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几种氨基酸铜对大丽轮枝菌产生毒素蛋白的影响 被引量:6
1
作者 张进霞 袁洪水 +3 位作者 王士英 单耀军 韩继刚 朱宝成 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2006年第2期79-82,共4页
用几种氨基酸铜溶液处理大丽轮枝菌,阴离子交换层析分离培养液中的毒素蛋白,并进行棉苗的致萎实验,比较了各氨基酸铜制剂对大丽轮枝菌毒素蛋白产生的影响。实验表明,丙氨酸铜、甘氨酸铜、谷氨酸铜和复合氨基酸铜都在一定程度上抑制了大... 用几种氨基酸铜溶液处理大丽轮枝菌,阴离子交换层析分离培养液中的毒素蛋白,并进行棉苗的致萎实验,比较了各氨基酸铜制剂对大丽轮枝菌毒素蛋白产生的影响。实验表明,丙氨酸铜、甘氨酸铜、谷氨酸铜和复合氨基酸铜都在一定程度上抑制了大丽轮枝菌微菌核的形成和毒素蛋白的分泌,而苏氨酸铜促进了毒素蛋白的分泌。说明复合氨基酸铜的抑菌作用是各成分协同作用的结果。 展开更多
关键词 大丽轮枝菌 黄萎病 毒素蛋白 致萎活性 微菌核 蛋白液相色谱
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可激活人γδT细胞的结核杆菌耐热多肽抗原的初步纯化与活性鉴定 被引量:13
2
作者 陈 勇 胡建国 +4 位作者 吕合作 侯彦强 张海峰 李柏青 何海辉 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期176-179,182,共5页
目的 对结核杆菌耐热多肽抗原(Mtb-Ag)的蛋白组成进行定性分析,并观察Mtb-Ag及其纯化组分刺激人外周血rδT细胞和αβT细胞增殖反应的量效关系。方法 用快速蛋白液相色谱仪(FPLC)定性分析Mtb-Ag的蛋白组成,并用不同剂量的Mtb-Ag及... 目的 对结核杆菌耐热多肽抗原(Mtb-Ag)的蛋白组成进行定性分析,并观察Mtb-Ag及其纯化组分刺激人外周血rδT细胞和αβT细胞增殖反应的量效关系。方法 用快速蛋白液相色谱仪(FPLC)定性分析Mtb-Ag的蛋白组成,并用不同剂量的Mtb-Ag及其纯化组分体外刺激健康人外周血PBMC,培养9d后经流式细胞仪检测细胞表型。结果 Mtb-Ag经FPLC MonoQ离子交换柱分析存在20种蛋白成分。Mtb-Ag在合适刺激剂量时对人rδT细胞发挥优势扩增;当剂量过大则对αβT细胞发挥优势扩增;其分离纯化的含大分子蛋白的蛋白峰I随着刺激剂量增加而对αβT细胞的扩增表现显著增强趋势;而其分离的含低分子多肽的蛋白峰Ⅱ随着刺激剂量增加则对rδT细胞扩增表现显著增强趋势,并且其活性明显高于蛋白峰I,同时其对αβT细胞的扩增效应并不明显,并显著低于Mtb-Ag和蛋白峰I。结论 Mtb-Ag刺激rδT细胞扩增时应选择合适的刺激剂量,其所含的低分子多肽抗原能特异性激活rδT细胞,而其所含的大分子蛋白抗原则特异性激活αβT细胞。 展开更多
关键词 结核杆菌 ΓΔT细胞 快速蛋白液相色谱仪 纯化 Mtb-Ag 抗原 鉴定
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天麻糖蛋白GGE2b的分离纯化及对急性血瘀大鼠血液流变的影响 被引量:7
3
作者 丁诚实 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第1期240-242,共3页
目的:从天麻中分离纯化得到糖蛋白组分GGE2b,研究其对急性血瘀大鼠血液流变学指标的影响。方法:采用离子交换和快速蛋白液相层析色谱(FPLC)技术分离天麻水溶性提取物,得到组分GGE2b。采用皮下注射盐酸肾上腺素结合冷刺激的方法制造急性... 目的:从天麻中分离纯化得到糖蛋白组分GGE2b,研究其对急性血瘀大鼠血液流变学指标的影响。方法:采用离子交换和快速蛋白液相层析色谱(FPLC)技术分离天麻水溶性提取物,得到组分GGE2b。采用皮下注射盐酸肾上腺素结合冷刺激的方法制造急性血瘀大鼠模型。观察GGE2b各剂量组对急性血瘀大鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数和红细胞变形指数的影响。结果:离子交换结合FPLC技术分离纯化得到天麻糖蛋白组分GGE2b。GGE2b60、120mg/kg能够显著降低急性血瘀模型大鼠高切、中切的全血黏度(P<0.05或0.01)和血浆黏度(P<0.01),降低红细胞聚集指数(P<0.05或0.01),增大红细胞变形指数(P<0.05)。结论:层析技术用于天麻糖复和物的分离纯化是可行的,且得到的糖蛋白组分GGE2b对急性血瘀大鼠异常的血液流变有良好的治疗效果。 展开更多
