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酚/氯仿抽提法提取绵羊凝血块中基因组DNA 被引量：11
1
作者 曹果清 莫清珊 陈凤仙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第34期16771-16772,共2页
[目的]对组织DNA提取方法进行改进,建立一种从绵羊凝血块中提取基因组DNA的方法。[方法]将绵羊凝血块用眼科剪剪碎,用组织DNA抽提液裂解细胞,用蛋白酶K消化后,经过酚/氯仿抽提,无水乙醇沉淀获得基因组DNA。[结果]提取的DNA浓度为(159.90... [目的]对组织DNA提取方法进行改进,建立一种从绵羊凝血块中提取基因组DNA的方法。[方法]将绵羊凝血块用眼科剪剪碎,用组织DNA抽提液裂解细胞,用蛋白酶K消化后,经过酚/氯仿抽提,无水乙醇沉淀获得基因组DNA。[结果]提取的DNA浓度为(159.90±0.70)ng/μl,A260/A280比值为1.80±0.01,分子完整,结果理想。以从凝血块中提取的DNA为模板,对绵羊BM203微卫星位点进行了PCR扩增,扩增效果良好。[结论]该方法简单、实用,提取的DNA可满足后续相关研究对DNA质量的要求,值得推广借鉴。 展开更多
关键词 绵羊凝血块 酚/氯仿抽提法 DNA提取
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牛凝固血基因组DNA提取方法的比较及优化 被引量：2
2
作者 刘莉莉 王雅春 +6 位作者 赵萌 张旭 吴宏军 刘爱荣 王东升 俞英 徐青 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2013年第1期1-4,26,共5页
为筛选出一种从牛凝固血中高效获得基因组DNA的方法,本研究选择64个凝固血样,分别进行匀浆破碎和手动剪碎的预处理,结合酚-氯仿抽提和试剂盒提取方法,提取基因组DNA,并选择抗凝血作为参照,对试验耗时、DNA数量和质量进行比较。结果表明... 为筛选出一种从牛凝固血中高效获得基因组DNA的方法,本研究选择64个凝固血样,分别进行匀浆破碎和手动剪碎的预处理,结合酚-氯仿抽提和试剂盒提取方法,提取基因组DNA,并选择抗凝血作为参照,对试验耗时、DNA数量和质量进行比较。结果表明:通过对牛凝血块进行匀浆破碎预处理,不仅缩短了蛋白酶K的消化时间,而且获得了高质量基因组DNA,浓度和纯度均达到抗凝血提取效果(P>0.05)。酚-氯仿提取法相比试剂盒法,虽然得到更多量的DNA,但是DNA质量下降,而且试验耗时增加。本研究证实,匀浆破碎预处理后的牛凝固血样可以作为高质量基因组DNA的样本来源,并可替代抗凝血,解决生产中抗凝血不易获得和采集的问题。 展开更多
关键词 凝固血 基因组DNA 匀浆 DNA提取试剂盒 酚-氯仿法 牛
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牛支原体分离株全基因组序列测定及初步分析 被引量：10
3
作者 王艳杰 李平安 +1 位作者 吴太平 关平原 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第8期44-49,共6页
为全面了解牛支原体NM2012株的基因序列,研究其潜在的致病机制及其复制、转录、翻译过程的调控机制,采用体外大量培养,酚-氯仿法提取牛支原体NM2012株基因组DNA,并送往北京华大基因公司进行全基因组测序注释。结果显示,牛支原体NM2012... 为全面了解牛支原体NM2012株的基因序列,研究其潜在的致病机制及其复制、转录、翻译过程的调控机制,采用体外大量培养,酚-氯仿法提取牛支原体NM2012株基因组DNA,并送往北京华大基因公司进行全基因组测序注释。结果显示,牛支原体NM2012株基因组大小为993 483bp,GC含量为29.26%,测序组装后共产生3个scaffolds,24个contigs。基因组组分分析后发现,NM2012株的基因组含有885个基因,总长度为834 042bp,基因平均长度为942bp,占基因组全长的83.95%。串联重复序列共79个,总长为9 203bp,占基因组全长的0.926 3%。小卫星序列53个,微卫星序列5个,tRNA 34个,rRNA 4个。牛支原体NM2012株16SrRNA序列与支原体属致牛羊病主要菌株构建进化树进一步证实NM2012株为牛支原体,为后期进一步研究牛支原体提供依据。 展开更多
关键词 牛支原体 酚-氯仿提取法 全基因组测序
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藏酋猴毛干DNA的3种提取方法 被引量：7
4
作者 徐怀亮 汪宴廷 +4 位作者 姚永芳 黄晓峰 倪庆永 程安春 潘阳 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期58-61,共4页
