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光敏生物素标记鸭瘟病毒核酸探针的制备及应用的研究 被引量:7
1
作者 贺东生 赵善昌 《广西农业大学学报》 CAS CSCD 1993年第3期69-74,共6页
本试验研制了光敏生物素标记鸭瘟病毒全基因组核酸探针,对此探针的敏感性和特异性进行了研究。把提纯的鸭瘟病毒经蛋白酶消化后,提取核酸,核酸和光敏生物素经光标记后制成核酸探针。经亲和素—辣根过氧化物酶(AV-HRP)或碱性磷酸酶显色... 本试验研制了光敏生物素标记鸭瘟病毒全基因组核酸探针,对此探针的敏感性和特异性进行了研究。把提纯的鸭瘟病毒经蛋白酶消化后,提取核酸,核酸和光敏生物素经光标记后制成核酸探针。经亲和素—辣根过氧化物酶(AV-HRP)或碱性磷酸酶显色的核酸斑点杂交结果表明:该探针最低可检出10 pg(AV—AP法)同源的鸭瘟病毒F_(33)—DNA或10^(-5)稀释的攻毒鸭脑中的F_(33)—DNA;用辣根酶系统显色,灵敏度要比碱性磷酸酶的低约10倍;该探针与鸭瘟弱毒、禽巴氏杆菌、鸭肝炎病毒、新城疫病毒、马立克氏病毒和正常鸭组织均不出现杂交信号,表明探针是敏感与特异的;探针在—18℃的保存期大于4个月;用探针检测21份病料,阳性率为90.5%(19/21),其中攻毒病料100%(7/7)被检出,而病毒分离—电镜法的检出率仅为75%(6/9)。杂交结果还显示了病鸭体内各组织含毒量的大小,依次是:脑>肝,脾>血,肾>肌肉。 展开更多
关键词 鸭病 鸭瘟病毒 光敏生物素
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鸡传染性喉气管炎病毒核酸探针的制备及特异性鉴定 被引量:6
2
作者 童光志 李峰 +3 位作者 王玫 王柳 辛桂香 王锡堃 《兽医大学学报》 CSCD 1992年第3期231-234,共4页
从鸡传染性喉气管炎病毒王岗株感染的鸡胚绒毛尿囊膜细胞中提取病毒,并抽提其核酸,经限制性核酸内切酶Pst Ⅰ完全消化后,在0.7%琼脂糖凝胶中电泳分离,然后用DE—81滤纸回收2~6kb区域的片段与质粒pBluescrip^+SK重组.有3个重组质粒(pLT... 从鸡传染性喉气管炎病毒王岗株感染的鸡胚绒毛尿囊膜细胞中提取病毒,并抽提其核酸,经限制性核酸内切酶Pst Ⅰ完全消化后,在0.7%琼脂糖凝胶中电泳分离,然后用DE—81滤纸回收2~6kb区域的片段与质粒pBluescrip^+SK重组.有3个重组质粒(pLT—1,pLT—2和pLT—4)所含外源DNA片段的大小,分别与4.3kb,4.8kb和1.6kb的鸡传染性喉气管炎病毒DNA Pst Ⅰ片段一致,经过Southern杂交试验证明,这3个片段都是病毒DNA的特异性片段.用光生物素标记重组质粒pLT—1和pLT—2后混合作为探针,再与鸡喉气管炎病毒及其他8种鸡传染性病原进行杂交,证明此探针只与喉气管炎病毒反应,而与其他8种病原无任何交叉反应. 展开更多
关键词 喉气管炎 病毒 核酸探针
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PRV特异性糖蛋白gp50基因片段的克隆探针制备 被引量:5
3
作者 魏伟 王正党 +5 位作者 冉多亮 黄嘉驷 孟颖 秋阳 叶志远 魏文进 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期457-459,共3页
在BHK21细胞中增殖伪狂犬病病毒(PRV),提纯PRVDNA,选编码特异性糖蛋白gp50基因中的262bp片段进行PCR扩增。扩增产物经KpnⅠ和SalⅠ双酶切后,将222bp片段与质粒pUC19连接构成重组子pU... 在BHK21细胞中增殖伪狂犬病病毒(PRV),提纯PRVDNA,选编码特异性糖蛋白gp50基因中的262bp片段进行PCR扩增。扩增产物经KpnⅠ和SalⅠ双酶切后,将222bp片段与质粒pUC19连接构成重组子pUP。通过转化大肠杆菌JM83、Ampr和α互补效应筛选后,扩增、提纯重组子pUP,用KpnⅠ和SalⅠ酶切,电泳回收克隆的222bp片段。用光敏生物素标记222bp片段和重组子pUP制备的探针,分别检出46.8pg和93.6pg的PRVDNA,且pUP探针只与PRV呈杂交阳性反应,与HSV-1、HSV-2及CMV呈阴性反应。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gp50基因 无性系 光敏生物素 探针
