应用假病毒技术研究HIV-1复制抑制剂 被引量：23

1

作者 曹颖莉 郭颖 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期253-258,共6页

建立以HIV-1复制为靶点的细胞水平假病毒药理筛选模型,并运用该模型筛选化合物库中随机选取的化合物。细胞水平的HIV-1假病毒药理筛选模型是应用水泡性口膜炎病毒的外壳糖蛋白(vesicular stomatitis virusglycoprotein,VSV-G)包装HIV-1... 建立以HIV-1复制为靶点的细胞水平假病毒药理筛选模型,并运用该模型筛选化合物库中随机选取的化合物。细胞水平的HIV-1假病毒药理筛选模型是应用水泡性口膜炎病毒的外壳糖蛋白(vesicular stomatitis virusglycoprotein,VSV-G)包装HIV-1核心建立的,简称VSVG/HIV模型。细胞被VSVG/HIV感染后,病毒携带的报告基因的表达水平(荧光素酶活性或GFP阳性细胞比例)反映了HIV-1的复制水平。对HIV-1复制有抑制作用的化合物应用VSVG/MLV模型对其特异性地进一步检测。被感染细胞中报告基因的表达水平与病毒稀释度呈显著的剂量依赖效应。阳性药物齐多夫定(zidovudine,AZT)、拉米夫定(lamivudine,3TC)、去羟基苷(didanosine,DDI)可剂量依赖性地抑制HIV-1的复制,其IC50分别为48.5 nmol.L-1、0.13μmol.L-1和1.73μmol.L-1,与文献报道一致。在随机筛选的500个化合物中有3个化合物可以抑制HIV-1的复制,IC50分别为1.92、5.38和3.39μmol.L-1,而对MLV的复制无影响。VSVG/HIV假病毒系统是一种安全、有效的针对HIV-1复制的药理筛选模型。当将此模型与VSVG/MLV模型联合使用时,可判断化合物作用的特异性。实验表明:3个化合物,2-甲硫基-5-(4-甲基苯并)酰胺基-1,3,4-噻二唑(化合物A)、N-(3-羟基苯基)-2-(4-异丁基苯基)丙酰胺(化合物B)和N-(4-甲基吡啶基)-4-甲基苯磺酰胺(化合物C)可以特异性抑制HIV-1的复制。 展开更多

关键词 HIV-1 药物筛选 假病毒 复制抑制剂

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SARS-CoV假病毒中和试验技术的建立及评价 被引量：14

2

作者 闫克夏 谭文杰 +3 位作者 张相民 王慧娟 李岩 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期440-446,共7页

为避免传统的SARS病毒中和试验需要操作活毒而存在的生物安全隐患,建立了基于假病毒系统、操作较安全的SARS中和试验技术平台。本研究应用高效表达SARS-CoV S(密码子优化的全长S蛋白,简称S)的真核表达载体(pVRC8304),与HIV慢病毒包装质... 为避免传统的SARS病毒中和试验需要操作活毒而存在的生物安全隐患,建立了基于假病毒系统、操作较安全的SARS中和试验技术平台。本研究应用高效表达SARS-CoV S(密码子优化的全长S蛋白,简称S)的真核表达载体(pVRC8304),与HIV慢病毒包装质粒(p CMV△8.2)及转移质粒(pHR′CMV EGFP)3个质粒载体系统共同转染人胚肾细胞293T,包装了SARS假病毒;通过SARS假病毒感染的RD-A细胞中标记基因EGFP表达的分析,确定SARS假病毒能有效进入细胞,建立了可在BSL-2级实验室操作的SARS病毒中和试验技术平台。用该技术平台对不同免疫血清进行了中和抗体分析,并比较了基于假病毒和基于SARS活病毒的中和试验效果。结果显示:SARS假病毒和SARS活病毒两个中和试验系统获得中和抗体滴度变化趋势一致,表明本研究构建的SARS假病毒可替代SARS活病毒用于建立操作上安全的SARS病毒中和试验技术平台。 展开更多

关键词 SARS-COV S蛋白 假病毒 中和试验

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新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶抑制剂细胞水平评价体系的建立 被引量：7

3

作者 张超 曹颖莉 +2 位作者 钟武 肖军海 郭颖 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期383-387,共5页

