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介孔分子筛上的蛋白质直接电化学 被引量:19
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作者 戴志晖 鞠熀先 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1262-1266,共5页
将介孔分子筛用于不同含血红素蛋白质的直接电子传递研究,分别研究了辣根过氧化物酶、血红蛋白和肌红蛋白在六方介孔硅(HMS)上的直接电化学,探讨了介孔分子筛与这些蛋白质间的相互作用,构建了过氧化氢和亚硝酸根的新型的生物传感器.这... 将介孔分子筛用于不同含血红素蛋白质的直接电子传递研究,分别研究了辣根过氧化物酶、血红蛋白和肌红蛋白在六方介孔硅(HMS)上的直接电化学,探讨了介孔分子筛与这些蛋白质间的相互作用,构建了过氧化氢和亚硝酸根的新型的生物传感器.这些工作扩展了HMS在蛋白质固定、直接电子传递研究和无试剂生物传感器制备方面的应用. 展开更多
关键词 介孔分子筛 蛋白质 直接电化学 辣根过氧化物酶 血红蛋白 肌红蛋白 生物传感器
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酵母双杂交技术的影响因素及其实验策略 被引量:9
2
作者 方玉楷 许丽艳 +3 位作者 麦瑞琴 韩溟 牛永东 李恩民 《中国实验诊断学》 2005年第1期70-74,共5页
目的 为了研究蛋白质分子间的相互作用 ,以大T抗原和P5 3为阳性对照 ,建立酵母双杂交实验系统。方法 通过比较共转化、顺序转化和交配实验三种方法的优劣 ,分析了影响酵母转化效率的因素 ,与此同时还分析了酵母体内 β 半乳糖苷酶的... 目的 为了研究蛋白质分子间的相互作用 ,以大T抗原和P5 3为阳性对照 ,建立酵母双杂交实验系统。方法 通过比较共转化、顺序转化和交配实验三种方法的优劣 ,分析了影响酵母转化效率的因素 ,与此同时还分析了酵母体内 β 半乳糖苷酶的活性。 结果 ①顺序转化比共转化转化效率高 ;②质粒纯度是影响酵母转化效率的一个主要因素 ,与经典碱裂解法提取质粒相比 ,试剂盒提取质粒的转化效率明显高 ;③PEG浓度对转化效率也有一定影响 ;④β 半乳糖苷酶定量分析能够区分蛋白质分子间的强相互作用与弱相互作用 ,实验结果更可靠。结论 在此基础上 ,我们提出了一种共转化与交配实验有机结合的有效的酵母双杂交新实验策略 ,并将之成功运用于筛选NGAL(neutrophilgelatinaseassociatedlipocalin ,NGAL)相互作用蛋白实验。 展开更多
关键词 酵母双杂交技术 蛋白质分子相互作用 转化效率 Β-半乳糖苷酶活性
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Interaction of δ-opioid Receptor with Membrane Transporters: Possible Mechanisms in Pain Suppression by Acupuncture 被引量:17
3
作者 杨智杰 鲍国斌 +6 位作者 邓海平 杜慧明 顾全保 裴钢 濮璐 Wolfgang SCHWARZ 夏鹏 《Journal of Acupuncture and Tuina Science》 2008年第5期298-300,共3页
Objective: To investigate the possible mechanisms in acupuncture analgesia by interaction of δ-opioid receptor with neurotransmitter transport proteins or the Na^+-K^+ pump. Methods: Microinjection of respective ... Objective: To investigate the possible mechanisms in acupuncture analgesia by interaction of δ-opioid receptor with neurotransmitter transport proteins or the Na^+-K^+ pump. Methods: Microinjection of respective heterologous cRNA into the Xenopus oocytes as a model system, and measurement of steady-state currents under