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抗除草剂旱稻转基因植株的获得 被引量:10
1
作者 于志华 陈敏勇 +2 位作者 顾红雅 陈章良 李岩 《北京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期499-504,共6页
以旱稻丹粳旱5-55、6-24、6-37(OryzasativaL.varjaponica)的悬浮细胞及未成熟胚为受体材料,采用基因枪法将含BAR基因的pDM302质粒DNA导入旱稻细胞中,经PPT筛选获得抗性愈伤组... 以旱稻丹粳旱5-55、6-24、6-37(OryzasativaL.varjaponica)的悬浮细胞及未成熟胚为受体材料,采用基因枪法将含BAR基因的pDM302质粒DNA导入旱稻细胞中,经PPT筛选获得抗性愈伤组织,筛选出的愈伤组织在分化培养基上再生出完整的旱稻转基因植株。Southern分子杂交分析表明,外源BAR基因已整合到水稻基因组内,抗除草剂试验结果表明,转化植株对0.01%Basta(有效成分为PPT)有一定程度的抗性,说明外源BAR基因已在旱稻细胞内正确表达。90%的转基因植株可育并已结实。 展开更多
关键词 旱稻 转基因植株 抗除草剂试验 基因枪法
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转基因抗草丁膦油菜籽中Barnase基因的实时荧光定量PCR检测 被引量:15
2
作者 潘良文 田风华 张舒亚 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期194-198,共5页
利用荧光定量PCR技术,对进口抗草丁膦油菜籽中的Barnase基因进行了定量检测,分别建立了抗草丁膦油菜籽参照样品外源Barnase基因和内标准HMG基因C t值与模板量之间的标准曲线和线性回归方程,运用所建立起来的方法对14批油菜籽样品进行了... 利用荧光定量PCR技术,对进口抗草丁膦油菜籽中的Barnase基因进行了定量检测,分别建立了抗草丁膦油菜籽参照样品外源Barnase基因和内标准HMG基因C t值与模板量之间的标准曲线和线性回归方程,运用所建立起来的方法对14批油菜籽样品进行了定量分析。 展开更多
关键词 转基因油菜籽 草丁膦 Barnase基因 HMG基因 定量PCR
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抗生素及草酊磷对盐藻生长的影响 被引量:7
3
作者 郑合明 薛乐勋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2002年第6期790-793,共4页
目的 :研究常用抗生素和草酊磷 (Phosphinothricin ,PPT)对盐藻生长的影响。方法 :在固体培养基中加入不同浓度的卡那霉素、青霉素、链霉素、壮观霉素、利福平和PPT ,在液体培养基中加入不同浓度PPT ,对盐藻进行选择培养 ,观察盐藻在选... 目的 :研究常用抗生素和草酊磷 (Phosphinothricin ,PPT)对盐藻生长的影响。方法 :在固体培养基中加入不同浓度的卡那霉素、青霉素、链霉素、壮观霉素、利福平和PPT ,在液体培养基中加入不同浓度PPT ,对盐藻进行选择培养 ,观察盐藻在选择试剂作用下的生长情况。结果 :卡那霉素、青霉素、链霉素、壮观霉素 16 0 0mg/L时尚不影响固体培养基中盐藻的生长 ;利福平 4 0 0mg/L时可完全抑制固体培养基中盐藻的生长 ;而PPT 3mg/L时即可完全抑制固体和液体培养基中盐藻的生长 ,5mg/L时可以杀死液体培养基中的盐藻。 结论 :PPT对盐藻的生长具有很强的抑制作用 ,在基因工程中 ,以抗除草剂 (BAR)基因作为盐藻的选择标记基因研究盐藻的转化是合适的 。 展开更多
关键词 抗生素 草酊磷 盐藻 生长
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抗除草剂基因和荧光素酶基因在小麦愈伤组织中的稳定表达 被引量:6
4
作者 杨书礼 曾君祉 +3 位作者 吴有强 朱小平 王东江 张健 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1993年第11期825-830,共6页
用PEG介导法将抗除草剂基因和萤火虫荧光素酶基因转入小麦原生质体,在含50mg/L Basta的培养基上筛选出有抗性的愈伤组织。DNA分子杂交结果表明bar基因和luc基因都已整合到小麦细胞基因组中,萤火虫荧光素酶活... 用PEG介导法将抗除草剂基因和萤火虫荧光素酶基因转入小麦原生质体,在含50mg/L Basta的培养基上筛选出有抗性的愈伤组织。DNA分子杂交结果表明bar基因和luc基因都已整合到小麦细胞基因组中,萤火虫荧光素酶活性测定也检测到luc基因的表达。 展开更多
关键词 小麦 荧光素酶 除草剂 基因
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除草剂草丁膦抗性基因bar作为三角褐指藻基因工程选择标记的研究 被引量:4
