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绿色荧光蛋白基因(gfp)在华癸中生根瘤菌与紫云英共生固氮作用研究中的应用 被引量:8
1
作者 周俊初 史巧娟 谢波 《中国科学基金》 CSCD 北大核心 2001年第5期302-305,共4页
绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)最初足从维多利亚多管水母(Aequoria victoria)中发现的发光蛋白[1]。天然GFP的生色团由65—67位Ser-Tyr-Gly的氨基酸残基组成,并经环化和脱氢形成一个咪唑环[2]。其最大激发峰为395nm,在47... 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)最初足从维多利亚多管水母(Aequoria victoria)中发现的发光蛋白[1]。天然GFP的生色团由65—67位Ser-Tyr-Gly的氨基酸残基组成,并经环化和脱氢形成一个咪唑环[2]。其最大激发峰为395nm,在475 nm处有一副激发峰,最大发射峰位于510nm。gfp作为一种新型的报告基因具有许多优越性:首先它分子量较小,只编码238个氨基酸的多肽。 展开更多
关键词 紫方英 共生 结瘤 固氮 基因表达 绿色荧光蛋白基因 华癸中生根瘤菌 启动子探针载体 原位监测 分子遗传学
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谷氨酸棒杆菌10147基因组中启动子活性片段的克隆与分析 被引量:8
2
作者 刘桂明 赵智 +2 位作者 张英姿 王宇 丁久元 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期972-977,共6页
【目的】获得谷氨酸棒杆菌10147基因组中具有启动子活性片段的结构序列,为构建表达载体做准备。【方法】利用启动子探测载体pAKC6,采用鸟枪法克隆经过限制性内切酶Sau3A I完全酶切的谷氨酸棒杆菌10147染色体DNA片段,并测定pAKC6上报告... 【目的】获得谷氨酸棒杆菌10147基因组中具有启动子活性片段的结构序列,为构建表达载体做准备。【方法】利用启动子探测载体pAKC6,采用鸟枪法克隆经过限制性内切酶Sau3A I完全酶切的谷氨酸棒杆菌10147染色体DNA片段,并测定pAKC6上报告基因编码的氯霉素乙酰转移酶(CAT)的比活力,以筛选有启动子功能的片段。【结果】共克隆到30个具有启动子功能的片段。其中有3个插入片段启动的氯霉素乙酰转移酶比活力大于24 U/mg,插入片段F57启动的CAT比活力为32.50 U/mg;而插入有启动子Ptrc的阳性对照的CAT比活力为26.33 U/mg。【结论】获得3个DNA插入片段具有与已知启动子Ptrc相当的启动活性,这些片段可以用于构建谷氨酸棒杆菌表达载体。 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 启动子探测载体 启动子 氯霉素乙酰转移酶
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粗毛栓菌(Trametes gallic)基因启动子的分离与鉴定 被引量:5
3
作者 胡敏珊 张义正 曾凡亚 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期340-344,共5页
粗毛栓菌 (Trametesgallic)总DNA经Sau3AI酶切后插入到启动子探针型载体pSUPV8的BamHI位点 ,在含氨苄青霉素与潮霉素双抗平板上筛选到 8个潮霉素抗性(Hygr)重组子 (命名为 pTP1~ 8) ,其插入片段大小为 0 .5~ 1.7kb ,抗性水平为 0 .15&... 粗毛栓菌 (Trametesgallic)总DNA经Sau3AI酶切后插入到启动子探针型载体pSUPV8的BamHI位点 ,在含氨苄青霉素与潮霉素双抗平板上筛选到 8个潮霉素抗性(Hygr)重组子 (命名为 pTP1~ 8) ,其插入片段大小为 0 .5~ 1.7kb ,抗性水平为 0 .15× 10 - 3 ~0 .35× 10 - 3 g/mL .对 pTP6进行酶切分析表明 ,插入片段中含有KpnI ,XbaI和SacI位点各一个 ,用限制酶SacI和XbaI去掉其 5’端 0 .7kb和 1.2kb片段后 ,其潮霉素抗性由 0 .2 5×10 - 3 g/mL均降为 0 .15× 10 - 3 g/mL .将TP5片段与粗毛栓菌总DNA进行Southern杂交 ,结果证明 ,TP5片段来源于粗毛栓菌总DNA .对片段TP5的 3’端进行序列分析 。 展开更多
