期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到8,507篇文章
< 1 2 … 250 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
一个新的白血病相关基因LRP16全长cDNA的克隆、序列分析及表达特征 被引量：60
1
作者 韩为东 于力 +5 位作者 楼方定 王全顺 赵瑜 史子江 焦宏远 周建军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期209-214,共6页
克隆一个与白血病复发相关基因 (LRP1 6)的全长 c DNA序列 ,对其进行染色体定位、组织表达谱分析 ,并对该基因编码蛋白质进行原核表达 .首先用获得的一段 3kb DNA片段在 NCBI提供的 h ESTs数据库中进行电子杂交并对重叠克隆片段组装 ,... 克隆一个与白血病复发相关基因 (LRP1 6)的全长 c DNA序列 ,对其进行染色体定位、组织表达谱分析 ,并对该基因编码蛋白质进行原核表达 .首先用获得的一段 3kb DNA片段在 NCBI提供的 h ESTs数据库中进行电子杂交并对重叠克隆片段组装 ,再设计引物进行 c DNA末端快速扩增(RACE技术 ) .采用 Northern印迹方法进行组织表达分析 .以高通量基因组序列 (HTGS)数据库为基础进行染色体定位 .对构建的克隆菌用 IPTG诱导重组蛋白表达后进行 SDS- PAGE,同时对重组体测序确证 .钓取了该基因全长 c DNA、推导所编码的氨基酸序列 ,并将该基因定位于染色体1 1 q1 2 .2 .原核表达筛选获得了该基因重组子的一个缺失体 .对 LRP1 6基因全长 c DNA的序列分析提示 ,该基因可能编码两种 N端不同的蛋白质 ,且该基因的转录本可能存在一种丰度较低的剪接体 . 展开更多
关键词 白血病 相关基因 LRP16 重组蛋白 原核表达 CDNA 克隆 序列分析
下载PDF
PRRSV BJ-4株ORF5基因的原核表达与重组蛋白的纯化 被引量：36
2
作者 谷红 杨汉春 +1 位作者 郭鑫 陈艳红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期64-69,共6页
为成功表达猪繁殖与综合征病毒(PRRSV)结构蛋白GP5,通过PCR方法从重组质粒pGEM ORF5扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF5(deletingORF5)。将dORF5克隆至原核高效表达载体pGEX 4T 2,在E.coliBL21细胞中成功表达了重组蛋白GST dORF5,... 为成功表达猪繁殖与综合征病毒(PRRSV)结构蛋白GP5,通过PCR方法从重组质粒pGEM ORF5扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF5(deletingORF5)。将dORF5克隆至原核高效表达载体pGEX 4T 2,在E.coliBL21细胞中成功表达了重组蛋白GST dORF5,表达产物以包涵体的形式存在,表达量为20 8%。Western Blot结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。利用融合肽进行亲和层析得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究PRRS病毒结构蛋白的结构和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 PRRSV BJ-4株 ORF5基因 原核表达 重组蛋白 分离纯化 猪 繁殖与呼吸综合症
下载PDF
大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒ORF2片段的聚合现象研究 被引量：37
3
作者 李少伟 张军 +5 位作者 何志强 葛胜祥 顾颖 林鉴 刘如石 夏宁邵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期463-467,共5页