two-electrode voltage clamp. Results: The co-expression of the 8-opioid receptor with GAT1, EAAC 1 or the sodium pump resulted in reducing activity of the respective transporter. Opioid receptor activation affected transporter activity in different ways: 1) GAT1 was further inhibited; 2) EAAC1 was stimulated; 3) Na^+-K^+ pump activity interfered with agonist sensitivity of DOR. Pump inhibition led to higher sensitivity for DPDPE. Conclusion: GABA transporter inhibition and glutamate transporter stimulation may counteract pain sensation by affecting the neurotransmitter concentration in the synaptic cleft and, therefore, may contribute synergistically to pain suppression by acupuncture. Sodium pump inhibition by endogenous ouabain may amplify these effects. These synergistic effects may be the molecular mechanism of inhibiting pain sense and/or acupuncture analgesia. 展开更多
关键词 Acupuncture Analgesia Receptors Opioid Neurotransmitter Transport proteins protein interaction Domains and Motifs
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红细胞膜蛋白与膜骨架 被引量:12
4
作者 卢义钦 刘俊凡 《生命科学研究》 CAS CSCD 2005年第4期283-291,共9页
近10多年红细胞膜领域的研究取得了可观的进展,在红细胞膜蛋白的结构-功能相关和相互作用以及红细胞膜障碍多方面都有新的发现和开拓.现主要就国内外有关报道作一扼要综述,涉及红细胞膜蛋白的组成、功能及其相互作用,红细胞膜骨架和红... 近10多年红细胞膜领域的研究取得了可观的进展,在红细胞膜蛋白的结构-功能相关和相互作用以及红细胞膜障碍多方面都有新的发现和开拓.现主要就国内外有关报道作一扼要综述,涉及红细胞膜蛋白的组成、功能及其相互作用,红细胞膜骨架和红细胞膜蛋白疾病等研究进展. 展开更多
关键词 红细胞 膜蛋白 相互作用 功能障碍 膜骨架
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用T7噬菌体展示筛选系统筛选与p38相结合的蛋白 被引量:7
5
作者 李志杰 刘靖华 +9 位作者 龚小卫 秦清和 黄浩 邓鹏 王静珍 孙学刚 赵善超 刘亚伟 赵克森 姜勇 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第11期1131-1133,共3页
目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用... 目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断,回收PCR产物并进行测序,将所得到的序列用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列,得到了46个编码蛋白的序列。结论T7噬菌体展示筛选系统筛选新的结合蛋白简单、快速、有效。 展开更多
关键词 T7噬菌体 筛选 P38 结合蛋白 靶蛋白
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多酚与蛋白质相互作用的研究进展 被引量:11
6
作者 关惠 李锋 李大鹏 《食品安全质量检测学报》 CAS 2020年第3期682-687,共6页