关键词 天麻糖蛋白 快速蛋白液相色谱 急性血瘀 血液流变
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水稻白叶枯病菌解毒素蛋白提纯和作用机制研究 被引量:2
4
作者 邵敏 陆徐忠 王金生 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期28-32,共5页
采用 (NH4) 2 SO4分步沉淀法 ,从水稻白叶枯病菌培养滤液中提取对水稻白叶枯病菌有机酸毒素具解毒作用的解毒蛋白粗提物 (crudedetoxificationprotein ,CDP) ,经滚动式等电聚焦电泳 (RPIE)和离子交换层析 (FPLC)分离 ,生物测定结果表明 ... 采用 (NH4) 2 SO4分步沉淀法 ,从水稻白叶枯病菌培养滤液中提取对水稻白叶枯病菌有机酸毒素具解毒作用的解毒蛋白粗提物 (crudedetoxificationprotein ,CDP) ,经滚动式等电聚焦电泳 (RPIE)和离子交换层析 (FPLC)分离 ,生物测定结果表明 ,第Ⅱ吸收峰具有生物活性 ;再经SDS PAGE电泳和考马斯亮蓝染色 ,第Ⅱ吸收峰收集物有明显的一条带 ,相对分子质量为 4 7 9× 10 3 。野生菌产生的CDP解毒活性明显低于其毒性基因突变体。CDP对热和蛋白酶K均不稳定 ,对毒素的解毒主要是通过脱羧起作用。用CDP处理水稻后 ,水稻体内与抗病性相关的酶活性显著提高 ;接种水稻白叶枯病菌 。 展开更多
关键词 水稻白叶枯病菌 解毒素蛋白 提纯 作用机制 有机酸毒素 等电聚集电泳 离子交换层析
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快速蛋白液相色谱系统纯化和分析小鼠肝癌细胞热休克蛋白70的研究 被引量:2
5
作者 马萍 孟凡东 +3 位作者 傅庆国 陈冬 李莉 刘杰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期243-244,共2页
目的 :应用快速蛋白液相色谱 (FRLC)系统建立分离和纯化 615系小鼠肝癌细胞系Hcaf细胞膜上热休克蛋白 (HSP70 )的分离方法。方法 :用经 4 3℃热处理 8h的Hcaf细胞制备裂解液 ,用ConA Sepharose 4B和MonoQ柱进行连续分离 ,所得蛋白经电泳... 目的 :应用快速蛋白液相色谱 (FRLC)系统建立分离和纯化 615系小鼠肝癌细胞系Hcaf细胞膜上热休克蛋白 (HSP70 )的分离方法。方法 :用经 4 3℃热处理 8h的Hcaf细胞制备裂解液 ,用ConA Sepharose 4B和MonoQ柱进行连续分离 ,所得蛋白经电泳及Western blot进行蛋白分子量及性质鉴定。结果 :纯化蛋白经鉴定为分子量70 0 0 0的HSP70。结论 :用此层析法经FRLP可分离纯度较高的HSP70。 展开更多
关键词 快速蛋白液相色谱 肝癌细胞 热休克蛋白70
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约氏疟原虫保护性抗原快速蛋白液相色谱法纯化及鉴定 被引量:1
6
作者 王春莉 刘智广 +3 位作者 薛采芳 陈志南 甄荣芬 刘成钢 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 1996年第3期201-204,共4页
目的:建立制备级纯化约氏疟原虫(P.y.)保护性抗原的新方法。方法:应用快速蛋白液相色谱系统(FPLC),将重度感染P.y.的BALB/c小鼠血液中提取的粗抗原,首先用SephacrylS-200凝胶色谱柱进行分离,... 目的:建立制备级纯化约氏疟原虫(P.y.)保护性抗原的新方法。方法:应用快速蛋白液相色谱系统(FPLC),将重度感染P.y.的BALB/c小鼠血液中提取的粗抗原,首先用SephacrylS-200凝胶色谱柱进行分离,收集活性组分,再用DEAE-40HR阴离子交换色谱柱进一步纯化。结果:一次上样量约200mg,可得到纯化抗原14mg。经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定抗原纯度>90%,抗原分子量为53kDa。结论:动物实验证明,该抗原具有很好的保护作用。该法操作比亲和色谱法简单,制备量大于亲和色谱法和高效液相色谱法(HPLC),纯化效率和纯度与HPLC法相似,一次纯化周期仅需3h,是P.y.抗原纯化的高效方法。 展开更多
