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银加强胶体金技术检测猪细小病毒的研究 被引量:23
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作者 黄瑜 甘孟侯 刘尚高 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期239-244,共6页
本研究首次成功地建立了检测猪细小病毒(PPV)抗原的银加强胶体金检测法(SECGA),并确定了操作流程中的最佳试验条件。应用该法对纯化PPV抗原的最低检出量为0.3125ng/点,其敏感性分别为间接Dot-ELISA... 本研究首次成功地建立了检测猪细小病毒(PPV)抗原的银加强胶体金检测法(SECGA),并确定了操作流程中的最佳试验条件。应用该法对纯化PPV抗原的最低检出量为0.3125ng/点,其敏感性分别为间接Dot-ELISA和HA的8倍和1000倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明SECGA具有较高的特异性。20份样本SECGA的检测结果与病毒分离和鉴定结果完全相符。SECGA和间接Dot-ELISA对77份样本检测的阳性率分别为83.1%和80.5%,其阳性符合率为96.9%。研究结果表明本法具有经济、敏感性、特异性强等优点,可用于PPV感染的特异诊断。为胶体金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究奠定基础。 展开更多
关键词 细小病毒 银加强胶体金 检测
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猪细小病毒在PK细胞中的增殖过程 被引量:16
2
作者 魏战勇 崔保安 +5 位作者 黄克和 金喜新 王学斌 胡功政 杨明凡 张素梅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期453-455,共3页
将猪细小病毒南京毒株1(N J-1)、南京毒株2(N J-2)和7909毒株接种于PK-15细胞,用免疫荧光检测方法研究了猪细小病毒增殖的基本特性与规律。在PK-15细胞中,3个毒株的增殖规律基本相似,均在感染后12 h即可检测到荧光,表明其子代病毒粒子产... 将猪细小病毒南京毒株1(N J-1)、南京毒株2(N J-2)和7909毒株接种于PK-15细胞,用免疫荧光检测方法研究了猪细小病毒增殖的基本特性与规律。在PK-15细胞中,3个毒株的增殖规律基本相似,均在感染后12 h即可检测到荧光,表明其子代病毒粒子产生,随后逐渐增多,在感染后48 h荧光几乎遍布所有细胞,随后荧光开始衰减,在84 h时病毒引起细胞大面积崩解,荧光呈现岛屿状分布。通过绘制其一步法生长曲线可知,在病毒感染后12 h,细胞培养液中的病毒TC ID50/mL为2.0左右,随后逐渐增高,感染后60 h 3种毒株的TC ID50/mL均达到最高,子代病毒粒子向细胞外释放也达到高峰,其后TC ID50逐渐下降。培养液中病毒粒子的半寿期为7 h。 展开更多
关键词 猪细小病毒 PK-15细胞 增殖 免疫荧光试验
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猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪细小病毒混合感染的流行病学调查 被引量:13
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作者 崔立 姚从斌 +2 位作者 芦银华 陈溥言 华修国 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2006年第4期330-334,共5页
根据Genbank中PRRSV ORF7及PPVVP2基因序列设计合成引物,建立了分别用于检测PRRSV、PPV的RT-PCR及PCR方法。应用建立的方法对38个PCV2阳性病料进行了PRRSV及PPV检测,以确定猪群中PCV2与PRRSV和/或PPV混合感染情况,结果表明,15份样品表现... 根据Genbank中PRRSV ORF7及PPVVP2基因序列设计合成引物,建立了分别用于检测PRRSV、PPV的RT-PCR及PCR方法。应用建立的方法对38个PCV2阳性病料进行了PRRSV及PPV检测,以确定猪群中PCV2与PRRSV和/或PPV混合感染情况,结果表明,15份样品表现为PRRSV与PCV2混合感染,占样品总数的39.4%;2份样品表现为PCV2与PPV混合感染,占5.3%。另外,还有一定比例的三重感染,共3个样品,占7.9%。由此可见,猪群中PCV2与PRRSV及PPV混合感染比较普遍。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪细小病毒 混合感染