蛋白质是人体必须的营养素,也在调控人体生物学功能中扮演了重要的角色。多酚类物质能和食品体系中的膳食蛋白发生相互作用,影响蛋白质的功能特性和营养价值,也能与生物体内激酶、转录因子、受体等功能蛋白相互作用,调控不同信号通路中... 蛋白质是人体必须的营养素,也在调控人体生物学功能中扮演了重要的角色。多酚类物质能和食品体系中的膳食蛋白发生相互作用,影响蛋白质的功能特性和营养价值,也能与生物体内激酶、转录因子、受体等功能蛋白相互作用,调控不同信号通路中靶基因的表达,进而发挥健康效应。本文综述了多酚类物质与膳食蛋白及体内功能蛋白相互作用的研究现状,分析了多酚与蛋白的互作机制及常用的研究方法,以期为进一步揭示多酚类物质的生理功能,拓展多酚类物质在食品和医药领域中的应用提供参考依据。 展开更多
关键词 多酚类物质 膳食蛋白 转录因子 相互作用
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氯化钠对猪肉肌原纤维蛋白构像及其与辣椒素相互作用的影响 被引量:5
7
作者 王海帆 熊哲民 +4 位作者 王玉洁 彭利娟 廖鄂 路洪艳 王海滨 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第5期101-107,共7页
目的 探究氯化钠浓度对猪肉肌原纤维蛋白(myofibrillar proteins,MPs)与辣椒素(capsaicin,CAP)相互作用的影响。方法 选择0~0.9 mol/L的氯化钠处理MPs,然后与CAP在25℃进行反应,并采用粒度仪、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium... 目的 探究氯化钠浓度对猪肉肌原纤维蛋白(myofibrillar proteins,MPs)与辣椒素(capsaicin,CAP)相互作用的影响。方法 选择0~0.9 mol/L的氯化钠处理MPs,然后与CAP在25℃进行反应,并采用粒度仪、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)、激光共聚焦显微拉曼光谱、荧光光谱分析了不同浓度氯化钠对MPs的结构以及MPs与CAP相互作用的影响。结果 MPs在溶液中的稳定性随氯化钠浓度的增加而逐渐增强;SDS-PAGE表明,氯化钠浓度的改变,会引起MPs溶液中各种蛋白质分子组成的变化;氯化钠浓度的升高会增强MPs表面疏水性,并进一步促进了MPs与CAP的结合。拉曼光谱数据表明氯化钠的存在没有显著改变MPs的二级结构,同时,CAP与MPs结合不影响MPs的二级结构。荧光猝灭光谱数据表明:在不同氯化钠浓度下,CAP均能引起MPs的内源荧光产生静态猝灭;且随着氯化钠浓度的增加,MPs-CAP复合物的结合常数Kb值及n值均增大,表明氯化钠能够促进MPs与CAP的相互作用。结论 氯化钠浓度的增加能够提高MPs稳定性,不改变MPs的二级结构,能够通过增加MPs表面疏水性的方式促进MPs与CAP之间的相互作用。 展开更多
关键词 肌原纤维蛋白 辣椒素 氯化钠 相互作用 蛋白质结构
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肌肉蛋白与挥发性风味物质的相互作用机制及影响因素研究进展 被引量:9
8
作者 殷小钰 刘昊天 +2 位作者 邹汶蓉 孔保华 陈倩 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第15期288-294,共7页
肌肉蛋白是肉及肉制品的重要成分之一,不仅是衡量肉制品营养价值的重要指标,而且对肉的品质特性有重要的影响。肌肉蛋白本身没有气味,然而它们能结合风味化合物,作为风味载体和改良剂从而影响肉制品风味释放与感知。本文综合近几年国内... 肌肉蛋白是肉及肉制品的重要成分之一,不仅是衡量肉制品营养价值的重要指标,而且对肉的品质特性有重要的影响。肌肉蛋白本身没有气味,然而它们能结合风味化合物,作为风味载体和改良剂从而影响肉制品风味释放与感知。本文综合近几年国内外相关研究,简述肌肉蛋白与挥发性风味物质相互作用的机制,综述引起肌肉蛋白质结构发生变化的影响因素以及结构变化对肌肉蛋白与风味物质相互作用的影响,以期为肉制品风味调控提供理论参考及借鉴。 展开更多
关键词 肌肉蛋白 风味物质 相互作用机制 蛋白质结构 影响因素
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蛋白质和多糖在界面处的相互作用研究进展 被引量:9
9
作者 董磊 刘田静 +4 位作者 孔令姗 郭惠玲 李晨晨 超文正 俞苓 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第23期397-400,共4页