5
作者 卞曙光 姜鹏 +2 位作者 崔玉琳 刘兆普 秦松 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期62-66,78,共6页
研究了三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)对氯霉素、卡那霉素、青霉素、链霉素、潮霉素5种抗生素和一种除草剂草丁膦的敏感性,发现三角褐指藻对草丁膦非常敏感,用统计学分析法得出了其72h半致死质量浓度为22mg/L。通过基因枪法将... 研究了三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)对氯霉素、卡那霉素、青霉素、链霉素、潮霉素5种抗生素和一种除草剂草丁膦的敏感性,发现三角褐指藻对草丁膦非常敏感,用统计学分析法得出了其72h半致死质量浓度为22mg/L。通过基因枪法将携带草丁膦抗性基因bar的载体pSVB导入三角褐指藻细胞中,通过草丁膦筛选成功获得了抗性藻细胞,PCR检测获得阳性结果,提示草丁膦更适合用于构建安全、高效、廉价的三角褐指藻表达系统。 展开更多
关键词 三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum) 草丁膦 BAR基因 基因工程 选择标记
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蛋白桑叶片再生体系的建立及对草丁膦敏感性测定 被引量:4
6
作者 熊意 王红红 +2 位作者 张芳松 穆建强 祝建波 《北方园艺》 CAS 北大核心 2016年第17期98-102,共5页
以蛋白桑的幼嫩叶片为外植体,以MS为基本培养基,采用正交实验设计,研究不同浓度的植物生长调节剂对蛋白桑植株再生的影响。结果表明:叶片诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+TDZ 1.0mg·L^(-1)+NAA 0.1mg·L^(-1);最佳分化培养基为MS... 以蛋白桑的幼嫩叶片为外植体,以MS为基本培养基,采用正交实验设计,研究不同浓度的植物生长调节剂对蛋白桑植株再生的影响。结果表明:叶片诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+TDZ 1.0mg·L^(-1)+NAA 0.1mg·L^(-1);最佳分化培养基为MS+TDZ 0.2mg·L^(-1)+NAA 0.09mg·L^(-1),分化率为21.65%;培养基1/2MS+PVP 0.2g·L^(-1)+NAA 0.5mg·L^(-1)生根率最高,达到66.70%;对草丁膦的敏感性试验中,草丁膦浓度0.04mg·L^(-1)为蛋白桑叶片半致死浓度,草丁膦浓度0.05mg·L^(-1)对蛋白桑叶片的致死率为75.00%,草丁膦浓度0.07mg·L^(-1)的致死率为100.00%。 展开更多
关键词 蛋白桑 叶片 再生体系 草丁膦
原文传递
草铵膦的应用、生物合成与降解
7
作者 李斌 赵昌明 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期392-402,共11页
传统的非选择性除草剂市场近十几年来发生了剧烈的变化,比如百草枯由于其较高的毒性和致死率逐渐被多个国家禁用,草甘膦由于抗性的累积以及对环境造成的负担市值逐渐降低,草铵膦(phosphinothricin,PT)作为后起之秀市场占比正在稳步增加... 传统的非选择性除草剂市场近十几年来发生了剧烈的变化,比如百草枯由于其较高的毒性和致死率逐渐被多个国家禁用,草甘膦由于抗性的累积以及对环境造成的负担市值逐渐降低,草铵膦(phosphinothricin,PT)作为后起之秀市场占比正在稳步增加。草铵膦是20世纪70年代发现的一种次膦酸化合物,可以与谷氨酰胺合成酶结合,不可逆地抑制其活性,从而杀灭杂草。以草铵膦为药效核心的天然产物双丙氨膦生物合成途径中存在许多不寻常的生化反应:首先,大多数非核糖体肽合成酶会选择含有未修饰的α-氨基的底物,而双丙氨膦合成途径中的非核糖体肽合成酶选择了α-氨基被乙酰化修饰的底物;其次,草铵膦结构中独特的C-P-C(碳-磷-碳)键结构单元的生物合成涉及到的P-甲基转移酶既是研究的热点,也是研究的难点。另一方面,作为一种天然产物,草铵膦在生物降解方面具有得天独厚的优势。虽然目前对草铵膦具体的生物降解途径所知甚少,但从其它的膦酸天然产物生物降解的研究中我们可以得到很多有益的启示。本文将从草铵膦的应用、生物合成、生物降解3个方面展开,对草铵膦的研究现状进行综述。 展开更多
关键词 草铵膦 双丙氨膦 除草剂 非核糖体肽 次膦酸
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盐藻对除草剂草丁膦的抗性研究(英文) 被引量:3
8
作者 张贵星 许培荣 +2 位作者 郑合明 王建民 薛乐勋 《生命科学研究》 CAS CSCD 2002年第1期92-94,共3页
对分离出的单藻落盐藻进行除草剂草丁膦的抗性实验 .液体培养结果显示 ,野生盐藻对除草剂草丁膦敏感 ,3.0mg
