通过测定脑缺血再灌注时海马中半胱天冬酶-3酶原(procaspase-3)的表达变化,从细胞凋亡的角度探讨脑缺血再灌注损伤的分子生物学机制及procaspase-3的活化机制.将C57BL/6N小鼠随机分为假手术组(正常对照组)、缺血再灌注组(I/R组),后者夹...通过测定脑缺血再灌注时海马中半胱天冬酶-3酶原(procaspase-3)的表达变化,从细胞凋亡的角度探讨脑缺血再灌注损伤的分子生物学机制及procaspase-3的活化机制.将C57BL/6N小鼠随机分为假手术组(正常对照组)、缺血再灌注组(I/R组),后者夹闭双侧颈总动脉20 min后再通血流,建立前脑缺血再灌注模型,分别于再灌注6 h、12 h、24 h和48 h取海马.采用蛋白免疫印迹(Western blotting)方法检测海马中procaspase-3的表达变化.结果显示,12 h I/R及24 h I/R组海马中总procaspase-3水平与假手术组相比有明显升高,且差异有统计学意义(P<0.05);24 h I/R组海马中去磷酸化水平与假手术组相比有明显升高,且差异有统计学意义(P<0.05);而各组procaspase-3磷酸化水平与假手术组相比差异无统计学意义.结果提示,脑缺血再灌注损伤诱发procaspase-3表达增加;其中procaspase-3去磷酸化水平高明显,提示脑缺血再灌注损伤可能诱发procaspase-3去磷酸化,继而促进procaspase-3转化为活性形式.展开更多
目的观察穿山龙提取物(extract from Dioscoreae nipponicae Rhizoma,DNR)联合哈尔满碱(harmane)对人肝癌细胞(HepG2)增殖抑制作用及诱导凋亡的机理。方法采用MTT法检测药物对细胞的生长抑制作用,应用等效曲线-相互指数法(isobole-inter...目的观察穿山龙提取物(extract from Dioscoreae nipponicae Rhizoma,DNR)联合哈尔满碱(harmane)对人肝癌细胞(HepG2)增殖抑制作用及诱导凋亡的机理。方法采用MTT法检测药物对细胞的生长抑制作用,应用等效曲线-相互指数法(isobole-interaction index method)评价两药的相互作用,倒置显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,Western印迹法检测凋亡蛋白procaspase-3的表达。结果穿山龙提取物(DNR)与哈尔满碱质量浓度比为2∶1时,I(相互指数)=0.768<1,联合用药具有协同作用;质量浓度比为1∶2时,I=1.041≈1.0,联合用药具有相加作用。FCM法检测联合用药48、72 h细胞凋亡率与单独用药相比分别增加了10.44%、50.06%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western印迹法检测联合用药诱导HepG2细胞凋亡的机制之一可能与procaspase-3蛋白的表达有关。结论 DNR联合哈尔满碱在体外有明显的协同抗肿瘤的作用,其可能的机制是影响procaspase-3蛋白的表达。展开更多
文摘通过测定脑缺血再灌注时海马中半胱天冬酶-3酶原(procaspase-3)的表达变化,从细胞凋亡的角度探讨脑缺血再灌注损伤的分子生物学机制及procaspase-3的活化机制.将C57BL/6N小鼠随机分为假手术组(正常对照组)、缺血再灌注组(I/R组),后者夹闭双侧颈总动脉20 min后再通血流,建立前脑缺血再灌注模型,分别于再灌注6 h、12 h、24 h和48 h取海马.采用蛋白免疫印迹(Western blotting)方法检测海马中procaspase-3的表达变化.结果显示,12 h I/R及24 h I/R组海马中总procaspase-3水平与假手术组相比有明显升高,且差异有统计学意义(P<0.05);24 h I/R组海马中去磷酸化水平与假手术组相比有明显升高,且差异有统计学意义(P<0.05);而各组procaspase-3磷酸化水平与假手术组相比差异无统计学意义.结果提示,脑缺血再灌注损伤诱发procaspase-3表达增加;其中procaspase-3去磷酸化水平高明显,提示脑缺血再灌注损伤可能诱发procaspase-3去磷酸化,继而促进procaspase-3转化为活性形式.
文摘目的观察穿山龙提取物(extract from Dioscoreae nipponicae Rhizoma,DNR)联合哈尔满碱(harmane)对人肝癌细胞(HepG2)增殖抑制作用及诱导凋亡的机理。方法采用MTT法检测药物对细胞的生长抑制作用,应用等效曲线-相互指数法(isobole-interaction index method)评价两药的相互作用,倒置显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,Western印迹法检测凋亡蛋白procaspase-3的表达。结果穿山龙提取物(DNR)与哈尔满碱质量浓度比为2∶1时,I(相互指数)=0.768<1,联合用药具有协同作用;质量浓度比为1∶2时,I=1.041≈1.0,联合用药具有相加作用。FCM法检测联合用药48、72 h细胞凋亡率与单独用药相比分别增加了10.44%、50.06%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western印迹法检测联合用药诱导HepG2细胞凋亡的机制之一可能与procaspase-3蛋白的表达有关。结论 DNR联合哈尔满碱在体外有明显的协同抗肿瘤的作用,其可能的机制是影响procaspase-3蛋白的表达。