关键词 粗毛栓菌 基因启动子 Hyg^r基因 启动子探针型载体 基因分基 基因表达 潮霉素抗性 序列分析
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酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)基因启动子的分离和鉴定 被引量:5
4
作者 赵玮 张义正 王焰玲 《真菌学报》 CSCD 北大核心 1995年第1期57-63,共7页
用启动子探针型载体pFR109从酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)总DNA中克隆到多个启动子片段,它们在大肠杆菌中均能启动β-半乳糖苷酶基因的表达。对其中Y8片段的进一步分析结果表明:该片段不仅来自酿酒酵母基因组,而且是以多拷贝的... 用启动子探针型载体pFR109从酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)总DNA中克隆到多个启动子片段,它们在大肠杆菌中均能启动β-半乳糖苷酶基因的表达。对其中Y8片段的进一步分析结果表明:该片段不仅来自酿酒酵母基因组,而且是以多拷贝的形式存在。当Y8片段再次转入供体酵母时,它仍能启动β-半乳糖苷酶基因表达,但经次克隆去掉Y8片段5′端部分顺序后,它就失去了启动子的功能。 展开更多
关键词 酵母 分离 鉴定 酿酒酵母 基因 启动子
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乳酸菌启动子探针载体的构建及其功能验证 被引量:4
5
作者 张维 姚璐 +2 位作者 张世湘 罗云波 郝彦玲 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2010年第11期4-6,29,共4页
以β-葡萄糖醛酸酶基因gusA作为报告基因,在乳酸菌表达载体pMG36e基础上,利用平滑化技术删除表达载体自带启动子P32,构建了乳酸菌启动子探针载体pMGPP。将已知的嗜酸乳杆菌S-layer蛋白基因启动子slpA插入到pMGPP无启动子的gusA基因上游... 以β-葡萄糖醛酸酶基因gusA作为报告基因,在乳酸菌表达载体pMG36e基础上,利用平滑化技术删除表达载体自带启动子P32,构建了乳酸菌启动子探针载体pMGPP。将已知的嗜酸乳杆菌S-layer蛋白基因启动子slpA插入到pMGPP无启动子的gusA基因上游验证其功能,GUS染色结果表明:pMGPP在大肠杆菌KW1和植物乳杆菌WQ0815中皆具有启动子探针载体的功能。因此,具有自主知识产权的启动子探针载体pMGPP的构建不仅为筛选乳酸菌启动子提供了有效的工具,同时为高效乳酸菌表达载体的构建奠定基础。 展开更多
关键词 乳酸菌 启动子探针载体 报告基因gusA 功能验证
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谷氨酸棒杆菌/大肠杆菌穿梭型启动子探测载体构建 被引量:3
6
作者 李开 赵智 +2 位作者 张英姿 王宇 丁久元 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期191-196,共6页
从质粒pXZ10145和pUC19出发,构建了一个谷氨酸棒杆菌/大肠杆菌穿梭载体pAK6。pAK6的大小为5684bp,带有卡那霉素和氨苄青霉素抗性选择标记,以及多克隆位点。在pAK6基础上,构建了以氯霉素乙酰转移酶为报告基因的启动子探测载体pAKC6,pAKC... 从质粒pXZ10145和pUC19出发,构建了一个谷氨酸棒杆菌/大肠杆菌穿梭载体pAK6。pAK6的大小为5684bp,带有卡那霉素和氨苄青霉素抗性选择标记,以及多克隆位点。在pAK6基础上,构建了以氯霉素乙酰转移酶为报告基因的启动子探测载体pAKC6,pAKC6的大小为6474bp。采用鸟枪法,将经Sau3AI消化的谷氨酸棒杆菌基因组片段连入pAKC6;根据谷氨酸棒杆菌对氯霉素的抗性,从中分离出两个具有启动子功能的插入片段。通过测定报告基因氯霉素乙酰转移酶的活性,对两个启动子片段在谷氨酸棒杆菌中的强度进行了初步的判断;测序后,用启动子预测软件对其结构进行了预测,证实了启动子序列的存在。 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 大肠杆菌 穿梭载体 启动子探测载体
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Application of Green Fluorescent Protein Gene (gfp) in the Symbiosis between Mesorhizobium Huakuii and Astragalus Sinicus 被引量:1
