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基因枪介导小麦条锈菌毒性突变的研究 被引量:4
1
作者 张如佳 王阳 +2 位作者 王美南 井金学 李振岐 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第5期87-91,共5页
为了得到带有明确遗传标记的毒性突变菌株,应用基因枪转化技术,以小麦条锈菌野生白化菌系为转化受体,以含有潮霉素抗性基因(Hyg)的质粒为插入载体,对基因枪介导小麦条锈菌插入突变的条件进行了研究。结果表明,当小麦条锈菌夏孢子萌动2 h... 为了得到带有明确遗传标记的毒性突变菌株,应用基因枪转化技术,以小麦条锈菌野生白化菌系为转化受体,以含有潮霉素抗性基因(Hyg)的质粒为插入载体,对基因枪介导小麦条锈菌插入突变的条件进行了研究。结果表明,当小麦条锈菌夏孢子萌动2 h,可裂膜承载压力为1 100 Psi时进行轰击转化,所得的小麦条锈菌夏孢子在含有潮霉素的培养基上萌发率最高,为36.09%。进一步将转化的小麦条锈菌夏孢子进行扩繁,在筛选品种上筛选,将筛选到的突变体在其上继代培养4代,获得了两个稳定的毒性突变菌株MM-2、MM-3。MM-2菌株对南大2419的毒性减弱,反应型由野生菌系的4型变为2型;MM-3菌株在南大2419的反应型由野生菌系的4型变为2、3型,毒性发生分化。采用中国鉴别寄主对突变体的毒性研究表明,各突变菌株的毒性均较原始菌系发生了明显改变。进一步用Hyg基因特异PCR在两个突变菌系中均扩增到目的片段,表明MM-2、MM-3的突变是由Hyg基因插入引起的。 展开更多
关键词 小麦条锈菌 基因枪 毒性变异 插入突变
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Characterization of EmpA protease in Vibrio anguillarum M3 被引量:2
2
作者 HAN Yifan MO Zhaolan +3 位作者 XIAO Peng HAO Bin LI Jie YANG Guanpin 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS 2011年第4期379-384,共6页
EmpA is an extracellular metalloprotease secreted by Vibrio anguillarum.For better understanding its role in the patho-genicity of V.anguillarum strain M3,empA insertion mutant was constructed.In the mutant it decreas... EmpA is an extracellular metalloprotease secreted by Vibrio anguillarum.For better understanding its role in the patho-genicity of V.anguillarum strain M3,empA insertion mutant was constructed.In the mutant it decreased in extracellular proteolytic activity,swarming motility,hemolytic activity and virulence on turbot(Scophthalmus maximus).Significant decline(by 5-fold)of extracellular proteolytic activity and similar growth curve between mutant and wild type strains indicated that EmpA was the major extracellular protease of M3.LD50 of mutant increased by 38-fold compared with wild type.No pro-EmpA was detected in the su-pernatant of culture,indicating that EmpA autolyzed to mature protein after 24 h.Secretion of EmpA in M3 was similar to that in NB10 strain.Attenuated virulence of mutant was similar to that of M93Sm strain.It was demonstrated that specific operation of EmpA was different from that in previous studies and EmpA contributed to the swarming motility and hemolytic activity in V.an-guillarum strain M3.The results provides insight into understanding the function of EmpA and its potential application in vaccine development. 展开更多
关键词 Vibrio anguillarum pathogenicity insertion mutation EMPA
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2015-2016年唐山市流感病原学特征及B型流感病毒HA基因进化分析 被引量:1
3
作者 杨荔 刘丹 王俊明 《河南预防医学杂志》 2019年第4期252-257,共6页