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肉食兽细小病毒核酸探针的制备及其初步应用研究 被引量:6
4
作者 赵永军 童光志 +2 位作者 赵奕 白丽萍 殷震 《兽医大学学报》 CSCD 1990年第1期1-6,共6页
将提纯的貂肠炎病毒(MEV)中间复制型DNA(RF-DNA),以HinaⅡ酶切,回收0.7kbC片段并克隆至质粒pBR322中,构成重组质粒pBM,经转化大肠杆菌RRⅠ并扩增后,提纯pBM,酶切电泳回收克隆的C片段,以[α-32P]dATP标记C片段和pBM,用光生物素标记pBM,... 将提纯的貂肠炎病毒(MEV)中间复制型DNA(RF-DNA),以HinaⅡ酶切,回收0.7kbC片段并克隆至质粒pBR322中,构成重组质粒pBM,经转化大肠杆菌RRⅠ并扩增后,提纯pBM,酶切电泳回收克隆的C片段,以[α-32P]dATP标记C片段和pBM,用光生物素标记pBM,分别制成放射性同位素和光生物素核酸探针。采用打点杂交技术检测了5种肉食兽细小病毒的细胞培养物和非细小病毒科5种病毒的细胞培养物,同时检测了貂和犬的粪便样品33份。结果表明,32P标记的C片段和pBM探针与光生物素际记的pBM探针均具有相同的杂交特异性,与5种肉食兽细小病毒及感染细小病毒的貂、犬粪样呈杂交阳性反应,与其他科病毒及健貂、犬粪样呈阴性。同位素32P和光生物素标记探针分别检出1 pg和10 pg貂肠炎病毒RF-DNA,敏感性比血凝试验分别离100倍和10倍。 展开更多
关键词 肉食兽 细小病毒 核酸探针
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牛疱疹病毒Ⅳ型(DN-599株)DNA的分子克隆 被引量:4
5
作者 童光志 Dieter Burger David T Shen 《病毒学杂志》 CSCD 1990年第4期423-429,共7页
从感染的MDBK(牛肾)细胞中直接抽提出牛疱疹病毒IV型(BHV-4)DNA。分别经限制性内切酶EcoRⅠ,HindⅢ或BamHI消化后,用鸟枪法和选择法将病毒DNA片段克隆到质粒pBR322和pUC9的相应位点中,构建了三组病毒DNA基因库。阳性克隆是用光生物素标... 从感染的MDBK(牛肾)细胞中直接抽提出牛疱疹病毒IV型(BHV-4)DNA。分别经限制性内切酶EcoRⅠ,HindⅢ或BamHI消化后,用鸟枪法和选择法将病毒DNA片段克隆到质粒pBR322和pUC9的相应位点中,构建了三组病毒DNA基因库。阳性克隆是用光生物素标记的病毒DNA和牛胸腺细胞DNA与各重组质粒DNA杂交而筛选的。总共克隆了病毒基因组的94%,其中用EcoRI克隆了83.4%,BamHI克隆了63.4%,HindIlI克隆了45%。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒 IV型 分子克隆
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光敏生物素DNA探针用于血内和蚊体内疟原虫的检测 被引量:3
6
作者 黄炳成 陈锡欣 +4 位作者 刘玉冰 王金祥 寇景轩 赵长磊 刘克义 《实用寄生虫病杂志》 1999年第4期159-161,共3页
从恶性疟原虫(P.f) 基因文库中筛选的具有P.f 种特异的质粒型pBF2 克隆DNA 经光敏生物素标记后作探针,用核酸杂交方法检测不同疟区病人血内和蚊体内的疟原虫,敏感性和特异性均达应用水平,显示该探针在疟疾监测中具有... 从恶性疟原虫(P.f) 基因文库中筛选的具有P.f 种特异的质粒型pBF2 克隆DNA 经光敏生物素标记后作探针,用核酸杂交方法检测不同疟区病人血内和蚊体内的疟原虫,敏感性和特异性均达应用水平,显示该探针在疟疾监测中具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 光敏生物素 DNA探针 疟疾