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猪细小病毒VP2蛋白的主要抗原表位基因的原核表达及检测应用 被引量:10
4
作者 李斐 曹瑞兵 +5 位作者 周斌 郑其升 魏建超 李鹏 任雪枫 陈溥言 《中国病毒学》 CSCD 2005年第5期507-510,共4页
将构建好的重组质粒PET-VP2Ⅰ转化宿主菌BL21,利用IPTG(1mmol/L)诱导实现了PET-VP2Ⅰ蛋白主要抗原域VP2Ⅰ融合蛋白的高效表达。通过Western-blot检测证明表达的重组蛋白具有良好的免疫学活性。表达产物经HisBind层析柱纯化后作为诊断抗... 将构建好的重组质粒PET-VP2Ⅰ转化宿主菌BL21,利用IPTG(1mmol/L)诱导实现了PET-VP2Ⅰ蛋白主要抗原域VP2Ⅰ融合蛋白的高效表达。通过Western-blot检测证明表达的重组蛋白具有良好的免疫学活性。表达产物经HisBind层析柱纯化后作为诊断抗原初步建立了检测PPV抗体的间接ELISA方法。结果表明:抗原的最佳包被浓度为3.5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶40,待检血清阳性标准初步定为OD490>0.51,且待检血清的OD490值与阴性血清的OD490值的比值大于2.1。 展开更多
关键词 猪细小病毒 VP2 蛋白的主要抗原域 原核表达 间接ELISA
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猪细小病毒重组酶聚合酶扩增快速检测方法的建立 被引量:11
5
作者 刘立兵 王建昌 +2 位作者 经美 王金凤 袁万哲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第11期3320-3326,共7页
试验旨在建立一种简单、快速检测猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的重组酶聚合酶(recombinase polymerase amplification,RPA)检测方法,为中国PPV的防控和诊断提供一种新的、可靠的技术支持。本研究基于PPVVP2基因的保守序列,设计合... 试验旨在建立一种简单、快速检测猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的重组酶聚合酶(recombinase polymerase amplification,RPA)检测方法,为中国PPV的防控和诊断提供一种新的、可靠的技术支持。本研究基于PPVVP2基因的保守序列,设计合成1对RPA引物探针,通过对反应时间的优化,建立38℃恒温水浴锅检测PPV的RPA方法。结果表明,所建立的RPA方法在38℃水浴锅中恒温反应30min,能够特异性的检测PPV;以重组质粒pPPV-VP2作为模板,RPA的检测限为102拷贝,同本研究中应用的实时荧光定量PCR方法检测限一致,比普通PCR方法高100倍;RPA方法对疑似PPV感染临床样品的阳性检出率为82.6%,略低于实时荧光定量PCR的检出率(86.9%),明显高于普通PCR的阳性检出率(66.7%)。本研究建立的RPA方法操作简单、反应快速,结果确实可靠,适用于PPV的快速检测。 展开更多
关键词 猪细小病毒(ppv) 等温扩增 聚合酶重组酶扩增 快速检测
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多价荧光抗体监测外源病毒污染的研究 被引量:4
6
作者 邵振华 田海燕 《中国兽药杂志》 北大核心 1997年第2期1-6,T001,共7页
用猪瘟病毒(HCV)、猪细小病毒(PPV)、牛病毒性腹泻/粘膜病病毒(BVD/MDV)、伪狂犬病病毒(PrV)、兰舌病病毒(BtV)、羊口疮病毒(OV)等六种病毒,多次同时或先后强化免疫猪,制取六价高免血清;用狂犬病... 用猪瘟病毒(HCV)、猪细小病毒(PPV)、牛病毒性腹泻/粘膜病病毒(BVD/MDV)、伪狂犬病病毒(PrV)、兰舌病病毒(BtV)、羊口疮病毒(OV)等六种病毒,多次同时或先后强化免疫猪,制取六价高免血清;用狂犬病病毒(RV)免疫兔,制取RV单价高免血清。分别用异硫氰酸荧光素(FITC)标记制成荧光抗体(FA)。并按二者最佳染色价配制成七价(多价)FA。由于各病毒在其宿主细胞中复制部位和与宿主细胞相互关系各不相同,在荧光显微镜下,多价FA对其相应病毒的细胞培养物,能显示出各不相同的荧光特点,而得以检测、鉴定。用相应的多、单价高免血清作抑制染色试验,结果各病毒荧光可被一一抑制,表明了多价FA具有高度的特异性。对各病毒进行FA细胞培养物半数感染量(FA-TCID50)与常规TCID50或LD50测定比较试验,结果前者均高于后者,表明了这种荧光抗体制剂同时具有高度的敏感性。应用多价FA,对非禽源细胞苗生产中外源病毒的污染进行了中间监测,选用了与强毒荧光无区别的7种感染的细胞作阳性参照,保证了生产单位在使用中的安全,对A、B二厂生产猪瘟苗有干扰的细胞,进行抽样监测80批,结果13批污染BVDV(16.25%),1? 展开更多