蛋白质和多糖两种生物大分子在界面处的相互作用对于乳状液和泡沫体系有显著影响。蛋白质和多糖混合后的协同效应可构建新的、功能性的纳、微或宏观结构,改变食品的力学和流动特性,对改良食品,降低生产成本具有重要意义。本文对近年来... 蛋白质和多糖两种生物大分子在界面处的相互作用对于乳状液和泡沫体系有显著影响。蛋白质和多糖混合后的协同效应可构建新的、功能性的纳、微或宏观结构,改变食品的力学和流动特性,对改良食品,降低生产成本具有重要意义。本文对近年来蛋白质的界面行为,多糖的界面行为以及蛋白质-多糖复合物的界面行为所做的一些研究进行综述。 展开更多
关键词 蛋白质 多糖 蛋白质-多糖复合物 相互作用 界面
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药物与蛋白质相互作用研究方法的进展 被引量:4
10
作者 姜虹 安普丽 蒋晔 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期662-666,共5页
药物和蛋白质的相互作用是生命科学研究的重要领域,本文综述了近5年相关研究的技术和方法,包括光谱分析法、平衡透析法、超滤法、微透析法、毛细管电泳法、核磁共振、X射线晶体衍射技术、电化学法、亲和层析法、迎头分析法、液相色谱法... 药物和蛋白质的相互作用是生命科学研究的重要领域,本文综述了近5年相关研究的技术和方法,包括光谱分析法、平衡透析法、超滤法、微透析法、毛细管电泳法、核磁共振、X射线晶体衍射技术、电化学法、亲和层析法、迎头分析法、液相色谱法等。目前研究表明往往需多种方法联合使用才能阐明特定药物与其靶蛋白的相互作用。 展开更多
关键词 药物 蛋白质 相互作用
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普鲁兰酶及其分泌相关蛋白的研究进展 被引量:8
11
作者 姜楠 宋诙 王萍 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期725-731,共7页
普鲁兰酶对于以淀粉为原料的食品加工以及生物能源等工业具有重要的作用。近年来对于该工业酶的开发已经不仅仅停留于简单的新菌种筛选过程,为了完成菌株的分子改造从而提高产量以及酶学性质,对其编码基因的调控及其分泌等相关蛋白的研... 普鲁兰酶对于以淀粉为原料的食品加工以及生物能源等工业具有重要的作用。近年来对于该工业酶的开发已经不仅仅停留于简单的新菌种筛选过程,为了完成菌株的分子改造从而提高产量以及酶学性质,对其编码基因的调控及其分泌等相关蛋白的研究则显得尤为重要。本文对这一内容的研究进展进行了系统的综述。 展开更多
关键词 普鲁兰酶 分泌 蛋白质相互作用
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应用蛋白质与多糖分子间的相互作用制备食品乳状液 被引量:8
12
作者 侯占群 龚树立 高彦祥 《食品科技》 CAS 北大核心 2013年第1期56-62,共7页
作为食品体系中两类重要的生物大分子,蛋白质和多糖在食品工业中得到了广泛应用。应用蛋白质及多糖分子间的相互作用,可以构建具有不同特性的蛋白质多糖混合物,从而应用于各种食品、制药等领域。主要介绍了蛋白质及多糖分子间的共价与... 作为食品体系中两类重要的生物大分子,蛋白质和多糖在食品工业中得到了广泛应用。应用蛋白质及多糖分子间的相互作用,可以构建具有不同特性的蛋白质多糖混合物,从而应用于各种食品、制药等领域。主要介绍了蛋白质及多糖分子间的共价与非共价相互作用机制及其在食品乳状液制备中的应用进展。 展开更多
关键词 蛋白质 多糖 相互作用 共价复合物 乳状液
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弓形虫棒状体蛋白与宿主细胞互作的研究进展 被引量:8
13
作者 赵桂华 尹淑霞 尹昆 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2014年第4期453-456,共4页
棒状体蛋白是弓形虫分泌于宿主细胞的主要效应因子,定位于宿主细胞的不同部位,并与其存在复杂的相互作用。通过调控膜系及骨架结构,该蛋白可影响宿主细胞的生物活性因子,从而阻断其内在的防御机制,使弓形虫成功实现胞内入侵、寄生及增... 棒状体蛋白是弓形虫分泌于宿主细胞的主要效应因子,定位于宿主细胞的不同部位,并与其存在复杂的相互作用。通过调控膜系及骨架结构,该蛋白可影响宿主细胞的生物活性因子,从而阻断其内在的防御机制,使弓形虫成功实现胞内入侵、寄生及增殖。棒状体蛋白对宿主细胞的功能及作用方式反映了弓形虫的致病机制,对探寻治疗弓形虫病的药物靶点及安全有效的疫苗候选分子意义重大。本文就近年来弓形虫棒状体蛋白与宿主细胞间相互作用的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 弓形虫 棒状体蛋白 宿主细胞 相互作用
