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大肠杆菌表达rhIL—8的纯化和生物学活性鉴定 被引量：1
1
作者 陆宇新 张毅 +2 位作者 刘继民 朱剑昆 张学光 《苏州医学院学报》 1996年第6期1011-1013,共3页
高志昕应用钙盐沉淀法将ｈＩＬ一８重组质粒ＰＨＮＰ１０１转化感受态大肠杆菌ＨＢ１０１，转化菌经扩增培养，其包涵体及胞浆内均发现有重组蛋日的表达（约１０：１）。表达蛋白经初步分离，肝素柱、离子交换柱和凝胶柱进一步纯化，获... 高志昕应用钙盐沉淀法将ｈＩＬ一８重组质粒ＰＨＮＰ１０１转化感受态大肠杆菌ＨＢ１０１，转化菌经扩增培养，其包涵体及胞浆内均发现有重组蛋日的表达（约１０：１）。表达蛋白经初步分离，肝素柱、离子交换柱和凝胶柱进一步纯化，获得了高纯度的ｒｈＩＬ—８（＞９５％）。纯化的中ＩＬ—８在新西兰免体内白细胞动员试验中显示了较高的生物学活性硕士研究生＊导师脉采血，计数其外周血白细胞总数。对照组静脉注射等体积灭菌生理盐木，并于相同的时间点干血检查。２结果２．１重组质拉ｐＨＮＰ１０１转化ＨＢ１０１细菌：转化菌可在含１００ｍｇ／Ｌ氨苄青霉素的琼脂平板上生长并形成定落．空日质粒转化细菌则不能生长。２．２纯化ｒｈＩＬ——８的ＳＤＳ—ＰＡＧＥ：成熟ｈＩＬ——８是一低分子蛋曰，分子量约为１０ｋｕ．初步分离的ｒｈＩＬ——８经纯化后其纯度逐步提高（＞９５％），于电泳图谱上１０ｋｕ处显示单一条带（附图）。２．３纯化ｒｈＩＬ——８的ＥＬＩＳＡ检测；ｈＩＬ——８ＥＬＩＳＡ检测结果显示上述纯化后的蛋白为特异性ｒｈＩＬ——８，其含量约为２５ｍｇ／Ｌ。２．４ｒｈＩＬ——８快速募集白细胞进人外周血循环：在静注，ｒｈＩＬ——８（１０μｇ／ｋｇ）５ｍｉｎ后。 展开更多
关键词 人白细胞介素8 大肠杆菌 纯化 生物学活性
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去脑垂体大鼠诱导免疫耐受性的实验研究
2
作者 周幽心 张学光 +3 位作者 鲍耀东 周岱 朱凤清 陈忠平 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1998年第3期155-156,共2页
在立体定向仪经耳去除近交系ＳＤ大鼠脑垂体基础上，用不同剂量近交新的生的Ｗｉｎｓｔａｒ大鼠制成活化脾细胞和环磷酰胺进行诱导免疫耐受性的研究。
关键词 脾 环磷酰胺 垂体 免疫耐受
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诱导免疫耐受控制垂体移植免疫排斥Ⅰ.去脑垂体大鼠免疫耐受性的诱导
3
作者 周幽心 鲍耀东 +4 位作者 周岱 朱凤清 陈忠平 张学光 郑列琳 《苏州医学院学报》 1996年第1期7-9,197-198,共3页
在立体定各仪经耳去除交系ＳＤ大鼠脑垂体基础上，用不同剂量近交新生的Ｗｉｓｔａｒ大鼠制成活化脾细胞和环磷酰胺进行诱导免疫耐受性的研究。结果：活化脾细胞５×１０＾７／０．５ｍｌ／Ｗ或５×１０＆６／０．５ｍｌ／Ｗ联... 在立体定各仪经耳去除交系ＳＤ大鼠脑垂体基础上，用不同剂量近交新生的Ｗｉｓｔａｒ大鼠制成活化脾细胞和环磷酰胺进行诱导免疫耐受性的研究。结果：活化脾细胞５×１０＾７／０．５ｍｌ／Ｗ或５×１０＆６／０．５ｍｌ／Ｗ联合环磷酰胺２０ｍｇ／ｋｇ／ｄ持续２周后，去脑垂体大鼠同种异体皮肤移植自下而上时间分别为ＭＳＴ〉３３．５天和ＭＳＴ〉４７．８天。 展开更多
关键词 环磷酰胺 垂体 免疫耐受 免疫排斥 器官移植
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去脑垂体大鼠免疫耐受性诱导及产生机制探讨
4
作者 周幽心 周岱 +3 位作者 朱风清 鲍耀东 张学光 郑列琳 《苏州医学院学报》 1996年第6期1001-1004,共4页