在大肠杆菌中表达了戊型肝炎病毒 (HEV)ORF2的a .a .394～a .a .6 0 4片段 ,得到的重组蛋白NE2在SDS PAGE中主要以可被尿素解聚的二聚体形式存在 ,二聚体对病人血清的反应性明显强于单体 ;质谱分析表明NE2可形成从二聚体到至少六聚体的... 在大肠杆菌中表达了戊型肝炎病毒 (HEV)ORF2的a .a .394～a .a .6 0 4片段 ,得到的重组蛋白NE2在SDS PAGE中主要以可被尿素解聚的二聚体形式存在 ,二聚体对病人血清的反应性明显强于单体 ;质谱分析表明NE2可形成从二聚体到至少六聚体的多种聚体 ;动态光散射测定表明平均分子半径约 4nm ,相当于四聚体 ,但分散度较大 ,提示为多种大小不一的聚合体的混合物。这些证据表明NE2蛋白可形成以同源二聚体为基本单位的多种聚合体形式 ,其中以二聚体间的结合最为紧密 ,并且以二聚体为基础可进一步装配出多种更高级结构 ,从而具有作为HEV疫苗及诊断试剂抗原的良好前景。 展开更多
关键词 大肠杆菌 表达 戊型肝炎病毒ORF2片段 聚合现象 组装 二聚体 原核表达
下载PDF
猪γ干扰素的基因克隆、改造、表达及活性测定 被引量：32
4
作者 曹瑞兵 周斌 +1 位作者 陈德胜 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期71-75,共5页
提取经ConA诱导培养的猪外周血白细胞总RNA ,RT -PCR扩增出猪IFN -γ基因并克隆到pGEM -T -easy载体 ,测序结果表明扩增片段是含有信号肽的猪IFN -γ的完整基因。设计 1对引物亚克隆猪IFN -γ成熟蛋白基因并对其5′端前 2个稀有密码子... 提取经ConA诱导培养的猪外周血白细胞总RNA ,RT -PCR扩增出猪IFN -γ基因并克隆到pGEM -T -easy载体 ,测序结果表明扩增片段是含有信号肽的猪IFN -γ的完整基因。设计 1对引物亚克隆猪IFN -γ成熟蛋白基因并对其5′端前 2个稀有密码子进行大肠杆菌偏嗜性改造。经测序鉴定后插入原核表达载体pRLC ,并实现在大肠杆菌中的高效表达。表达产物以包涵体形式存在 ,经 7mol·L-1盐酸胍的变性液溶解及 0 5mol·L-1盐酸胍复性液复性处理 ,表达产物进行脱盐、凝胶层析纯化。细胞病变抑制法测定结果表明 ,重组猪IFN -γ具有较高的干扰素活性 ,约为 4 5× 10 6U·mg-1。 展开更多
关键词 猪Γ干扰素 基因克隆 基因改造 基因表达 活性 细胞病变抑制法
下载PDF
耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达 被引量：29
5
作者 李金明 宋如俊 +1 位作者 王露楠 邓巍 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期86-88,共3页
目的　为耐核糖核酸酶 (RNase)的RNA标准品和质控品的表达制备提供 1个通用载体平台。方法　将MS2 噬菌体基因组中成熟酶蛋白和包膜蛋白基因编码序列的 1 7kbcDNA目的片段 ,用HindⅢ和EcoRⅠ酶切后 ,用于相同内切酶酶切的表达载体质粒pE... 目的　为耐核糖核酸酶 (RNase)的RNA标准品和质控品的表达制备提供 1个通用载体平台。方法　将MS2 噬菌体基因组中成熟酶蛋白和包膜蛋白基因编码序列的 1 7kbcDNA目的片段 ,用HindⅢ和EcoRⅠ酶切后 ,用于相同内切酶酶切的表达载体质粒pET2 8b中 ,并在T4 DNA连接酶的存在下连接 ,构建一新的表达载体pINCCL ,再转化BL2 1 DE3E Coli进行原核表达。结果　成功构建出新的表达载体pINCCL ,经原核表达为耐RNase的病毒样颗粒。结论　本研究得到的pINCCL表达载体及原核表达系统 ,可作为 1个耐RNase的RNA标准品与质控品的构建和制备表达通用载体平台 ,以促进有关标准品和质控品的研究。 展开更多
关键词 核糖核酸 噬菌体 核糖核酸酶类 原核表达
原文传递
大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒ORF2多肽对恒河猴的免疫保护研究 被引量：22
6
作者 葛胜祥 张军 +3 位作者 黄果勇 逄淑强 周开姣 夏宁邵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期35-42,共8页
