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Myostatin基因打靶载体的构建及猪胎儿成纤维细胞Myostatin基因的敲除 被引量：8
1
作者 李鸿辉 冯冲 +5 位作者 王宁 闫军 哈福 陈红星 樊宝良 潘登科 《生物技术通讯》 CAS 2010年第5期699-704,共6页
目的:用缺口修复等技术构建Myostatin(肌肉生长抑制素,MSTN)基因打靶载体,并对大白猪胎儿成纤维体细胞进行转染,获得基因敲除细胞。方法与结果:首先构建用于MSTN基因同源长臂(LA)的抓捕载体,然后在大肠杆菌内利用Red同源重组系统介导的... 目的:用缺口修复等技术构建Myostatin(肌肉生长抑制素,MSTN)基因打靶载体,并对大白猪胎儿成纤维体细胞进行转染,获得基因敲除细胞。方法与结果:首先构建用于MSTN基因同源长臂(LA)的抓捕载体,然后在大肠杆菌内利用Red同源重组系统介导的缺口修复,从含大白猪MSTN基因座的细菌人工染色体上亚克隆9.9 kb的LA到抓捕载体上,经过部分序列测定,同源性为100%;通过PCR获得1.4 kb的同源短臂(SA);将LA和SA连入载体pLOXP,构建含有neo和tk正负筛选标记基因的MSTN基因打靶载体pLOXP-MSTN-KO;将线性化的pLOXP-MSTN-KO通过电转染整合到大白猪胎儿成纤维细胞基因组中,利用G418和丙氧鸟苷进行药物筛选,获得抗性细胞克隆890个,通过PCR和DNA测序鉴定获得基因敲除的细胞克隆4个。结论:构建了有效的MSTN基因打靶载体,通过转染获得基因敲除细胞,为利用体细胞核移植制备MSTN基因敲除猪奠定了基础。 展开更多
关键词 MYOSTATIN基因 缺口修复 基因打靶 正负筛选 大白猪
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第二型曲面积分计算公式正负号选取的研究 被引量：1
2
作者 庞峰 《绥化学院学报》 2020年第6期156-160,共5页
第二型曲面积分计算公式正负号选取是高等数学教学中非常重要的知识点。通过对第二型曲面积分的定义以及积分计算公式进行分析,并结合实例对第二型曲面积分计算中公式正负号选取问题展开探讨,发现参数法、矢量法、投影法等三种方法能够... 第二型曲面积分计算公式正负号选取是高等数学教学中非常重要的知识点。通过对第二型曲面积分的定义以及积分计算公式进行分析,并结合实例对第二型曲面积分计算中公式正负号选取问题展开探讨,发现参数法、矢量法、投影法等三种方法能够轻松完成计算过程公式正负号选取,解决了一些实际的问题,值得进行推广应用。 展开更多
关键词 第二型曲面积分 多元函数 正负号选取
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谁从影子教育中获益——基于选择假说和理性选择理论 被引量：26
3
作者 李佳丽 《教育发展研究》 CSSCI 北大核心 2016年第20期66-73,80,共9页
本文基于正负向选择假说和理性选择理论,使用多水平分层法(SM)估计影子教育对参与影子教育机会不同的初中学生群体的异质性影响,尝试探讨影子教育对教育不均等的启示。研究结果发现:对于七年级和九年级学生来说,参与影子教育机会处于中... 本文基于正负向选择假说和理性选择理论,使用多水平分层法(SM)估计影子教育对参与影子教育机会不同的初中学生群体的异质性影响,尝试探讨影子教育对教育不均等的启示。研究结果发现:对于七年级和九年级学生来说,参与影子教育机会处于中间水平的中产阶级家庭的孩子从影子教育中获益更多,基于理性选择理论,影子教育是中产阶级有效维持教育竞争优势从而维护阶级稳定的途径。另外,负向选择假说在九年级学生中得到验证:较少机会参加影子教育的弱势学生群体能从影子教育中获益更多,增加九年级弱势学生群体影子教育机会可能是缩减教育不均等的有效措施。 展开更多
关键词 影子教育 正向 负向选择假说 理性选择理论 教育不均等
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利用同源转基因技术培育氮高效利用转基因水稻 被引量：8
4
