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旋毛虫肌幼虫p53cDNA的克隆及鉴定 被引量：3
1
作者 孙树民 吴秀萍 +7 位作者 王学林 付宝权 卢强 李莲瑞 郭恒 P.Boireau 陈启军 刘明远 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期532-535,共4页
根据GenBank中旋毛虫53000抗原基因的序列设计引物,用PCR技术直接从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因p53 cDNA,将其克隆到pMD-18T载体,转化至大肠埃希氏菌NovaBlue后测序分析,结果表明,克隆到1176bp的p53 cDNA,共编码391个氨基酸。序... 根据GenBank中旋毛虫53000抗原基因的序列设计引物,用PCR技术直接从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因p53 cDNA,将其克隆到pMD-18T载体,转化至大肠埃希氏菌NovaBlue后测序分析,结果表明,克隆到1176bp的p53 cDNA,共编码391个氨基酸。序列分析表明,p53 cDNA序列与GenBank中的旋毛虫p53基因序列相比共有12个核苷酸发生改变,二者的同源性为98%,所编码蛋白质氨基酸序列的同源性为98%。将其克隆到原核表达载体pET28a并转化至表达菌BL21star(DE3),经IPTG诱导表达后获得约48000的重组蛋白。Western blotting检测证实,p53重组蛋白可以被旋毛虫感染猪血清识别,具有很好的抗原性。 展开更多
关键词 旋毛虫 p53 cdna 克隆 表达 抗原性
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含野生型p53cDNA重组逆转录病毒的制备
2
作者 李艳利 王若宁 +1 位作者 张一鸣 陈丙莺 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期299-300,共2页
目的:制备含野生型p53cDNA重组体的复制缺陷型逆转录病毒。方法:设计引物PCR扩增野生型p53cDNA,用T-A克隆的方法克隆入质粒载体pGEM-T,转化JM109,提取pGEM-T/p53重组体,双酶切得到野生型p53cDNA,然后再克隆入逆转录病毒表达载体pLXSN,... 目的:制备含野生型p53cDNA重组体的复制缺陷型逆转录病毒。方法:设计引物PCR扩增野生型p53cDNA,用T-A克隆的方法克隆入质粒载体pGEM-T,转化JM109,提取pGEM-T/p53重组体,双酶切得到野生型p53cDNA,然后再克隆入逆转录病毒表达载体pLXSN,转化感受态大肠杆菌JM109,筛选pL(p53cDNA)SN重组体,脂质体法转染包装细胞AM12,G-418(geneticin)筛选,收集病毒液。结果:通过PCR和重组质粒酶切筛选出重组阳性克隆,收集含pL(p53cDNA)SN重组体的逆转录病毒。结论:含pL(p53cDNA)SN重组体的复制缺陷逆转录病毒可用于转染真核细胞等进一步研究。 展开更多
关键词 野生型p53 cdna 逆转录病毒表达载体
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野生型p53cDNA真核表达载体的构建 被引量：1
3
作者 李艳利 王若宁 +3 位作者 李崇勇 徐桦 朱自路 陈丙莺 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期169-170,共2页
关键词 野生型p53cdna 真核表达载体 基因突变 构建 肿瘤 基因治疗
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