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小分子物质与蛋白质相互作用研究方法的现状与进展 被引量:8
14
作者 唐江宏 连宁 +1 位作者 张国华 赵德建 《江苏技术师范学院学报》 2010年第12期1-7,共7页
小分子与蛋白质相互作用的研究是化学生物学的重要研究内容。蛋白质能与许多内源性和外源性小分子物质结合形成超分子复合物。通过实验方法可以获得蛋白质与小分子配体作用的结合常数、结合位点数、结合位置、作用力类型以及在客体小分... 小分子与蛋白质相互作用的研究是化学生物学的重要研究内容。蛋白质能与许多内源性和外源性小分子物质结合形成超分子复合物。通过实验方法可以获得蛋白质与小分子配体作用的结合常数、结合位点数、结合位置、作用力类型以及在客体小分子作用下蛋白质结构与功能的变化等信息。简述紫外可见光谱、荧光光谱法、傅立叶变换红外光谱和分子模拟法及其他分析方法在小分子与蛋白质相互作用方面的应用和研究进展。 展开更多
关键词 蛋白质 小分子 相互作用 方法综述
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花色苷与蛋白质相互作用的研究进展 被引量:3
15
作者 藏志焕 丑述睿 +3 位作者 唐思懿 李芝颖 田金龙 李斌 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第1期319-326,共8页
花色苷作为一种功能活性物质备受关注,但因稳定性差、生物利用率低限制了其应用。蛋白质作为人体必需的三大营养素之一,具有较好的生物相容性和生物可降解性,常用于食品加工中,但其功能性质有待改善。食品组分中的蛋白质与花色苷通常是... 花色苷作为一种功能活性物质备受关注,但因稳定性差、生物利用率低限制了其应用。蛋白质作为人体必需的三大营养素之一,具有较好的生物相容性和生物可降解性,常用于食品加工中,但其功能性质有待改善。食品组分中的蛋白质与花色苷通常是共存的成分,很容易发生相互作用,作用方式包括非共价和共价作用,其中非共价作用方式最为普遍,包括氢键、疏水相互作用、静电相互作用、范德华力。本文总结了花色苷-蛋白质相互作用的研究进展,包括蛋白质对花色苷稳定性和生物利用率的影响、花色苷对蛋白质功能性质的影响,以及复合物功能产品的应用现状,以期为花色苷与蛋白质在食品深加工中的应用提供理论参考。 展开更多
关键词 花色苷 蛋白质 稳定性 功能性质 相互作用
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Cellulose synthesis in land plants 被引量:3
16
作者 Gustav B.Pedersen Leonard Blaschek +2 位作者 Kristian E.H.Frandsen Lise C.Noack Staffan Persson 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2023年第1期206-231,共26页
All plant cells are surrounded by a cell wall that provides cohesion,protection,and a means of directional growth to plants.Cellulose microfibrils contribute the main biomechanical scaffold for most of these walls.The... All plant cells are surrounded by a cell wall that provides cohesion,protection,and a means of directional growth to plants.Cellulose microfibrils contribute the main biomechanical scaffold for most of these walls.The biosynthesis of cellulose,which typically is the most prominent constituent of the cell wall and therefore Earth’s most abundant