关键词 多价荧光抗体 HCV ppv PRV BTV 药物 病毒污染
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猪细小病毒抗体IPMA检测方法的建立及应用 被引量:8
7
作者 刘杉杉 赵亚荣 +3 位作者 张超范 吕超超 胡泉博 崔尚金 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期387-391,共5页
建立了一种检测猪细小病毒(PPV)血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA),对该方法的反应条件、特异性、敏感性和重复性进行了系统试验,并与HI和ELISA的检测结果进行了比较。结果显示,PPV种毒按照1∶100的剂量接种后第48小时固定效... 建立了一种检测猪细小病毒(PPV)血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA),对该方法的反应条件、特异性、敏感性和重复性进行了系统试验,并与HI和ELISA的检测结果进行了比较。结果显示,PPV种毒按照1∶100的剂量接种后第48小时固定效果最佳,辣根过氧化物酶-葡萄球菌A蛋白标记物的最适稀释度为1∶1 000,待检血清最适稀释度为1∶100。该IPMA方法与PCV2、PRV、PRRSV和CSFV的参考血清无交叉反应;PPV阳性血清稀释至1∶1 600时仍能检出;批内和批间重复性试验表明,该方法具有良好的重复性。符合性试验结果表明,该IPMA方法与HI和ELISA的符合率分别为96.0%与98.0%。用建立的IPMA方法检测PPV灭活疫苗免疫猪,结果免疫后第2周开始阳转,5周后全部阳转。对现地送检的400份猪血清样本进行检测,结果平均检出阳性率为86.5%。该IPMA方法的建立使PPV的血清学快速检测成为可能,可以用此方法开展PPV的抗体流行病学普查。 展开更多
关键词 猪细小病毒 免疫过氧化物酶单层细胞试验 抗体检测
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实时荧光定量PCR检测猪细小病毒 被引量:6
8
作者 李小康 崔保安 +4 位作者 陈红英 魏战勇 郑兰兰 赵丽 吕晓丽 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1118-1121,共4页
根据已报道的猪细小病毒基因组序列,设计并合成了引物和探针,从猪细小病毒(PPV)感染的细胞中提取DNA,经PCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌JM109,筛选后得到重组标准品质粒,对重组标准品质粒进行PCR和测序鉴定,表明目的... 根据已报道的猪细小病毒基因组序列,设计并合成了引物和探针,从猪细小病毒(PPV)感染的细胞中提取DNA,经PCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌JM109,筛选后得到重组标准品质粒,对重组标准品质粒进行PCR和测序鉴定,表明目的片段已经成功克隆。将104~108拷贝反应的重组标准品质粒进行荧光定量PCR,系统自动分析软件显示Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系。动力学曲线分析表明,在该反应体系和反应条件下,标准曲线的灵敏度为102拷贝。本方法的建立为猪细小病毒感染的早期诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 猪细小病毒 实时荧光定量PCR 标准曲线
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黄芪和板蓝根对猪细小病毒的体外抑制作用 被引量:4
9
作者 钟华 赵宝玉 +2 位作者 范国英 刘俊伟 陈俊杰 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2008年第10期48-52,58,共6页
【目的】探讨黄芪和板蓝根对猪细小病毒(PPV)的体外抑制作用。【方法】选用中草药黄芪、板蓝根作为抗病毒药物,利用细胞病变(CPE)抑制试验,测定黄芪与板蓝根单独使用及等体积合用,在PK-15单层细胞上对猪细小病毒的抑制作用。【结果】板... 【目的】探讨黄芪和板蓝根对猪细小病毒(PPV)的体外抑制作用。【方法】选用中草药黄芪、板蓝根作为抗病毒药物,利用细胞病变(CPE)抑制试验,测定黄芪与板蓝根单独使用及等体积合用,在PK-15单层细胞上对猪细小病毒的抑制作用。【结果】板蓝根单独使用时,体外试验对PPV有明显的抑制作用,对PPV的最小直接杀灭质量浓度为0.63 mg/mL,最小阻断质量浓度为0.31 mg/mL;黄芪单独使用时对PPV无明显的抑制作用;板蓝根与黄芪等体积合用时,对PPV的抑制作用显著增强,最小直接杀灭质量浓度提高为0.31 mg/mL,最小阻断质量浓度提高为0.038 mg/mL。【结论】黄芪与板蓝根联合使用抗病毒能力增强,且毒性较弱。 展开更多