为控制垂体移植免疫排斥．利用供体Ｗｉｓｔａｒ大鼠活化脾细胞（ＡＳＣ）和（或）环磷酰胺（ＣＰ）对去垂体ＳＤ大鼠进行免疫耐受诱导，同时检测受体Ｔ细胞业群、细胞因子及ＭＬＲ。结果ＡＳＣ５×１０７／０．５ｍｌ／周２次或Ａ... 为控制垂体移植免疫排斥．利用供体Ｗｉｓｔａｒ大鼠活化脾细胞（ＡＳＣ）和（或）环磷酰胺（ＣＰ）对去垂体ＳＤ大鼠进行免疫耐受诱导，同时检测受体Ｔ细胞业群、细胞因子及ＭＬＲ。结果ＡＳＣ５×１０７／０．５ｍｌ／周２次或ＡＳＣ联合ＣＰ２０ｍｇ／ｋｇ·ｄ２周，使移植皮片ＭＳＴ明显延长。致耐受体ＣＤ＋３、ＣＤ＋４、ＣＤ＋８细胞以及ＩＬ—２、ＩＬ——６和ＴＮＦ显著低于排斥组。ＭＬＲ显示，受体对特异抗原产生反应。表明ＡＳＣ和（或）ＣＰ能诱导去垂体大鼠的免疫耐受，其机制与Ｔ细胞业群对特定抗原的免疫无反应性及参予免疫应答的细胞因子水平下降有关。导师．Ｐ＜０．０１定［１２］ｒＩＬ一６标准品（法国Ｋｌｅｉｎ博士赠），四甲基偶素华盐（ＭＴＴ，瑞士）。１．７．３ＴＮＦ的检测：按ＴＮＦ敏感细胞株Ｌ９２９增殖法［１３］。ＴＮＦ标准品（法国Ｋｌｅｉｎ博士赠）。１．８混合淋巴细胞反应：取正常、去脑垂体及诱导耐受皮肤移植后的ＳＤ大鼠脾，制成脾细胞４×１０８／Ｌ作为反应细胞。取Ｗｉｓｔａｒ大鼠和ＢＡｂｌ／ｃ小鼠的经丝裂霉素处理的脾细胞８Ｘ１０／Ｌ作为刺激细胞。各组用含５％正常大鼠血清，１００ｍｇ／Ｌ庆大霉素，２５ｍｍｏｌＨＥＰＳ。 展开更多
关键词 免疫耐受性 T细胞亚群 垂体切除术 垂体移植
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颅咽管瘤患者术后腺垂体生长激素储备功能的初步评价 被引量：8
5
作者 梁丹 郭莹 钟历勇 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 2013年第4期71-74,共4页
目的探讨颅咽管瘤患者手术后腺垂体生长激素储备功能状态。方法采用胰岛素耐受性试验(insulin tolerance test,ITT)对12例颅咽管瘤术后时间超过6个月以上的患者行动态腺垂体生长激素储备功能试验。结果本组所有患者ITT各时间点生长激素... 目的探讨颅咽管瘤患者手术后腺垂体生长激素储备功能状态。方法采用胰岛素耐受性试验(insulin tolerance test,ITT)对12例颅咽管瘤术后时间超过6个月以上的患者行动态腺垂体生长激素储备功能试验。结果本组所有患者ITT各时间点生长激素分泌的水平均低于1ng/ml,提示本组受试者均存在完全性生长激素缺乏。受试者中4例患者的生长激素水平在ITT试验的各观察时间点波动在0.092～0.199ng/ml,但仍低于1ng/ml,其余8例患者生长激素水平在ITT激发后各观察时间点较前4例更低,其中4例患者各观察时间点生长激素水平甚至低于0.05ng/ml。结论本组颅咽管瘤患者在手术治疗6个月以后均存在严重的腺垂体生长激素储备功能减退。 展开更多
关键词 颅咽管瘤 外科手术 垂体 生长激素缺乏 胰岛素耐量试验
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经蝶入路垂体腺瘤切除术对垂体生长激素腺瘤糖耐量状态的影响 被引量：4
6
作者 李一琳 张硕 +4 位作者 郭晓鹏 高路 连伟 王任直 幸兵 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期73-77,共5页
目的探讨经蝶入路垂体腺瘤切除术对垂体生长激素(GH)腺瘤糖耐量状态的影响。方法回顾性分析2013年在北京协和医院神经外科就诊的105例垂体GH腺瘤的临床资料,比较手术前后患者的糖耐量状态、GH和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平,评估手术... 目的探讨经蝶入路垂体腺瘤切除术对垂体生长激素(GH)腺瘤糖耐量状态的影响。方法回顾性分析2013年在北京协和医院神经外科就诊的105例垂体GH腺瘤的临床资料,比较手术前后患者的糖耐量状态、GH和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平,评估手术对不同糖耐量状态的疗效。