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题名CRLF2实时定量PCR检测方法的建立及初步应用
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作者
付晶晶
李红
易丽君
乐萍
黄慧
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机构
江西省儿童医院中心实验室
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出处
《国际检验医学杂志》
CAS
2015年第24期3520-3521,3524,共3页
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基金
江西省自然科学基金项目(20114BAB215031)
江西省卫生厅科技计划项目(20141152)
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文摘
目的建立人细胞因子受体样因子2（CRLF2）实时定量PCR检测方法。方法设计特异性引物扩增目的基因CRLF2及管家基因ABL,将纯化的PCR产物进行TA克隆,经菌落PCR筛选并测序鉴定后,提取重组质粒DNA,紫外分光光度计检测浓度换算成copies/mL浓度,稀释制备成质粒标准品,制作标准曲线观察灵敏度和线性范围,同时对质粒标准品的稳定性进行评估。初步应用该方法检测10例健康儿童和10例急性淋巴细胞白血病（ALL）初诊儿童的骨髓单个核细胞CRLF2水平。结果 CRLF2PCR产物具有单一特异的熔解曲线;标准品的线性检测范围为103~108 copies/mL;质粒标准品反复冻融3次仍旧稳定;临床标本的CRLF2水平均在标准品线性检测范围。结论该实验室建立的CRLF2实时定量PCR检测方法具有良好的特异性、线性范围和稳定性,可应用于临床ALL儿童CRLF2基因的定量检测。
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关键词
实时定量聚合酶链反应
急性淋巴细胞白血病
细胞因子受体样因子2
质粒标准品
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Keywords
real-time quantitative polymerase chain reaction
cytokine receptor-like factor 2
acute lymphoblastic leukemia
plasmid standard substance
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分类号
R733.71
[医药卫生—肿瘤]
R730.43
[医药卫生—临床医学]
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