在大肠杆菌中表达的一段戊型肝炎病毒 (HEV)结构蛋白NE2 ,纯化后以弗氏佐剂 ,按0d ,1 0d ,30d的方案 1 0 μg 针的剂量免疫 3只恒河猴 ,在第 2周抗体阳转 ,第 6周时 1只滴度达 1∶1 0 0 0 0 0 ,另 2只滴度 1∶2 0 0 0 0 ,此时以 1 0 6PC... 在大肠杆菌中表达的一段戊型肝炎病毒 (HEV)结构蛋白NE2 ,纯化后以弗氏佐剂 ,按0d ,1 0d ,30d的方案 1 0 μg 针的剂量免疫 3只恒河猴 ,在第 2周抗体阳转 ,第 6周时 1只滴度达 1∶1 0 0 0 0 0 ,另 2只滴度 1∶2 0 0 0 0 ,此时以 1 0 6PCR滴度的HEV病毒粪悬液攻击。对照组 3只均出现血清转氨酶 (ALT)升高 ,抗体阳转 ,粪便持续排毒 1月以上 ;疫苗组无一发病 ,未检出非疫苗来源的抗体 ,其中 1只始终未检出粪便排毒 ,另 2只仅出现短暂排毒。以一份NE2免疫后猴血清 (滴度 1∶2 0 0 0 0 )与 1 0 3PCR滴度的病毒混匀后感染 2只恒河猴 ,结果对照组 2只均持续排毒 3周以上 ,抗体阳转 ,1只ALT明显升高 ;而抗体中和组 2只猴始终未检出粪便排毒 ,抗NE2抗体缓慢下降 ,ALT正常。这些结果表明NE2具有良好的免疫原性和免疫保护性 ,有可能成为有效的戊肝疫苗。 展开更多
关键词 大肠杆菌 基因表达 戊型肝炎病毒 ORF2多肽 恒河猴 免疫保护
下载PDF
H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因的原核表达及间接ELISA方法的初步建立 被引量：21
7
作者 郑其升 张晓勇 +2 位作者 刘华雷 李鹏 陈溥言 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期58-61,共4页
根据GenBank公布的H5N1亚型禽流感病毒 (AIV)血凝素 (HA)基因序列设计引物 ,用PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒HA1基因 ,将该片段定向插入到原核表达载体pET_32a(+)中 ,构建原核表达载体pET_HA1。阳性质粒转化宿主菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱... 根据GenBank公布的H5N1亚型禽流感病毒 (AIV)血凝素 (HA)基因序列设计引物 ,用PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒HA1基因 ,将该片段定向插入到原核表达载体pET_32a(+)中 ,构建原核表达载体pET_HA1。阳性质粒转化宿主菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导 ,HA1基因获得表达 ,重组蛋白以包涵体的形式存在。通过改变IPTG的浓度和诱导时间 ,确定了表达HA1基因的最佳诱导条件 :IPTG终浓度为 0 8mmol L ,诱导时间为 3h。Westernblot分析表明表达产物具有良好的免疫学活性。以纯化的表达产物作为诊断抗原建立了检测H5亚型AIV抗体的iHA_ELISA方法。结果表明 ,抗原的最佳包被浓度为 4 μg mL ,血清的最佳稀释度为 1∶2 0 0 ,阳性标准初步定为 :OD待检血清>0 5 ,且OD待检血清 OD阴性血清 >2。 展开更多
关键词 H5N1亚型禽流感病毒 血凝素基因 原核表达 iHA—ELISA
下载PDF
重组人CK2β亚基的原核表达、纯化与鉴定 被引量：29
8
作者 刘新光 梁念慈 马涧泉 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第2期201-205,共5页
将构建成功的人蛋白激酶CK2 β亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下表达 .表达蛋白大多数以不溶形式存在 .6L (约 10 2g)表达菌抽提得到约 2 0mg的可溶性表达产物 ,通过P11磷酸纤维素一步层析分离 ,得到 6 8mg... 将构建成功的人蛋白激酶CK2 β亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下表达 .表达蛋白大多数以不溶形式存在 .6L (约 10 2g)表达菌抽提得到约 2 0mg的可溶性表达产物 ,通过P11磷酸纤维素一步层析分离 ,得到 6 8mg纯化蛋白 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化的蛋白为一分子质量2 6ku的单一蛋白带 .蛋白质印迹结果证明 :纯化的表达产物与抗人CK2 β抗体可发生特异性免疫反应 .CK2 β亚基对CK2α有激活作用 ,纯化的CK2α和β亚基在等摩尔混合时即可组成有最大生物活性的全酶 .实验结果有力地证明了克隆表达与纯化的重组蛋白是人蛋白激酶CK2 β亚基 . 展开更多