关键词 盐藻 除草剂 草丁膦 抗性
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草铵膦与高效氟吡甲禾灵复配对一年生禾本科杂草的联合作用和非耕地除草效果研究 被引量:2
9
作者 胡尊纪 范金勇 +2 位作者 庄占兴 庄治国 刘钰 《山东化工》 CAS 2017年第15期25-27,共3页
为明确草铵膦、高效氟吡甲禾灵联合作用效果和15%草铵膦·高效氟吡甲禾灵ME对非耕地一年生禾本科杂草的防治效果,采用茎叶喷雾法测定了2种除草剂室内联合作用试验,并对筛选的15%草铵膦·高效氟吡甲禾灵ME进行了田间药效试验。... 为明确草铵膦、高效氟吡甲禾灵联合作用效果和15%草铵膦·高效氟吡甲禾灵ME对非耕地一年生禾本科杂草的防治效果,采用茎叶喷雾法测定了2种除草剂室内联合作用试验,并对筛选的15%草铵膦·高效氟吡甲禾灵ME进行了田间药效试验。草铵膦、高效氟吡甲禾灵以9∶1复配对非耕地一年生禾本科杂草的联合作用较好,15%草铵膦·高效氟吡甲禾灵ME的推荐使用剂量为337.5~450 g a.i./hm^2,药后30 d对非耕地一年生禾本科杂草的总体防效可达到96.3%~98.5%。草铵膦、高效氟吡甲禾灵复配互补性强,对牛筋草等一年生禾本科杂草增效作用明显,15%草铵膦·高效氟吡甲禾灵ME能够有效防除非耕地一年生禾本科杂草。 展开更多
关键词 草铵膦 高效氟吡甲禾灵 联合作用 一年生禾本科杂草 防效
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浒苔原生质体再生苗对草丁膦与6种抗生素的敏感性 被引量:2
10
作者 吴春辉 王峰 +2 位作者 赵瑾 刘晓杰 姜鹏 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1-6,共6页
浒苔(Ulva prolifera)是构成黄海绿潮的优势种,通过构建浒苔稳定转化系统,可以为相关基因功能验证提供有力工具。本文以浒苔原生质体再生苗为材料,试验了对除草剂草丁膦和6种抗生素的敏感性,发现浒苔对氨苄青霉素、卡那霉素、硫酸链霉素... 浒苔(Ulva prolifera)是构成黄海绿潮的优势种,通过构建浒苔稳定转化系统,可以为相关基因功能验证提供有力工具。本文以浒苔原生质体再生苗为材料,试验了对除草剂草丁膦和6种抗生素的敏感性,发现浒苔对氨苄青霉素、卡那霉素、硫酸链霉素、Zeocin 4种抗生素不敏感,对氯霉素、潮霉素较敏感,对除草剂草丁膦极为敏感,进一步统计得出草丁膦对浒苔的半致死剂量(LD50)和95%可信限,发现敏感性与光周期明显相关。上述结果为进一步筛选转化子、构建浒苔稳定转化系统打下了基础。 展开更多
关键词 浒苔(Ulva prolifera) 基因工程 草丁膦 抗生素 敏感性 光周期
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Cloning of Glutamate Dehydrogenase cDNA from Chlorella sorokiniana and Analysis of Transgenic Tobacco Plants 被引量:1
11
作者 黄国存 孟颂东 +2 位作者 王荣 杨怀义 田波 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2002年第3期318-324,共7页
A full_length cDNA has been cloned encoding nicotinamide adenine dinucleotide phosphate_specific glutamate dehydrogenase (NADP_GDH) from Chlorella sorokiniana with the RT_PCR method. The complete nucleotide sequence o... A full_length cDNA has been cloned encoding nicotinamide adenine dinucleotide phosphate_specific glutamate dehydrogenase (NADP_GDH) from Chlorella sorokiniana with the RT_PCR method. The complete nucleotide sequence of NADP_GDH gene had 94% homology to the previously reported one . The NADP_GDH gene was constructed into a vector highly expressed in plants. The specific activity of NADP_GDH in transformants was detected, but not in the control plants. All transformed shoots on MS medium containing lower concentration of nitrogen and