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利用DNA免疫法制备植物选择标记基因hpt表达蛋白抗体的研究 被引量：4
1
作者 杨丽琛 朱祯 杨晓光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期248-251,共4页
目的 :制备转基因作物中选择标记基因潮霉素B磷酸转移酶 (hygromycinBphosphotransferase,hpt)基因表达产物的多克隆抗体 ,并探讨影响核酸免疫效果的因素及相应机制。方法 :以hpt的cDNA全长插入真核表达载体 pCDNA3中 ,并经限制性内切... 目的 :制备转基因作物中选择标记基因潮霉素B磷酸转移酶 (hygromycinBphosphotransferase,hpt)基因表达产物的多克隆抗体 ,并探讨影响核酸免疫效果的因素及相应机制。方法 :以hpt的cDNA全长插入真核表达载体 pCDNA3中 ,并经限制性内切酶酶切及DNA测序鉴定。以纯化的重组质粒pCDNA3 HPT免疫BALB/c小鼠。用在E .coli中表达并纯化的 (His) 6 HPT进行ELISA ,检测免疫过程中小鼠血清抗体效价的增长状况 ,并用Westernblot检测抗血清的特异性。结果 :经 3次核酸免疫后 ,小鼠血清中未发现明显的抗HPT抗体。第 4次加强免疫时 ,将小鼠分为 3组 ,每组两只。第 1组改用去内毒素的质粒提取试剂盒提纯的重组质粒免疫 ,第2组用 (His) 6 HPT融合蛋白免疫 ,第 3组仍用原来提取的重组质粒免疫。结果发现 ,第 1组小鼠抗血清的效价有所上升 ,经ELISA检测达 1∶2 0 0 ;第 2组抗血清的滴度显著升高 ,达到 1∶2 0 0 0 ;而第 3组小鼠血清中仍未检测到明显的抗体。Westernblot证实 ,前两组抗血清均可与亲和层析纯化的GST HPT、(His) 6 HPT融合蛋白及其诱导表达的相应菌体总蛋白发生特异性结合。结论 :用DNA免疫法成功地制备了抗hpt基因表达产物的特异性抗体 ,但抗体效价不够理想。推测与hpt基因本身的性质及其在体内表达呈现的水? 展开更多
关键词 DNA免疫法 hpt 多克隆抗体 安全性评价
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