无义介导的mRNA降解在胚胎发育中的作用及机制的研究进展 被引量：1

1

作者 宣丽娜 沈细亚 +4 位作者 王鹏 杜雷雷 张帆 徐星星 黄智慧 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期327-335,共9页

无义介导的mRNA降解(nonsense-mediated mRNA decay, NMD)最初被认为是一种广泛存在的mRNA质量监控机制,可迅速降解含有提前终止密码子的异常mRNA,避免有害的、截短的蛋白产物积累而对细胞造成损害。最近研究显示,NMD也可以调控执行重... 无义介导的mRNA降解(nonsense-mediated mRNA decay, NMD)最初被认为是一种广泛存在的mRNA质量监控机制,可迅速降解含有提前终止密码子的异常mRNA,避免有害的、截短的蛋白产物积累而对细胞造成损害。最近研究显示,NMD也可以调控执行重要细胞生理功能的正常基因转录物的降解过程,因此被认为是真核生物中高度保守的转录后调节机制。NMD直接或间接调控从酵母到人的3%～20%的转录组,对于细胞稳态、应激反应、增殖、分化等多种生理活动都是必不可少的。研究表明,NMD可以调节与发育相关的转录物的水平,NMD因子敲除大多具有胚胎致死效应。NMD在胚胎干细胞的自我更新、分化与胚胎发育的过程中发挥重要作用。本文将对NMD在胚胎发育中的作用及机制的最新研究进展进行综述,以期为胚胎发育的研究和胚胎发育相关疾病的治疗提供新的思路。 展开更多

关键词 无义介导的mRNA降解 提前终止密码子 胚胎干细胞 自我更新 分化 胚胎发育

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无义突变型荧光素酶稳定表达细胞株的建立

2

作者 谢骁祥 袁辉 +4 位作者 王震宇 程静 吴磊 杜柳涛 江高峰 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期583-588,共6页

目的:建立稳定表达含无义突变位点荧光素酶的细胞株,用以筛选新的无义突变通读剂。方法:酶切质粒p GL4-WT和p GL4-MUT,得到野生型和无义突变荧光素酶编码c DNA,分别插入到慢病毒载体p LVX-IRES-Neo多克隆位点。酶切及PCR鉴定后,将重组... 目的:建立稳定表达含无义突变位点荧光素酶的细胞株,用以筛选新的无义突变通读剂。方法:酶切质粒p GL4-WT和p GL4-MUT,得到野生型和无义突变荧光素酶编码c DNA,分别插入到慢病毒载体p LVX-IRES-Neo多克隆位点。酶切及PCR鉴定后,将重组载体包装成慢病毒颗粒,感染HEK 293细胞,单克隆细胞抗性筛选获得稳定细胞株,提取总RNA,经逆转录PCR方法验证荧光素酶m RNA表达。最后用已知阳性无义突变通读剂G 418处理细胞,Western blot方法检测处理前后荧光素酶蛋白表达水平,同时分析荧光素酶活性。结果:经酶切获得2.7 kb长野生型和无义突变荧光素酶编码c DNA,与p LVX-IRES-Neo连接获得重组慢病毒载体p LVX-WT、p LVX-MUT,EcoRⅠ单酶切、NheⅠ与BamHⅠ双酶切结果证明序列正确插入,PCR也扩增出目的片段;稳定感染慢病毒的HEK293WT和HEK293MUT细胞经逆转录PCR方法成功检测到荧光素酶m RNA表达;阳性通读剂G 418处理细胞后发现,HEK293WT细胞在处理前后均表达荧光素酶蛋白,荧光素酶活性也基本相同,而HEK293MUT细胞在处理前不表达荧光素酶蛋白,无荧光素酶活性,处理后恢复了部分荧光素酶蛋白表达,其荧光素酶活性相当于HEK293WT细胞的20%。结论:成功建立了稳定表达无义突变荧光素酶的细胞株,可用于筛选新的无义突变通读剂。 展开更多