为寻求一种从藏酋猴毛干中提取总DNA的有效方法,从一藏酋猴个体背部剪取数量不等的毛干样品(不含毛囊),经蛋白酶K消化后,分别采用高盐沉淀抽提法、酚氯仿抽提法、纳米磁珠抽提法分离获得用于PCR扩增的模板DNA,通过紫外分光光度计测定OD... 为寻求一种从藏酋猴毛干中提取总DNA的有效方法,从一藏酋猴个体背部剪取数量不等的毛干样品(不含毛囊),经蛋白酶K消化后,分别采用高盐沉淀抽提法、酚氯仿抽提法、纳米磁珠抽提法分离获得用于PCR扩增的模板DNA,通过紫外分光光度计测定OD值并计算出质量浓度,同时进行琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增检测,分析3种方法提取藏酋猴毛干DNA的质量差异。每处理设置10个重复。结果表明,纳米磁珠法提取藏酋猴毛干中DNA是一种快捷、简便、经济、高效、安全的有效方法;进行毛发取样时以5～10根较为合适。 展开更多
关键词 藏酋猴 毛干 DNA 高盐沉淀抽提法 酚氯仿抽提法 磁珠抽提法
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水牛全血基因组抽提方法优化 被引量：1
5
作者 陆杏蓉 庞春英 +3 位作者 邓廷贤 朱鹏 段安琴 梁贤威 《中国牛业科学》 2016年第2期28-31,共4页
[目的]通过比较三种提取水牛全血基因组DNA的方法,获得一种安全、高效、快速的DNA提取方法,为水牛基因功能的研究奠定基础。[方法]收集43头水牛抗凝血样,每份血样随机分为等量3份,每份血样2mL,分别使用试剂盒改良法、试剂盒说明书法及... [目的]通过比较三种提取水牛全血基因组DNA的方法,获得一种安全、高效、快速的DNA提取方法,为水牛基因功能的研究奠定基础。[方法]收集43头水牛抗凝血样,每份血样随机分为等量3份,每份血样2mL,分别使用试剂盒改良法、试剂盒说明书法及酚仿抽提法提取全血基因组DNA。比较分析三种方法提取的同一头牛三份血样DNA的含量、OD260/280值、琼脂糖凝胶电泳和基因扩增结果。[结果]三种方法提取DNA的含量由高到低依次为试剂盒改良法、酚仿抽提法、试剂盒说明书法,各组间差异显著(1376.72±127.54VS 1121.32±81.64VS 326.18±21.17,P<0.05)。三种方法提取DNA的OD-260/280值依次增加,试剂盒改良法与试剂盒说明书法OD260/280值差异不显著(1.85±0.0017 VS1.86±0.0021,P>0.05),与酚仿抽提法OD260/280值有显著差异(1.85±0.0017VS 1.88±0.0029,1.86±0.0021VS 1.88±0.0029,P<0.05)。三种方法提取DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示,试剂盒改良法和试剂盒说明书法DNA条带清晰、光密度高,酚仿抽提法条带模糊有拖带现象。三种方法所提取的基因组PCR扩增stat5基因获得较清晰准确的条带,扩增效果良好。[结论]试剂盒改良法用于水牛全血基因组的提取比试剂盒说明书法和酚氯仿法更安全、高效、便捷。 展开更多
关键词 水牛血液 基因组抽提 试剂盒改良法 试剂盒说明书法 酚仿抽提法
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一种简单高效稳定的高质量第X期鸡胚盘DNA提取方法的建立
6
作者 代敏敏 李德娟 +3 位作者 耿琳烨 褚素乔 郭伟婷 樊宝良 《东北农业科学》 北大核心 2020年第2期48-52,共5页
为了建立快速高效稳定的高质量鸡胚盘DNA提取方法,试验通过收集第X期鸡胚胎,应用酚氯仿抽提法、微量组织DNA提取试剂盒法和优化的硅胶膜吸附法分别提取鸡胚DNA,所提DNA经0.8%的琼脂糖凝胶电泳初步检测,并经PCR进一步分析检验,对不同方... 为了建立快速高效稳定的高质量鸡胚盘DNA提取方法,试验通过收集第X期鸡胚胎,应用酚氯仿抽提法、微量组织DNA提取试剂盒法和优化的硅胶膜吸附法分别提取鸡胚DNA,所提DNA经0.8%的琼脂糖凝胶电泳初步检测,并经PCR进一步分析检验,对不同方法提取DNA的稳定性和质量进行评价。结果表明:微量组织DNA提取试剂盒法提取的基因组DNA比用酚氯仿抽提法提取DNA的方法具有更高的稳定性和更好的质量,而微量组织DNA提取试剂盒法与本试验建立的优化的硅胶膜吸附法提取的基因组DNA稳定性和质量相近,但本试验建立优化的硅胶膜吸附法,无需蛋白酶K消化胚盘组织,因而优化了步骤降低了成本。试验建立了一个简单高效稳定的高质量低成本的第X期鸡胚盘DNA提取方法,为后续的相关研究建立了一个有效的鸡受精蛋胚盘DNA提取方法。 展开更多
关键词 第X期鸡受精蛋胚盘 微量组织DNA提取试剂盒法 优化的硅胶膜吸附法 蛋白酶K 酚氯仿抽提法 DNA提取