结果 105例患者中,47例(44.8%)术前为正常血糖(NGT),26例(24.8%)为糖尿病前期(ECMDs),32例(30.5%)为糖尿病(DM)。除NGT组外,ECMDs和DM组的术后空腹血糖(P=0.006,P=0.017)和餐后血糖(P=0.000,P=0.000)都得到明显改善;NGT组、ECMDs组和DM组患者的术后随机GH水平(P=0.001,P=0.004,P=0.001)、GH谷值(P=0.000,P=0.001,P=0.001)及IGF-1水平(P=0.005,P=0.000,P=0.000)均较术前均显著下降;DM组的空腹血糖(P=0.029,P=0.000)、餐后血糖(P=0.003,P=0.000)及血清IGF-1水平下降幅度(P=0.048,P=0.000)均明显大于ECMDs组和NGT组。结论经蝶垂体腺瘤切除术可明显改善垂体GH腺瘤患者的血糖、GH及IGF-1水平,且手术对术前明确DM者的糖耐量状态及IGF-1水平改善较ECMDs更显著。 展开更多
关键词 垂体生长激素腺瘤 胰岛素样生长因子-1 糖耐量 经蝶手术
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新型基因重组PACAP衍生物MPL-2的制备及其抗2型糖尿病作用研究 被引量：4
7
作者 王得华 马义 +6 位作者 韩磊 肖兴 李艳伟 党诗莹 范志勇 文涛 洪岸 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期59-65,共7页
利用基因工程技术高效制备具有治疗2型糖尿病功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生物MPL-2,并以2型糖尿病小鼠(db/db小鼠)为模型在体内研究其抗2型糖尿病的生物学作用。实验结果表明:利用基因工程技术制备的PACAP27衍生多肽MPL-2的... 利用基因工程技术高效制备具有治疗2型糖尿病功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生物MPL-2,并以2型糖尿病小鼠(db/db小鼠)为模型在体内研究其抗2型糖尿病的生物学作用。实验结果表明:利用基因工程技术制备的PACAP27衍生多肽MPL-2的分子质量为3 902Da.,纯度达97%,其产率可达29.3mg/L发酵产物;在以db/db小鼠为模型的体内葡萄糖耐量实验中,MPL-2可有效促进小鼠胰岛素第一时相(5~15min)分泌,显著提高小鼠的葡萄糖耐受能力。在MPL-2的长效药效学实验中,经过8周连续用药治疗后,MPL-2可显著提高db/db小鼠的胰岛素敏感性,胰岛素耐量实验60min时MPL-2可将小鼠血糖降至初始值的63.52%;同时,在8周连续用药治疗过程中,与生理盐水(NS)处理组相比,MPL-2可有效降低db/db小鼠的体重、空腹血糖、饮食量、饮水量,分别低于NS组21.98%、21.46%、22.20%、60.07%,而且可显著改善db/db小鼠的血脂常数,生物学作用显著优于多肽BAY55-9837。建立了新型基因重组PACAP27衍生多肽MPL-2的高效制备技术,重组多肽MPL-2可有效改善2型糖尿病db/db小鼠的葡萄糖耐量、胰岛素敏感性、血脂常数,显著降低db/db小鼠的体重、空腹血糖、饮食和饮水量,从而发挥治疗2型糖尿病的生物学作用,可为MPL-2的药用研发提供实验数据。 展开更多
关键词 基因工程 垂体腺苷酸环化酶激活肽衍生物 2型糖尿病 胰岛素敏感性 葡萄糖耐量
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纳米复合肽SCM的制备及其对Ⅱ型糖尿病治疗作用的研究 被引量：3
8
作者 党诗莹 马义 +2 位作者 文涛 肖兴 洪岸 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期17-23,共7页