本文旨在建立以2009新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(neuraminidase,NA)为靶点的神经氨酸酶抑制剂(neuraminidase inhibitors,NAIs)细胞水平评价体系。NA有促进流感病毒释放的作用,本研究应用重组病毒技术,通过将表达NA[A/California/04... 本文旨在建立以2009新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(neuraminidase,NA)为靶点的神经氨酸酶抑制剂(neuraminidase inhibitors,NAIs)细胞水平评价体系。NA有促进流感病毒释放的作用,本研究应用重组病毒技术,通过将表达NA[A/California/04/2009(H1N1)]的质粒、表达流感病毒血凝素蛋白HA(hemagglutinin)的质粒以及表达敲除外壳基因并带有荧光素酶报告基因的HIV-1基因组共转染至病毒生成细胞,产生以HA、NA为外壳蛋白包裹HIV-1核心的重组病毒。在病毒释放前加入不同浓度的化合物,收集病毒上清液感染细胞,通过测定感染率来反映化合物对重组病毒NA的抑制作用。经用阳性对照药物奥司他韦及其羧酸盐证实本模型能够反映化合物对病毒NA的抑制作用;在此基础上,本研究还建立了奥司他韦耐药株评价模型。本研究所建立的体系可用于针对新型甲型H1N1流感病毒及其临床耐药株神经氨酸酶抑制剂的寻找和评价。 展开更多

关键词 H1N1 神经氨酸酶抑制剂 重组病毒 奥司他韦耐药

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假病毒技术在新突发病毒性传染病防控产品评价中的应用 被引量：8

4

作者 黄维金 王佑春 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1177-1186,共10页

新发烈性病毒性传染病病原体的实验操作往往需要在高等级的生物安全实验室中进行,活病毒在实验室内操作和实验室间转移均具有较高的安全风险,导致采用活病毒进行疫苗、抗体药物的体外效力评价、筛选等受到影响。随着生物技术的提高,假... 新发烈性病毒性传染病病原体的实验操作往往需要在高等级的生物安全实验室中进行,活病毒在实验室内操作和实验室间转移均具有较高的安全风险,导致采用活病毒进行疫苗、抗体药物的体外效力评价、筛选等受到影响。随着生物技术的提高,假病毒技术通过模拟病毒的膜结构或者模拟病毒核酸状态,前者模拟病毒感染的受体结合、细胞进入、抗体识别等过程,可替代活病毒进行体外细胞实验和动物体内实验,后者代替活病毒,用于核酸检测的质控品。本文将对假病毒技术在疫苗、抗体、诊断试剂等生物技术产品评价中的应用情况进行综述,以期为假病毒技术在SARS-CoV-2防控产品研究和评价中的应用提供借鉴。 展开更多

关键词 新突发传染病 SARS-CoV-2 假病毒 疫苗 中和抗体

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稳定表达T7RNA聚合酶IBRS-2细胞系的建立以及利用该细胞系对SVDV的体内拯救 被引量：7

5

作者 郑海学 田宏 +4 位作者 靳野 吴锦艳 尚佑军 刘湘涛 谢庆阁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第4期449-456,共8页

利用PCR从!溶原性细菌DE3中扩增出T7RNA聚合酶基因,定向克隆进逆转录病毒载体pBABEpuro,得到阳性重组质粒pT7BABEpuro.把该重组质粒与pVSV-G共感染GP2-293包装细胞系,形成假型病毒.通过polybrene介导假型病毒感染IBRS-2细胞,利用嘌呤霉... 利用PCR从!溶原性细菌DE3中扩增出T7RNA聚合酶基因,定向克隆进逆转录病毒载体pBABEpuro,得到阳性重组质粒pT7BABEpuro.把该重组质粒与pVSV-G共感染GP2-293包装细胞系,形成假型病毒.通过polybrene介导假型病毒感染IBRS-2细胞,利用嘌呤霉素进行传代筛选,形成细胞系IBRST7.对不同代次的IBRST7细胞基因组进行PCR和RT-PCR鉴定,结果表明,T7RNA聚合酶基因在细胞传代过程中能稳定存在,并能表达目的蛋白的mRNA.为了鉴定T7RNA聚合酶在IBRST7细胞内是否具有转录活性,扩增口蹄疫病毒(FMDV)的内部核糖体进入位点(IRES)片段和EGFP基因,定向克隆于原核表达载体pET-43.1a-c(+)中,构建了T7启动子控制下转录的具有非帽依赖性表达的重组质粒pIERS-EGFP-ET,把该质粒转染IBRST7细胞,能够在紫外显微镜下观察到绿色荧光,说明EGFP得到了表达,表明IBRST7细胞系内的T7RNA聚合酶具有转录活性.然后,利用该细胞系成功拯救出具有感染性的猪水泡病病毒(SVDV),并对其生物学功能进行了鉴定.该细胞系的建立为利用T7RNA聚合酶转录系统体内高效拯救病毒提供了基础.该拯救病毒的策略使RNA拯救简化为一步快速的拯救方法,为进一步探索SVDV病毒致病的分子机制及研制新型SVD疫苗奠定了良好的基础. 展开更多

