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转NtPMT和HnH6H转变莨菪碱型颠茄为东莨菪碱型颠茄
1
作者 权红 夏科 +3 位作者 曾俊岚 陈敏 兰小中 廖志华 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1913-1919,共7页
颠茄（Atropa belladonna）是生产药用托品烷类生物碱（tropane alkaloids,TAs）的商业药用植物。颠茄中莨菪碱含量远高于东莨菪碱,其化学型属于莨菪碱型,提高其东莨菪碱含量,使其化学型转变为东莨菪碱型是该产业追求的共同目标。本课... 颠茄（Atropa belladonna）是生产药用托品烷类生物碱（tropane alkaloids,TAs）的商业药用植物。颠茄中莨菪碱含量远高于东莨菪碱,其化学型属于莨菪碱型,提高其东莨菪碱含量,使其化学型转变为东莨菪碱型是该产业追求的共同目标。本课题组在已经获得的T0代转NtPMT和HnH6H颠茄基础上,采用自交法培育出T1代转基因颠茄并在西藏林芝进行了田间试验。在T1代转基因颠茄中能同时特异性地扩增出461 bp的NtPMT和1 077 bp的HnH6H片段,在野生型颠茄中则不能,表明获得了阳性的T1代转基因颠茄。RT-PCR表明NtPMT和HnH6H在转基因颠茄叶片有表达。HPLC检测莨菪碱和东莨菪碱结果表明：T1代转基因颠茄叶片和茎杆几乎没有莨菪碱,东莨菪碱是主要的生物碱;野生型颠茄叶片和茎杆绝大多数为莨菪碱（东莨菪碱含量极低）。T1代转基因颠茄叶片中东莨菪碱含量比野生型颠茄叶片提高了15-36倍;T1代转基因颠茄茎杆中东莨菪碱含量比野生型颠茄茎杆提高了37-108倍。NtPMT和HnH6H双基因过表达使得莨菪碱转化为价值更高的东莨菪碱,大大提高了颠茄药用和商业价值。 展开更多
关键词 颠茄 东莨菪碱 腐胺-n-甲基转运酶 莨菪碱-6β-羟化酶 代谢工程
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外源植物生长调节物质对烟草根中烟碱含量和烟碱合成酶活性变化的生理效应 被引量：25
2
作者 刘华山 朱大恒 +2 位作者 韩锦峰 毕庆文 曾涛 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期319-321,共3页
水培法研究烟草打顶和喷施外源生长调节物质的结果表明:打顶的比不打顶的烟草根中鸟氨酸脱羧酶(ODC)、腐胺N-甲基转移酶(PMT)和N-甲基腐胺氧化酶(MPO)活性升高,烟叶中烟碱含量剧增;打顶喷施ABA和6-BA烟叶中烟碱含量升高,喷施IAA和GA3的... 水培法研究烟草打顶和喷施外源生长调节物质的结果表明:打顶的比不打顶的烟草根中鸟氨酸脱羧酶(ODC)、腐胺N-甲基转移酶(PMT)和N-甲基腐胺氧化酶(MPO)活性升高,烟叶中烟碱含量剧增;打顶喷施ABA和6-BA烟叶中烟碱含量升高,喷施IAA和GA3的下降,IAA的效果更明显。 展开更多
关键词 烟碱含量 植物生长调节物质 生理效应 活性变化 草根 外源 合成酶 鸟氨酸脱羧酶 甲基转移酶 胺氧化酶 n-甲基 6-BA IAA 打顶 喷施 水培法 ABA GA3 烟叶 烟草
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颠茄PMT·TR-I和H6H基因植物高效表达载体的构建 被引量：9
3
作者 成瑜 杨春贤 +5 位作者 王贵君 李郑娜 杨颖舫 冯国庆 陈敏 廖志华 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第14期7211-7213,共3页
[目的]构建1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶(Putrescine N-methyltransferase,PMT)基因、托品酮还原酶-I(Tropinone reductase-I,TR-I)基因和莨菪碱6-β-羟化酶(Hyoscyamine 6β-Hydroxylase,H6H)基因的植物高效表达载体。[方法]采用RT-PCR方... [目的]构建1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶(Putrescine N-methyltransferase,PMT)基因、托品酮还原酶-I(Tropinone reductase-I,TR-I)基因和莨菪碱6-β-羟化酶(Hyoscyamine 6β-Hydroxylase,H6H)基因的植物高效表达载体。[方法]采用RT-PCR方法从颠茄中克隆到PMT、TR-I和H6H基因编码区序列,并连接到植物表达载体pCAMBIA1304+(p1304+)中。[结果]成功构建了植物高效表达载体p1304+-PMT、p1304+-TR-I、p1304+-H6H、p1304+-PMT-H6H、p1304+-TR-I-PMT和p1304+-TR-I-H6H,并转化农杆菌,获得可直接用于遗传改良颠茄的工程菌。[结论]该研究为利用植物基因工程技术提高东莨菪碱的产量奠定了基础。 展开更多
关键词 东莨菪碱 颠茄 1 4-丁二胺-氮-甲基转移酶 托品酮还原酶-I 莨菪碱6-β-羟化酶 载体构建
