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外源基因在苏云金杆菌染色体上的定点整合及表达
被引量：
10
1
作者
刘萍
夏立秋
+4 位作者
胡胜标
严礼
丁学知
张友明
喻子牛
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期661-666,共6页
【目的】研究构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)工程菌的方法。在构建Bt工程菌时,高拷贝外源质粒的转入导致Bt芽孢数量减少,芽孢形成期延滞,影响Bt菌株的杀虫活力。而且,外源质粒在Bt...
【目的】研究构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)工程菌的方法。在构建Bt工程菌时,高拷贝外源质粒的转入导致Bt芽孢数量减少,芽孢形成期延滞,影响Bt菌株的杀虫活力。而且,外源质粒在Bt中的稳定性较差,外源基因容易丢失。将基因整合入染色体是一种构建遗传性状稳定、杀虫活力高的Bt工程菌的有效方法。【方法】本研究采用PCR技术,分两段扩增定位于Bt无晶体突变株XBU001染色体上的trigger factor基因片段作为同源臂,克隆入温度敏感型载体pKSV7,构建了定点整合载体pKTF12。并利用pKTF12质粒将cry1Ac基因定点整合入XBU001染色体上。【结果】利用载体pKTF12将cry1Ac定点插入triggerfactor位点,对宿主菌XBU001的正常生长没有影响。重组菌株KCTF12中的cry1Ac基因能够稳定遗传、表达并形成菱形晶体。与携带高拷贝外源质粒的Bt菌株HTX42相比较,KCTF12具有芽孢数量增多、芽孢形成期提前的优势。【结论】定点整合法是一种构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因Bt工程菌的有效方法。
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关键词
苏云金芽孢杆菌
定点整合
同源重组
pksv
7
triggerfactor基因
CRY1AC基因
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职称材料
枯草芽孢杆菌基因的安全改良研究
被引量：
1
2
作者
沈玺龙
蔡传斌
+2 位作者
王亚娟
卢彪
吴拥军
《中国酿造》
CAS
2014年第2期28-31,共4页
为了构建能稳定表达外源基因且无抗性标记基因的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)工程菌。采用聚合酶链式反应(PCR)技术,分两段扩增定位于B.subtilis BJ3-2染色体上的谷氨酰胺酶基因(glsA)上下游基因片段作为同源臂。将同源臂及卡那霉...
为了构建能稳定表达外源基因且无抗性标记基因的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)工程菌。采用聚合酶链式反应(PCR)技术,分两段扩增定位于B.subtilis BJ3-2染色体上的谷氨酰胺酶基因(glsA)上下游基因片段作为同源臂。将同源臂及卡那霉素基因(Kan)克隆入温敏型载体pKSV7,构建了双交换载体pKUKD。并利用pKUKD质粒将kan基因定点整合入BJ3-2染色体上,通过Kan抗性筛选获得glsA敲除菌株BJ-kan。经检测BJ3-2菌株谷氨酰胺酶活力比重组菌株高3.2倍。结果显示:BJ3-2染色体上的基因可通过同源重组方式进行敲除与置换,为今后BJ3-2菌株以及野生型B.subtilis基因敲除与置换提供了更加便捷的方法。
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关键词
枯草芽孢杆菌
谷氨酰胺酶
卡那霉素
pksv
7
双交换
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职称材料
题名
外源基因在苏云金杆菌染色体上的定点整合及表达
被引量：
10
1
作者
刘萍
夏立秋
胡胜标
严礼
丁学知
张友明
喻子牛
机构
湖南师范大学生命科学学院
华中农业大学
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期661-666,共6页
基金
国家自然科学基金(30570050,30670052)
国家“863计划”(2006AA02Z187,2006AA10A212)
国家博士点基金项目(20060542006)~~
文摘
【目的】研究构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)工程菌的方法。在构建Bt工程菌时,高拷贝外源质粒的转入导致Bt芽孢数量减少,芽孢形成期延滞,影响Bt菌株的杀虫活力。而且,外源质粒在Bt中的稳定性较差,外源基因容易丢失。将基因整合入染色体是一种构建遗传性状稳定、杀虫活力高的Bt工程菌的有效方法。【方法】本研究采用PCR技术,分两段扩增定位于Bt无晶体突变株XBU001染色体上的trigger factor基因片段作为同源臂,克隆入温度敏感型载体pKSV7,构建了定点整合载体pKTF12。并利用pKTF12质粒将cry1Ac基因定点整合入XBU001染色体上。【结果】利用载体pKTF12将cry1Ac定点插入triggerfactor位点,对宿主菌XBU001的正常生长没有影响。重组菌株KCTF12中的cry1Ac基因能够稳定遗传、表达并形成菱形晶体。与携带高拷贝外源质粒的Bt菌株HTX42相比较,KCTF12具有芽孢数量增多、芽孢形成期提前的优势。【结论】定点整合法是一种构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因Bt工程菌的有效方法。
关键词
苏云金芽孢杆菌
定点整合
同源重组
pksv
7
triggerfactor基因
CRY1AC基因
Keywords
Bacillius thuringiensis
site-specific integration
homologous recombination
pksv
7
trigger factor gene
crylAc gene
分类号
S476.11 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
下载PDF
职称材料
题名
枯草芽孢杆菌基因的安全改良研究
被引量：
1
2
作者
沈玺龙
蔡传斌
王亚娟
卢彪
吴拥军
机构
贵州大学生命科学学院
出处
《中国酿造》
CAS
2014年第2期28-31,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(31260394)
贵州省重大专项(黔科合重大专项字[2013]6013号)
贵阳市科技计划项目(筑科工合同字[2010]第1-68号)
文摘
为了构建能稳定表达外源基因且无抗性标记基因的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)工程菌。采用聚合酶链式反应(PCR)技术,分两段扩增定位于B.subtilis BJ3-2染色体上的谷氨酰胺酶基因(glsA)上下游基因片段作为同源臂。将同源臂及卡那霉素基因(Kan)克隆入温敏型载体pKSV7,构建了双交换载体pKUKD。并利用pKUKD质粒将kan基因定点整合入BJ3-2染色体上,通过Kan抗性筛选获得glsA敲除菌株BJ-kan。经检测BJ3-2菌株谷氨酰胺酶活力比重组菌株高3.2倍。结果显示:BJ3-2染色体上的基因可通过同源重组方式进行敲除与置换,为今后BJ3-2菌株以及野生型B.subtilis基因敲除与置换提供了更加便捷的方法。
关键词
枯草芽孢杆菌
谷氨酰胺酶
卡那霉素
pksv
7
双交换
Keywords
Bacillus subtilis
glutaminase
kanamycin
pksv
7
dual-exchange
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
外源基因在苏云金杆菌染色体上的定点整合及表达
刘萍
夏立秋
胡胜标
严礼
丁学知
张友明
喻子牛
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
10
下载PDF
职称材料
2
枯草芽孢杆菌基因的安全改良研究
沈玺龙
蔡传斌
王亚娟
卢彪
吴拥军
《中国酿造》
CAS
2014
1
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职称材料
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