关键词 T7RNA聚合酶 IBRST7细胞系 假型病毒 SVDV 病毒拯救 逆转录病毒载体 感染性克隆

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埃博拉假病毒小鼠攻毒模型的建立与评估

6

作者 孙冰洁 范鹏飞 +2 位作者 房婷 于长明 陈薇 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期213-221,共9页

埃博拉病毒具有极大的危险性,对其活病毒相关的操作必须严格限制在生物安全四级实验室(BSL-4)中,阻碍了疫苗和治疗药物的研发进程。本研究将扎伊尔埃博拉病毒(EBOV)膜表面糖蛋白(GP)表达质粒与携带荧光素酶报告基因的pNL4-3.Luc.R-E-慢... 埃博拉病毒具有极大的危险性,对其活病毒相关的操作必须严格限制在生物安全四级实验室(BSL-4)中,阻碍了疫苗和治疗药物的研发进程。本研究将扎伊尔埃博拉病毒(EBOV)膜表面糖蛋白(GP)表达质粒与携带荧光素酶报告基因的pNL4-3.Luc.R-E-慢病毒载体共转染至HEK293T细胞,包装HIV骨架的EBOV GP-Fluc假病毒颗粒,建立了BSL-2条件下基于假病毒和生物发光成像(BLI)技术的BALB/c小鼠EBOV感染模型,并通过不同给药时间、途径和抗体种类的系统评估对其可靠性进行了验证。腹腔注射包含GP全长的假病毒在第4d可检测到集中于胸腺部位的最大发光信号,测试抗体在预防性静脉给药时可完全阻断假病毒的感染,在暴露后腹腔给药时表现出与其在活病毒小鼠模型中一致的保护效力。该模型为埃博拉病毒以及类似烈性病原体防治药物研发提供了一种简单有效的前期筛选方案。 展开更多

关键词 埃博拉病毒 糖蛋白 假型病毒 小鼠模型 生物发光成像 抗体

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马传贫病毒弱毒疫苗免疫马匹后中和抗体变化规律研究 被引量：4

7

作者 陈杰 王雪峰 +2 位作者 林跃智 关平原 王晓钧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期311-314,共4页

为研究马传贫病毒(EIAV)弱毒疫苗免疫马匹后中和抗体的动态变化规律,本研究通过将表达EIAV囊膜蛋白重组质粒(pcDNA-env),与表达EIAV主要结构基因gag-pol的包装质粒(pUK-gag-pol)、表达荧光素酶的转移载体(pONY8.1)共转染293T细胞,制备了... 为研究马传贫病毒(EIAV)弱毒疫苗免疫马匹后中和抗体的动态变化规律,本研究通过将表达EIAV囊膜蛋白重组质粒(pcDNA-env),与表达EIAV主要结构基因gag-pol的包装质粒(pUK-gag-pol)、表达荧光素酶的转移载体(pONY8.1)共转染293T细胞,制备了EIAV假病毒粒子(EIAV-Env)。在此基础上,利用该假病毒对2匹EIAV疫苗免疫马在免疫后6个月内不同时间点的中和抗体进行检测。即将EIAV疫苗免疫马血清通过连续4倍稀释,与EIAV-Env共孵育1 h后接种ELR1-293T细胞,36 h后通过检测细胞内荧光酶活性计算不同血清样品的中和抗体滴度。结果显示,EIAV疫苗免疫马血清可以特异性地中和EIAV-Env。EIAV疫苗免疫马后,随着时间的增加其体内中和抗体滴度逐渐升高,在6个月时能够达到最高值,这提示中和抗体可能与EIAV疫苗体液免疫成熟相关。本研究为进一步深入EIAV及其疫苗诱导体液免疫保护机制的研究提供了相关的实验依据。 展开更多