关键词 黄芪 板蓝根 猪细小病毒(ppv)
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猪细小病毒VP2蛋白主要抗原表位基因真核表达载体的构建及表达 被引量:4
10
作者 任雪枫 胡志华 +6 位作者 谈国蕾 周斌 徐学清 郑其升 张晓勇 陈德胜 陈溥言 《中国病毒学》 CSCD 2004年第6期636-638,共3页
Using a pair of specific primers designed according to the relevant nucleotide sequences from GenBank, the main antigen domain for VP2 gene of Porcine parvovirus was ampilified with PCR method using the genomic DNA as... Using a pair of specific primers designed according to the relevant nucleotide sequences from GenBank, the main antigen domain for VP2 gene of Porcine parvovirus was ampilified with PCR method using the genomic DNA as template. The PCR product was cloned into the expression vector pIREShyg to get a recombinant eukaryotic expression plasmid pIREShyg-VP2, which was then transfected into the CHO-K1 cells. The expressed product was detected by IFA after the positive cell clone was selected with hygromycin. The result revealed that the main antigen domain for VP2 gene of porcine parvovirus was stably expressed in CHO-K1 cells. 展开更多
关键词 猪细小病毒 VP2蛋白 潮霉素 CHO-K1细胞
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猪细小病毒的提纯及其生化特性分析 被引量:4
11
作者 邱建明 何秉耀 王悦先 《浙江农业学报》 CSCD 1990年第2期67-71,共5页
将自行分离鉴定的猪细小病毒 HZ-9株感染仔猪肾原代细胞,采用 PEG 沉淀法及 CsCl密度梯度离心从病毒细胞培养物中提纯病莓。该病毒 CsCl 梯度中获得单一的血凝峰,浮力密度为1.38~1.39g/ml,紫外扫描获得典型的病毒吸收峰,OD260mn/OD280... 将自行分离鉴定的猪细小病毒 HZ-9株感染仔猪肾原代细胞,采用 PEG 沉淀法及 CsCl密度梯度离心从病毒细胞培养物中提纯病莓。该病毒 CsCl 梯度中获得单一的血凝峰,浮力密度为1.38~1.39g/ml,紫外扫描获得典型的病毒吸收峰,OD260mn/OD280nm 为1.64,电镜观察为球形颗粒,无囊膜,测得病毒粒子直径为19.6±1.8nm。经 SDS-PAGE 分析,病毒有3种结构多肽,其分子量和百分含量分别为 Vpl 81.7kd、9.8%、Vp2 67.6kd、11.7%,Vp364.6kd、76.9%。病毒核酸经中性1%琼脂糖凝胶电泳呈现一条核酸带,经碱性1%琼脂糖凝胶电泳测得核酸长度约为5kd,分子量约为1.44×10~6道尔顿。 展开更多
关键词 细小病毒 提纯 生化特性 多肽
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二乙烯亚胺对猪细小病毒的灭活作用 被引量:7
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作者 傅元华 刘俊斌 +2 位作者 钱钟 李玉和 王绍君 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第1期73-76,共4页