作者 王虹玲 阚国仕 +3 位作者 李珊珊 马小路 贾士荣 刘昱辉 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第5期862-869,共8页
为了提高水稻对氮素的吸收利用率,培育不含任何标记基因、报告基因和载体骨架序列的转基因水稻,从硅藻中克隆了硝酸盐转运蛋白(Diatom Nitrate Transporter,NAT)基因,构建了3个植物表达载体:可使NAT在水稻中高效表达但无抗性筛选标记基... 为了提高水稻对氮素的吸收利用率,培育不含任何标记基因、报告基因和载体骨架序列的转基因水稻,从硅藻中克隆了硝酸盐转运蛋白(Diatom Nitrate Transporter,NAT)基因,构建了3个植物表达载体:可使NAT在水稻中高效表达但无抗性筛选标记基因的植物表达载体pANW2300K-、带有负选择标记—大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶CodA的正负筛选植物表达载体pCodA1301和植物表达载体pIpt121。明确Ipt基因可显著抑制转基因烟草的生长发育,但对水稻的影响较小;建立了以短暂选择和正负筛选为基础的水稻同源转基因技术;获得了18株有目标基因NAT,但不含任何筛选标记基因和载体的骨架序列的转基因水稻植株,转化率达27.7%;实现了同源转基因技术在水稻中的应用,这在国内尚属首例。 展开更多
关键词 水稻 同源转基因技术 短暂选择方法 正负筛选 NAT
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用于未知病毒检测的免疫识别模型和算法研究 被引量：1
5
作者 鲍欣龙 马建辉 +2 位作者 罗文坚 曹先彬 王煦法 《计算机科学》 CSCD 北大核心 2005年第1期74-76,94,共4页
现有的反病毒技术难以识别与处理新的未知病毒。本文借鉴生物免疫系统识别未知病毒的机制,以非我识别机制为基础,进一步抽取免疫进化学习机制和阳性/阴性选择机制,提出了一种新的检测器和自我均自适应变化的免疫识别模型和算法。文中给... 现有的反病毒技术难以识别与处理新的未知病毒。本文借鉴生物免疫系统识别未知病毒的机制,以非我识别机制为基础,进一步抽取免疫进化学习机制和阳性/阴性选择机制,提出了一种新的检测器和自我均自适应变化的免疫识别模型和算法。文中给出了算法的详细实现步骤,并针对几种实际病毒进行了检测实验。测试实验结果表明该算法能够检测到未知病毒,具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 未知病毒检测 免疫识别模型 算法 人工免疫 进化学习 计算机病毒 网络安全
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牛朊蛋白基因prnp敲除载体的构建及真核细胞转染 被引量：3
6
作者 张海林 程胖 +2 位作者 兰杰 宋永利 张涌 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期297-304,共8页
利用正负筛选策略(Positive-negative selection,PNS)对中靶细胞进行富集是提高体细胞基因打靶效率常用的策略之一。将动物的朊蛋白基因prnp敲除,使其不能表达朊蛋白(传染性海绵状脑病的致病蛋白),从而使其具有抵抗Prion病感染的能力。... 利用正负筛选策略(Positive-negative selection,PNS)对中靶细胞进行富集是提高体细胞基因打靶效率常用的策略之一。将动物的朊蛋白基因prnp敲除,使其不能表达朊蛋白(传染性海绵状脑病的致病蛋白),从而使其具有抵抗Prion病感染的能力。本研究采用正负筛选策略,构建了牛prnp基因的双等位基因敲除载体,经内切酶Sac Ⅱ线性化后,再通过电穿孔转染牛胎儿成纤维细胞,分别用600μg/mL G418、200nmol/mL Ganciclovir(GCV)进行正负药物筛选,最终获得了176个药物抗性细胞克隆,进一步采用PCR、测序、间接免疫荧光试验及Western blotting试验对细胞克隆进行鉴定,结果表明,其中的9个细胞克隆为中靶细胞,证明牛prnp基因被成功敲除。本研究为牛prnp的敲除提供了可行性依据,并为体细胞核移植生产敲除朊蛋白基因的转基因动物提供供体细胞。 展开更多