关键词 马传贫病毒 弱毒疫苗 囊膜蛋白 假病毒 中和抗体

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甲型H1N1流感重组病毒模型的建立及应用 被引量：3

8

作者 吴彦霖 罗剑 +2 位作者 张媛 刘倩 高华 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1162-1168,共7页

目的:针对流感病毒感染宿主机体的作用机制,建立以甲型H1N1流感A/California/04/2009(H1N1)为靶点的重组病毒模型,并对其应用进行探索。方法:通过将表达流感病毒血凝素蛋白HA、神经氨酸酶NA及敲除外壳基因、复制基因并带有荧光素酶报告... 目的:针对流感病毒感染宿主机体的作用机制,建立以甲型H1N1流感A/California/04/2009(H1N1)为靶点的重组病毒模型,并对其应用进行探索。方法:通过将表达流感病毒血凝素蛋白HA、神经氨酸酶NA及敲除外壳基因、复制基因并带有荧光素酶报告基因的HIV^(-1)质粒共转染至293T包装细胞,产生以HA[A/California/04/2009(H1N1)]和NA[A/California/04/2009(H1N1)]为膜蛋白,HIV^(-1)(p NL4-3.Luc.R-E-)为核心的重组病毒。通过该重组流感病毒模型评价阳性对照化合物(奥斯他韦、奥斯他韦酸)、中和血清以及板蓝根药材提取液对重组病毒活性的抑制作用。结果:奥司他韦、奥司他韦酸抑制重组病毒p NL+HA04+NA04的IC50为1.07×10-8 mol·L^(-1)和1.82×10-9 mol·L^(-1);中和血清的IC50为1∶320~1∶640;中药板蓝根提取液的IC50为1.91×10-5 g·m L^(-1)。结论:奥斯他韦、奥斯他韦酸、中和血清及板蓝根提取液对于重组病毒的活性有抑制作用,提示所构建的重组病毒模型可用于上述作用机制药物的筛选和评价。 展开更多

关键词 重组病毒 H1N1流感 板蓝根药材提取液 奥斯他韦 达菲 奥斯他韦酸 中和血清 血凝素 神经氨酸酶 抗流感病毒活性评价

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应用假病毒和假型病毒制备抗猪瘟病毒E2蛋白中和性单克隆抗体的初步研究 被引量：4

9

作者 陈景艳 尹晓磊 +5 位作者 王宜 袁丽 王超 邓宏魁 钱永华 袁克湖 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期289-293,共5页

为制备抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体(MAb),本实验以表达CSFV E2囊膜糖蛋白的水泡口炎假病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合;利用间接ELISA方法和携带荧光素酶(Luciferase)报告基因的HIV-luc/CSFV-E1&E2假病毒... 为制备抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体(MAb),本实验以表达CSFV E2囊膜糖蛋白的水泡口炎假病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合;利用间接ELISA方法和携带荧光素酶(Luciferase)报告基因的HIV-luc/CSFV-E1&E2假病毒系统筛选分泌中和性E2MAb的杂交瘤细胞;测定MAb亚型并纯化后,间接ELISA方法测定MAb的效价;采用western blot鉴定MAb的特异性亲和力;利用HIV-luc/CSFV-E1&E2假病毒进行体外中和试验,分析MAb抑制病毒感染的能力。结果表明本实验获得了1株分泌中和性MAb的杂交瘤细胞9C8,该MAb能与E2蛋白特异性结合,而且体外抑制试验中和效价大于1∶25600。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 中和性单克隆抗体 假病毒 中和试验

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应用于抗体中和试验的假型化新型冠状病毒的构建

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作者 黄昭阳 张炎华 +1 位作者 朱颖 翁育伟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期857-864,共8页