使用新型灭活剂二乙烯亚胺(binary ethylenimine,BEI)对猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)进行了灭活试验,通过ST传代细胞接种法观察病毒灭活后是否出现细胞病变,并结合血凝试验检测灭活效果,确定最佳灭活方法。用3~5日龄乳鼠检测BE... 使用新型灭活剂二乙烯亚胺(binary ethylenimine,BEI)对猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)进行了灭活试验,通过ST传代细胞接种法观察病毒灭活后是否出现细胞病变,并结合血凝试验检测灭活效果,确定最佳灭活方法。用3~5日龄乳鼠检测BEI灭活后的病毒培养物和相应制备疫苗的安全性,并用豚鼠检测该灭活工艺制备疫苗的效果,与传统甲醛灭活进行了比较。结果显示,终浓度为1‰的BEI在32℃情况下经20 h即可彻底灭活PPV病毒;BEI灭活的病毒制备的疫苗免疫豚鼠较甲醛灭活病毒产生较高的血凝抑制抗体。 展开更多
关键词 猪细小病毒 灭活 二乙烯亚胺 抗原性
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SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法检测猪细小病毒 被引量:6
13
作者 陈坚 刘业兵 +2 位作者 张志刚 姜晓晨 张晓杰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第8期6-8,共3页
为建立特异敏感的猪细小病毒(PPV)的SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法,本研究根据GenBank上PPV NS1保守序列设计合成了1对引物,利用本实验室构建的重组质粒(pMD18-T-PPV NS1)为标准模板,对反应条件进行优化,绘制标准曲线,并进行熔解曲... 为建立特异敏感的猪细小病毒(PPV)的SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法,本研究根据GenBank上PPV NS1保守序列设计合成了1对引物,利用本实验室构建的重组质粒(pMD18-T-PPV NS1)为标准模板,对反应条件进行优化,绘制标准曲线,并进行熔解曲线分析,建立了PPV的SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法。分别进行了特异性、敏感性及重复性检验,结果表明,本方法具有良好的特异性,与PRRSV、CSFV、PRV、PCV-2、SIV及阴性对照均为阴性;其最低检出量为7copies/μL,比PCR敏感100倍,且批内和批间重复性良好。用该方法对15份临床病料进行检测,并与常规PCR、环介导等温扩增(LAMP)方法进行对比,显示该方法灵敏度高、成本低,能够对样品组织中病毒进行定量检测,为快速检测PPV提供了有效的技术手段。 展开更多
关键词 猪细小病毒 SYBR GreenⅠ实时定量PCR 检测
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猪细小病毒和猪圆环病毒2型二重液相芯片检测方法的建立 被引量:5
14
作者 王晶钰 朱向博 +6 位作者 刘业兵 韩雪清 王慧煜 张丽 张磊 张晓杰 唐攀 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1603-1608,共6页
作者拟建立检测猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的二重液相芯片(xMAP)检测方法,以满足出入境检疫和临床高通量检测的要求。依据GenBank中PPV结构蛋白VP2基因及PCV2全基因序列,设计PPV和PCV2特异性探针、引物及探针互补序列,将探... 作者拟建立检测猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的二重液相芯片(xMAP)检测方法,以满足出入境检疫和临床高通量检测的要求。依据GenBank中PPV结构蛋白VP2基因及PCV2全基因序列,设计PPV和PCV2特异性探针、引物及探针互补序列,将探针与磁性微球偶联,对下游引物和探针互补序列标记生物素,采用不对称性二重PCR扩增靶序列,将PCR产物与偶联好的探针进行杂交,用液相芯片仪进行检测。通过对检测条件优化,建立检测PPV、PCV2两种病毒的二重液相芯片技术,并对临床样本进行检测。建立的PPV和PCV2二重液相芯片检测方法,特异性良好,该方法对PPV和PCV2基因拷贝数检测下限分别为1.53×104、2.58×102;对56份临床样品检测表明,该方法与单项PCR检测结果符合率为100%。成功建立了PPV、PCV2二重xMAP检测方法,该检测技术可用于出入境检疫和兽医临床检验。 展开更多