目的了解2015-2016年唐山市流感流行季节的流感病原学特征,并对B型流感病毒HA基因进行进化分析,为制定有效防治措施提供科学依据。方法采集哨点医院流感样病例咽拭子标本,采用实时荧光PCR检测流感病毒RNA,并对3株B型流感病毒进行扩增测... 目的了解2015-2016年唐山市流感流行季节的流感病原学特征,并对B型流感病毒HA基因进行进化分析,为制定有效防治措施提供科学依据。方法采集哨点医院流感样病例咽拭子标本,采用实时荧光PCR检测流感病毒RNA,并对3株B型流感病毒进行扩增测序分析。结果 2015-2016年采集的1 391例患者的标本中检出阳性275例,检出率为19.77%,其中B型147例,H3N2亚型102例,新甲H1N1亚型26例。流感季峰值出现在2016年第2周和第13周。监测的流感样病例以5~14岁病毒检出率最高,为28.94%。HA基因进化分析显示,唐山市B型流感病毒分为B/Victoria和B/Yamagata两大谱系,其中2株B/Victoria属于进化1A分支,1株B/Yamagata属于进化3分支,与WHO推荐的疫苗株B/Brisbane/60/2008相比B/Victoria系毒株最具代表性的氨基酸替换发生在I117V和N129D(1A分支),与疫苗株B/Phuket/3073/2013(B/Yamagata 3分支)相比B/Yamagata有3个位点发生替换。结论 2015-2016年唐山市流感流行季节流感的流行主要以B型流感病毒为主,并有明显的季节性,主要易感人群为儿童。应加强对流感病毒的监控并积极推广疫苗的接种。2015-2016年唐山市B型流感毒株发生明显变异,连续的分子学监测对该市的疫苗接种政策有重要意义。 展开更多
关键词 流感 病原学特征 HA基因 基因变异
原文传递
稻瘟病菌REMI突变体的筛选和鉴定
4
作者 熊如意 刘娟 +2 位作者 周益军 范永坚 郑小波 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期91-94,共4页
利用构建的含潮霉素(HygB)抗性标记的质粒pUCATPH在稻瘟病菌菌株M 131中建立一个转化体系,通过限制酶介导整合(REM I)插入诱变技术,以HygB抗性作为突变体筛选标记,获得639个转化子。对其中200个转化子进行表型和致病性测定后,通过点杂... 利用构建的含潮霉素(HygB)抗性标记的质粒pUCATPH在稻瘟病菌菌株M 131中建立一个转化体系,通过限制酶介导整合(REM I)插入诱变技术,以HygB抗性作为突变体筛选标记,获得639个转化子。对其中200个转化子进行表型和致病性测定后,通过点杂交鉴定分别获得6个致病性突变菌株和部分表型突变菌株。对2个表型突变菌株和rep-PCR图谱差异性较大的2个致病性突变菌株进行RFLP分析,结果表明:突变体中均已插入质粒,但转化质粒在M 131中整合具有一定的随机性。 展开更多
关键词 稻瘟病菌 REMI 致病性突变 点杂交 rep—PCR RFLP
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致中国幽门螺杆菌致病岛缺失突变载体的构建及鉴定
5
作者 刘炯 许国铭 +2 位作者 李兆申 屠振兴 聂时南 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期798-800,共3页
为构建中国幽门螺杆菌 (Hp)致病岛缺失突变的载体 ,采用PCR扩增、质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切、目的基因与载体的连接、感受态细胞的制备及转化等多种基因工程技术 ,将氯霉素抗性基因CmR 连接到PCR扩增致病岛两端区域产生的... 为构建中国幽门螺杆菌 (Hp)致病岛缺失突变的载体 ,采用PCR扩增、质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切、目的基因与载体的连接、感受态细胞的制备及转化等多种基因工程技术 ,将氯霉素抗性基因CmR 连接到PCR扩增致病岛两端区域产生的两目的基因片段之间 ,并共同插入到pBluescriptSK 载体的多克隆位点中 ,经氨苄青霉素抗性筛选及相应的限制性酶切等方法鉴定。构建的突变载体经内切酶酶切分析显示 :产生的条带与设计结果完全一致。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 致病岛 基因突变 载体构建 PCR
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环丙沙星对沙门菌毒力岛基因invA影响的分析 被引量:4
6
作者 王玉平 李俊萍 +1 位作者 陈亚 吴永宁 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第13期2318-2320,共3页
目的:分析沙门菌毒力岛基因invA在不同血清型的基因变异和耐环丙沙星菌株中基因突变情况,及环丙沙星对沙门菌生长能力的影响。方法:用微量肉汤稀释法测定6个血清型的40株沙门菌的环丙沙星MIC;采用多阶段筛选法对敏感菌株诱导环丙沙星耐... 目的:分析沙门菌毒力岛基因invA在不同血清型的基因变异和耐环丙沙星菌株中基因突变情况,及环丙沙星对沙门菌生长能力的影响。方法:用微量肉汤稀释法测定6个血清型的40株沙门菌的环丙沙星MIC;采用多阶段筛选法对敏感菌株诱导环丙沙星耐药株;对invA基因进行测序比对,分析其基因变异和突变情况;测定诱导前后沙门菌的生长曲线。结果:不同血清型的沙门菌其invA基因序列存在不同程度的变异,但均属于沉默突变;环丙沙星耐药株未发现invA基因突变或缺失;环丙沙星诱导后沙门菌的生长能力明显减弱(P<0.001)。结论:invA基因在不同血清型的变异,说明沙门菌的毒力仍在进化中;环丙沙星未引起invA基因的突变或缺失,但可使沙门菌的生长能力下降。 展开更多
关键词 沙门菌毒力岛 invA基因 基因突变 环丙沙星
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非同义单核苷酸变异致病性预测研究综述 被引量:2
7
作者 葛芳 胡俊 +1 位作者 朱一亨 於东军 《南京理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第1期1-17,共17页