7
作者 Zhou Junchu Shi Qiaojuan Xie Bo(Huazhong Agricultural University, Key Laboratory of Agricultural Microbiology, Wuhan 430070) 《Science Foundation in China》 CAS 2002年第2期41-44,共4页
Green fluorescent protein (GFP) is a luminescent protein which was first discovered from A equoreavicto-ria[1]. The chromophore of wild type GFP consists of an imidazoione ring formed by cyclization of Ser65, dehydrat... Green fluorescent protein (GFP) is a luminescent protein which was first discovered from A equoreavicto-ria[1]. The chromophore of wild type GFP consists of an imidazoione ring formed by cyclization of Ser65, dehydrated Tyr66 and Gly67. GFP can emit 510 nm green fluorescence (Emmax = 510 nm) by 395 nm 展开更多
关键词 green FLUORESCENT protein gene (gfp) Mesorhizobiumhuakuii promoter-probe vector
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氧化葡萄糖酸杆菌启动子的筛选及鉴定 被引量:1
8
作者 肖苏珂 杨雪鹏 +1 位作者 魏东芝 林金萍 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期654-658,共5页
利用缺乏启动子的绿色荧光蛋白TFP作为报告基因,与广宿主型质粒pBBR1MCS-5相结合,构建了可在氧化葡萄糖酸杆菌中稳定存在的探针质粒pBBR1MCS5-TFP。利用构建的启动子探针质粒从氧化葡萄糖酸杆菌中分离到多个具有启动子功能的DNA片段——... 利用缺乏启动子的绿色荧光蛋白TFP作为报告基因,与广宿主型质粒pBBR1MCS-5相结合,构建了可在氧化葡萄糖酸杆菌中稳定存在的探针质粒pBBR1MCS5-TFP。利用构建的启动子探针质粒从氧化葡萄糖酸杆菌中分离到多个具有启动子功能的DNA片段——G12、G65、G69和G78,序列测定结果显示G12片段上具有典型的细菌启动子保守序列(-35和-10区)和核糖体结合位点(RBS),将其命名为Lhp启动子。鉴定Lhp在氧化葡萄糖酸杆菌中的启动活性,结果显示该启动子能有效启动异源基因绿色荧光蛋白以及NADH脱氢酶Ⅱ基因的表达。 展开更多
关键词 氧化葡萄糖酸杆菌 随机启动子库 启动子探针质粒 特征序列与功能
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Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中启动子P_(aziU1)的克隆及表达 被引量:1
9
作者 周俊 何璟 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期26-31,共6页
为鉴定和分析aziU1基因的启动子PaziU1,将该基因上游183bp的DNA片段和组成型强启动子PermE*(作为阳性对照)分别克隆到启动子探针载体pIJ8660中,以增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp)作为报告基因,通过检测菌丝体中绿色荧光的强弱,对PaziU1... 为鉴定和分析aziU1基因的启动子PaziU1,将该基因上游183bp的DNA片段和组成型强启动子PermE*(作为阳性对照)分别克隆到启动子探针载体pIJ8660中,以增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp)作为报告基因,通过检测菌丝体中绿色荧光的强弱,对PaziU1的启动子活性进行了定性和定量分析。PaziU1在3种不同的链霉菌Streptomyces sahachiroi、Streptomyces lividans ZX1和Streptomyces albus中均表现出启动子活性。PaziU1的启动子活性在初始培养的36h略低于PermE*,在培养48h后,PaziU1的表达活性高于PermE*。结果表明,Pazi U1与PermE*一样,是一个可以在链霉菌中组成型表达的强启动子。 展开更多