目的构建基于HIV的假型化新冠病毒用于替代野生型病毒,降低实验室生物安全风险。方法从新冠病毒武汉类似株病毒RNA中扩增获得全长刺突蛋白基因,经密码子优化、C末端截短等改善刺突蛋白表达;同时,通过转染等包装条件优化,获得高滴度假型... 目的构建基于HIV的假型化新冠病毒用于替代野生型病毒,降低实验室生物安全风险。方法从新冠病毒武汉类似株病毒RNA中扩增获得全长刺突蛋白基因,经密码子优化、C末端截短等改善刺突蛋白表达;同时,通过转染等包装条件优化,获得高滴度假型化新冠病毒。按照相同方法,获得Delta和Omicron变异株的假型化病毒。结果成功建立基于HIV包装系统的新冠病毒假型化系统,抗体中和试验表明,所构建的3种(武汉株、Delta、Omicron)假型化病毒与相应的野生型病毒的中和试验结果具有较好的一致性和相关性。结论本研究构建的假型化病毒可用于替代野生型病毒用于新冠病毒抗体中和试验。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 新型冠状病毒感染 假型化病毒 中和抗体

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HIV-1假病毒包装方法的探讨 被引量：3

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作者 徐树莹 乔录新 +5 位作者 史宣玲 徐萌 魏飞力 袁霖 石英 陈德喜 《中华实验和临床感染病杂志（电子版）》 CAS 2014年第1期10-13,共4页

目的通过不同方案包装HIV-1假病毒,确定获得高重复性、高稳定性和高滴度假病毒的方法。方法从转染效率影响因素出发,通过不同的转染方案,利用pNL4-3 LucR-E-质粒与VSV-G质粒共转染293细胞包装病毒,分别于48 h和72 h收取假病毒并重新感染... 目的通过不同方案包装HIV-1假病毒,确定获得高重复性、高稳定性和高滴度假病毒的方法。方法从转染效率影响因素出发,通过不同的转染方案,利用pNL4-3 LucR-E-质粒与VSV-G质粒共转染293细胞包装病毒,分别于48 h和72 h收取假病毒并重新感染293细胞,48 h后测荧光素酶报告基因。结果成功包装出HIV-1假病毒,不同包装方案的病毒滴度不同,测得报告基因最高接近107 RLUs。结论应用PEI转染试剂、大提质粒pNL4-3︰VSV-G为4︰1时,转染效率最高,包装的假病毒滴度最高。 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 假病毒 包装方法 HUMAN immunodeifciency virus typeⅠ

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整合深圳人源H5N1禽流感病毒株血凝素蛋白的假型逆转录病毒的构建 被引量：3

12

作者 张国良 周伯平 +5 位作者 陈心春 蔡车国 陆坚 杨桂林 聂广 周保罗 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期53-57,共5页

目的构建整合深圳人源H5N1禽流感病毒（avianinfluenzavirus，AIV）株血凝素（HA）的假型逆转录病毒。方法利用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术扩增深圳人源H5N1禽流感病毒株HA基因，将扩增产物与pGEM-T载体连接，在经过酶切及测序... 目的构建整合深圳人源H5N1禽流感病毒（avianinfluenzavirus，AIV）株血凝素（HA）的假型逆转录病毒。方法利用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术扩增深圳人源H5N1禽流感病毒株HA基因，将扩增产物与pGEM-T载体连接，在经过酶切及测序鉴定后，通过Sal Ⅰ与BamHⅠ酶切位点将HA基因克隆至真核表达载体CMV／R，然后协同转移载体pHR—Luc、包装载体pCMV＆8．2通过磷酸钙共沉淀法转染人胚肾细胞（293T），72h后收集假病毒上清，超速离心后通过Western blot鉴定假病毒颗粒HA、P24蛋白的表达，同时测定HIV—HA假病毒对犬肾传代细胞（MD-CK）、宫颈癌上皮细胞（HeLa）、中国仓鼠卵母细胞（CHO）和293T等4种不同细胞株的感染活性。结果深圳人源H5N1禽流感病毒株A／Shenzhen／406H／06属于subclade2．3，其HA基因开放读码框编码567个氨基酸，在GenBank登录号为EFl37706。经Sal Ⅰ与BamHⅠ双酶切鉴定HA基因成功克隆至真核表达载体CMV／R。将pHR—Luc、pCMV＆8．2、CMV—HA共转染293T细胞后，所收集的假病毒经Westernblot证实假病毒颗粒不仅含有HIV基质蛋白P24，还可以整合AIVHA蛋白，并且能够由前体蛋白HA。裂解为具有生物活性的HA，和HA：蛋白。HIV—HA假病毒可以感染MDCK、HeLa、CHO、293T等4种靶细胞，表明所构建的假病毒具有感染活力，且具有广泛的宿主范围。结论本研究成功构建整合A／Shenzherv／406H／06HA蛋白的假型逆转录病毒，并且HIV—HA假病毒具有良好的感染活性，从而为下一步筛选中和抗体及抗原表位分析奠定基础。 展开更多

