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乙型肝炎病毒基因组中前前-S-编码基因启动子序列的确定及转录活性的鉴定
被引量：
25
1
作者
杨倩
董菁
+4 位作者
成军
刘妍
洪源
王建军
张树林
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第9期761-762,765,共3页
为了解前 前 S编码区ORF上游是否具有启动子活性 ,选取其起始密码子ATG上游 2 77bp的DNA序列 ,将其克隆至报告基因表达载体pCAT3中 ,构建pCAT3 前 前 S promoter表达载体 ,以该质粒转染HepG2细胞 ,用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测氯霉素...
为了解前 前 S编码区ORF上游是否具有启动子活性 ,选取其起始密码子ATG上游 2 77bp的DNA序列 ,将其克隆至报告基因表达载体pCAT3中 ,构建pCAT3 前 前 S promoter表达载体 ,以该质粒转染HepG2细胞 ,用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性。结果发现 ,质粒pCAT3 前 前 S promoter能够激活CAT的表达 ,吸光度 (A值 )是pCAT3 basic的 10倍 ,说明pCAT3 前 前 S promoter具有启动子活性 ,为在HBV基因组DNA序列中界定、研究新的前 前 SORF提供了直接的实验依据。
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关键词
肝炎病毒
乙型
前-前-S基因
启动子
下载PDF
职称材料
厦门市乙型肝炎病毒亚基因型分布的初步研究
2
作者
陈美娅
周飞
+5 位作者
卢雅丕
任建林
王琳
刘明
陈建民
董菁
《实用肝脏病杂志》
CAS
2008年第4期248-252,共5页
目的探讨厦门地区乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况。方法应用混合性型特异性引物聚合酶链反应法结合琼脂糖电泳,根据PCR产物片段大小直接判定HBV基因型;应用PCR扩增全S基因序列-DNA测序-生物信息学分析方法确定部分...
目的探讨厦门地区乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况。方法应用混合性型特异性引物聚合酶链反应法结合琼脂糖电泳,根据PCR产物片段大小直接判定HBV基因型;应用PCR扩增全S基因序列-DNA测序-生物信息学分析方法确定部分样本的亚基因型,并探讨前前S区编码的流行情况。结果在217例可以通过混合性型特异性引物聚合酶链反应法确定基因型的感染者中,B型83例(38.2%)、C型71例(32.7%),B/C混合型63例(29.0%)。HBeAg阳性患者中感染B基因型占50%,B/C型混合感染占22%;抗-HBe阳性患者中B/C型混合感染36%,B型38%;在慢性乙型肝炎患者中,以B基因型多见(46%),在肝硬化和肝癌患者中,以C(41%和42%)或B/C混合基因型(38%和33%)感染为主;20例患者血清经过DNA测序-生物信息学分析方法确定了亚基因型,其中B2亚型2例,C2亚型18例,其中混合性型特异性引物聚合酶链反应判断为B型的4例经过测序分析为C2亚型。B2亚型不编码前前S区,18例C2亚型均编码前前S区。结论本研究提示厦门地区乙型肝炎患者群的HBV基因型B、C型的感染率大致相同,亚基因型分析提示C2亚基因型占90%,可能是B/C基因型重组的结果。C2亚基因型病毒株均编码前前S区,提示前前S区的编码可能具有亚基因型特异性。
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关键词
乙型肝炎
乙型肝炎病毒
基因型
亚基因型
前前S区
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职称材料
乙型肝炎病毒囊膜蛋白前前-S至前S2区自激活功能的初步研究
3
作者
周飞
卢雅丕
+3 位作者
任建林
陈美娅
陈建民
董菁
《实用肝脏病杂志》
CAS
2008年第6期361-363,369,共4页
目的构建含乙型肝炎病毒(HBV)囊膜蛋白的前前-S至前S2区酵母细胞表达质粒,以重组质粒转化酵母细胞后的自激活作用来探讨靶区域表达蛋白是否具有反式激活作用。方法用多聚酶链反应法扩增含前前-S区的前-S2基因序列,定向克隆于pDEST32载体...