biopolymer,is finely attuned to developmental and environmental cues.Our understanding of the machinery that catalyzes and regulates cellulose biosynthesis has substantially improved due to recent technological advances in,for example,structural biology and microscopy.Here,we provide a comprehensive overview of the structure,function,and regulation of the cellulose synthesis machinery and its regulatory interactors.We aim to highlight important knowledge gaps in the field,and outline emerging approaches that promise a means to close those gaps. 展开更多
关键词 plant cell wall cellulose microfibrils cellulose synthases membrane proteins CYTOSKELETON protein interaction
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羟基-α-山椒素与肌原纤维蛋白互作及其麻味感知机制
17
作者 王帅谦 姜典典 +2 位作者 唐洁 蒋珍菊 赵婕 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第4期80-89,共10页
花椒中的酰胺类物质羟基-α-山椒素(α-SOH)与蛋白质的相互作用可增强川菜中肉类菜肴的麻味。为明晰肉类加工中二者的结构变化及附着情况,探究热诱导(60,70,90℃)的猪肉肌原纤维蛋白(MPs)与α-SOH的互作机制,并通过分子对接解析α-SOH... 花椒中的酰胺类物质羟基-α-山椒素(α-SOH)与蛋白质的相互作用可增强川菜中肉类菜肴的麻味。为明晰肉类加工中二者的结构变化及附着情况,探究热诱导(60,70,90℃)的猪肉肌原纤维蛋白(MPs)与α-SOH的互作机制,并通过分子对接解析α-SOH的麻味激活机制。结果表明,α-SOH可增加α-SOH/MPs复合物的表面疏水性,促进热处理MPs的解聚。α-SOH酰胺基团中的N-H键易与氨基酸残基之间形成稳定氢键,改变蛋白的亚基聚集状态,从而显著减弱SDS-PAGE上大于45 ku的条带。荧光图谱和圆二色谱结果证实α-SOH导致蛋白二级结构由规则向无序状态转变。适度热处理(60℃和70℃)的MPs更易与α-SOH形成复合物,从而降低游离α-SOH含量。分子对接结果显示,α-SOH激活麻味是通过与TRPV1受体上的L681结合产生。本试验阐明MPs与α-SOH的互作机制以及激活麻味的机理,可为肉制品加工中的麻味调控提供理论依据。 展开更多
关键词 肌原纤维蛋白 羟基-α-山椒素 互作机制 TRPV1 麻味
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多酚与膳食成分的相互作用及应用研究进展
18
作者 代文婷 王世萍 +4 位作者 张晶 代佳慧 康效宁 吉建邦 陈静静 《保鲜与加工》 CAS 北大核心 2024年第6期120-130,共11页
多酚具有多种生物活性,但由于其稳定性差,限制了应用。综述了多酚与膳食成分通过非共价和/或共价相互作用形成的二元和三元体系,包括膳食成分对酚类物质稳定性和生物利用度的影响,以及膳食成分的理化性质和功能性质等方面的变化,并总结... 多酚具有多种生物活性,但由于其稳定性差,限制了应用。综述了多酚与膳食成分通过非共价和/或共价相互作用形成的二元和三元体系,包括膳食成分对酚类物质稳定性和生物利用度的影响,以及膳食成分的理化性质和功能性质等方面的变化,并总结了近年来多酚-膳食成分复合物在递送系统、乳液、包装材料和食品保鲜加工方面的应用,以期为多酚膳食化合物的设计与应用提供参考。 展开更多
关键词 多酚 蛋白质 脂质 碳水化合物 相互作用 应用
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嗜肺军团菌效应蛋白之间的调控机制
19
作者 康丽娜 黄诗晴 +1 位作者 陈涛涛 欧阳松应 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2024年第2期336-344,共9页
嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)是一种革兰氏阴性致病菌,它可以引起人类军团病。嗜肺军团菌的Dot/Icm分泌系统在其致病过程中至关重要,其向宿主细胞内转运约330种效应蛋白,通过修饰细胞调节因子、抑制细胞凋亡等一系列措施操纵宿... 嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)是一种革兰氏阴性致病菌,它可以引起人类军团病。嗜肺军团菌的Dot/Icm分泌系统在其致病过程中至关重要,其向宿主细胞内转运约330种效应蛋白,通过修饰细胞调节因子、抑制细胞凋亡等一系列措施操纵宿主细胞的多种生命活动,以完成自身的增殖与侵染。为避免对宿主生理造成不必要的破坏,嗜肺军团菌已进化出复杂而精细的调控机制来平衡嗜肺军团菌毒力与宿主细胞的稳态,以确保嗜肺军团菌在宿主细胞内的生存。军团菌效应蛋白的功能及分子机制的研究近几年取得突破性进展,嗜肺军团菌效应蛋白之间的作用机理也成为我们进一步研究的热点。该文主要对嗜肺军团菌的致病机制及其效应蛋白间的调控机制进行了综述,为进一步了解嗜肺军团菌致病机制提供了一定的参考。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 Dot/Icm分泌系统 效应蛋白 相互作用
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利用酵母双杂交系统筛选本氏烟中与RGSV P5互作的蛋白
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作者 熊桂红 胡昱颛 吴祖建 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期404-412,共9页
【目的】水稻草状矮化病是由水稻草状矮化病毒引起的,给粮食产量造成了严重威胁。RGSV P5是该病毒的沉默抑制子,在抵抗寄主RNA沉默中发挥重要作用。筛选、鉴定与水稻草状矮缩病毒(RGSV)沉默抑制子P5互作的寄主蛋白,为揭示水稻草状矮化... 【目的】水稻草状矮化病是由水稻草状矮化病毒引起的,给粮食产量造成了严重威胁。RGSV P5是该病毒的沉默抑制子,在抵抗寄主RNA沉默中发挥重要作用。筛选、鉴定与水稻草状矮缩病毒(RGSV)沉默抑制子P5互作的寄主蛋白,为揭示水稻草状矮化病毒致病的分子机制提供理论基础,为该病毒病的防治提供有效策略。【方法】利用酵母双杂交技术筛选与水稻草状矮化病毒P5互作的寄主蛋白。提取感染水稻草状矮化病毒的水稻叶片的总RNA。依据P5基因的CDS序列设计特异性引物。利用RT-PCR技术获得P5基因,将P5基因构建到酵母诱饵表达载体pGBKT7上,利用双酶切鉴定诱饵质粒。将诱饵载体pGBKT7、pGBKT7-P5、重组质粒pGBKT7-P5/pGADT7分别转化到酵母感受态细胞Y2H Gold中,通过观察其在缺陷培养基SD/-Trp、SD/-Leu-Trp/上的生长情况及在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal上的显色情况检测诱饵质粒的毒性和自激活活性。将烟草酵母cDNA文库质粒转化到含诱饵载体pGBKT7-P5的酵母感受态细胞中,先后用不同缺陷型培养基SD/-Leu/-Trp、SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp和SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal筛选后获得阳性克隆。经酵母质粒提取、转化、测序和Blast等分子生物学方法最终获得互作蛋白的序列。【结果】RT-PCR扩增得到P5基因,其大小为576 bp。成功构建诱饵载体pGBKT7-P5。表达的诱饵蛋白P5对酵母菌没有毒性和自激活活性。诱饵蛋白P5从本氏烟酵母cDNA文库中进行大量筛选,获得15个阳性克隆,分析后最终得到7个与P5互作的本氏烟蛋白。经生物信息学分析它们分别为线粒体孔蛋白VDAC、ADP核糖基化因子GTP水解酶激活蛋白ArfGAP、囊泡突触结合蛋白Syt-2、延伸因子eEF1A、脯氨酸合成酶共转录的细菌同源蛋白PROSC、非特征蛋白C9orf78及一种未知蛋白。【结论】本研究成功筛选到7个与水稻草状矮化病毒P5互作的寄主因子。这些互作的� 展开更多
关键词 水稻草状矮化病毒 P5蛋白 酵母双杂交 蛋白互作
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