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光生物素标记DNA探针对貂和犬细小病毒感染的检测 被引量:2
7
作者 赵永军 赵奕 +2 位作者 殷震 童光志 白丽萍 《兽医大学学报》 CSCD 1991年第3期201-203,共3页
将貂肠炎病毒中间复制型DNA(MEV—RF—DNA)的Hind Ⅲ酶切C片段克隆到pBR332中,形成重组质粒pBM.以光生物素标记的pBM探针,检测接种细小病毒前的貂和犬粪样36份和12份,阳性率分别为36.1%和33.3%;检测接毒后不同时间的貂和犬粪样98份和71... 将貂肠炎病毒中间复制型DNA(MEV—RF—DNA)的Hind Ⅲ酶切C片段克隆到pBR332中,形成重组质粒pBM.以光生物素标记的pBM探针,检测接种细小病毒前的貂和犬粪样36份和12份,阳性率分别为36.1%和33.3%;检测接毒后不同时间的貂和犬粪样98份和71份,阳性率分别是90.8%和91.5%.探针对接毒前、后貂和大粪样检出的阳性率均明显高于常规HA试验.另外,对部分貂和大粪样进行了电镜检查和病毒分离试验,并与探针检测结果进行了比较. 展开更多
关键词 细小病毒 感染 DNA 探针
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in situ LOCALIZATION OF HGG mRNA IN HUMAN CHORION VILLI WITH IMMUNOGOLD-SILVER STAINING
8
作者 杨增明 陈大元 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1992年第16期1385-1389,共5页
in situ hybridization or hybridocytochemistry is a powerful tool for detection and localization of gene expression. It is also the most commonly used procedure to localize specific DNA or RND sequences in tissue secti... in situ hybridization or hybridocytochemistry is a powerful tool for detection and localization of gene expression. It is also the most commonly used procedure to localize specific DNA or RND sequences in tissue sections or cell preparations. Probes are usually 展开更多
关键词 in SITU HYBRIDIZATION photobiotin immunogold-silver staining.
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香石竹环斑病毒的分子检测 被引量:3
9
作者 陈定虎 于顺 《植物检疫》 北大核心 1997年第5期257-260,共4页
试验具体研究了两类不同性质的cDNA探针对香石竹环斑病毒的检测效果。毒源由中国农业大学植物病毒室提供,繁殖于苋色藜Chenopodiumamaranticolor上,提纯该病毒,然后抽提其核酸RNA,将RNA多聚腺苷... 试验具体研究了两类不同性质的cDNA探针对香石竹环斑病毒的检测效果。毒源由中国农业大学植物病毒室提供,繁殖于苋色藜Chenopodiumamaranticolor上,提纯该病毒,然后抽提其核酸RNA,将RNA多聚腺苷化后,以Oligo(dT)为引物,反转录合成cDNA,补平后与载体连接,转化大肠杆菌,获得阳性克隆,用32P和光敏生物素分别标记cDNA制作探针,与CRSV及其RNA进行点杂交,结果表明,两类不同性质的探针在检测RNA水平上具有相同的灵敏度,其检测极限均达到1ng/ml,并对二类探针进行了比较。 展开更多
关键词 香石竹环斑病毒 CDNA 光敏生物素 同位素