关键词 人蛋白激酶 CK2β亚基 蛋白质纯化 基因表达
下载PDF
非洲猪瘟病毒p30基因的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：29
9
作者 吴竞 王西西 +2 位作者 吴映彤 任肖 郭晓宇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第12期3555-3562,共8页
为建立检测血清中非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的间接ELISA方法,本试验将ASFVp30基因进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blotting方法对重组蛋白进行表达鉴定和免疫原性分析,随后以纯化的重组蛋白为包被抗原,经... 为建立检测血清中非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的间接ELISA方法,本试验将ASFVp30基因进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blotting方法对重组蛋白进行表达鉴定和免疫原性分析,随后以纯化的重组蛋白为包被抗原,经条件优化、特异性试验、敏感性试验和重复性试验,建立一种血清中ASFV抗体的检测方法。结果显示,ASFVp30基因成功克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得pET-32a-p30重组质粒;转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,得到P30重组蛋白,重组蛋白大小约为42ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果显示,纯化后的蛋白具有良好的免疫原性;以纯化的P30重组蛋白为包被抗原,建立了检测ASFV抗体的间接ELISA方法,通过方阵试验对间接ELISA方法进行优化,最终确定了抗原最佳包被浓度为1.2μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,最佳封闭液为1%BSA,酶标抗体最佳稀释度为1∶4 000,以此建立的ASFV间接ELISA方法临界值为0.322。本方法仅与ASFV阳性血清发生特异性反应,与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型及猪流行性腹泻病毒阳性血清均无交叉反应,具有较强的特异性。该方法检测ASFV阳性血清灵敏度可达到1∶1 600;批内重复性和批间重复性变异系数均<10%。本试验建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可初步应用于ASFV抗体的检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟(ASFV) P30基因 原核表达 重组蛋白 间接ELISA
下载PDF
棉花4-香豆酸辅酶A连接酶基因克隆及原核表达 被引量：28
10
作者 倪志勇 王娟 +3 位作者 吕萌 李波 白岩 范玲 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期429-436,共8页
本研究从棉花中克隆了一个4CL基因,命名为Gh4CL2(GenBank登录号为FJ848870)。研究结果表明:Gh4CL2基因cDNA全长2332bp,具有一个1725bp的开放阅读框,5′非编码区为64bp,3′非编码区为543bp,编码574个氨基酸,预测分子量约为62.106kD,等电... 本研究从棉花中克隆了一个4CL基因,命名为Gh4CL2(GenBank登录号为FJ848870)。研究结果表明:Gh4CL2基因cDNA全长2332bp,具有一个1725bp的开放阅读框,5′非编码区为64bp,3′非编码区为543bp,编码574个氨基酸,预测分子量约为62.106kD,等电点为5.94。氨基酸同源性分析发现,Gh4CL2与来自白杨、大豆和紫草的4CL一致性较高。进一步研究Gh4CL2基因的功能,构建了该基因的原核表达载体pET-28a-4CL2,经酶切鉴定后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。SDS-PAGE分析表明,最佳诱导表达条件为0.5mmol/LIPTG在37℃下诱导4h,重组蛋白主要以包涵体形式出现。 展开更多