关键词 H5N1型禽流感病毒 血凝素 假病毒 逆转录病毒

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表达马尔堡病毒囊膜糖蛋白重组水泡性口炎病毒的构建 被引量：1

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作者 梁博 王申 +9 位作者 王琪 王玮琦 贺文文 李政蓉 冯娜 赵永坤 王铁成 闫飞虎 杨松涛 夏咸柱 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1397-1404,共8页

为了构建携带e GFP标签并表达马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)囊膜糖蛋白(GP)的复制型水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis v,iVrSuVs)假型病毒,通过将VSV感染性克隆全长质粒中的G基因替换成马尔堡病毒的GP基因,与4个辅助质粒p3.1-VSV-... 为了构建携带e GFP标签并表达马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)囊膜糖蛋白(GP)的复制型水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis v,iVrSuVs)假型病毒,通过将VSV感染性克隆全长质粒中的G基因替换成马尔堡病毒的GP基因,与4个辅助质粒p3.1-VSV-N、p3.1-VSV-P、p3.1-VSV-L、p3.1-VSV-G共转染BSR细胞,拯救成功的重组VSV病毒传5代后,进行Western-blot、间接免疫荧光试验、RT-PCR鉴定和生长动力学曲线检测。显微镜检测结果显示,3个重组全长质粒分别与4个辅助质粒共转染BSR细胞培养48 h后均能使细胞发生合胞体病变并伴有绿色荧光蛋白表达;Western-blot、间接免疫荧光试验鉴定结果显示,3株马尔堡病毒的囊膜糖蛋白在重组VSV病毒中正确表达;生长动力学曲线显示,3株重组VSV病毒的毒力相较于母本VSV病毒均降低,但病毒滴度依旧能达到1×10^(6)~1×10^(7)TCID_(50)mL^(-1)。结论:本研究成功构建3株携带e GFP标签表达MARV GP的复制型VSV假型病毒,为后续MARV疫苗与抗体的效果评价等奠定了基础。 展开更多

关键词 马尔堡病毒 水泡性口炎病毒 假型病毒

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柯萨奇病毒A组6型报告基因假病毒可视化感染模型的建立 被引量：3

14

作者 吴星 苏瑶 +8 位作者 董方玉 陈盼 李克雷 高帆 卞莲莲 孙世洋 胡亚林 毛群颖 梁争论 《中国病毒病杂志》 CAS 2018年第6期515-520,共6页

目的以含报告基因的柯萨奇病毒A组6型(CV-A6)假病毒(pCV-A6-Luc),建立CV-A6可视化感染模型,用于疫苗的有效性评价.方法比较BALB/c、C57BL/6、ICR、NIH、KM小鼠对pCV-A6-Luc的敏感性,确定模型动物;进行小鼠周龄选择、检测时间摸索以及假... 目的以含报告基因的柯萨奇病毒A组6型(CV-A6)假病毒(pCV-A6-Luc),建立CV-A6可视化感染模型,用于疫苗的有效性评价.方法比较BALB/c、C57BL/6、ICR、NIH、KM小鼠对pCV-A6-Luc的敏感性,确定模型动物;进行小鼠周龄选择、检测时间摸索以及假病毒感染剂量优化等研究,确定模型体系;通过给小鼠接种灭活CV-A6病毒或被动免疫抗血清观察保护效果.结果通过不同品系小鼠对假病毒的敏感性比对,确定将BALB/c小鼠作为模型动物,并确定了使用4周龄小鼠作为假病毒攻毒时间,攻毒后16h为检测时间.半数动物感染剂量(AID50)研究结果表明,活体成像发光值与pCV-A6-Luc攻毒剂量呈现良好的剂量效应关系(r^2=0.996),Reed-Muench法计算pCV-A6-Luc感染BALB/c小鼠的AID50攻毒剂量为2.86×10^8拷贝.主动免疫和被动免疫研究结果表明,抗体及灭活疫苗均可抑制pCV-A6-Luc对小鼠的感染.主动免疫实验组小鼠活体成像发光强度和中和抗体检测结果均明显低于对照组.结论本研究建立了安全、敏感、可视化的CV-A6报告基因假病毒可视化感染模型,该模型可应用于CV-A6疫苗评价及药物筛选研究. 展开更多