关键词 疟原虫 约氏疟原虫 保护性抗原 液相色谱法 鉴定
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牦牛乳中主要过敏原的分离纯化 被引量:2
7
作者 李海梅 马莺 +3 位作者 崔艳华 汪加琦 李启明 何胜华 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第4期80-85,共6页
为研究牦牛乳蛋白质的过敏性,用化学方法分离牦牛乳中主要的过敏原蛋白质,采用快速蛋白纯化系统(FPLC)结合凝胶层析技术对分离出的蛋白质进行纯化.在牦牛脱脂乳中添加10%醋酸至酪蛋白的等电点pH4.6,使酪蛋白和乳清蛋白分离.根据酪蛋白... 为研究牦牛乳蛋白质的过敏性,用化学方法分离牦牛乳中主要的过敏原蛋白质,采用快速蛋白纯化系统(FPLC)结合凝胶层析技术对分离出的蛋白质进行纯化.在牦牛脱脂乳中添加10%醋酸至酪蛋白的等电点pH4.6,使酪蛋白和乳清蛋白分离.根据酪蛋白在尿素溶液中的溶解度和对钙的敏感性不同,对酪蛋白进行粗分级,得到αs-酪蛋白和β-酪蛋白.应用离子交换色谱和葡聚凝胶sephadex G100进一步纯化粗分级得到的酪蛋白,得到αs-casein和β-酪蛋白.以柠檬酸钠为螯合剂、在低pH并有盐存在的条件下从酸乳清中分离出β-乳球蛋白,FPLC纯化后用RP-HPLC检测其纯度,得到αs-casein和β-酪蛋白纯度分别为87.13%和88.58%,β-乳球蛋白的纯度为80.00%. 展开更多
关键词 牦牛乳 酪蛋白分离 β-乳球蛋白分离 快速蛋白纯化色谱
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快速蛋白液相色谱系统纯化肺癌组织热休克蛋白70及其鉴定 被引量:2
8
作者 张慧珍 杨继要 +2 位作者 范清堂 许东 吴逸明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第1期20-22,共3页
目的:从肺癌组织中纯化并鉴定热休克蛋白70(HSP70),为研究其免疫原性和作为肿瘤疫苗奠定基础。方法:用组织蛋白裂解液从肺癌组织中提取总蛋白,应用ConA-sepharose亲和层析和快速蛋白液相色谱系统(FR-LC)连续分离、梯度洗脱获得蛋白,应... 目的:从肺癌组织中纯化并鉴定热休克蛋白70(HSP70),为研究其免疫原性和作为肿瘤疫苗奠定基础。方法:用组织蛋白裂解液从肺癌组织中提取总蛋白,应用ConA-sepharose亲和层析和快速蛋白液相色谱系统(FR-LC)连续分离、梯度洗脱获得蛋白,应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western-blot进行蛋白相对分子质量及免疫原性鉴定。结果与结论:所获蛋白的相对分子质量为70000,经Western-blot鉴定为HSP70。 展开更多
关键词 快速蛋白液相色谱系统 肺癌组织 热休克蛋白70
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人肺癌组织中热休克蛋白70(HSP70)的纯化
9
作者 钟鸣 郭玉华 郁有祝 《安阳师范学院学报》 2007年第2期71-73,共3页
用快速蛋白液相色谱系统并结合ConA-Sepharose柱,建立了从人肺癌组织中分离纯化热休克蛋白70(HSP70)的方法,分离得到的蛋白经过聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法鉴定,结果表明该蛋白为HSP70;并且通过Brad-ford标准曲线法对蛋白进行定量,... 用快速蛋白液相色谱系统并结合ConA-Sepharose柱,建立了从人肺癌组织中分离纯化热休克蛋白70(HSP70)的方法,分离得到的蛋白经过聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法鉴定,结果表明该蛋白为HSP70;并且通过Brad-ford标准曲线法对蛋白进行定量,计算出HSP70的得率为:每克湿重肺癌组织可纯化得到约53.2μg HSP70。 展开更多
关键词 HSP70 快速蛋白液相色谱 蛋白纯化 肺癌组织
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KANSL1蛋白的真核表达纯化及功能验证
10
作者 温开清 李婷 +4 位作者 张亚昆 韩秋影 赵洁 潘欣 李腾 《军事医学》 CAS 北大核心 2019年第11期846-850,共5页