超过6000种人类疾病是由非同义单核苷酸变异(Non-synonymous single nucleotide variations,nsSNVs)引发的,快速准确地预测nsSNVs的致病性,有助于理解发病原理和设计新药物,也是生物信息领域的重要研究课题之一。该文给出了nsSNVs致病... 超过6000种人类疾病是由非同义单核苷酸变异(Non-synonymous single nucleotide variations,nsSNVs)引发的,快速准确地预测nsSNVs的致病性,有助于理解发病原理和设计新药物,也是生物信息领域的重要研究课题之一。该文给出了nsSNVs致病性研究的重要意义与背景知识;总结了国内外研究的主流方法,包括基于突变频率的方法、基于通路的方法、结合基因组和转录信息的方法、基于序列进化保守性的方法、基于序列和结构混合特征的方法以及综合评价类方法,对代表性方法进行了阐述;给出了nsSNVs致病性研究中常用的数据库、特征表示方法以及性能评价指标,多角度地对12种nsSNVs致病性预测方法进行了比较;最后,展望了nsSNVs致病性预测中可能取得突破的若干研究方向。 展开更多
关键词 非同义单核苷酸变异 致病性预测 致病性突变 癌症驱动突变 生物计算
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肠聚集性大肠杆菌ybtE基因缺失突变株的构建 被引量:2
8
作者 张冬梅 胡静 俞守义 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期433-437,共5页
目的构建肠聚集性大肠杆菌ybtE缺失突变株,为下一步ybtE基因功能的研究奠定基础。方法应用PCR扩增肠聚集性大肠杆菌的ybtE基因,将其克隆至pUC18载体,酶切缺失988bp ybtE片段,并插入998bp的卡那霉素抗性基因,利用定向克隆技术将突变的ybt... 目的构建肠聚集性大肠杆菌ybtE缺失突变株,为下一步ybtE基因功能的研究奠定基础。方法应用PCR扩增肠聚集性大肠杆菌的ybtE基因,将其克隆至pUC18载体,酶切缺失988bp ybtE片段,并插入998bp的卡那霉素抗性基因,利用定向克隆技术将突变的ybtE片段克隆至自杀质粒pKTN701,形成重组自杀质粒。将携带重组自杀质粒的SM10λpir与EAEC17-2进行接合转移,利用同源重组,根据卡那霉素抗性筛选并鉴定接合子。结果经PCR、酶切和探针杂交鉴定,得到2株肠聚集性大肠杆菌ybtE缺失突变株。结论成功构建肠聚集性大肠杆菌ybtE基因缺失突变株。 展开更多
关键词 ybtE基因 毒力岛 肠聚集性大肠杆菌 基因突变
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耐喹诺酮类药物沙门菌毒力岛基因和耐药基因突变研究 被引量:1
9
作者 王玉平 康维钧 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2013年第8期2004-2006,共3页
目的:研究耐喹诺酮类药物沙门菌毒力岛基因和喹诺酮耐药基因在不同血清型及耐环丙沙星菌株中基因变异情况。方法:对分属于6个不同血清型的40株沙门菌测定环丙沙星MIC;对沙门菌毒力岛Ⅰ的3个主要基因和喹诺酮耐药基因进行测序比对,分析... 目的:研究耐喹诺酮类药物沙门菌毒力岛基因和喹诺酮耐药基因在不同血清型及耐环丙沙星菌株中基因变异情况。方法:对分属于6个不同血清型的40株沙门菌测定环丙沙星MIC;对沙门菌毒力岛Ⅰ的3个主要基因和喹诺酮耐药基因进行测序比对,分析其基因变异情况及与毒力的关系。结果:40株沙门菌其毒力岛Ⅰ的3个基因全部为阳性,不同血清型其基因序列存在不同程度的变异;环丙沙星耐药株喹诺酮耐药基因gyrA均发生了S83F和/或D87N/G点突变,parC基因发生了S87R的点突变。结论:毒力岛Ⅰ基因在不同血清型的变异,说明其毒力仍在进化中;环丙沙星并未引起沙门菌毒力岛基因突变或缺失,但喹诺酮耐药基因均发生了点突变,这可能与其毒力降低相关。 展开更多
关键词 沙门菌毒力岛 基因突变 毒力 喹诺酮耐药基因
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幽门螺杆菌cag1基因缺陷株的构建与鉴定 被引量:1
10
作者 凌峰 王晓春 +4 位作者 陈珵 余敏 朱虹 罗彩凤 邵世和 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2013年第5期369-372,376,共5页
目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)细胞毒素相关基因致病岛(cytotoxin associated gene pathogenicity island,cag PAI)中的第1个编码基因hp0520/cag1基因缺陷株,为进一步研究cag1基因在cag PAI中的功能奠定基础。方法... 目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)细胞毒素相关基因致病岛(cytotoxin associated gene pathogenicity island,cag PAI)中的第1个编码基因hp0520/cag1基因缺陷株,为进一步研究cag1基因在cag PAI中的功能奠定基础。方法:使用同源重组技术,通过PCR扩增出cag1基因两侧同源臂序列,酶切纯化后分别连接于带卡那霉素抗性标志的载体两端,构建成cag1基因自杀质粒。将该质粒通过电穿孔导入受体野生株中,通过抗性筛选与PCR验证得到cag1基因缺陷株,与人胃上皮GES-1细胞共培养后,与野生株比较,观察细胞形态变化。结果:成功敲除H.pylori cag1基因,获得cag1基因缺陷株;与野生株相比,cag1基因缺陷株破坏细胞的能力降低。结论:成功获得幽门螺杆菌cag1基因缺陷株;cag1基因缺失后H.pylori对GES-1细胞的毒力减弱。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 细胞毒素相关基因致病岛 自杀质粒 基因缺陷 cag1
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