the transformed seedlings grown in lower concentration of nitrogen vermiculite had higher growth rate and more leaves than the control plants. Transformed leaf discs cultured on MS medium containing different nitrogen concentrations had more chlorophyll contents compared to the controls. These results suggested that exogenous NADP_GDH may enhance the absorption and utilization to ammonium in plants. The increased weight of transformed leaf discs cultured on medium supplemented with different concentrations of phosphinothricin (PPT) was more than that of control discs. 0.5 μg/mL PPT could be used as a selecting drug instead of kanamycin to develop the transformants. These results suggested that the NADP_GDH gene might be used as a new selecting gene in the future research of plant gene engineering. 展开更多
关键词 nicotinamide adenine dinucleotide phosphate_specific glutamate dehydrogenase (NADP_GDH) transgenic tobacco ammonium absorption phosphinothricin resistance
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Summarization and Analysis on the Synthesis Schemes of Glufosinate-Ammonium
12
作者 Hongtao Song Shijin Chu 《Journal of Chemistry and Chemical Engineering》 2014年第8期819-824,共6页
Glufosinate-ammonium is a highly efficient, non-selective herbicide. The former synthesis schemes of glufosinate-ammonium were introduced and analyzed, the main of which are Arbuzov synthesis method, method under cata... Glufosinate-ammonium is a highly efficient, non-selective herbicide. The former synthesis schemes of glufosinate-ammonium were introduced and analyzed, the main of which are Arbuzov synthesis method, method under catalyzer and high pressure, targeted method under low temperature, Gabriel synthesis method, Zelinsky-Strecher synthetic method, synthetic method with chiral-synthon, and several special methods such as with enzyme or stereochemistry. Based on the structure and synthesis characteristic of glufosinate-ammonium as well as Arbuzov reaction and Michael reaction, a novel and reasonable scheme, which was named Arbuzov-Michael method, was put forward as the more economical one with simpler raw reagents and less waste. 展开更多
关键词 Glufosinate-ammonium HERBICIDE phosphinothricin Arbuzov-Michael method synthesis.