目的利用昆虫杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac)表达KANSL1蛋白并进行纯化,同时验证该蛋白在体外对微管蛋白聚合的影响。方法构建真核表达载体pFast-Bac-HTB-mCherry-KANSL1,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭质粒(Bacmid),用脂质... 目的利用昆虫杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac)表达KANSL1蛋白并进行纯化,同时验证该蛋白在体外对微管蛋白聚合的影响。方法构建真核表达载体pFast-Bac-HTB-mCherry-KANSL1,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭质粒(Bacmid),用脂质体转染介导Bacmid进入草地贪夜蛾细胞(Sf9 cell),以产生可表达目的基因的重组杆状病毒。随后用此重组杆状病毒感染并扩增Sf9细胞使其大量表达His-mCherry-KANSL1融合蛋白。通过镍柱亲和层析对表达的His-mCherry-KANSL1融合蛋白进行初步纯化,再经快速蛋白液相色谱(FPLC)进一步纯化,利用Western印迹、考马斯亮蓝染色鉴定目的蛋白的表达纯化效果,最后通过体外微管聚合实验分析纯化的KANSL1蛋白对微管蛋白聚合的影响。结果质粒测序显示,pFast-Bac-HTB-mCherry-KANSL1真核表达质粒构建成功;考马斯亮蓝染色、Western印迹表明纯化得到正确的His-mCherry-KANSL1蛋白,体外微管聚合实验显示KANSL1蛋白显著促进微管蛋白的聚合。结论成功构建pFast-Bac-HTB-mCherry-KANSL1真核表达质粒并在真核表达系统中表达和纯化,重组KANSL1蛋白具有促进微管聚合的作用,为后续KANSL1蛋白功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 KANSL1 杆状病毒表达系统 载体构建 真核表达 蛋白纯化 快速蛋白液相色谱
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一种实用高效的高纯氮气制备装置的介绍 被引量:1
11
作者 晋日亚 钟国晋 胡国胜 《陕西化工》 CSCD 1999年第3期38-39,共2页
着重介绍了用催化剂制备高纯氮气的新型装置,该装置可使普通氮气中氧的含量降到 5×10- 6 以下。
关键词 氮气 催化剂 制备装置
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快速蛋白质液相色谱法分离鉴定脱氧寡核苷酸片段
12
作者 唐惠炜 金由辛 朱德煦 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期438-440,共3页
由机器合成的反义核酸药物需要有效的纯度鉴定方法。用 M O N O Q 柱在 p H 12 时以 Na Cl的浓度梯度洗脱,可将 19 至 21 Nts 的小片段寡核苷酸很好分开。
关键词 寡聚脱氧核苷酸 反义核酸药物 寡核苷酸 LC 测定
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利用FPLC技术建立重组碱性蛋白酶的快速纯化方案
13
作者 唐雪明 沈微 +3 位作者 邵蔚蓝 王正祥 方惠英 诸葛健 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期11-14,共4页
在构建了以地衣芽孢杆菌为宿主的产碱性蛋白酶的工程菌BA0 71以后 ,为了给探索重组酶的性质及其稳定性奠定基础 ,利用快速蛋白液相层析 (FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸氨沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙... 在构建了以地衣芽孢杆菌为宿主的产碱性蛋白酶的工程菌BA0 71以后 ,为了给探索重组酶的性质及其稳定性奠定基础 ,利用快速蛋白液相层析 (FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸氨沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶 ,再经过CM Sephadex C 5 0、Sephadex G 75柱层析后较好地得到了单一组份的重组碱性蛋白酶 ,酶纯度提高了 76.2倍。SDS PAGE显示重组碱性蛋白酶分子质量为 2 8ku。 展开更多