关键词 棉花 4-香豆酸辅酶A连接酶 基因克隆 原核表达
下载PDF
促进原核表达蛋白可溶性的研究进展 被引量：28
11
作者 张磊 唐永凯 +4 位作者 李红霞 李建林 徐逾鑫 李迎宾 俞菊华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期138-149,共12页
以大肠杆菌为代表的原核表达蛋白系统具有操作简单、周期短、成本低、表达量高等优点而成为获得外源表达蛋白的首选方案。但外源蛋白在原核宿主中往往以无生物活性的包涵体形式存在,这限制了原核表达系统的广泛应用。随着对蛋白折叠动... 以大肠杆菌为代表的原核表达蛋白系统具有操作简单、周期短、成本低、表达量高等优点而成为获得外源表达蛋白的首选方案。但外源蛋白在原核宿主中往往以无生物活性的包涵体形式存在,这限制了原核表达系统的广泛应用。随着对蛋白折叠动力学、参与蛋白折叠的酶和分子伴侣等认识的不断深入,科学家们通过诱导条件优化、宿主细胞改造以及使用融合标签等手段,在促进原核表达蛋白可溶性方面取得了较大的进展。就这些研究进展进行综述,旨在为设计和获得原核可溶表达蛋白的实验方案提供参考。 展开更多
关键词 原核表达 可溶性 蛋白折叠酶 分子伴侣 融合标签
原文传递
猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区编码基因的原核表达及其单克隆抗体的制备 被引量：26
12
作者 侯强 彭伍平 +1 位作者 孙元 仇华吉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期1-5,共5页
利用RT-PCR扩增了猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗株(C株)的E2蛋白主要抗原区(tE2)编码区,并定向克隆到表达载体pPROEX-HTb中,获得重组表达载体pPROEX-tE2,将其转化大肠杆菌DH5α菌株,经IPTG诱导,tE2蛋白获得高效表达;经检测,该重组蛋白能被... 利用RT-PCR扩增了猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗株(C株)的E2蛋白主要抗原区(tE2)编码区,并定向克隆到表达载体pPROEX-HTb中,获得重组表达载体pPROEX-tE2,将其转化大肠杆菌DH5α菌株,经IPTG诱导,tE2蛋白获得高效表达;经检测,该重组蛋白能被CSFV C株抗血清识别。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了1株稳定分泌抗tE2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经检测,该单克隆抗体能够与CSFV C株和石门株以及杆状病毒表达的重组E2蛋白发生特异性反应。推测,该单克隆抗体是针对CSFV E2蛋白的一个保守线性表位。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 原核表达 单克隆抗体
下载PDF
中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2 cDNA的克隆及原核表达 被引量：26
13
作者 李红亮 聂文敏 +1 位作者 高其康 程家安 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期933-938,共6页