关键词 柯萨奇病毒A组6型 可视化 动物模型 报告基因 假病毒

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高致病性禽流感病毒H5N1血凝素蛋白中和抗体及表位的鉴定 被引量：3

15

作者 蔡孟华 李铮 +2 位作者 董鹏 吴瑞平 何维 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2014年第5期633-637,共5页

目的制备并鉴定中国境内流行的高致病性禽流感病毒H5N1血凝素蛋白(HA)的中和抗体及其表位。方法选取9个HA候选抗原表位序列设计串联表位,利用表面线性表位抗体库(SEAL)专利技术制备单克隆抗体。亲和层析纯化抗体,酶联免疫吸附实验检测... 目的制备并鉴定中国境内流行的高致病性禽流感病毒H5N1血凝素蛋白(HA)的中和抗体及其表位。方法选取9个HA候选抗原表位序列设计串联表位,利用表面线性表位抗体库(SEAL)专利技术制备单克隆抗体。亲和层析纯化抗体,酶联免疫吸附实验检测亚型及与合成肽结合的剂量依赖性,假病毒微量中和实验筛选中和抗体,免疫印迹法验证与不同毒株HA的结合。结果共制备了23株单抗,其中亚型鉴定10株为IgG型;证明3株IgG3亚型的抗体具有高中和活性,均能与4种不同分枝HA结合;中和抗体识别肽为"LIKKNNAYPT"和"R/KSSFFRNVVW"且具有剂量依赖性。结论鉴定出3株分泌抗中国境内流行H5N1 HA的中和抗体,其对应的HA抗原表位为中和表位,可作为H5N1疫苗研制的候选表位。 展开更多

关键词 H5N1禽流感 血凝素蛋白 假病毒 中和抗体

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新疆“生命营养液”体外抗HIV-1活性的分析 被引量：3

16

作者 陈建国 梁寒峭 +2 位作者 吾布利.卡地尔 赵婷 程池 《安徽农业科学》 CAS 2015年第19期8-9,29,共3页

[目的]研究新疆"生命营养液"体外抗HIV-1活性,并对其作用机制进行初步探讨。[方法]采用MTT比色法,检测"生命营养液"的细胞毒性;用携带荧光素酶基因的HIV-1假病毒感染体系,检测"生命营养液"体外抗HIV-1活... [目的]研究新疆"生命营养液"体外抗HIV-1活性,并对其作用机制进行初步探讨。[方法]采用MTT比色法,检测"生命营养液"的细胞毒性;用携带荧光素酶基因的HIV-1假病毒感染体系,检测"生命营养液"体外抗HIV-1活性,分析"生命营养液"体外抗HIV-1机制。[结果]"生命营养液"抑制HIV-1感染活性的半数有效浓度(IC50)为1.784 mg/ml,治疗指数(TI)为7.22,其作用方式更接近于整合酶抑制剂MK-0518。[结论]"生命营养液"具有抗HIV-1活性,其作用机制可能抑制病毒的整合。 展开更多

关键词 “生命营养液” HIV-1 假病毒 荧光素酶 机制

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表达猪瘟病毒E2蛋白的复制型水疱性口炎假病毒的拯救 被引量：2

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作者 陈景艳 李文雯 钱永华 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第9期7-10,共4页

为拯救囊膜表面携带有猪瘟病毒E2蛋白的复制型水疱性口炎假病毒,共转染分别表达水疱性口炎病毒核衣壳蛋白、磷蛋白、聚合酶蛋白以及携带有猪瘟病毒E2基因的复制型水疱性口炎病毒载体于BHK-21细胞中。采用Western blot、间接ELISA以及体... 为拯救囊膜表面携带有猪瘟病毒E2蛋白的复制型水疱性口炎假病毒,共转染分别表达水疱性口炎病毒核衣壳蛋白、磷蛋白、聚合酶蛋白以及携带有猪瘟病毒E2基因的复制型水疱性口炎病毒载体于BHK-21细胞中。采用Western blot、间接ELISA以及体外微量中和试验检测和鉴定拯救的假病毒。结果显示,E2蛋白成功地在BHK-21细胞中表达,假病毒VSV/CSFV-E2免疫的Balb/c小鼠血清中有高滴度的抗E2抗体,假病毒诱导产生的抗体在体外可以有效的阻断猪瘟病毒囊膜蛋白E1和E2蛋白假型的病毒HIV-luc/CSFV-E1&E2对PK-15细胞的感染。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 水疱性口炎病毒 假型病毒