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以植物miR-2911为外参检测循环miRNA的荧光定量PCR方法评价 被引量：1
7
作者 张乃键 伍华东 +1 位作者 刘秋红 赵亚萍 《临床血液学杂志（输血与检验）》 CAS 2019年第3期456-460,共5页
目的:探讨和优化循环miRNA检测方法,建立稳定可靠的用于研究血浆miRNA的检测平台。方法:提取4例健康体检者的血浆,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对miR-21进行检测。比较苯酚氯仿抽提法和试剂盒法的提取效率;针对miR-2911成熟体,建立标... 目的:探讨和优化循环miRNA检测方法,建立稳定可靠的用于研究血浆miRNA的检测平台。方法:提取4例健康体检者的血浆,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对miR-21进行检测。比较苯酚氯仿抽提法和试剂盒法的提取效率;针对miR-2911成熟体,建立标准曲线;通过qRT-PCR对外参照miR-2911及血浆miR-21进行检测,评估循环检测方法的重复性。结果:苯酚氯仿抽提法循环miRNA的提取效率是试剂盒法的8倍;miR-2911拷贝数log值与循环阈值(Ct)的标准曲线方程为Y=-3.242X+35.28,R^2=0.991,呈良好的线性关系。血浆miR-21批内批间重复性实验的标准差(SD)在0.144～0.793、变异系数(CV)在0.52%～2.76%,说明该方法有较好的重复性。以miR-2911作为外参照,同一血浆标本miR-21的4次检测结果中ΔCt值的SD为0.1445,CV为1.225%,提示miR-2911可作为血浆miRNAs qRT-PCR检测的稳定外参。结论:利用外源miR-2911能有效监测qRT-PCR检测方法的稳定性,为循环miRNA的研究提供了较好的实验基础。 展开更多
关键词 循环miRNA 苯酚氯仿抽提法 QRT-PCR 外参miR-2911
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饱和苯酚-氯仿抽提法与Chelex-100树脂法提取DNA在研究犬STR基因座多态性中的应用比较 被引量：4
8
作者 王海生 张文平 +5 位作者 王祥 李孟华 康远方 刘榜 李奎 陈家琳 《湖北农业科学》 北大核心 2002年第6期107-110,共4页
在研究犬STR基因座多态性中,比较使用了饱和苯酚-氯仿抽提法和Chelex-100树脂法,两种方法提取的DNA在扩增后的检测结果均能准确地反映实验结果。尽管从平均峰面积和平均峰高值等指标上,利用Chelex-100树脂法提取的DNA质量和扩增后的检... 在研究犬STR基因座多态性中,比较使用了饱和苯酚-氯仿抽提法和Chelex-100树脂法,两种方法提取的DNA在扩增后的检测结果均能准确地反映实验结果。尽管从平均峰面积和平均峰高值等指标上,利用Chelex-100树脂法提取的DNA质量和扩增后的检测效果较饱和苯酚-氯仿抽提法差,但Chelex-100树脂提取法更为简单快捷,适合在建立警犬STR基因座等位基因数据库中和犬亲缘关系鉴定中广泛使用。 展开更多
关键词 饱和苯酚-氯仿抽提法 Chelex-100树脂法 提取 DNA 犬 STR基因座多态性 应用 比较
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结合于红细胞表面单链短核苷酸提取方法学建立研究 被引量：1
9
作者 张印则 葛伟鹏 +4 位作者 吴凡 梁延连 苏宇清 李大成 徐华 《中国输血杂志》 CAS 北大核心 2016年第8期782-784,共3页
目的建立用于红细胞消减SELEX筛选的单链短核苷酸的提取方法。方法使用高灵敏度的硅烷磁珠法提取结合于红细胞表面的单链短核苷酸,并采用实时荧光定量PCR法对其进行定量检测。同时以常用的酚氯仿提取法为对照,评价硅烷磁珠提取法的优劣... 目的建立用于红细胞消减SELEX筛选的单链短核苷酸的提取方法。方法使用高灵敏度的硅烷磁珠法提取结合于红细胞表面的单链短核苷酸,并采用实时荧光定量PCR法对其进行定量检测。同时以常用的酚氯仿提取法为对照,评价硅烷磁珠提取法的优劣。结果硅烷磁珠法提取结合于红细胞表面的单链短核苷酸的拷贝数为(4.79±0.13)×10^(10)/μL,而常用的酚氯仿法为(3.61±0.14)×10^(10)/μL。两者相比统计学差异显著(t=17.825,P<0.05)。结论与酚氯仿提取法相比,硅烷磁珠法提取ssDNA的灵敏度更高,可获得更多的结合于红细胞表面的单链短核苷酸。 展开更多
关键词 SSDNA 磁珠法 酚氯仿法 荧光定量
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