【目的】克隆、分析和原核表达编码中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2的cDNA。【方法】以13个不同日龄中华蜜蜂工蜂触角为材料,通过RT-PCR技术以获得编码中华蜜蜂Apis cerana cerana气味结合蛋白ASP2基因成熟蛋白开放阅读框序列,并在pET-30a(+)/... 【目的】克隆、分析和原核表达编码中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2的cDNA。【方法】以13个不同日龄中华蜜蜂工蜂触角为材料,通过RT-PCR技术以获得编码中华蜜蜂Apis cerana cerana气味结合蛋白ASP2基因成熟蛋白开放阅读框序列,并在pET-30a(+)/BL21(DE3)系统中进行原核表达。【结果】克隆了命名为Acer-ASP2(GenBank登录号:DQ449667)的中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2基因,该序列全长429bp,编码142个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为15.7kD和4.36。预测蛋白具有昆虫气味结合蛋白典型的6个保守的半胱氨酸残基的特征,进一步分析表明Acer-ASP2极有可能属于GOBP家族。构建的原核表达载体pET/Acer-ASP2,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达出一个分子量约为21kD的融合蛋白,融合蛋白大部分以包涵体的形式存在于菌体沉淀中(约59.7%),经洗涤和尿素梯度溶解对包涵体进行了纯化,经凝胶光密度扫描分析,约占最终产物的81.2%左右。【结论】克隆、分析和表达了一个新的编码中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2cDNA序列,为进一步研究其分子结构和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 工蜂触角 气味结合蛋白 原核表达
下载PDF
罗非鱼无乳链球菌Sip基因的克隆、表达及免疫原性分析 被引量：25
14
作者 黎炯 叶星 +3 位作者 可小丽 卢迈新 迟妍妍 田园园 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期626-633,共8页
表面免疫原性蛋白(Surface Immunogenic Protein,Sip)是B群链球菌(Group B Streptococcus,GBS)的一种表面蛋白,在GBS多种血清型的菌株中均有表达。研究从实验室分离到的罗非鱼无乳链球菌广东株的基因组DNA中扩增出Sip基因,构建原核表达... 表面免疫原性蛋白(Surface Immunogenic Protein,Sip)是B群链球菌(Group B Streptococcus,GBS)的一种表面蛋白,在GBS多种血清型的菌株中均有表达。研究从实验室分离到的罗非鱼无乳链球菌广东株的基因组DNA中扩增出Sip基因,构建原核表达载体pColdII-Sip,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)菌株。经诱导表达、SDS-PAGE电泳检测显示重组蛋白主要以可溶形式表达。重组蛋白用亲和层析的方法纯化,蛋白纯度达98%。纯化后的重组蛋白免疫罗非鱼(Oreochromis niloticus,GIFT strain)以分析其免疫原性。受免鱼免疫14d后进行人工攻毒试验,免疫组的相对保护率为70%—87%。酶联免疫吸附试验(Elisa)显示受免鱼对重组蛋白产生了较好的免疫应答,免疫剂量为3μg/g和5μg/g时受免鱼血清抗体滴度可达1:128000。研究结果显示重组蛋白Sip具有较强的免疫原性和保护作用,Sip基因可作为罗非鱼链球菌基因工程亚单位疫苗候选基因。 展开更多
关键词 罗非鱼 无乳链球菌 表面免疫原性蛋白 原核表达 免疫原性 抗体 相对保护率
下载PDF
两种水稻GDP解离抑制蛋白基因的分离及特征分析 被引量：25
15
作者 梁卫红 唐朝荣 吴乃虎 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期785-791,共7页
以Rho家族成员OsRacD为诱饵 ,采用酵母双杂交体系 ,分离到两种与OsRacD互作的水稻RhoGDP解离抑制蛋白的基因 ,分别命名为OsRhoGDI1和OsRhoGDI2 .酵母体内结合和GSTpulldown分析结果显示 ,OsRhoGDI1和OsRhoGDI2与野生型和组成型激活的OsR... 以Rho家族成员OsRacD为诱饵 ,采用酵母双杂交体系 ,分离到两种与OsRacD互作的水稻RhoGDP解离抑制蛋白的基因 ,分别命名为OsRhoGDI1和OsRhoGDI2 .酵母体内结合和GSTpulldown分析结果显示 ,OsRhoGDI1和OsRhoGDI2与野生型和组成型激活的OsRacD都能结合 ,且不依赖GDI的N端部分序列 ;GDI和Rho的结合具有一定的特异性 .两种GDI在水稻根、地上组织和幼穗等多种组织和器官都有表达 ,但在表达特征上存在明显差异 .研究证实 ,在水稻中存在着调控RhoGTPases的GDP解离抑制蛋白基因家族 。 展开更多