关键词 基因打靶 正负筛选策略 朊蛋白 牛胎儿成纤维细胞 PRNP 间接免疫荧光 Western BLOTTING
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植物基因靶向整合技术研究进展 被引量：2
7
作者 阚国仕 马小路 +2 位作者 李珊珊 王虹玲 刘昱辉 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第17期3476-3479,共4页
基因打靶作为反向遗传学的基础工具,可以对基因进行精确修饰或替换,从而改变生物的遗传特性。然而将基因打靶应用于高等植物方面的研究中却存在着打靶效率过低的问题。讨论了目前几种对植物基因打靶有效的试验方法包括转RAD54基因、锌... 基因打靶作为反向遗传学的基础工具,可以对基因进行精确修饰或替换,从而改变生物的遗传特性。然而将基因打靶应用于高等植物方面的研究中却存在着打靶效率过低的问题。讨论了目前几种对植物基因打靶有效的试验方法包括转RAD54基因、锌指核酸酶(ZFN)以及正负筛选的方法。这些方法将使基因打靶应用在植物中成为可能。 展开更多
关键词 基因打靶 RAD54 锌指核酸酶 正负筛选
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PiggyBac转座子介导的诱导细胞永生化转基因载体的构建及其整合效率的检测
8
作者 张婷婷 辛颖 +4 位作者 张志强 任充华 杨涵江 王令 张智英 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第17期3576-3583,共8页
【目的】构建在小鼠水平上实现多个目的基因的表达以及标记基因安全删除的转基因载体。【方法】以载体为模板,分别扩增SV40P neo、IRES、tk-PloyA,通过overlap PCR连接,并在两端添加方向相同的LoxP序列,构建转基因基本载体PB-NIT;然后通... 【目的】构建在小鼠水平上实现多个目的基因的表达以及标记基因安全删除的转基因载体。【方法】以载体为模板,分别扩增SV40P neo、IRES、tk-PloyA,通过overlap PCR连接,并在两端添加方向相同的LoxP序列,构建转基因基本载体PB-NIT;然后通过overlap PCR扩增获得Tet-CMV-SV40 T-T2A-p 53-PolyA基因表达盒,将其插入PB-NIT中,构建载体PB-NIT-STP;最后将转录因子激活域rtTA通过同尾酶连接插入PB-NIT-STP,构建载体PB-rtTA-NIT-STP。【结果】经酶切和测序等鉴定,以上载体均正确;经转座活性鉴定,共转染转座子载体PB-rtTA-NIT-STP和转座酶载体比只转染转座子载体获得的阳性克隆数提高了20倍。【结论】得到了基于PiggyBac转座子的可用于正负向筛选和诱导目的基因表达的转基因载体。 展开更多
关键词 小鼠 SV40 T 转录激活域rtTA PIGGYBAC转座子 正负向筛选
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植物基因打靶中正负筛选系统的研究
9
作者 李珊珊 安书红 刘昱辉 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2011年第6期41-45,共5页
基因打靶是反向遗传学研究的重要工具,在植物基因功能研究等方面具有重要意义。正负筛选系统是一种筛选发生正确基因打靶转化株的方法,能够减少筛选的工作量,使植物基因打靶效率大大提高。通过近些年的研究改进,正负筛选在植物基因打靶... 基因打靶是反向遗传学研究的重要工具,在植物基因功能研究等方面具有重要意义。正负筛选系统是一种筛选发生正确基因打靶转化株的方法,能够减少筛选的工作量,使植物基因打靶效率大大提高。通过近些年的研究改进,正负筛选在植物基因打靶研究中的应用逐渐成熟,就植物基因打靶研究中正负筛选系统的原理及研究进展进行综述,对今后的基因打靶研究具有重要的参考价值。 展开更多
关键词 基因打靶 正负筛选 CODA DT-A
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