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亚麻下胚轴对卡那霉素及膦化麦黄酮的敏感浓度筛选
13
作者 贾婉琪 郝冬梅 +5 位作者 邱财生 郭媛 邓欣 龙松华 陈信波 王玉富 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第16期3412-3415,共4页
在亚麻(Linum usitatissimum L.)高效再生体系建立的基础上,以亚麻栽培品种派克斯(L.usitatissi-mum cv.Pax)、中亚2号(L.usitatissimum cv.Zhongya No.2)和华星009(L.usitatissimum cv.Huaxing009)为材料,研究了不同浓度的卡那霉素(Kan... 在亚麻(Linum usitatissimum L.)高效再生体系建立的基础上,以亚麻栽培品种派克斯(L.usitatissi-mum cv.Pax)、中亚2号(L.usitatissimum cv.Zhongya No.2)和华星009(L.usitatissimum cv.Huaxing009)为材料,研究了不同浓度的卡那霉素(Kanamycin,Kan)和膦化麦黄酮(Phosphinothricin,PPT)对亚麻下胚轴分化和生长的影响。结果表明,在亚麻遗传转化早期选择时,50 mg/L的Kan或1.5 mg/L的PPT能够完全抑制亚麻下胚轴的分化,是适宜的筛选浓度。 展开更多
关键词 亚麻 组织培养 遗传转化 卡那霉素 膦化麦黄酮
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多壁碳纳米管/纳米Ag-TiO_2膜DNA电化学生物传感器 被引量:16
14
作者 周娜 杨涛 +1 位作者 焦奎 宋彩霞 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第3期301-306,共6页
基于多壁碳纳米管/纳米Ag-TiO2复合膜制备了高灵敏度的DNA电化学生物传感器。将Ag-TiO2复合物与适量分散于N,N-二甲基甲酰胺中的多壁碳纳米管(MWNT)相混合,形成均匀稳定的混合溶液,将其滴涂于裸碳糊电极表面,制得MWNT/Ag-TiO2修饰碳糊... 基于多壁碳纳米管/纳米Ag-TiO2复合膜制备了高灵敏度的DNA电化学生物传感器。将Ag-TiO2复合物与适量分散于N,N-二甲基甲酰胺中的多壁碳纳米管(MWNT)相混合,形成均匀稳定的混合溶液,将其滴涂于裸碳糊电极表面,制得MWNT/Ag-TiO2修饰碳糊电极。碳纳米管大的比表面积和良好的电子传递性能与Ag-TiO2纳米复合物良好的生物相容性和对DNA极好的吸附能力的协同作用,显著提高了DNA探针的固载和DNA杂交的检测灵敏度。应用循环伏安法和电化学交流阻抗谱分别对传感膜的制备和DNA的固定与杂交进行了表征。以电化学交流阻抗谱法对转基因植物外源草丁膦乙酰转移酶基因片段进行了检测,线性范围为1.0×10-11~1.0×10-6mol/L,检出限为3.12×10-12mol/L。 展开更多
关键词 DNA电化学传感器 多壁碳纳米管 Ag/TiO2复合物 草丁膦乙酰转移酶基因 交流阻抗谱
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黄瓜离体培养再生技术及农杆菌介导的ACS1转化 被引量:15
15
作者 李泠 潘俊松 +2 位作者 何欢乐 吴爱忠 蔡润 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2007年第1期17-23,29,共8页