关键词 基因治疗药物筛选 无义突变通读剂 提前终止密码子 荧光素酶 蛋白质截短试验 双荧光素酶报告基因检测方法

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无义突变通读药物研发进展

3

作者 袁辉 江高峰 杜柳涛 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期893-898,共6页

无义突变与众多疾病发生有关,包括肿瘤和遗传病。某些化合物如氨基糖苷类抗生素、非氨基糖苷类抗生素及其他小分子化合物能诱导无义突变通读,从而翻译出有功能的全长蛋白。化合物诱导的无义突变通读对于遗传病及肿瘤治疗是一个非常有潜... 无义突变与众多疾病发生有关,包括肿瘤和遗传病。某些化合物如氨基糖苷类抗生素、非氨基糖苷类抗生素及其他小分子化合物能诱导无义突变通读,从而翻译出有功能的全长蛋白。化合物诱导的无义突变通读对于遗传病及肿瘤治疗是一个非常有潜力的治疗策略,但目前没有几种化合物显示出确切的临床疗效。因此,急需筛选新型、更具药物特性的化合物,推动通读治疗走向临床。本文详细介绍了无义突变通读药物的研究现状,为新药开发提供参考。 展开更多

关键词 无义突变 提前终止密码子 通读诱导剂 氨基糖苷类抗生素 遗传性疾病

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基因治疗药物无义突变通读活性检测方法的研究进展

4

作者 谢骁祥 江高峰 杜柳涛 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1701-1705,共5页

30%人类致病基因突变属无义突变,无义突变可导致众多疾病。无义突变通读剂具有无义突变通读活性,可诱导基因恢复其功能,属于基因治疗药物。基因编码区发生的无义突变可致蛋白翻译在无义突变位点提前终止,导致蛋白功能缺失,引起包括遗传... 30%人类致病基因突变属无义突变,无义突变可导致众多疾病。无义突变通读剂具有无义突变通读活性,可诱导基因恢复其功能,属于基因治疗药物。基因编码区发生的无义突变可致蛋白翻译在无义突变位点提前终止,导致蛋白功能缺失,引起包括遗传病、肿瘤在内的众多疾病。少数化合物具有无义突变通读作用,可诱导全长蛋白翻译,是一种潜在的治疗药物。目前通读剂活性检测方法主要包括蛋白质截短试验和报告基因系统两大类型。本文回顾了无义突变通读活性检测方法的发展及最新进展,为药物高通量筛选方法的建立提供参考。 展开更多

关键词 基因治疗药物 无义突变通读活性检测 致病基因突变 提前终止密码子 通读诱导剂 蛋白质截短试验 细胞外蛋白合成试验 双荧光素酶报告基因检测方法

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无义介导的mRNA降解 被引量：8

5

作者 贾晓波 胡剑 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期115-120,共6页

无义介导的mRNA降解(nonsense-mediated mRNA decay,NMD)作为真核细胞中重要RNA监控机制,识别并降解开放阅读框中含有提前终止密码子(premature termination codon,PTC)的mRNA,以避免因截短的蛋白产物积累对细胞造成毒害.NMD还调控正常... 无义介导的mRNA降解(nonsense-mediated mRNA decay,NMD)作为真核细胞中重要RNA监控机制,识别并降解开放阅读框中含有提前终止密码子(premature termination codon,PTC)的mRNA,以避免因截短的蛋白产物积累对细胞造成毒害.NMD还调控正常生理基因的表达,暗示其在真核细胞中扮演重要角色.NMD途径的关键是PTC的识别.本文通过3种模型来分别阐述发现于哺乳动物、酵母等不同有机体的识别机制.通常由NMD因子UPF1(up-frameshift)等被招募至含PTC的mRNA上,借助这些因子组装形成"功能复合体"并激活降解.但目前对于PTC识别后的过程仍认识有限,本文通过综述NMD途径的分子机制以更好地理解其生物学意义. 展开更多