一种新型的神经内分泌肽,垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）被发现在碳水化合物或脂质代谢中具有重要作用,但是易受二肽基肽酶IV的降解。将壳聚糖修饰的纳米硒（Se NPs-CTS,SC）作为载体,通过酰胺键负载连接PACAP衍生肽MPL-2,制备稳定性... 一种新型的神经内分泌肽,垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）被发现在碳水化合物或脂质代谢中具有重要作用,但是易受二肽基肽酶IV的降解。将壳聚糖修饰的纳米硒（Se NPs-CTS,SC）作为载体,通过酰胺键负载连接PACAP衍生肽MPL-2,制备稳定性良好、具有协同治疗Ⅱ型糖尿病作用的纳米复合肽Se NPs-CTS-MPL-2（SCM）。实验结果表明,成功构建了高稳定性的纳米复合肽SCM,SCM的平均粒径为158nm,粒径较为集中,表面Zeta电位为35.6m V,较SC粒径及Zeta电位有明显的变化,说明MPL-2成功的连接到了SC表面。SCM在水溶液中可稳定存在40天,在水溶液中有较强的稳定性。体外缓释实验表明SCM在48h内不断释放活性多肽MPL-2,有效的延长了MPL-2的作用时间。Ⅱ型糖尿病模型鼠（db/db小鼠）腹腔注射SCM,葡萄糖耐量实验结果表明MPL-2负载到载体SC上构建了SCM后,SCM在体内不断缓释MPL-2,延长了MPL-2的作用时间,增强了MPL-2的药效。在8周连续用药治疗的过程中,SCM可显著提高Ⅱ型糖尿病模型小鼠的胰岛素敏感性,药效明显强于MPL-2和SC单独用药。构建了纳米复合肽SCM,可有效的延长MPL-2的作用时间,发挥治疗Ⅱ型糖尿病的生物学作用。 展开更多
关键词 垂体腺苷酸环化酶激活肽衍生肽(MPL-2) 纳米硒 Ⅱ型糖尿病 胰岛素敏感性葡萄糖耐量
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垂体非生长激素瘤病人术后生长激素储备功能观察 被引量：2
9
作者 侯丕秀 王新凤 袁鹰 《青岛大学医学院学报》 CAS 2011年第3期222-224,共3页
目的了解垂体非生长激素瘤病人术后生长激素(GH)储备功能状况。方法对23例垂体非生长激素瘤术后6个月以上病人行胰岛素耐量试验(ITT),在试验前30 min及试验后0、30、45、60、90、120 min分别采血测葡萄糖(GLU)和GH,试验前30 min的血标... 目的了解垂体非生长激素瘤病人术后生长激素(GH)储备功能状况。方法对23例垂体非生长激素瘤术后6个月以上病人行胰岛素耐量试验(ITT),在试验前30 min及试验后0、30、45、60、90、120 min分别采血测葡萄糖(GLU)和GH,试验前30 min的血标本加测胰岛素样生长因子-1(IGF-Ⅰ)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)。结果垂体非生长激素瘤病人术后IGF-Ⅰ的浓度平均为(0.32±0.14)g/L,与年龄呈负相关关系(r=-0.555,P<0.05)。IGFBP-3的平均浓度为(5.92±1.15)g/L,与年龄无相关关系(r=0.036,P>0.05)。GH峰值平均为(3.92±4.71)μg/L,仅有4例病人GH峰值>5.0μg/L,其余19例病人GH峰值均<5.0μg/L,其中15例GH峰值<3.0μg/L。GH峰值<5.0μg/L的病人中有8例IGF-Ⅰ与IGFBP-3水平在正常值范围。GH峰值高度与GLU水平最低值不相关(r=-0.352,P>0.05)。结论多数垂体非生长激素瘤病人术后会发生GH缺乏或严重缺乏,对于垂体瘤术后垂体前叶功能低下者应注意评估GH储备功能。在常规补充糖皮质激素、甲状腺激素的同时,对GH缺乏或严重缺乏者应重视GH的长期替代治疗。 展开更多
关键词 垂体肿瘤 生长激素 缺乏症 胰岛素 葡萄糖耐量试验 胰岛素样生长因子-Ⅰ 胰岛素样生长因子结合蛋白质-3
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