关键词 RHO蛋白 酵母双杂交 GDP解离抑制蛋白 原核表达 GST PULL DOWN
下载PDF
凡纳滨对虾热休克蛋白70的原核高效表达 被引量：22
16
作者 吴任 谢数涛 +2 位作者 孙勇 完颜小青 张其中 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期305-309,共5页
将凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)热休克蛋白70基因(heat shock protein 70,HSP70)克隆到原核表达载体pET-3c中,经酶切和DNA测序鉴定后,将重组质粒转入表达宿主BL21(DE3),在不同温度、时间下经IPTG诱导表达,收集菌液,进行SDS-PAGE和W... 将凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)热休克蛋白70基因(heat shock protein 70,HSP70)克隆到原核表达载体pET-3c中,经酶切和DNA测序鉴定后,将重组质粒转入表达宿主BL21(DE3),在不同温度、时间下经IPTG诱导表达,收集菌液,进行SDS-PAGE和Western blot检测,并用软件Bandscan分析蛋白表达水平。结果表明,成功构建含凡纳滨对虾HSP70基因的重组表达载体pET-3c/HSP70,表达的目标蛋白相对分子量约为72 kD,并能与小鼠抗人HSP70抗体特异性结合。37℃诱导5 h目标蛋白表达量最高;但25℃诱导目标蛋白的可溶性比例达80%,目标蛋白占全菌总蛋白70%以上,均较37℃为高。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 热休克蛋白70 原核表达
下载PDF
粉尘螨Ⅰ类抗原cDNA的克隆表达和初步鉴定 被引量：21
17
作者 杨庆贵 李朝品 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期472-474,共3页
目的　构建粉尘螨Ⅰ类抗原 (Derf1)cDNA基因的重组表达质粒 ,并于E .coli表达。方法　用BamHⅠ和SacⅠ从重组质粒pMD 18T Derf 1上切下Derf1基因 ,插入表达载体pET32a(+)质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1,在氨苄青霉素阳性的LB平板上筛选阳性重... 目的　构建粉尘螨Ⅰ类抗原 (Derf1)cDNA基因的重组表达质粒 ,并于E .coli表达。方法　用BamHⅠ和SacⅠ从重组质粒pMD 18T Derf 1上切下Derf1基因 ,插入表达载体pET32a(+)质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1,在氨苄青霉素阳性的LB平板上筛选阳性重组子 ,并经双酶切及PCR扩增鉴定。重组质粒pET32a(+) Derf 1转化大肠杆菌 ,IPTG诱导表达后进行SDS PAGE电泳和薄层凝胶扫描定量分析。结果　对重组质粒进行酶切和PCR鉴定 ,与预期结果相符 ,证明已成功构建携带Derf1基因的重组原核表达质粒pET32a(+) Derf 1。核酸序列测定及同源性分析证实所构建的原核表达质粒pET32a(+) Derf1中所含的Derf1基因与GenBank中的Derf1序列同源性达到 99.5 %。Derf 1基因在大肠杆菌诱导表达后获得Mr 约4 5 0 0 0的蛋白 ,蛋白含量占全菌体蛋白含量的 15 %。结论　成功构建了粉尘螨Ⅰ类抗原cDNA基因的重组表达质粒pET32a(+) Derf 1,并在大肠杆菌中获得高效表达 ,为获得重组纯化Derf 展开更多
关键词 粉尘螨 抗原 CDNA 基因重组 原核表达
下载PDF
猪白细胞介素18成熟蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：22
18
作者 郑敏 金宁一 +2 位作者 张洪勇 李昌 尹革芬 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期430-432,共3页