关键词 提前终止密码子(PTC) 外显子连接复合体(EJC) 上游移码蛋白(UPF)

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NMD作用的顺式调控元件 被引量：1

6

作者 黄峙 周天鸿 郭宝江 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1321-1326,共6页

真核生物利用无义介导的mRNA降解 (nonsense mediatedmRNAdecay ,NMD) ,对含有提前终止密码子(prematureterminationcodons ,PTC)的异常转录产物进行快速清除 ,防止毒害性截短蛋白 (truncatedproteins)的产生 ,是真核生物重要的mRNA监... 真核生物利用无义介导的mRNA降解 (nonsense mediatedmRNAdecay ,NMD) ,对含有提前终止密码子(prematureterminationcodons ,PTC)的异常转录产物进行快速清除 ,防止毒害性截短蛋白 (truncatedproteins)的产生 ,是真核生物重要的mRNA监视机制。NMD作用的启动与多种顺式调控元件有关 ,它们包括 :提前终止密码子的标识 ;PTC下游特定位置的序列元件 ,在酵母细胞称为DSE (downstreamsequenceelement,DSE) ,在哺乳动物细胞主要为内含子剪接依赖性序列元件 (exon exonjunction ,EEJ) ;稳定作用元件 (stabilizerelements ,STE)对NMD作用的阻抑调节 ;以及其他与NMD作用相关的序列 ,如 poly(A)延长、5′ UTR的uORF(upstreamopenreadingframe ,uORF)和程序化核糖体移码 (programmed 1ribosomalframeshift, 1PRF)信号序列等。 展开更多

关键词 无义介导的mRNA降解 NMD 顺式调控元件 提前终止密码子(PTC) 截短蛋白

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无义介导的mRNA降解与肿瘤 被引量：1

7

作者 林敏 谢海龙 苏琦 《国际病理科学与临床杂志》 CAS 2006年第4期291-294,共4页

无义介导的mRNA降解(nonsense-m ed iated mRNA decay,NMD)能够选择性降解含有翻译提前终止密码子(prem ature translation term ination condon,PTC)的mRNA,从而防止对机体有害的截短蛋白(truncated pro-te ins)的产生,它是真核生物中... 无义介导的mRNA降解(nonsense-m ed iated mRNA decay,NMD)能够选择性降解含有翻译提前终止密码子(prem ature translation term ination condon,PTC)的mRNA,从而防止对机体有害的截短蛋白(truncated pro-te ins)的产生,它是真核生物中广泛存在的一种高度保守的有效的监督机制。NMD与肿瘤发生发展过程中的基因突变有密切关系。 展开更多

关键词 无义介导的mRNA降解 翻译提前终止密码子 肿瘤

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一种新的Srrm1/SRm160可变剪接体经历无义突变介导的mRNA降解

8

作者 何章荣 瞿秀华 +4 位作者 刘萱 李晓明 靳彦文 李平 曹诚 《生物技术通讯》 CAS 2010年第5期605-609,共5页

目的:研究基因Srrm1/SRm160的可变剪接。方法:应用RT-PCR研究Srrm1/SRm160的可变剪接,通过蛋白质的翻译抑制和RNA干扰研究剪接异构体是否经历无义突变介导的mRNA降解(NMD)过程。结果:获得Srrm1/SRm160新的可变剪接异构体,该异构体产生... 目的:研究基因Srrm1/SRm160的可变剪接。方法:应用RT-PCR研究Srrm1/SRm160的可变剪接,通过蛋白质的翻译抑制和RNA干扰研究剪接异构体是否经历无义突变介导的mRNA降解(NMD)过程。结果:获得Srrm1/SRm160新的可变剪接异构体,该异构体产生提前终止密码子,翻译抑制和RNA干扰证实含有提前终止密码子的剪接体经过NMD而降解。结论:Srrm1/SRm160通过可变剪接和NMD调节自身的表达水平,作为剪接因子进一步调节其他基因的可变剪接。 展开更多