利用诱导分化培养基(MS+BA 1.5mg·L-1+ABA 0.5mg·L-1+AgNO3 2.0mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂5.8g·L-1,pH5.8)对26个黄瓜自交系的子叶进行离体再生培养,其中的S52、S94、S04、S17S44和S47等6个自交系具有较高的不... 利用诱导分化培养基(MS+BA 1.5mg·L-1+ABA 0.5mg·L-1+AgNO3 2.0mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂5.8g·L-1,pH5.8)对26个黄瓜自交系的子叶进行离体再生培养,其中的S52、S94、S04、S17S44和S47等6个自交系具有较高的不定芽分化率,最高达93%(S44),最低为57%(S94)。除草剂PPT对这6个材料再生分化的抑制程度品种间差异较大。以S52(ff)的子叶为外植体,以pEZT-ACS1为中间载体,利用优化的S52诱导分化培养基MS+BA 2.0mg·L-1+ABA 2.0mg·L-1+AgNO3 2.0mg·L-1进行农杆菌(LBA4404)介导的遗传转化,选择培养基中PPT浓度为2.0mg·L-1,生根培养基中PPT浓度为1.0mg·L-1,获得抗性再生苗,经PCR检测有15株为阳性株,炼苗移栽到温室。 展开更多
关键词 黄瓜 ACS1 PPT 子叶 不定芽
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Bar基因的转化及抗草丁膦除草剂转基因玉米植株的获得 被引量:14
16
作者 刘小红 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期25-29,共5页
杂草危害已成为玉米(Zea mays L.)栽培中的一大难题,采用常规人工拔草的方式去除杂草存在操作麻烦、成本高等问题,而培育抗除草剂转基因玉米是解决这一问题的有效途径。为了获得生产中可用的抗草丁膦(phosphinothricin,PPT)除草剂的优... 杂草危害已成为玉米(Zea mays L.)栽培中的一大难题,采用常规人工拔草的方式去除杂草存在操作麻烦、成本高等问题,而培育抗除草剂转基因玉米是解决这一问题的有效途径。为了获得生产中可用的抗草丁膦(phosphinothricin,PPT)除草剂的优良转基因玉米,本研究通过基因枪法将p35SIH3X质粒上的bar基因导入了优良玉米自交系18-599红幼胚诱导的愈伤组织。转化后的愈伤组织经过在含Bialaphos浓度(以有效成分PPT计算)为6,10,15mg.L-1的选择培养基中筛选3次以后进行分化,长出的小苗再经炼苗后移栽至大田,最后得到长大成活植株75株,结实收获8株。通过PCR(polymerase chain reaction)及Southern杂交等技术对抗性再生植株进行了鉴定,结果显示bar基因已整合到玉米基因组中,且已遗传至下一代,再对T1代转基因植株通过人工涂抹0.5mg.L-1的PPT进一步做表型鉴定,结果对照植株全部死亡,而转基因植株呈现出不同程度的抗性。 展开更多
关键词 玉米 除草剂 基因枪 转基因 草丁膦
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A Facile Synthetic Route to L-Phosphinothricin 被引量:9
17
作者 Xue Song XU Han Bing TENG Guo Fu QIU Shu Cai LIANG Xian Ming HU 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2006年第2期177-179,共3页
A convenient and effective method for synthesis of L-phosphinothricin was described. The highlight was involved in a simple access to the key intermediate L-2-amino-4-chlorobutyric acid derivative from the inexpensive... A convenient and effective method for synthesis of L-phosphinothricin was described. The highlight was involved in a simple access to the key intermediate L-2-amino-4-chlorobutyric acid derivative from the inexpensive L-methionine. 展开更多
关键词 SYNTHESIS L-METHIONINE L-phosphinothricin.