关键词 FPLC技术 碱性蛋白酶 基因工程菌 快速蛋白液相层析 分离纯化
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源于大肠杆菌蛋白的表达、液相色谱复性与纯化新进展 被引量:9
14
作者 王骊丽 耿信笃 《中国科学(B辑)》 CSCD 北大核心 2009年第8期711-727,共17页
对近两年来源于大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)的蛋白表达和用蛋白折叠液相色谱(protein folding liquid chrom atography,PFLC)法对所形成的包涵体目标蛋白的复性并同时纯化的新近发展做了简要的介绍和评述.PFLC法用于包涵体蛋白... 对近两年来源于大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)的蛋白表达和用蛋白折叠液相色谱(protein folding liquid chrom atography,PFLC)法对所形成的包涵体目标蛋白的复性并同时纯化的新近发展做了简要的介绍和评述.PFLC法用于包涵体蛋白分离、纯化很广,其特点是除了在色谱柱上将目标蛋白与其他组分分开,还同时要在色谱柱上进行包涵体蛋白折叠.可以说,现代生物技术中所用的大多数有价值蛋白产品的制备仍然有赖于不同机理的液相色谱(LC)法.而用PFLC法对源于E.coli的蛋白的制备方法更具可塑性和容易达到规模化,其生成本可以成倍地降低.该文主要内容包括了E.coli蛋白的表达及样品前处理、PFLC的实用范围、PFLC的优化、PFLC中的新技术、新设备和新方法、PFLC的分子学机理、应用事例及对未来的展望. 展开更多
关键词 大肠杆菌 蛋白折叠液相色谱法 蛋白复性 蛋白纯化 液相色谱 生物工程
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A novel protein refolding method integrating ion exchange chromatography with artificial molecular chaperone 被引量:3
15
作者 Qin Ming Zhang Chao Zhan Wang Jiang Feng Liu Li Li Wang 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2008年第5期595-598,共4页
Artificial molecular chaperone (AMC) and ion exchange chromatography (IEC) were integrated, thus a new refolding method, artificial molecular chaperone-ion exchange chromatography (AMC-IEC) was developed. Compar... Artificial molecular chaperone (AMC) and ion exchange chromatography (IEC) were integrated, thus a new refolding method, artificial molecular chaperone-ion exchange chromatography (AMC-IEC) was developed. Compared with AMC and IEC, the activity recovery of lysozyme obtained by AMC-IEC was much higher in the investigated range of initial protein concentrations, and the results show that AMC-IEC is very efficient for protein refolding at high concentrations. When the initial concentration of lysozyme is 180 mg/mL, its activity recovery obtained by AMC-IEC is still as high as 76.6%, while the activity recoveries obtained by AMC and IEC are 45.6% and 42.4%, respectively. 展开更多