关键词 可变剪接 提前终止密码子 无义突变介导的mRNA降解

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凝血因子Ⅸ无义突变真核表达载体的构建及其在COS-7细胞的表达 被引量：1

9

作者 聂欣 杨林花 +4 位作者 柴宝峰 申泉 张媛 张耀方 陈剑芳 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第3期749-752,共4页

本研究以含有fⅨ cDNA的pcDNA3.1质粒为模板构建4种包含不同类型无义突变的fⅨ真核表达载体并进行鉴定,实现其在COS-7细胞中的表达。采用以PCR为基础的定点突变法体外构建fⅨ基因无义突变体,并通过DNA序列分析进一步鉴定证实;应用脂质... 本研究以含有fⅨ cDNA的pcDNA3.1质粒为模板构建4种包含不同类型无义突变的fⅨ真核表达载体并进行鉴定,实现其在COS-7细胞中的表达。采用以PCR为基础的定点突变法体外构建fⅨ基因无义突变体,并通过DNA序列分析进一步鉴定证实;应用脂质体转化技术将野生型、突变型fⅨ表达载体分别瞬时转染COS-7细胞,采用实时定量PCR鉴定fⅨ mRNA在各组的相对表达水平。结果表明,4个突变型质粒除相应位点的无义突变外,未见其它突变,提示无义突变载体构建成功。实时定量PCR鉴定表明,各突变组真核表达载体已成功转染COS-7细胞株并能转录为mRNA。结论:采用以PCR为基础的定点突变法可在体外构建fⅨ真核表达载体,并可在COS-7细胞中表达,其转录过程中不引发mRNA降解,这为进一步研究无义突变引起FⅨ功能丧失及表达量降低的机制和治疗研究提供了物质基础。 展开更多

关键词 凝血因子IX 真核表达载体 血友病B 提前终止翻译密码子

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马凡综合征FBN1基因突变及基因型表型关联研究 被引量：4

10

作者 张莹 张琳 +3 位作者 高凌根 杨坤璂 杨延坤 周宪梁 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2016年第4期1792-1796,共5页

目的本研究报道了一个马凡综合征家系的临床特征和致病基因筛查结果,同时探索了FBN1基因突变和临床表型间的关系。方法研究纳入1个MFS家系,经询问病史及检查,并对其基因组DNA进行了FBN1测序。结合既往研究的数据进行了基因型与表型关联... 目的本研究报道了一个马凡综合征家系的临床特征和致病基因筛查结果,同时探索了FBN1基因突变和临床表型间的关系。方法研究纳入1个MFS家系,经询问病史及检查,并对其基因组DNA进行了FBN1测序。结合既往研究的数据进行了基因型与表型关联分析。结果在先证者及家系成员中发现FBN1终止突变p.R565X,c.1693C>T。基因型-表型分析发现,100%携带者有心血管系统累及(9/9),88.9%的携带者有骨骼系统的异常累及(8/9)。结论本研究报道了MFS家系的致病突变R565X。携带者容易出现心血管和骨骼病变,进行氯沙坦治疗可以延缓主动脉病变的进展。这些发现对马凡综合征的诊断和治疗有重要意义。 展开更多