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质粒DNA物理形态和其它因素对获得可育转基因小麦的影响 被引量:2
18
作者 徐子勤 D.Becker H.Lrz 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2001年第3期183-189,共7页
本工作分析了不同形态质粒DNA和未成熟胚高渗透压处理对基因枪小麦转化体系的适用性。高渗处理对瞬间表达和转基因小麦的再生均有明显的促进作用。轰击之前对质粒DNA进行变性处理导致瞬间表达反应大幅度下降,但稳定转化频率(指从100个... 本工作分析了不同形态质粒DNA和未成熟胚高渗透压处理对基因枪小麦转化体系的适用性。高渗处理对瞬间表达和转基因小麦的再生均有明显的促进作用。轰击之前对质粒DNA进行变性处理导致瞬间表达反应大幅度下降,但稳定转化频率(指从100个轰击未成熟胚得到的再生可育转基因植株数)与双链DNA相差不大。使用单链质粒DNA、线性双链质粒DNA和环状双链质粒DNA均可以得到转基因小麦植株。迄今已得到26个不同的转基因冬小麦株系和4个不同的转基因春小麦株系。这些转基因小麦大多数已产生种子,几个春小麦株系已获第二代种子。 展开更多
关键词 转基因小麦 质粒DNA 物理形态 稳定转化 育性
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玉米Ubi-1启动子在可育转基因玉米植株中的表达活性 被引量:2
19
作者 徐子勤 贾敬芬 +2 位作者 郝建国 王英娟 冯淑珍 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2002年第4期296-302,共7页
本工作将玉米泛素基因-1启动子(Ubi-1)与大肠杆菌β-葡糖苷酸酶基因(gus,uidA)的编码区融合,通过基因枪粒子轰击方法转化来自玉米未成熟胚盾片组织的Ⅰ-型愈伤组织,经PFF选择获得可育的玉米转基因植株,并采用组织化学方法分析了Ubi-1启... 本工作将玉米泛素基因-1启动子(Ubi-1)与大肠杆菌β-葡糖苷酸酶基因(gus,uidA)的编码区融合,通过基因枪粒子轰击方法转化来自玉米未成熟胚盾片组织的Ⅰ-型愈伤组织,经PFF选择获得可育的玉米转基因植株,并采用组织化学方法分析了Ubi-1启动子驱动的gus基因在不同组织、细胞中的表达活性,发现gus基因在除花药壁以外的其它所试组织中均可以有效表达。Ubi:GUS在花粉、卵细胞和T_1代转基因植株未成熟胚中的表达显示该启动子在植株发育的早期阶段即具有活性。对T_0代转基因植株的花粉进行GUS组织化学染色,gus基因呈1:1分离,显示外源基因在转基因植株中以孟德尔方式遗传。同时发现,使用玉米本身的启动子Ubi-1可以降低外源基因在转基因玉米中的拷贝数,进而避免基因沉默现象的发生。目前已得到第二代转基因种子。 展开更多
关键词 转基因植株 GUS基因 转基因玉米 花粉 花药壁 植株发育 启动子 未成熟 表达 组织化学染色
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限制性内切酶介导的玫烟色拟青霉原生质转化体系构建 被引量:5
20
作者 杨旭芬 应盛华 冯明光 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期606-612,共7页
丝孢类害虫生防真菌的生态适应性和环境抗逆性决定着生防菌剂的田间适用性,兼具多个抗逆性状的菌株一般只能通过相关功能基N的遗传操作和定向选育而获得,但这类真菌遗传操作的可行方法目前相当有限,本文利用限制性内切酶介导插入法... 丝孢类害虫生防真菌的生态适应性和环境抗逆性决定着生防菌剂的田间适用性,兼具多个抗逆性状的菌株一般只能通过相关功能基N的遗传操作和定向选育而获得,但这类真菌遗传操作的可行方法目前相当有限,本文利用限制性内切酶介导插入法将含有草丁膦抗性标记的Bar基因的质粒pAN52-1N-Bar转入玫烟色拟青霉Pfr116菌株的原生质体中,转化效率约为6~13个转化子μg^-1质粒DNA.通过对Pfr116菌株突变转化子的基因组DNA进行PCR产物检测及基因组DNA单酶切片段的Southern杂交分析,证明Bar基因已整合到随机抽取的转化子基因组中,且都在基因组上单位点插入,转化子对草丁膦的抗性具有遗传稳定性,由此构建的原生质体转化体系具有低拷贝、转化率较高,遗传稳定强的特点,不失为一种丝孢类生防真菌遗传操作的有效方法. 展开更多
关键词 玫烟色拟青霉 原生质体转化 限制性内切酶 草丁膦抗性基因
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