目的构建含乙型肝炎病毒(HBV)囊膜蛋白的前前-S至前S2区酵母细胞表达质粒,以重组质粒转化酵母细胞后的自激活作用来探讨靶区域表达蛋白是否具有反式激活作用。方法用多聚酶链反应法扩增含前前-S区的前-S2基因序列,定向克隆于pDEST32载体,经序列测定,重组质粒命名为pDEST32-pS2。用乙酸锂转化法将重组质粒转化酵母菌MaV203,经Western blot法验证重组质粒在酵母细胞中的表达。按酵母双杂交法将重组质粒和载体pDEST22共同转入酵母细胞MaV203,并在SC/-Leu/-Trp/-His三缺培养基及不同浓度梯度3AT培养基中生长,判断靶区域编码蛋白是否具有自激活功能。结果重组质粒pDEST32-pS2经序列测定含有HBV自前前-S至前-S2基因序列,Western blot法证实转染重组质粒的酵母细胞可表达前S1和前S2蛋白。将pDEST32-pS2与pDEST22共转染MaV203,证实被转染酵母细胞不能在浓度为28mM的3AT培养基中生长。结论构建了pDEST32-pS2表达载体,pDEST32-pS2可在酵母细胞中表达部分囊膜蛋白,前前-S区至前S2区域编码的部分表面抗原可能具有较弱的反式激活作用,可以被3AT所抑制。
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关键词
乙型肝炎病毒
前前-S区基因
酵母细胞双杂交技术
反式激活作用
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职称材料
题名
乙型肝炎病毒基因组中前前-S-编码基因启动子序列的确定及转录活性的鉴定
被引量：
25
1
作者
杨倩
董菁
成军
刘妍
洪源
王建军
张树林
机构
解放军第
出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第9期761-762,765,共3页
基金
国家自然科学基金 (编号C39970 674
C0 30 1 1 4 0 2
+4 种基金
C30 0 70 689
C3990 0 1 30 )
军队"十五"科技攻关青年基金 (编号 0 1Q1 38)
军队"十五"科技攻关面上项目 (编号 0 1MB1 35)
军队留学归国人员启动基金 (编号 98H0 38)资助课题
文摘
为了解前 前 S编码区ORF上游是否具有启动子活性 ,选取其起始密码子ATG上游 2 77bp的DNA序列 ,将其克隆至报告基因表达载体pCAT3中 ,构建pCAT3 前 前 S promoter表达载体 ,以该质粒转染HepG2细胞 ,用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性。结果发现 ,质粒pCAT3 前 前 S promoter能够激活CAT的表达 ,吸光度 (A值 )是pCAT3 basic的 10倍 ,说明pCAT3 前 前 S promoter具有启动子活性 ,为在HBV基因组DNA序列中界定、研究新的前 前 SORF提供了直接的实验依据。
关键词
肝炎病毒
乙型
前-前-S基因
启动子
Keywords
hepatitis B virus
pre
-
pre
-S-
region
promoter
分类号
R512.62 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
厦门市乙型肝炎病毒亚基因型分布的初步研究
2
作者
陈美娅
周飞
卢雅丕
任建林
王琳
刘明
陈建民
董菁
机构
福建医科大学教学医院(福建省厦门大学附属中山医院)消化内科
出处
《实用肝脏病杂志》
CAS
2008年第4期248-252,共5页
基金
厦门市首批重大疾病科研攻关项目(WKZ0501)
厦门市卫生局医学科研立项项目(WSK0506)
+2 种基金
厦门大学引进人才科研启动基金(Z03109)
福建省青年科技人才创新项目(2006F3127)
福建省高校新世纪人才创新资助项目
文摘