关键词 STREPTOMYCES sahachiroi ATCC 33158 PermE* 启动子探针载体 PaziU1 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 组成型强启动子
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麦迪霉素产生菌具有启动功能的DNA片段的克隆和分析 被引量:3
10
作者 金红 王以光 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第6期415-421,共7页
利用启动子探针质粒载体pIJ486从麦迪霉素产生菌总DNA中克隆得到了一段具有启动功能的DNA片段.通过限制性酶酶切分析,测定插入DNA片段大小为2.3kb.又利用载体pIJ486和pIJ487的新霉素抗性结构基因上游有多酶切点方向相反的性质,分析了插... 利用启动子探针质粒载体pIJ486从麦迪霉素产生菌总DNA中克隆得到了一段具有启动功能的DNA片段.通过限制性酶酶切分析,测定插入DNA片段大小为2.3kb.又利用载体pIJ486和pIJ487的新霉素抗性结构基因上游有多酶切点方向相反的性质,分析了插入片段在两个不同方向上的启动能力.结果表明,在两个方向上均有启动功能,但强弱相差六倍.其中在XbaI-HindIII方向上具有较强的启动能力,在变铅青链霉菌中新霉素抗性水平可达20mg/ml以上.进一步对插入片段的三个BamHI小片段进行分析的结果表明,较强启动子区域集中在BamHI-BamHI 0.79kb DNA片段上. 展开更多
关键词 链霉菌 启动子 麦迪霉素产生菌 DNA 生物技术
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黄孢原毛平革菌基因启动子的分离与鉴定 被引量:8
11
作者 李维 张义正 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期599-602,共4页
利用启动子探针型载体 pSUPV8直接在大肠杆菌 (Escherichiacoli)中分离黄孢原毛平革菌 (Phanerochaetechrysosporium)基因启动子片段 ,获得 6个潮霉素抗性 (Hygr)重组子。对重组子CH2、CH6进行序列分析 ,结果发现它们都存在真核生物基... 利用启动子探针型载体 pSUPV8直接在大肠杆菌 (Escherichiacoli)中分离黄孢原毛平革菌 (Phanerochaetechrysosporium)基因启动子片段 ,获得 6个潮霉素抗性 (Hygr)重组子。对重组子CH2、CH6进行序列分析 ,结果发现它们都存在真核生物基因启动子的保守序列 ;用原生质体转化法将其转化黄孢原毛平革菌 ,仅 pCH6获得了潮霉素抗性转化子 ;PCR和斑点杂交分析表明 ,pCH6已成功导入黄孢原毛平革菌 ,并启动潮霉素抗性基因的表达。 展开更多
关键词 黄孢原毛平革菌 启动子 分离 鉴定 基因表达
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嗜热脂肪芽孢杆菌启动子克隆载体pFDC4和表达型载体pFDC11的构建 被引量:3
12
作者 何笑松 沈仁权 盛祖嘉 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1990年第4期313-320,共8页
以pPL703的衍生质粒pPGV5为载体,从嗜热脂肪芽孢杆菌CU21总DNA的Sau 3A酶切产物中得到1个0.54kb的启动子片段,它能促进载体上的无启动子的cat-86基因在嗜热脂肪芽孢杆菌及枯草芽孢杆菌中表达。这一片段以正、反向插入pPGV5载体,都能使... 以pPL703的衍生质粒pPGV5为载体,从嗜热脂肪芽孢杆菌CU21总DNA的Sau 3A酶切产物中得到1个0.54kb的启动子片段,它能促进载体上的无启动子的cat-86基因在嗜热脂肪芽孢杆菌及枯草芽孢杆菌中表达。这一片段以正、反向插入pPGV5载体,都能使重组质粒转化CU21原生质体的效率提高10^(?)至10(?)倍。Southern杂交实验表明,这一启动子片段与Imanaka等报道的来自CU21中的隐蔽性质粒pBS02的能提高转化效率的1.6kb Eco RI片段是同源的。利用所得到的0.54kb Sau 3A片段构建了新的启动子克隆载体pFDC4和表达型载体pFDC11,二者都能以很高的效率转化CU21原生质体。 展开更多