关键词 猪细小病毒 猪圆环病毒2型 二重液相芯片 检测
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高效佐剂对猪细小病毒和圆环病毒二联灭活疫苗的免疫增强效果 被引量:4
15
作者 张雪花 张道华 +5 位作者 陆吉虎 梅梅 华涛 唐波 侯继波 唐应华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期361-367,共7页
为评价高效佐剂VA5对猪细小病毒和猪圆环病毒二联灭活疫苗的免疫增强效果,将VA5与猪细小病毒、猪圆环病毒疫苗混合免疫BALB/c小鼠和豚鼠。结果显示,VA5佐剂能明显提高猪细小病毒血凝抑制抗体效价和血清病毒中和抗体效价,亦能提高猪圆环... 为评价高效佐剂VA5对猪细小病毒和猪圆环病毒二联灭活疫苗的免疫增强效果,将VA5与猪细小病毒、猪圆环病毒疫苗混合免疫BALB/c小鼠和豚鼠。结果显示,VA5佐剂能明显提高猪细小病毒血凝抑制抗体效价和血清病毒中和抗体效价,亦能提高猪圆环病毒ELISA抗体和中和抗体效价,并可降低二种抗原的使用量。VA5佐剂显著提高小鼠和豚鼠免疫后的淋巴细胞刺激指数。攻毒后,VA5佐剂处理组动物脾脏PCV2/PPV病毒载量明显低于不含高效佐剂的免疫组。VA5佐剂能提高猪细小病毒、猪圆环病毒疫苗在小鼠/豚鼠中的抗体效价,提高细胞免疫力,降低攻毒后的排毒。 展开更多
关键词 高效佐剂 猪细小病毒 猪圆环病毒 抗体 细胞免疫 病毒载量
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联合表达PCV2 ORF2和PPV VP2基因病毒样颗粒获得及免疫原性 被引量:4
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作者 徐志文 郭万柱 +3 位作者 陈杨 朱玲 陈燕凌 王印 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期821-825,共5页
将包含有完整闼读框架,长1740、705bp的PPVVP2基因、PCV2ORF2基因分别插入真核表达载体pPI-2.EGFP,构建了重组质粒pPi-Z.EGFP.VP2.ORF2。观察由脂质体介导转染重组质粒后的Vero细胞,结果最早在转染后20h左右出现荧光,36h达到高... 将包含有完整闼读框架,长1740、705bp的PPVVP2基因、PCV2ORF2基因分别插入真核表达载体pPI-2.EGFP,构建了重组质粒pPi-Z.EGFP.VP2.ORF2。观察由脂质体介导转染重组质粒后的Vero细胞,结果最早在转染后20h左右出现荧光,36h达到高峰;对转染细胞进行电镜检测,结果观察到病毒样颗粒存在。为证实所获病毒样颗粒是否为重组颗粒,将纯化后的病毒样颗粒免疫仔猪,检测其血中T淋巴细胞的动态变化以及血清抗体水平。结果免疫仔猪的CD3+、CD4+T淋巴细胞在外周血淋巴细胞中的比率均有一定程度的升高;CD8+T淋巴细胞在免疫后7~14d有所下降,之后再升高。抗体检测结果表明,免疫动物血清中有较高水平的PPV、PCV2特异性抗体。结果表明重组质粒pPI-2.EGFP.VP2.ORF2获得成功表达并形成重组病毒样颗粒,且该颗粒具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 病毒样颗粒 猪细小病毒 猪圆环病毒 免疫原性
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3种猪繁殖障碍性病毒Real-time PCR快速检测方法的建立 被引量:3
17
作者 赵绪永 马辉 +1 位作者 宁豫昌 赵丽 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2012年第12期27-33,共7页
【目的】建立可同时检测猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的多重实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank数据库中PRV、PPV和PCV2的核苷酸序列,设计3对特异性引物和探针,以10倍系列稀释的阳性质粒为模板,优... 【目的】建立可同时检测猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的多重实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank数据库中PRV、PPV和PCV2的核苷酸序列,设计3对特异性引物和探针,以10倍系列稀释的阳性质粒为模板,优化反应条件,建立检测PRV、PPV和PCV2的多重Real-time PCR方法,并对其敏感性、重复性和特异性进行检验;分别采用单项和多重Real-time PCR方法,对临床收集的42份疑似病料进行检测,比较2种方法的符合率。