通过 RT- PCR方法从用 PHA和 L PS刺激的猪脾脏细胞中扩增出猪白细胞介素 18(p IL - 18)成熟蛋白基因的c DNA,克隆到 T载体 p UCm- T后 ,序列测定表明 ,p IL- 18成熟蛋白基因核苷酸长度为 4 74 bp,编码 15 7个氨基酸。将该基因片段克隆... 通过 RT- PCR方法从用 PHA和 L PS刺激的猪脾脏细胞中扩增出猪白细胞介素 18(p IL - 18)成熟蛋白基因的c DNA,克隆到 T载体 p UCm- T后 ,序列测定表明 ,p IL- 18成熟蛋白基因核苷酸长度为 4 74 bp,编码 15 7个氨基酸。将该基因片段克隆到大肠杆菌表达载体 p ET- 2 8a构建重组质粒 p ETIL 18m,转化大肠杆菌 BL 2 1(DE3) ,并用 IPTG诱导。重组菌菌体裂解物 SDS- PAGE可检测到相对分子质量为 190 0 0的重组蛋白 ,免疫印迹法证实该重组蛋白可以与人 IL- 展开更多
关键词 猪白细胞介素18 成熟蛋白 基因克隆 原核表达 RT-PCR 大肠杆菌 免疫佐剂 免疫调节剂
下载PDF
猪胸膜肺炎放线杆菌毒素I基因的克隆、表达及其ELISA检测方法的建立 被引量：14
19
作者 刘建杰 何启盖 +5 位作者 陈焕春 吴斌 徐晓娟 刘军发 唐先春 贝为成 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期148-151,共4页
根据胸膜肺炎放线杆菌S4 0 74菌株毒素I的序列 ,设计了 1对引物 ,从本室自己分离的菌株中扩增了猪胸膜肺炎放线杆菌毒素I的结构基因 (apxICA) ,扩增的DNA片段大小为 36 4 0bp(4 6 87～ 832 6bp) ,将其克隆到pMD18 T载体中 ,酶切鉴定和... 根据胸膜肺炎放线杆菌S4 0 74菌株毒素I的序列 ,设计了 1对引物 ,从本室自己分离的菌株中扩增了猪胸膜肺炎放线杆菌毒素I的结构基因 (apxICA) ,扩增的DNA片段大小为 36 4 0bp(4 6 87～ 832 6bp) ,将其克隆到pMD18 T载体中 ,酶切鉴定和序列测定后 ,进一步将其插入pET 2 8a中构建了原核表达载体 ,SDS PAGE和Westernblotting分析表明 ,该基因在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中获得了表达 ,而且表达的蛋白质具有免疫学活性。利用表达的蛋白作为抗原包被酶标板 ,建立了检测毒素I血清抗体的ELISA方法。临床应用表明 。 展开更多
关键词 猪 胸膜肺炎 放线杆菌毒素 I基因克隆 基因表达 ELISA检测
下载PDF
大蒜E病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清制备 被引量：19
20
作者 林林 郑红英 +1 位作者 陈炯 陈剑平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期533-535,共3页
设计特异性引物PCR扩增了余杭大蒜病样中的大蒜E病毒 (GarV E)的全长CP基因 ,构建原核表达载体并在大肠杆菌中过量表达 ,纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。Westernblot检测结果表明 ,抗血清与GarV E的CP起强的特异性反应。 7个大蒜样... 设计特异性引物PCR扩增了余杭大蒜病样中的大蒜E病毒 (GarV E)的全长CP基因 ,构建原核表达载体并在大肠杆菌中过量表达 ,纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。Westernblot检测结果表明 ,抗血清与GarV E的CP起强的特异性反应。 7个大蒜样品中 ,内蒙古赤峰市、宁夏银川和甘肃天水等 4个样品受到GarV E的侵染。试验也证明了田间GarV E编码的CP分子量为 35kD ,不同于已报道的其他葱X病毒属成员的 2 展开更多
关键词 大蒜E病毒 外壳蛋白 基因 原核表达 抗血清 纯化
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 250 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部