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新疆细粒棘球绦虫DNA限制性酶切片段长度多态性的初步分析 被引量:3
10
作者 李新兰 柴君杰 +1 位作者 张文林 焦伟 《地方病通报》 1992年第1期18-22,101-102,共5页
应用光敏生物素标记细粒棘球绦虫特异性DNA探针pEG18,对新疆5个不同地区绵羊、1例肝包虫病人、阿勒泰地区牛细粒棘球绦虫原头节以及羊源、牛源细粒棘球绦虫成虫DNA进行限制性酶切谱和Southern杂交分析。牛源、羊源样本经EcoRI酶切后产... 应用光敏生物素标记细粒棘球绦虫特异性DNA探针pEG18,对新疆5个不同地区绵羊、1例肝包虫病人、阿勒泰地区牛细粒棘球绦虫原头节以及羊源、牛源细粒棘球绦虫成虫DNA进行限制性酶切谱和Southern杂交分析。牛源、羊源样本经EcoRI酶切后产生的杂交图型基本上是一致的。BamHI酶切后产生的杂交结果,在新疆5个不同地区绵羊感染的细粒棘球绦虫没有发现差别,而人源和牛源细粒棘球绦虫DNA产生的杂交图型与绵羊源细粒棘球绦虫DNA产生的杂交图型大体上是一致的,但又存在着各自的差异。与绵羊样本相比,人源细粒棘球绦虫产生的杂交图型约在8.3kb处明显可见一条杂交带,而牛源细粒棘球绦虫约在3.5kb处有一条清晰的杂交带。这些差异的意义有待进一步研究。用光敏生物素代替同位素标记DNA探针,简便易行,稳定可靠,可取得满意的结果,在边远的地区是一种值得推广的方法。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 DNA 限制性内切酶
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光敏生物素标记核酸探针法检测登革病毒核酸 被引量:2
11
作者 于曼 杨佩英 +2 位作者 秦鄂德 徐品芳 司炳银 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1994年第4期300-302,共3页
用光敏生物素标记的核酸探针法检测登革病毒核酸比常规的病毒分离法和免疫学方法快速、简便,而且不存在放射性同位素标记探针的污染问题,敏感性也较高。经实验证实,该方法可从感染6h的C6/36细胞中和感染16h的细胞上清液中... 用光敏生物素标记的核酸探针法检测登革病毒核酸比常规的病毒分离法和免疫学方法快速、简便,而且不存在放射性同位素标记探针的污染问题,敏感性也较高。经实验证实,该方法可从感染6h的C6/36细胞中和感染16h的细胞上清液中检出病毒的基因组序列,尤其适于检测感染16-48h的细胞内病毒核酸,并可检出0.01μg病毒中的核酸. 展开更多
关键词 核酸探针 登革病毒 光敏生物素
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光生物素标记抗体用于人心钠素基因表达的检测 被引量:1
12
作者 刘新平 陈南春 陈苏民 《第四军医大学学报》 1990年第5期333-335,共3页
光生物素与兔抗鼠IgG以不同克分子比在可见光照射下进行标记。标记抗体用于抗原的检测,敏感度可达62.5pg/2μl。用同样方法对大肠杆菌TAP106(pYX40)中心钠素的表达进行了检测,与(125)~Ⅰ标记的兔抗鼠IgG得到一致的结果。
关键词 光生物素 纳利尿肽素 心房
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用斑点杂交法检测肾综合征出血热患者尿沉渣细胞中病毒核酸 被引量:1
13
作者 刘军连 安家泽 +3 位作者 吕海 赵洪礼 汪美先 姜绍淳 《第四军医大学学报》 1991年第3期203-205,共3页
用光敏生物素标记的肾综合征出血热(HFRS)病毒R22株M片段R3克隆cDNA探针检测HFRS患者尿沉渣细胞内的病毒核酸,共检测81份患者尿液标本,阳性率为65.4%,而正常人及其他疾病患者的55份尿液标本均呈阴性,病程第1—7日病毒核酸检出率为80.8... 用光敏生物素标记的肾综合征出血热(HFRS)病毒R22株M片段R3克隆cDNA探针检测HFRS患者尿沉渣细胞内的病毒核酸,共检测81份患者尿液标本,阳性率为65.4%,而正常人及其他疾病患者的55份尿液标本均呈阴性,病程第1—7日病毒核酸检出率为80.8%(21/26),在发病第22日以后有的(5/13)仍可检出。7份尿液标本同时用光敏生物素和x-^(32)P标记探针检测,均为4份阳性,本实验结果提示,光敏生物素标记的核酸杂交技术可作为HFRS早期诊断及流行病学调查之用。 展开更多