关键词 Artificial molecular chaperone Ion exchange chromatography protein refolding LYSOZYME protein folding liquid chromatography
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应用生物素标记与蛋白质组学方法分离鉴定弓形虫表面蛋白和分泌蛋白 被引量:10
16
作者 刘媛 薛峰 +2 位作者 黄敏君 甘绍伯 谷俊朝 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期6-11,共6页
目的分离和鉴定刚地弓形虫RH株速殖子表面蛋白和分泌蛋白。方法在绿猴肾Vero细胞株中体外培养弓形虫RH株速殖子,利用滤膜和Percoll细胞分离液分离纯化速殖子。将纯化的速殖子用生物素标记后,裂解虫体,采用亲和素凝胶珠分离生物素标记的... 目的分离和鉴定刚地弓形虫RH株速殖子表面蛋白和分泌蛋白。方法在绿猴肾Vero细胞株中体外培养弓形虫RH株速殖子,利用滤膜和Percoll细胞分离液分离纯化速殖子。将纯化的速殖子用生物素标记后,裂解虫体,采用亲和素凝胶珠分离生物素标记的弓形虫表面蛋白和分泌蛋白。对分离得到的蛋白进行浓缩和密度梯度凝胶电泳。将电泳条带分段切胶,回收蛋白后,酶切,应用液相色谱和两级质谱联用技术(LC-MS/MS)进行蛋白鉴定。结果共鉴定出785种弓形虫蛋白,其中81种为基因组注释的表面或分泌蛋白,占10.3%。785种蛋白中,检测到同一种蛋白多肽的次数(PSM值)>10的蛋白有65种,其中43种为基因组注释的表面蛋白或分泌蛋白,占66%,余22种为预测的未知蛋白。结论应用生物素标记和亲和素层析分离了弓形虫表面蛋白和分泌蛋白,并初步鉴定了一批潜在的弓形虫新表面蛋白和分泌蛋白。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 表面蛋白 分泌蛋白 生物素标记 液相色谱和两级质谱联用技术
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重组人干扰素-γ的制备与鉴定 被引量:3
17
作者 吴丹 高栋 +1 位作者 白泉 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期206-211,共6页
用聚乙二醇200疏水相互作用色谱固定相(PEG200-STHIC)分别在色谱柱和色谱饼上完成了一步复性并同时纯化来源于大肠杆菌(E.coli)表达的重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)。为了能使色谱分离方法用于不同来源的rhIFN-γ的纯化,对rhIFN-γ在反相... 用聚乙二醇200疏水相互作用色谱固定相(PEG200-STHIC)分别在色谱柱和色谱饼上完成了一步复性并同时纯化来源于大肠杆菌(E.coli)表达的重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)。为了能使色谱分离方法用于不同来源的rhIFN-γ的纯化,对rhIFN-γ在反相色谱、离子交换色谱、固定化镍离子亲和色谱上的保留行为也进行了研究。色谱柱纯化的rhIFN-γ收集液经排阻色谱除盐和冷冻干燥得到rhIFN-γ干粉。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对rhIFN-γ干粉进行了测定,rhIFN-γ单体的相对分子质量为17184.0,二聚体的相对分子质量为34204.4。用细胞病变抑制法(CPEI)测定rhIFN-γ干粉的比活性为9.5×108IU/mg。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定rhIFN-γ干粉的纯度高于95%。用色谱柱复性并同时纯化rhIFN-γ的质量回收率达到93.7%,纯度高于95%,比活性为4.3×107IU/mg。结果表明,采用PEG200-STHIC色谱柱复性并同时纯化rhIFN-γ是一种十分高效的方法。 展开更多
关键词 重组人干扰素-γ 蛋白折叠液相色谱法 高效疏水色谱 复性 纯化