关键词 嗜热脂肪杆菌 原生质体转化 载体
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鸟枪法筛选枯草芽孢杆菌基因强启动子及对黄牛GHRL基因的表达 被引量:4
13
作者 张爱玲 张丽 +2 位作者 杨明明 张良志 陈宏 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期92-96,共5页
利用鸟枪法通过大肠埃希菌-枯草芽孢杆菌启动子探针载体分离到枯草芽孢杆菌168菌株的103个基因启动子片段,发现1个672 bp的启动子片段P3.4.23,能够在大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌高效启动报告基因β-半乳糖苷酶的表达,其酶活性分别达到3 41... 利用鸟枪法通过大肠埃希菌-枯草芽孢杆菌启动子探针载体分离到枯草芽孢杆菌168菌株的103个基因启动子片段,发现1个672 bp的启动子片段P3.4.23,能够在大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌高效启动报告基因β-半乳糖苷酶的表达,其酶活性分别达到3 418、2 877 U/mL.相似性分析表明P3.4.23启动子片段具有枯草芽孢杆菌基因启动子的保守序列,并确定其转录活性区域位于5~333 bp,为yxiE基因的调控序列.将黄牛GHRL基因导入到启动子亚克隆序列下游,使该基因在枯草芽孢杆菌中得到了表达. 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 大肠埃希菌 启动子探针载体 GHRL基因 鸟枪法
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低温菌启动子探针质粒的构建 被引量:3
14
作者 魏云林 林连兵 +1 位作者 季秀玲 井申荣 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期530-534,共5页
为了在宿主菌Acinetobacter sp.DWC6中构建低温菌蛋白表达载体,以pBR322质粒为基础,去除质粒上β-内酰胺酶基因的启动子片段,取而代之为来源于质粒pJRD215的卡那霉素抗性基因片段,并在pBR322中插入Acinetobacter菌属特异性ori的DNA片段... 为了在宿主菌Acinetobacter sp.DWC6中构建低温菌蛋白表达载体,以pBR322质粒为基础,去除质粒上β-内酰胺酶基因的启动子片段,取而代之为来源于质粒pJRD215的卡那霉素抗性基因片段,并在pBR322中插入Acinetobacter菌属特异性ori的DNA片段,构建了能在Acinetobacter sp.DWC6和E.coli中正常复制的启动子探针质粒pBAP1。通过在质粒pBAP1中的β-内酰胺酶基因上游随机导入Acinetobacter sp.DWC6基因组片段,通过检测宿主细胞的氨苄青霉素抗性和β-内酰胺酶活性,来筛选强启动子片段,并分析了启动子探针质粒载体的功能及启动子的强度。 展开更多
关键词 低温菌 启动子探针质粒载体 Β-内酰胺酶
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在大肠杆菌中直接克隆白腐丝状真菌-黄孢平革菌(Phanerochaete chrysosporium)基因启动子 被引量:1
15
作者 宋旭 曾凡亚 张义正 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期940-946,共7页
利用启动子探钍型载体pSUPV4 直接在大肠杆菌细胞中克隆到多个来自白腐丝状真菌-黄孢平革菌(Phanerochaete chrysosporium )的基因启动子片段.这些基因启动子片段能在大肠杆菌细胞中启动重组卡那... 利用启动子探钍型载体pSUPV4 直接在大肠杆菌细胞中克隆到多个来自白腐丝状真菌-黄孢平革菌(Phanerochaete chrysosporium )的基因启动子片段.这些基因启动子片段能在大肠杆菌细胞中启动重组卡那霉素抗性基因(rkanr)的表达,不同片段赋予宿主细胞以不同的卡那霉素抗性水平,最高的可达1000μg/m L,最低的则为50μg/m L.琼脂糖凝胶电泳显示这些重组质粒DNA 中均有不同大小的插入片段,其范围是0.5~6.0kb.选取一个插入3.9kb 的重组质粒pPC33 所作的Southern 杂交结果表明,插入片段以单拷贝形式存在于P.chrysosporium 的基因组中.当此片段5′-端被除去1.8kb 后,余下的2.1kb 片段可使融合的Kanr 基因的表达效率提高60% . 展开更多