关键词 马凡综合征 FBN1基因 基因型-表型分析 终止突变

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NMD机制及其对人类遗传病的治疗意义 被引量：2

11

作者 胡建燃 李平 《生命科学研究》 CAS CSCD 2016年第6期535-541,共7页

无义介导的mRNA降解机制(nonsense-mediated mRNA decay,NMD)是真核细胞内重要的RNA质量监控机制,能够识别并降解含有提前终止子(premature termination codon,PTC)的mRNA,避免细胞内积累有害的截短蛋白质产物。同时,NMD机制还调控着大... 无义介导的mRNA降解机制(nonsense-mediated mRNA decay,NMD)是真核细胞内重要的RNA质量监控机制,能够识别并降解含有提前终止子(premature termination codon,PTC)的mRNA,避免细胞内积累有害的截短蛋白质产物。同时,NMD机制还调控着大量不含PTC的mRNA稳定性,影响其蛋白质产物的含量。现综述了NMD机制的底物、调控因子及其对人类遗传病治疗意义的最新研究进展。 展开更多

关键词 无义介导的mRNA降解机制(NMD) 真核生物细胞 提前终止子(PTC) 人类遗传病

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FBN1基因钙结合转化生长因子结构域终止突变基因型表型研究 被引量：1

12

作者 张琳 张莹 +2 位作者 范鹏 杨坤璂 周宪梁 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2018年第3期2513-2516,共4页

目的报道一个马凡综合征家系的临床特征和致病基因筛查结果,同时探索FBN1基因表皮生长因子结构域终止突变和临床表型间的关系。方法研究纳入1个马凡综合征家系,经询问病史及检查,并对其基因组DNA进行了FBN1基因测序。结合既往研究的数... 目的报道一个马凡综合征家系的临床特征和致病基因筛查结果,同时探索FBN1基因表皮生长因子结构域终止突变和临床表型间的关系。方法研究纳入1个马凡综合征家系,经询问病史及检查,并对其基因组DNA进行了FBN1基因测序。结合既往研究的数据进行了FBN1基因钙结合表皮生长因子结构域终止突变的基因型与表型关联分析。结果在马凡综合征先证者及其家系成员中发现FBN1基因8号表皮生长因子结构域(cb EGF-like#08)移码突变p.Glu768Valfs X6,c.2302_2309del GAATGTGT。结合以往研究报道的基因型-表型分析发现,发生于FBN1基因8号表皮生长因子结构域的终止(PTC)突变,100%携带者有心血管系统累及(5/5),80.0%的携带者有骨骼系统的异常累及(4/5)。结论研究报道了MFS家系的一个新的致病移码突变Glu768Valfs X6,携带者容易出现主动脉夹层及主动脉瘤。基因型表型分析发现,发生于FBN1基因钙结合表皮生长因子结构域的终止突变更容易出现主动脉根部扩张及主动脉夹层等严重心血管系统表型。这些发现对马凡综合征的诊断和治疗有重要意义。 展开更多

关键词 马凡综合征 FBN1基因 基因型-表型分析 终止突变

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无义介导的mRNA降解机制及其在单基因遗传病中的作用 被引量：7

13

作者 郭文婷 徐汪洋 顾鸣敏 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期935-942,共8页

无义介导的mRNA降解(Nonsense-mediated mRNA decay,NMD)是一种广泛存在于真核生物细胞中的mRNA质量监控机制。该机制通过识别和降解含有提前终止密码子(Premature translational-termination codon,PTC)的转录产物防止有潜在毒性的截... 无义介导的mRNA降解(Nonsense-mediated mRNA decay,NMD)是一种广泛存在于真核生物细胞中的mRNA质量监控机制。该机制通过识别和降解含有提前终止密码子(Premature translational-termination codon,PTC)的转录产物防止有潜在毒性的截短蛋白的产生。据估计,约1/3的遗传性疾病是由提前终止密码子引起的,而NMD作用通常会改变某些遗传病的临床症状或遗传方式。文章主要综述了人体细胞中NMD对底物的识别及其作用机制,并以几种单基因遗传病为例探讨其对这些疾病表型的影响,表明NMD作用机制的进一步揭示将有助于单基因遗传病发病机制的阐明及治疗方法的改进。 展开更多

关键词 无义介导的mRNA降解(NMD) 提前终止密码子(PTC) 截短蛋白 人类单基因遗传病

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