关键词 流行性出血热 病毒 斑点杂交 核酸
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非放射性探针杂交检测早期钩端螺旋体病患者血清钩体DNA的研究 被引量:1
14
作者 张燕华 戴保民 《华西医学》 CAS 北大核心 1993年第1期48-50,共3页
作者首次应用非放射性地高辛配基、光敏生物素探针并以^(32)P探针作对照,斑点杂交检测33创早期钩体病人血清。结果,三种探针杂交的阳性率分别为69.70%(23/33)、27.27%(9/33)、57.58%(19/33)。地高辛配基探针的杂交阳性率高于血培养(2... 作者首次应用非放射性地高辛配基、光敏生物素探针并以^(32)P探针作对照,斑点杂交检测33创早期钩体病人血清。结果,三种探针杂交的阳性率分别为69.70%(23/33)、27.27%(9/33)、57.58%(19/33)。地高辛配基探针的杂交阳性率高于血培养(20/33),明显优于光敏生物素探针(p<0.01),稍高于^(32)P探针。阴性对照标本中,光敏生物素探针杂交1例出现阳性,地高辛配基,^(32)P探针无阳性结果出现。 展开更多
关键词 钩端螺旋体病 斑点杂交 DNA
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光敏生物素标记犬细小病毒核酸探针的制备及其应用 被引量:1
15
作者 孔繁德 陆承平 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第S1期77-80,共4页
将含有犬细小病毒2.0 kb DNA 克隆片段的重组质粒 pBI-264转化大肠杆菌 JF-803,扩增后用碱裂解法提取重组质粒,纯化后电泳,用冷榨法回收克隆片段。用光敏生物素分别标记重组质粒及克隆片段,制成重组质粒探针及克隆片段探针两种核酸探针... 将含有犬细小病毒2.0 kb DNA 克隆片段的重组质粒 pBI-264转化大肠杆菌 JF-803,扩增后用碱裂解法提取重组质粒,纯化后电泳,用冷榨法回收克隆片段。用光敏生物素分别标记重组质粒及克隆片段,制成重组质粒探针及克隆片段探针两种核酸探针,它们对犬细小病毒有相同的杂交特异性,检测灵敏度达 pg 水平,保存期至少8个月。检测25份犬粪样,阳性率为32%(8/25),而 HA-HI 试验为24%(6/25),两种方法的符合率为92%(23/25)。本试验从粪样直接提取病毒 DNA,用非放射性的光敏生物素标记探针检测,方法简便,可直接应用于兽医病毒学诊断。 展开更多
关键词 犬细小病毒 光敏生物素 核酸探针 病毒学诊断
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用光生物素标记F20探针检测柑桔裂皮病类病毒 被引量:1
16
作者 陈纯贤 万蜀渊 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期276-278,共3页
用光生物素标记F20探针检测柑桔裂皮病类病毒陈纯贤,万蜀渊(武汉华中农业大学柑桔研究所430070)关键词柑桔裂皮病类病毒,F20探针,光生物素,斑点杂交核酸分子杂交技术因其灵敏度高、特异性强,也广泛用于病毒和类病毒... 用光生物素标记F20探针检测柑桔裂皮病类病毒陈纯贤,万蜀渊(武汉华中农业大学柑桔研究所430070)关键词柑桔裂皮病类病毒,F20探针,光生物素,斑点杂交核酸分子杂交技术因其灵敏度高、特异性强,也广泛用于病毒和类病毒的检测。最初,一般采用放射性同位素... 展开更多
关键词 柑桔 裂皮病类病毒 F20探针 光生物素
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光敏生物素标记IgG检测农产品重金属污染 被引量:1
17
作者 邹亚丽 王廷璞 张娟 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期289-293,共5页