关键词 黄孢平革菌 基因启动子 大肠杆菌 克隆 真菌
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大肠杆菌-分枝杆菌启动子探针型穿梭载体pEQ3的构建
16
作者 徐恒 邱薇 +2 位作者 沈斌 吴峰 刘世贵 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期349-353,共5页
报道了大肠杆菌分枝杆菌启动子探针型(PromoterProbe)穿梭质粒pEQ3的构建过程.证明其保留了在大肠杆菌和分枝杆菌之间的穿梭功能,并具有启动子筛选功能.利用构建的PEQ3质粒。
关键词 卡介苗 启动子 穿梭质粒 大肠杆菌 分枝杆菌
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利用桥梁载体策略构建水稻条斑病菌T3SS基因诱导表达检测体系 被引量:1
17
作者 吾尼尔别克·美丽 杨小菲 +6 位作者 张翠萍 杨瑞环 李生樟 李逸朗 陈功友 陈晓斌 邹丽芳 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期846-856,共11页
水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)侵染水稻,引起细菌性条斑病(bacterial leaf streak,BLS)。Xoc主要依靠hrp基因簇(T3SS基因)编码的III型分泌系统(type III secretion system,T3SS)将效应蛋白注入水稻细胞中,激发寄... 水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)侵染水稻,引起细菌性条斑病(bacterial leaf streak,BLS)。Xoc主要依靠hrp基因簇(T3SS基因)编码的III型分泌系统(type III secretion system,T3SS)将效应蛋白注入水稻细胞中,激发寄主水稻的感(抗)病性。为了准确在Xoc中进行T3SS基因表达调控的分析,本研究设计出桥梁载体策略,将目标基因的启动子或者功能片段构建在高拷贝的桥梁载体,获得融合表达元件,通过亚克隆的方式将融合元件转入骨架载体上,获得用于转录表达和蛋白表达分析的载体。为了验证该策略的可行性,选取hrpG、hrpX和hrcC基因构建了相应的启动子探针载体和蛋白表达载体,将这些载体导入毒性调控子基因trh、lrpX和zur的突变体中,GUS活性测定、荧光定量PCR以及蛋白免疫杂交结果显示:在trh、lrpX和zur的突变体中,hrpG、hrpX和hrcC的转录表达水平、mRNA水平和蛋白表达水平呈现一致。这表明这套桥梁载体策略能够有效应用于T3SS基因转录表达和蛋白表达的分析。综上所述,运用桥梁载体能够克服低拷贝载体DNA遗传操作效率低的缺陷,这一策略也适用于毒性相关基因调控机理的研究,这将为Xoc-水稻互作研究提供高效的工作系统。 展开更多
关键词 水稻条斑病菌 T3SS基因 启动子探针载体 蛋白表达载体
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一个假单胞菌MY1402基因启动子的分离与鉴定
18
作者 冯强 张琦 +2 位作者 林连兵 季秀玲 魏云林 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期246-253,共8页
利用构建的启动子探针载体pUE,以大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α作为宿主菌,从耐低温假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株MY1402分离基因启动子片段,获得7个具有不同大小的启动子功能片段的重组子,命名为pUE1~pUE7.将其中具有p1片段的重组... 利用构建的启动子探针载体pUE,以大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α作为宿主菌,从耐低温假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株MY1402分离基因启动子片段,获得7个具有不同大小的启动子功能片段的重组子,命名为pUE1~pUE7.将其中具有p1片段的重组子PUE1导入假单胞菌MY1402中进行卡那霉素耐受浓度分析,结果显示阳性转化子MY1402/pUE1的最高耐受浓度为250 mg/L,而且在相同抗生素浓度下培养温度从28℃降到15℃并不影响转化子MY1402/pUE1的生长,表明pUE1中的插入片段p1具有低温启动子的活性.将所预测的p1核心序列p1a通过化学合成并连接到探针载体pUE上,构建出重组质粒pUE1a并转化MY4102中进行功能分析.结果显示,28℃条件下p1a片段仍保持相同强度的启动子活性,但15℃条件下活性下降明显,卡那霉素质量浓度高于100 mg/L基本没活性,表明p1a两端序列可能与p1低温转录启动活性有关. 展开更多