目的探讨厦门地区乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况。方法应用混合性型特异性引物聚合酶链反应法结合琼脂糖电泳,根据PCR产物片段大小直接判定HBV基因型;应用PCR扩增全S基因序列-DNA测序-生物信息学分析方法确定部分样本的亚基因型,并探讨前前S区编码的流行情况。结果在217例可以通过混合性型特异性引物聚合酶链反应法确定基因型的感染者中,B型83例(38.2%)、C型71例(32.7%),B/C混合型63例(29.0%)。HBeAg阳性患者中感染B基因型占50%,B/C型混合感染占22%;抗-HBe阳性患者中B/C型混合感染36%,B型38%;在慢性乙型肝炎患者中,以B基因型多见(46%),在肝硬化和肝癌患者中,以C(41%和42%)或B/C混合基因型(38%和33%)感染为主;20例患者血清经过DNA测序-生物信息学分析方法确定了亚基因型,其中B2亚型2例,C2亚型18例,其中混合性型特异性引物聚合酶链反应判断为B型的4例经过测序分析为C2亚型。B2亚型不编码前前S区,18例C2亚型均编码前前S区。结论本研究提示厦门地区乙型肝炎患者群的HBV基因型B、C型的感染率大致相同,亚基因型分析提示C2亚基因型占90%,可能是B/C基因型重组的结果。C2亚基因型病毒株均编码前前S区,提示前前S区的编码可能具有亚基因型特异性。
关键词
乙型肝炎
乙型肝炎病毒
基因型
亚基因型
前前S区
Keywords
Hepatitis B Hepatitis B virus Genotype Subgenotype
pre
-
pre
-S
region
分类号
R450 [医药卫生—治疗学]
下载PDF
职称材料
题名
乙型肝炎病毒囊膜蛋白前前-S至前S2区自激活功能的初步研究
3
作者
周飞
卢雅丕
任建林
陈美娅
陈建民
董菁
机构
厦门大学附属中山医学院消化内科
厦门大学消化疾病研究所厦门市消化疾病诊治中心
福建医科大学教学医院(中山医院)
出处
《实用肝脏病杂志》
CAS
2008年第6期361-363,369,共4页
基金
厦门市首批重大疾病科研攻关项目(WKZ0501)
厦门市卫生局医学科研立项项目(WSK0506)
+2 种基金
厦门大学引进人才科研启动基金(Z03109)
福建青年科技人才创新项目(2006F3127)
福建高校新世纪人才创新资助项目
文摘
目的构建含乙型肝炎病毒(HBV)囊膜蛋白的前前-S至前S2区酵母细胞表达质粒,以重组质粒转化酵母细胞后的自激活作用来探讨靶区域表达蛋白是否具有反式激活作用。方法用多聚酶链反应法扩增含前前-S区的前-S2基因序列,定向克隆于pDEST32载体,经序列测定,重组质粒命名为pDEST32-pS2。用乙酸锂转化法将重组质粒转化酵母菌MaV203,经Western blot法验证重组质粒在酵母细胞中的表达。按酵母双杂交法将重组质粒和载体pDEST22共同转入酵母细胞MaV203,并在SC/-Leu/-Trp/-His三缺培养基及不同浓度梯度3AT培养基中生长,判断靶区域编码蛋白是否具有自激活功能。结果重组质粒pDEST32-pS2经序列测定含有HBV自前前-S至前-S2基因序列,Western blot法证实转染重组质粒的酵母细胞可表达前S1和前S2蛋白。将pDEST32-pS2与pDEST22共转染MaV203,证实被转染酵母细胞不能在浓度为28mM的3AT培养基中生长。结论构建了pDEST32-pS2表达载体,pDEST32-pS2可在酵母细胞中表达部分囊膜蛋白,前前-S区至前S2区域编码的部分表面抗原可能具有较弱的反式激活作用,可以被3AT所抑制。
关键词
乙型肝炎病毒
前前-S区基因
酵母细胞双杂交技术
反式激活作用
Keywords
Hepatitis B virus
pre
-
pre
-S
region
Yeast two-hybrid Transactivation
分类号
R373.21 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
乙型肝炎病毒基因组中前前-S-编码基因启动子序列的确定及转录活性的鉴定
杨倩
董菁
成军
刘妍
洪源
王建军
张树林
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003
25
下载PDF
职称材料
2
厦门市乙型肝炎病毒亚基因型分布的初步研究
陈美娅
周飞
卢雅丕
任建林
王琳
刘明
陈建民
董菁
《实用肝脏病杂志》
CAS
2008
0
下载PDF
职称材料
3
乙型肝炎病毒囊膜蛋白前前-S至前S2区自激活功能的初步研究
周飞
卢雅丕
任建林
陈美娅
陈建民
董菁
《实用肝脏病杂志》
CAS
2008
0
下载PDF
职称材料
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