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题名构建可分解草酸的成人骨髓间充质干细胞系
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作者
阳旭明
袁坚
雷鸣
张泽
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机构
广州医学院第一附属医院
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出处
《中国组织工程研究》
CAS
CSCD
2013年第27期4974-4979,共6页
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基金
广东省科技厅资助项目(2009B080701026)
国家自然科学基金资助项目(30801140)~~
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文摘
背景: 高草酸尿是结石形成的危险因素之一,利用基因工程和干细胞技术构建具有高代谢草酸能力的细胞系,将成为防治草酸钙结石的有效手段。目的: 将产甲酸草酸杆菌的草酸分解基因Frc和Oxc共转染至正常成人骨髓间充质干细胞,构建可分解草酸的成人骨髓间充质干细胞系,使之获得分解草酸的功能。方法: PCR法扩增出Frc和Oxc基因的编码序列,构建真核表达载体pLEGFP-N1-myc-Frc和pBaBE-puro-flag-Oxc,将其共转染至正常成人骨髓间充质干细胞,以转染空载体及未进行转染的正常成人骨髓间充质干细胞作为对照。采用Westernblot检测目的基因表达情况;离子色谱法测定转基因后细胞培养液中草酸浓度。结果与结论: 酶切鉴定和测序结果显示实验成功扩增了Frc和Oxc基因,并构建了pLEGFP-N1-myc-Frc和pBaBE-puro-flag-Oxc载体。将其转染至正常成人骨髓间充质干细胞后,Westernblot检测结果显示其可稳定表达目的蛋白myc-甲酰辅酶A转移酶和flag-草酰辅酶A脱羧酶;离子色谱仪检测结果显示,随着培养时间的延长,转染目的基因的人骨髓间充质干细胞培养液中草酸浓度逐渐下降。而转染空载体及未进行转染的正常成人骨髓间充质干细胞无目的蛋白表达,也无分解草酸能力。说明实验成功构建了可分解草酸的成人骨髓间充质干细胞系,该细胞系可稳定表达草酸分解蛋白Frc和Oxc,并具有草酸分解能力。
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关键词
干细胞
骨髓干细胞
骨髓间充质干细胞
产甲酸草酸杆菌
高草酸尿
反转录病毒载体
草酸分解
FRC
OXC
转基因
基因工程
国家自然科学基金
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Keywords
stem cells
bone marrow-derived stem cells
bone marrow mesenchymal stem cells
oxalobacterformigenes
hyperoxal uria
retrovirus vector
oxalate-degradation
Frc
Oxc
transgenic
genetic engineering
NationalNatural Science Foundation of China
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分类号
R394.2
[医药卫生—医学遗传学]
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