关键词 假单胞菌 启动子探针质粒 卡那霉素抗性基因 启动子活性 低温
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模块化质粒系统用于水稻条斑病菌基因表达的分析
19
作者 杨小菲 李逸朗 +7 位作者 吾尼尔别克·美丽 张翠萍 杨瑞环 李生樟 李映斌 陈晓斌 陈功友 邹丽芳 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2019年第3期77-86,94,共11页
水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)侵染水稻,引起细菌性条斑病(bacterial leaf streak,BLS)。近几年,在我国南方水稻产区,条斑病大面积发生,对水稻的安全生产构成严重威胁。为了准确地在Xoc中进行基因功能的分析,本研... 水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)侵染水稻,引起细菌性条斑病(bacterial leaf streak,BLS)。近几年,在我国南方水稻产区,条斑病大面积发生,对水稻的安全生产构成严重威胁。为了准确地在Xoc中进行基因功能的分析,本研究设计出模块化的质粒系统,用于基因转录表达和蛋白表达的分析。为了验证该系统的可行性,选取hrpG、hrpX和hrpB1基因构建了相应的启动子载体和蛋白表达载体,将这些载体导入相应的hrp调控子基因trh、hrpG和hrpX的突变体中。GUS活性测定的结果显示,在XOM3培养基、寄主水稻组织和非寄主烟草组织中,启动子模块元件能够准确反映这3个hrp基因的调控表达模式。蛋白免疫杂交结果显示,HrpX蛋白表达水平反映的调控模式与hrpX启动子活性呈现的调控表达模式一致。水稻上致病性测定结果显示,有效表达的HrpG蛋白能够恢复hrpG突变体在寄主水稻上的致病性。这表明,这套模块化的载体系统能够有效应用于基因转录表达、蛋白表达和功能互补的分析。这将为Xoc-水稻互作研究提供有效的技术支持,加快Xoc毒性相关基因功能的研究。 展开更多
关键词 水稻条斑病菌 HRP基因 启动子探针载体 蛋白表达载体
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米根霉AS 3.819基因启动子片段的克隆及功能鉴定
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作者 张旻 姜绍通 +4 位作者 郑志 潘丽军 李兴江 罗水忠 吴学凤 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第7期71-78,共8页
从L-乳酸生产菌米根霉(Rhizopus oryzae)菌株AS 3.819基因组DNA中分别扩增得到了乳酸脱氢酶基因(ldh A)、丙酮酸脱氢酶基因(pdc A)、淀粉糖化酶基因(amy A)以及磷酸甘油酸酯激酶基因(pgk1)的启动子片段,并构建启动子探针载体p UKMR,以β... 从L-乳酸生产菌米根霉(Rhizopus oryzae)菌株AS 3.819基因组DNA中分别扩增得到了乳酸脱氢酶基因(ldh A)、丙酮酸脱氢酶基因(pdc A)、淀粉糖化酶基因(amy A)以及磷酸甘油酸酯激酶基因(pgk1)的启动子片段,并构建启动子探针载体p UKMR,以β-内酰胺酶基因(bla)为报告基因在大肠杆菌JM109中对这些启动子片段进行筛选及启动活性检测。结果表明:4种启动子片段成功启动报告基因表达;在非底物诱导情况下,ldh A和pgk1启动子启动活性较强;在有合适碳源底物诱导情况下pdc A和amy A启动子拥有更高的启动活性;ldh A基因的启动子启动活性随着启动子片段长度的增加有一定提高,而在长度为500 bp以上时,其启动活性变化不明显。本研究为Rhizopus oryzae提供了一种快速简便的启动子捕获分离及启动活性检测方法。 展开更多
关键词 米根霉 大肠杆菌 启动子探针载体 Β-内酰胺酶 乳酸脱氢酶
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