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利用假病毒技术筛选H5N1亚型禽流感病毒中和活性单克隆抗体 被引量：2

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作者 张卓 刘明 郑世民 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期545-548,共4页

为筛选H5N1禽流感病毒(AIV)血凝素蛋白(HA)特异性中和抗体,本研究构建了表达HA蛋白的重组质粒,利用该重组质粒及缺失表达人免疫缺陷病病毒1型(HIV-1)囊膜蛋白基因的骨架质粒,构建了表面整合有H5亚型AIV HA蛋白的HIV假病毒。利用该假病... 为筛选H5N1禽流感病毒(AIV)血凝素蛋白(HA)特异性中和抗体,本研究构建了表达HA蛋白的重组质粒,利用该重组质粒及缺失表达人免疫缺陷病病毒1型(HIV-1)囊膜蛋白基因的骨架质粒,构建了表面整合有H5亚型AIV HA蛋白的HIV假病毒。利用该假病毒系统,筛选得到一株具有中和活性的单克隆抗体(MAb)。经测定,该MAb与纯化的全病毒具有较好的反应性,其对HIV-H5HA假病毒的中和效价为64。中和试验表明该MAb能够有效阻断野生型病毒对鸡胚的感染。本研究结果为开发H5N1 AIV的被动免疫治疗方法奠定了基础,同时对亚单位疫苗的研制也具有一定的意义。 展开更多

关键词 H5N1禽流感病毒 假病毒 中和抗体

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HIV-1假病毒包装的重要影响因素分析 被引量：2

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作者 武立伟 潘煦文 +1 位作者 王希东 刘建玲 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期266-273,共8页

【目的】分析影响HIV-1假病毒包装的主要因素,建立该假病毒包装的优化条件。【方法】用单因素分析对比的方法,比较了对病毒包装效果有重要影响的转染试剂、转染试剂与质粒的数量、培养基血清类型、细胞周期阶段对于病毒包装效果的影响... 【目的】分析影响HIV-1假病毒包装的主要因素,建立该假病毒包装的优化条件。【方法】用单因素分析对比的方法,比较了对病毒包装效果有重要影响的转染试剂、转染试剂与质粒的数量、培养基血清类型、细胞周期阶段对于病毒包装效果的影响。【结果】对45批150盘病毒包装结果分析显示,使用PEI转染试剂成本低,转染效果好,其N/P在8?40均可以产生高活性的包装病毒;用进口血清包装时,相对于国产血清结果重复性高;细胞周期处于S及G2/M期时转染质粒相对于S以及G0/G1期有较高的病毒活性。【结论】用PEI为转染试剂可以包装出高活性的病毒,包装获取高活性病毒可以通过质粒与PEI梯度比例以及血清类型构成多个组合策略来实现。 展开更多

关键词 假病毒 HIV-1 转染试剂

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假型病毒载体研究进展 被引量：2

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作者 赵朴 徐耀辉 +1 位作者 郑玉姝 刘兴友 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第1期69-71,共3页

假型病毒是包被其它囊膜病毒糖蛋白的病毒颗粒。由于假型病毒具有宿主嗜性广、生物安全性高和稳定性强的优点,所以成为基因治疗中向靶细胞呈递治疗基因的有效工具,引起了广泛关注。假型病毒载体将会给基因治疗研究带来新的机遇。因此,... 假型病毒是包被其它囊膜病毒糖蛋白的病毒颗粒。由于假型病毒具有宿主嗜性广、生物安全性高和稳定性强的优点,所以成为基因治疗中向靶细胞呈递治疗基因的有效工具,引起了广泛关注。假型病毒载体将会给基因治疗研究带来新的机遇。因此,将就假型病毒载体的最新研究进展作以综述。 展开更多

关键词 假型病毒 载体 基因治疗

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