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雪旺细胞分泌神经营养蛋白的提纯 被引量:5
18
作者 肖玉周 朱家恺 顾熊飞 《中华显微外科杂志》 CSCD 北大核心 1997年第1期28-31,共4页
目的:寻找出提纯神经营养蛋白的实用而有效的方法。方法:收集SD乳鼠周围神经的雪旺细胞无血清条件培养液,离心,将上清液超滤浓缩(PM10)收集分子量大于10KDa浓缩蛋白液,经SephadexG-75凝胶过滤获得三个蛋... 目的:寻找出提纯神经营养蛋白的实用而有效的方法。方法:收集SD乳鼠周围神经的雪旺细胞无血清条件培养液,离心,将上清液超滤浓缩(PM10)收集分子量大于10KDa浓缩蛋白液,经SephadexG-75凝胶过滤获得三个蛋白峰,经生物活性检测,证明洗脱Ⅱ峰液生物活性最大。将冼脱Ⅱ峰液再经PM10超滤膜浓缩收集浓缩蛋白液,分别用THK24、TTK24微型过滤器去除大于100KDa和小于30KDa蛋白,过分子筛高效液相色谱柱。结果:得到4个主要蛋白峰,前三峰蛋白分子量均超过150KDa,第四峰分子量为67KDa,经SDS-PAGE和银染色法进一步证实该蛋白分子量为67KDa,基本为单一蛋白带。结论:Sephadex凝胶过滤、多次超滤和分子筛高效液相色谱技术综合应用是纯化雪旺细胞源神经营养蛋白较好的方法。 展开更多
关键词 雪旺细胞 神经营养蛋白 高效液相色谱
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雪旺细胞浆神经营养蛋白高效液相分离纯化及其生物活性研究 被引量:4
19
作者 谢冈 朱家恺 顾熊飞 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 2000年第4期226-229,共4页
目的 分离纯化雪旺细胞浆神经营养蛋白并研究其生物活性。方法 取 30 0只出生后 1~ 3天SD大鼠双侧坐骨神经 ,纯化培养 ,收集雪旺细胞 ,超声粉碎 ,超速离心 ,不同孔径分子筛滤膜 (PM10、30、5 0 )超滤浓缩 ,收集分子量 10~ 30 ku,30... 目的 分离纯化雪旺细胞浆神经营养蛋白并研究其生物活性。方法 取 30 0只出生后 1~ 3天SD大鼠双侧坐骨神经 ,纯化培养 ,收集雪旺细胞 ,超声粉碎 ,超速离心 ,不同孔径分子筛滤膜 (PM10、30、5 0 )超滤浓缩 ,收集分子量 10~ 30 ku,30~ 5 0 ku和 >5 0 ku三种组份胞浆蛋白浓缩液 ,分别加入体外无血清培养的 E14SD胎鼠脊髓运动神经元培养液中 ,用 MTT酶标法检测证实 10~ 30 ku和 >5 0 ku两组份蛋白有神经营养活性。再通过Diol- 15 0高效液相分子层析进一步从雪旺细胞胞浆中纯化分离出分子量为 2 6 ku和 5 8ku两种胞浆蛋白 ,并对其神经生物活性进行研究。结果  2 6 ku和 5 8ku雪旺细胞胞浆蛋白能维持体外无血清培养的脊髓运动神经元存活 ,其最佳生物活性浓度为 2 0 ng/孔。结论 雪旺细胞胞浆内含有分子量为 2 6 ku和 5 展开更多
关键词 雪旺细胞 运动神经营养蛋白 周围神经损伤 HPLC
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流行性出血热病毒核蛋白的血凝位点研究
20
作者 王灵枢 倪大石 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1994年第2期130-133,共4页
流行性出血热病毒(EHFV)A9株鼠脑抗原,经A35McAb偶联于Sepharose4B制备的免疫吸附柱进行亲和层析纯化,并用高压液相色谱(HPLC)进一步纯化,获得了高纯度的病毒核衣壳蛋白(NP),其分子量为500... 流行性出血热病毒(EHFV)A9株鼠脑抗原,经A35McAb偶联于Sepharose4B制备的免疫吸附柱进行亲和层析纯化,并用高压液相色谱(HPLC)进一步纯化,获得了高纯度的病毒核衣壳蛋白(NP),其分子量为50000,经不同特性的McAb和EHF患者血清通过间接ELISA和Western-blot鉴定,证实为EHF病毒特异性的NP,且具有血凝活性。将HPLC纯化的NP免疫小鼠后,可诱导产生特异性血凝抑制抗体,但无中和抗体产生,由此证实EHF病毒(A9株)NP具有构型依赖性血凝活性结合位点。 展开更多
关键词 流行性出血热 病毒 核蛋白
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