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过表达内源PMT和H6H基因对颠茄发根托品烷类生物碱合成的影响 被引量：8
4
作者 龙世平 卢衍 +3 位作者 王亚雄 杨春贤 兰小中 廖志华 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期243-249,共7页
颠茄是我国药典规定的托品烷类生物碱包括东莨菪碱和莨菪碱最主要的商业栽培的药源植物。本研究采用基于发根的基因表达系统,农杆菌介导遗传转化颠茄,潮霉素筛选获得转颠茄自身PMT和H6H基因发根;基因组PCR鉴定转基因发根;液体摇床培养后... 颠茄是我国药典规定的托品烷类生物碱包括东莨菪碱和莨菪碱最主要的商业栽培的药源植物。本研究采用基于发根的基因表达系统,农杆菌介导遗传转化颠茄,潮霉素筛选获得转颠茄自身PMT和H6H基因发根;基因组PCR鉴定转基因发根;液体摇床培养后,HPLC测量莨菪碱和东莨菪碱含量;qPCR检测颠茄PMT和H6H基因表达水平。基因组PCR检测获得5个双基因共转化颠茄发根系,其中2个发根系(PH2和PH14)的总生物碱含量得到显著提高,最高的PH2总生物碱含量为非转基因发根的2.7倍;另外3个转基因发根系总生物碱含量与对照相比没有显著性差异。4个转基因发根系(PH2、PH32、PH14和PH20)东莨菪含量都有提高,其中PH2东莨菪碱含量比对照提高了8.2倍。基因表达量与生物碱含量结果基本一致,说明颠茄发根中PMT和H6H两者同时维持高水平表达可以极大程度的促进东莨菪碱积累。 展开更多
关键词 东莨菪碱 颠茄 n-甲基-腐胺-转移酶 莨菪碱6β-羟化酶
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PMT和H6H双基因共转化颠茄发根的植株再生 被引量：2
5
作者 杨春贤 周启贵 +4 位作者 陈敏 彭梅芳 张婷婷 张磊 廖志华 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1548-1551,共4页
目的获得1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶(putrescine N-methyltransferase,PMT)和莨菪碱-6β-羟化酶(hyoscyamine6β-hydroxylase,H6H)双基因共转化的颠茄发根的再生植株。方法选用PMT和H6H双基因共转化的东莨菪碱高产发根单克隆T4,用1/2MS+1... 目的获得1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶(putrescine N-methyltransferase,PMT)和莨菪碱-6β-羟化酶(hyoscyamine6β-hydroxylase,H6H)双基因共转化的颠茄发根的再生植株。方法选用PMT和H6H双基因共转化的东莨菪碱高产发根单克隆T4,用1/2MS+1.0mg/LNAA固体培养基培养1、5、10d后,转入1/2MS固体培养基中诱导不定芽和不定根,培养条件均为(25±1)℃,55μmol/(m2.s),12h/d。采用PCR扩增检测再生植株的PMT、H6H和NPT-。结果发根在1/2MS+1.0mg/LNAA固体培养基上培养5d后,转入1/2MS固体培养基上培养,60%的外植体能自发长出不定芽,1/2MS+0.1mg/LIBA固体培养基中诱导生根较1/2MS固体培养基强,15d产生的条数平均为9条,形成了完整的再生植株。PCR检测表明所有再生植株均为颠茄的转基因再生植株。结论建立了颠茄转化发根再生体系,为实现颠茄托品烷类生物碱的代谢工程及开展分子育种奠定了基础。 展开更多
关键词 颠茄 1 4-丁二胺-氮甲基转移酶 莨菪碱-6β-羟化酶 发根 再生
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烟草打顶对腐胺N-甲基转移酶基因表达的影响 被引量：6
6
作者 戚元成 马雷 +1 位作者 王菲菲 刘卫群 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2009年第7期684-686,共3页
水培65d的烟株进行打顶后,测定打顶和不打顶烟株上部叶中烟碱含量。分别提取根中总RNA,以腐胺N-甲基转移酶基因(PMT)特异引物、肌动蛋白基因(actin)为内参作半定量RT-PCR分析;同时将提取的总RNA转膜,用地高辛标记PMTRT-PCR产物作探针,进... 水培65d的烟株进行打顶后,测定打顶和不打顶烟株上部叶中烟碱含量。分别提取根中总RNA,以腐胺N-甲基转移酶基因(PMT)特异引物、肌动蛋白基因(actin)为内参作半定量RT-PCR分析;同时将提取的总RNA转膜,用地高辛标记PMTRT-PCR产物作探针,进行Northern杂交分析的结果表明,打顶后的上部烟叶中烟碱含量和PMT基因表达量显著增加。 展开更多
关键词 烟草打顶 腐胺n-甲基转移酶基因(PMT) 半定量RT-PCR nORTHERn杂交
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