重金属污染的植物体内会产生较高的金属硫蛋白(MT),实验以光敏生物素标记用MT免疫家兔产生的抗体,用碱性磷酸酶标记亲和素,对MT进行免疫印迹检测,方法简单准确,标记的IgG最低检出量为1 ng/mL。通过对天水秦城区不同地域采集到的16种农... 重金属污染的植物体内会产生较高的金属硫蛋白(MT),实验以光敏生物素标记用MT免疫家兔产生的抗体,用碱性磷酸酶标记亲和素,对MT进行免疫印迹检测,方法简单准确,标记的IgG最低检出量为1 ng/mL。通过对天水秦城区不同地域采集到的16种农产品样本进行检测,其检测结果与样本中金属硫蛋白的含量测定结果一致。 展开更多
关键词 重金属 金属硫蛋白 光敏生物素 抗体
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光敏生物素标记总DNA探针对大豆根瘤菌的检测 被引量:1
18
作者 谢小保 杨苏声 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期9-11,共3页
以光敏生物素标记慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)USDA110总DNA作为探针,与快生型大豆根瘤菌杂交时,没有杂交斑点形成,而与慢生型大豆根瘤菌中的部分菌株能形成杂交斑点,表明该探针具有种和部分菌株特异性,用该探针与压碎... 以光敏生物素标记慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)USDA110总DNA作为探针,与快生型大豆根瘤菌杂交时,没有杂交斑点形成,而与慢生型大豆根瘤菌中的部分菌株能形成杂交斑点,表明该探针具有种和部分菌株特异性,用该探针与压碎的根瘤汁液进行DNA杂交,检测USDA110在不灭菌的盆栽土壤中的竞争结瘤能力,发现USDA110在大豆不同生育期的占瘤率为70%~90%。 展开更多
关键词 大豆根瘸菌 光敏生物素 DNA探针 固氮根瘤菌
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光生物素cDNA探针对体内外蓝舌病病毒感染的检测
19
作者 吴时友 孙书华 +4 位作者 宫云浩 蒋正军 杨承谕 普淑英 李晓成 《兽医大学学报》 CSCD 1991年第1期11-13,共3页
蓝舌病病毒(BTV)基因的第三片段(RMA_3)在不同型间有较高的同源性.用光生物素标记的其cDNA重组体pC7,检测2~22型BTV BHK细胞培养物全部为阳性,而相关病毒EHDV_1、EHDV_2和Ibraki病毒为阴性;同一探针检测17个型BTV攻毒羊的全血样品均为... 蓝舌病病毒(BTV)基因的第三片段(RMA_3)在不同型间有较高的同源性.用光生物素标记的其cDNA重组体pC7,检测2~22型BTV BHK细胞培养物全部为阳性,而相关病毒EHDV_1、EHDV_2和Ibraki病毒为阴性;同一探针检测17个型BTV攻毒羊的全血样品均为阳性,未感染的正常羊血细胞和BHK细胞培养物样品均为阴性. 展开更多
关键词 蓝舌病 病毒 光生物素 互补DNA
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光敏生物素标记总DNA探针对大豆根瘤菌的检测
20
作者 谢小保 杨苏声 《仲恺农业技术学院学报》 1997年第2期49-52,共4页
以光敏生物素标记慢生型大豆根瘤菌USDA110总DNA作为探针,与快生型大豆根瘤菌杂交,没有杂交斑点形成.而与慢生型大豆根瘤菌中的部分菌株能形成杂交斑点,表明该探针具有种和部分菌株特异性.用该探针与压碎的根瘤汁液进行DNA杂交,检... 以光敏生物素标记慢生型大豆根瘤菌USDA110总DNA作为探针,与快生型大豆根瘤菌杂交,没有杂交斑点形成.而与慢生型大豆根瘤菌中的部分菌株能形成杂交斑点,表明该探针具有种和部分菌株特异性.用该探针与压碎的根瘤汁液进行DNA杂交,检测USDA110在不灭菌的盆栽土壤中的竞争结瘤能力,发现USDA110在大豆不同生育期的占瘤率为70%~90%. 展开更多
关键词 大豆根瘤菌 光敏生物素 探针 检测
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