的原核表达载体pET28b-mGH转化大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS感受态细胞,经IPTG诱导表... 本研究旨在建立水貂生长激素(mink growth hormone,mGH)的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清。将已构建的原核表达载体pET28b-mGH转化大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS感受态细胞,经IPTG诱导表达,超声破碎菌体后离心获得包涵体蛋白,利用8mol/L尿素对其进行溶解和复性,经Ni-NTA树脂亲和层析纯化获得重组蛋白。通过Western blotting检测及MALDI-TOFMS质谱分析对获得的蛋白进行鉴定。用SDS-PAGE电泳法检测蛋白纯度,用BCA法测定其浓度。复性mGH蛋白与完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂乳化制备免疫抗原,采用皮下多点注射法免疫3只新西兰大白兔,首次免疫剂量为600μg/只,二免剂量为600μg/只,三免剂量为400μg/只。三免10d后分离制备血清,Western blotting法检测其特异性,间接ELISA法检测其效价。结果表明,原核表达的包涵体经Ni-NTA柱纯化后所得蛋白鉴定为mGH融合蛋白;SDS-PAGE电泳鉴定复性mGH蛋白条带单一,纯度达90%以上,BCA法计算蛋白浓度为669μg/mL,均达到了免疫动物的要求;制备的抗血清经Western blotting检测具有良好的结合特异性,间接ELISA法测定其抗体效价达1∶256 000以上。上述结果表明,原核表达载体pET28b-mGH可在大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS细胞中高效表达mGH融合蛋白,表达蛋白经变性、复性和纯化后免疫新西兰大白兔,可制备高效价特异性抗血清。 展开更多
关键词 水貂生长激素(mGH) 原核表达 Ni-NTA树脂 质谱分析 兔抗mGH血清
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磁性免疫微球在人血清白蛋白纯化中的应用(英文) 被引量：4
3
作者 吴明珲 姜玲黎 +2 位作者 曾凡波 王妮丹 唐斓 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期608-614,共7页
目的为了快速地从人血清中提纯人血清白蛋白,利用磁性免疫微球作为提取手段,再用间接酶联免疫法测定人血清白蛋白的回收率。方法将经过羧基修饰的聚苯乙烯微球作为载体,用EDC(碳化亚胺)活化微球表面的羧基,再将兔抗人血清白蛋白抗体包... 目的为了快速地从人血清中提纯人血清白蛋白,利用磁性免疫微球作为提取手段,再用间接酶联免疫法测定人血清白蛋白的回收率。方法将经过羧基修饰的聚苯乙烯微球作为载体,用EDC(碳化亚胺)活化微球表面的羧基,再将兔抗人血清白蛋白抗体包被于微球上,这种微球-抗体复合物能特异性地捕获人血清白蛋白,磁分离复合物后,通过将兔抗人血清白蛋白抗体作为捕获抗体,将酶联羊抗人血清白蛋白抗体作为检测抗体,建立起间接酶联免疫法,用于检测人血清中和磁性免疫微球上吸附人血清白蛋白的浓度,得到微球从人血清中提纯人血清白蛋白的回收率。结果第1次提纯的回收率为(86±4)%,重复利用微球2次,回收率分别为(69.0±0.6)%和(40.8±0.8)%,而提纯的人血清白蛋白的纯度为90%。结论以上结果表明,免疫磁性微球提纯人血清白蛋白的实验是有效的,为工业上大规模提纯人血清白蛋白提供了一条新的思路。 展开更多
关键词 磁性免疫微球 兔抗人血清白蛋白抗体 蛋白纯化 人血清白蛋白 BAS-ELISA
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人初乳分泌片的纯化和兔抗人分泌片免疫血清的制备及应用
4
作者 王晓蕾 孙玲 +2 位作者 贲昆龙 许金菊 曹筱梅 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期381-384,388,共5页
目的　获得足够量的分泌片 (SC)及其相应的抗血清 ,用于研究SC的功能与SC在人和某些物种黏膜组织内的分布。方法　在已有的凝胶过滤和离子交换层析的基础上 ,进一步通过亲和层析和凝胶过滤分离纯化人的SC并进行相应的鉴定。用免疫组织... 目的　获得足够量的分泌片 (SC)及其相应的抗血清 ,用于研究SC的功能与SC在人和某些物种黏膜组织内的分布。方法　在已有的凝胶过滤和离子交换层析的基础上 ,进一步通过亲和层析和凝胶过滤分离纯化人的SC并进行相应的鉴定。用免疫组织化学技术检测了SC在部分小鼠组织中的表达。结果　获得了免疫纯的SC ,并制备了相应的兔抗人SC的免疫血清 ;免疫组化显示 ,SC在小鼠小肠和子宫内膜处有表达。结论　利用改进的方法可以获得免疫纯的SC 。 展开更多
关键词 初乳 分泌片 纯化 兔抗人分泌片 免疫血清 制备 应用 免疫组织化学
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