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题名含绿色荧光蛋白报告基因pUC18筛选载体的构建
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作者
王进
李付广
李倩如
杜英
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机构
河南职工医学院微生物学与免疫学教研室
郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室
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出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2002年第5期621-624,共4页
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文摘
目的 :以绿色荧光蛋白 (GFP)基因为报告基因 ,将GFP基因克隆入pUC1 8建立大通量的筛选载体。方法 :用PCR方法扩增目的DNA片段 ,碱裂解法小量制备质粒DNA ,用限制性内切酶消化质粒DNA ,用低熔点琼脂糖凝胶分离和纯化大片段DNA ,GFP基因与 pUC1 8连接 ,用氯化钙法转化感受态细胞 ,DNA序列测定 ,琼脂糖凝胶电泳 ,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果 :pUC1 8 atg GFP载体意外表达GFP蛋白 ,新合成的上游引物与原下游引物扩增GFP基因 ,克隆入 pUC1 8构建 pUC1 8 GFP载体 ,通过PCR、酶切鉴定和DNA序列分析 ,GFP基因的读码框架与原设计方案完全一致 ,该载体自身无GFP表达。结论 :筛选载体内的GFP基因与克隆基因的融合基因可表达一种融合蛋白 ,在琼脂平板上含有该融合基因的克隆在紫外线激发下可发绿色荧光 ,因此 ,可表达基因能被挑选出来。
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关键词
绿色荧光蛋白
载体
puc18
GFP
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Keywords
green fluorescent protein
vector
plasmid puc18
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分类号
R392
[医药卫生—免疫学]
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题名稀土元素La(Ⅲ)对质粒pUC18复制速度的影响
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作者
石磊
傅佑丽
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机构
曲阜师范大学生命科学学院
曲阜师范大学学报编辑部
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出处
《曲阜师范大学学报（自然科学版）》
CAS
2003年第4期95-97,共3页
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文摘
稀土应用的日益增长将会对生物的遗传产生深远的影响 .生物的遗传离不开DNA的复制 ,由于染色体DNA非常巨大和复杂 ,难以直接研究稀土离子对其复制的影响 .以细菌染色体之外的遗传因子———质粒为对象 ,研究La3+对质粒DNA复制速度的影响 .结果表明 :在不同浓度La3+存在下 ,质粒在宿主细胞中复制的速度不同 ;由于质粒复制与染色体DNA复制使用相同的酶系 。
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关键词
稀土元素
镧
La
质粒puc18
复制速度
质粒拷贝数
荧光扫描法
生物效应
DNA复制
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Keywords
La(Ⅲ)
plasmid puc18
replication rate
copy number of plasmid
fluores cence scanning method
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分类号
Q785
[生物学—分子生物学]
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题名微绿球藻DNA质粒文库的构建
被引量：2
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作者
赵大显
周志刚
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机构
上海水产大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室
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出处
《海洋科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期87-91,共5页
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基金
国家转基因植物研究与产业化开发专项(JY03-B-20)
上海市属高校自然科学研究资助项目(01H04)
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文摘
微绿球藻（Nannochloropsis oculata）DNA被提取纯化并经超声波处理后，将所得大小在1．6～3kb之间的DNA片段用T4DNA聚合酶补平，再与Sma I酶切消化并经去磷酸化处理的质粒栽体pUCl8连接。转化至DH10B大肠杆菌（Escherichiacoli）的感受态细胞中。建立的DNA质粒文库容量含2×10^4个克隆，其中重组子占90％。随机挑选白色菌落并培养，抽提的质粒经XbaI和SacI双酶切鉴定，显示重组的质粒中均含有大小不等的DNA插入片段。
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关键词
微绿球藻(Nannochloropsis
oculata)
超声处理
质粒载体puc18
DNA文库
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Keywords
Nannochloropsis oculata
ultrasonication
plasmid vector puc18
genomic library
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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