【结果】特异性和灵敏度试验表明,建立的多重Real-time PCR检测方法具有高度特异性,与其他病原无明显交叉反应;检测灵敏度高,可检出1.0×101拷贝/μL的阳性质粒或1TCID50/mL的病毒样品。用多重Real-time PCR对42份临床疑似病料进行检测,其检测结果与单重Real-time PCR结果完全一致,表明多重Real-time PCR方法是可行的。【结论】建立了可同时检测PRV、PPV和PCV2的多重Real-time PCR方法,该法具有快速、灵敏、特异和重复性好等优点。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 猪细小病毒 猪圆环病毒Ⅱ型 多重实时荧光定量PCR
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秋季初产母猪死胎预防方法的研究 被引量:3
18
作者 邬捷 曹国文 +5 位作者 罗建模 黄旭雯 吴国群 姜永康 乔代容 杨松全 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第3期228-233,共6页
根据我们1982~1987年的研究,认为秋季初产母猪死胎主要是由PPV和JEV两种病毒所致。本项预防方法的研究,是在四川、广西、广东和河北四省区进行的。通过301头秋季初产母猪的试验,证明PPV灭活苗JEV弱毒苗组是预防秋季初产母猪死胎的最佳... 根据我们1982~1987年的研究,认为秋季初产母猪死胎主要是由PPV和JEV两种病毒所致。本项预防方法的研究,是在四川、广西、广东和河北四省区进行的。通过301头秋季初产母猪的试验,证明PPV灭活苗JEV弱毒苗组是预防秋季初产母猪死胎的最佳组合,预防效果极显著,死胎率和死仔率显著下降,活仔率上升至95.92%、96.04%,平均每窝多生仔猪3.37头,净增仔猪2.59头,死仔率由对照组68.57%、40.65%下降至4.08%、3.96%,P<0.01。 展开更多
关键词 母猪 死胎 病毒 来活苗 弱毒苗
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猪细小病毒在兔体内的垂直传播 被引量:1
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作者 黄瑜 甘孟侯 刘尚高 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期129-130,共2页
以猪细小病毒(PPV)细胞复壮毒接种于妊娠后11~13d的初妊母兔,接毒的初妊母兔均于妊娠后30~32d分娩。分娩后立即扑杀接毒母兔及其死产仔兔、对照母兔及其仔兔,分别无菌采集其肝脏和肾脏,按常规方法处理后以银加强胶... 以猪细小病毒(PPV)细胞复壮毒接种于妊娠后11~13d的初妊母兔,接毒的初妊母兔均于妊娠后30~32d分娩。分娩后立即扑杀接毒母兔及其死产仔兔、对照母兔及其仔兔,分别无菌采集其肝脏和肾脏,按常规方法处理后以银加强胶体金技术进行检测,结果试验兔样本均为阳性,而对照兔样本均为阴性,这表明PPV也可在兔体内垂直传播,并引起繁殖障碍。初妊母兔可替代妊娠母猪作为PPV人工感染试验的动物模型。 展开更多
关键词 猪细小病毒 兔体 垂直传播
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猪细小病毒的分离与鉴定 被引量:3
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作者 张婉华 朱永军 +2 位作者 张春玲 何锡忠 彭丽英 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期20-23,共4页
利用ST细胞对采集的猪木乃伊胎儿内脏进行病毒分离,ST细胞产生规律性病变,表现为细胞圆缩、拉网、灶性脱落等变化;分离毒适应于ST细胞培养,并可凝集豚鼠红细胞,TCID_(50)随着传代次数升高而逐渐增高;分离毒能被PPV特异性阳性血清中和,... 利用ST细胞对采集的猪木乃伊胎儿内脏进行病毒分离,ST细胞产生规律性病变,表现为细胞圆缩、拉网、灶性脱落等变化;分离毒适应于ST细胞培养,并可凝集豚鼠红细胞,TCID_(50)随着传代次数升高而逐渐增高;分离毒能被PPV特异性阳性血清中和,而不能被PPV阴性血清中和;对细胞培养物进行PPV荧光抗体染色可见特异性荧光,理化特性试验证实分离毒对温度、酸碱不敏感,对乙醚、氯仿等脂溶性溶剂具有较强的抗性,并能抵抗短时间的胰酶处理;接种豚鼠可产生PPV HI抗体。试验结果证实分离毒为猪细小病毒。 展开更多
关键词 猪细小病毒 ST细胞 病毒分离 病毒鉴定
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