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超级细菌bla_(NDM-1)基因TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:5
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作者 施开创 李凤梅 +3 位作者 张步娴 黎宗强 莫胜兰 许心婷 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期952-956,共5页
为建立快速检测超级细菌编码新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)的bla_(NDM-1)基因的方法,本研究针根据bla_(NDM-1)及其变异体的基因序列设计一对特异性引物和一条MGB探针,以构建的含有bla_(NDM-1)基因片段的重组质粒作为阳性标准品,经条件... 为建立快速检测超级细菌编码新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)的bla_(NDM-1)基因的方法,本研究针根据bla_(NDM-1)及其变异体的基因序列设计一对特异性引物和一条MGB探针,以构建的含有bla_(NDM-1)基因片段的重组质粒作为阳性标准品,经条件优化,建立了检测bla_(NDM-1)基因的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。结果显示该方法可以特异性扩增bla_(NDM-1)基因重组质粒标准品,而对鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌和鼠伤寒沙门氏菌的标准菌株扩增均为阴性;检出下限为2.59拷贝/μL,比常规PCR敏感性高100倍;组内及组间重复性试验的变异系数均小于1.5%。利用所建立的方法对34株鸡源致病性沙门氏菌分离株进行检测,结果均未检测到目的片段,表明所有分离株均未携带bla_(NDM-1)基因。本研究建立的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于监测携带bla_(NDM-1)基因及其变异体的超级细菌。 展开更多
关键词 TaqMan—MGB探针 荧光定量pcr blaNDM-1基因 超级细菌 检测方法
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鸭腺病毒A型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:2
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作者 万春和 刘荣昌 +5 位作者 程龙飞 施少华 傅光华 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第5期1341-1348,共8页
试验旨在建立鸭腺病毒A型(duck adenovirus A,DAdV-A)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。根据DAdV-A Hexon基因序列设计特异性引物和探针,建立了基于TaqMan探针检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,对其特异性、灵敏性、重复性进行检测,... 试验旨在建立鸭腺病毒A型(duck adenovirus A,DAdV-A)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。根据DAdV-A Hexon基因序列设计特异性引物和探针,建立了基于TaqMan探针检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,对其特异性、灵敏性、重复性进行检测,用建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法和常规PCR方法同时对福建地区临床收集的85份番鸭源病料进行DAdV-A感染的检测,比较其符合率。结果表明,试验成功建立了检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,其扩增相关系数为0.996,扩增效率为99.9%;特异性强,对鸭常见病原(如鸭瘟病毒、鹅细小病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性;灵敏度高,最低检测限为8.37拷贝/μL;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.54%~1.28%和0.61%~2.39%。对临床送检的85份病料,TaqMan实时荧光定量PCR方法的阳性率为7.06%(6/85),PCR方法的阳性率为5.88%(5/85),且PCR检测的阳性样品经TaqMan实时荧光定量PCR方法检测均为阳性,符合率为100%。本研究建立了基于TaqMan探针检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,为鸭群中开展DAdV-A的分子流行病学研究提供了有效技术手段。 展开更多
关键词 鸭腺病毒A型 Hexon基因 TAQMAN探针 实时荧光定量pcr方法
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烟曲霉荧光探针实时PCR法的临床应用价值研究 被引量:1
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作者 邢志芳 曹国君 +3 位作者 赵缜 赵红英 潘惠芬 夏建红 《国际检验医学杂志》 CAS 2016年第24期3391-3392,共2页
目的建立一种针对烟曲霉的探针实时聚合酶链反应(PCR)法并初步探讨其临床应用价值。方法以烟曲霉基因组内特有序列为靶位,设计引物、探针,建立PCR反应体系,初步应用于临床痰标本和血浆标本的检测验证其检测性能。结果所建针对烟曲霉的实... 目的建立一种针对烟曲霉的探针实时聚合酶链反应(PCR)法并初步探讨其临床应用价值。方法以烟曲霉基因组内特有序列为靶位,设计引物、探针,建立PCR反应体系,初步应用于临床痰标本和血浆标本的检测验证其检测性能。结果所建针对烟曲霉的实时PCR法具有良好的灵敏度和特异度,将其应用于临床痰标本和血浆标本的检测效果较好。结论所建立的荧光探针实时PCR法初步应用于临床痰标本和血浆标本检测,效果良好,其实际临床应用价值仍需进行大样本验证。 展开更多
关键词 烟曲霉菌 探针实时聚合酶链反应法 临床应用
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一种快速高效检测转基因玉米方法的建立 被引量:2
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作者 周德龙 孟令聪 +7 位作者 郑淑波 王楠 李穆 王薪淇 卢实 王敏 刘文国 路明 《作物杂志》 北大核心 2022年第1期65-69,共5页
建立高效的目的基因检测方法是保障生物育种研发和产业化进程的重要技术支撑。应用常规PCR法、TaqMan探针实时荧光PCR法及叶片直接PCR法对转基因玉米叶片进行CaMV35S启动子和NOS终止子2个转基因元件的检测。结果表明,叶片直接PCR法分别... 建立高效的目的基因检测方法是保障生物育种研发和产业化进程的重要技术支撑。应用常规PCR法、TaqMan探针实时荧光PCR法及叶片直接PCR法对转基因玉米叶片进行CaMV35S启动子和NOS终止子2个转基因元件的检测。结果表明,叶片直接PCR法分别较常规PCR方法和TaqMan探针实时荧光PCR法节约62%、48%的时间和25%、43%的成本,而且扩增出的目的条带清晰可见,符合目的片段大小,结果真实可靠,适用于大量转基因玉米植株叶片的快速筛选和鉴定。 展开更多
关键词 玉米 转基因 常规pcr TaqMan探针实时荧光pcr 叶片直接pcr
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