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锌液体外循环净化对连续热镀锌锅流动与传热的影响 被引量:3
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作者 冒飞飞 董安平 +4 位作者 韩兰英 祝国梁 疏达 王俊 孙宝德 《热加工工艺》 CSCD 北大核心 2017年第8期38-41,共4页
锌渣是损害镀锌板表面质量的最重要因素。在工业现役锌锅的基础上,本研究增加了热镀锌液体外循环净化装置,将电磁净化技术应用于热镀锌液中的锌渣去除。结果表明:引入外循环净化装置,锌液平均流速增加0.06 m/s,V形区平均流速增加0.69 m/... 锌渣是损害镀锌板表面质量的最重要因素。在工业现役锌锅的基础上,本研究增加了热镀锌液体外循环净化装置,将电磁净化技术应用于热镀锌液中的锌渣去除。结果表明:引入外循环净化装置,锌液平均流速增加0.06 m/s,V形区平均流速增加0.69 m/s,V形区速度的增加能促使锌渣向锌液表面流动。锌液的平均温度增加0.4℃,锌锅内的温度分布更加均匀,循环装置的引入不会对锌锅内流场和温度场产生负面影响,反而有利于锌渣与镀锌钢板的分离。 展开更多
关键词 热镀锌液 锌渣 体外净化
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禽波氏杆菌外膜蛋白的提取及其免疫原性的检测 被引量:20
2
作者 胡晓娜 朱瑞良 +3 位作者 刘红珍 毕建敏 王伟 李新苍 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期714-717,共4页
为研究禽波氏杆菌OMP的免疫原性,试验采用超声波破碎、TritonX-100处理技术提取了禽波氏杆菌OMP,采用Bradford方法测定禽波氏杆菌OMP含量,进行了SDS-PAGE检测,然后制备油乳剂OMP免疫抗原,对1日龄雏鸡分别以0.3mL(OMP90μg)、0.5mL(OMP15... 为研究禽波氏杆菌OMP的免疫原性,试验采用超声波破碎、TritonX-100处理技术提取了禽波氏杆菌OMP,采用Bradford方法测定禽波氏杆菌OMP含量,进行了SDS-PAGE检测,然后制备油乳剂OMP免疫抗原,对1日龄雏鸡分别以0.3mL(OMP90μg)、0.5mL(OMP150μg)、0.8mL(OMP240μg)的剂量颈部皮下接种。结果:禽波氏杆菌OMP含量为300μg/mL;禽波氏杆菌OMP最佳免疫剂量为0.5mL/只;通过免疫抗体与攻毒保护相关性测试,抗体效价在1:28以上能抵抗致死量禽波氏杆菌的攻击。据间接ELISA法检测的抗体水平可知,抗体的持续时间足以保护雏鸡避过易感日龄,试验发现OMP具有良好的免疫原性。本试验结果将为禽波氏杆菌OMP单克隆抗体的制备、快速诊断试剂盒的研制、亚单位疫苗的开发奠定良好的基础。 展开更多
关键词 禽波氏杆菌 外膜蛋白 提取 ELISA 免疫原性
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鲍曼不动杆菌外膜蛋白W的克隆表达及纯化 被引量:7
3
作者 魏常梅 王俊瑞 +1 位作者 孙鹏 张军力 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第2期139-143,共5页
目的通过基因克隆方法制备鲍曼不动杆菌外膜蛋白W(outer membrane protein W,OmpW),为研究其生物学活性及耐药机制奠定实验基础。方法通过PCR方法扩增鲍曼不动杆菌临床株A1株的外膜蛋白W基因(OmpW),构建原核表达载体pET30a/ompW,采用PC... 目的通过基因克隆方法制备鲍曼不动杆菌外膜蛋白W(outer membrane protein W,OmpW),为研究其生物学活性及耐药机制奠定实验基础。方法通过PCR方法扩增鲍曼不动杆菌临床株A1株的外膜蛋白W基因(OmpW),构建原核表达载体pET30a/ompW,采用PCR方法和测序鉴定扩增产物。筛选阳性表达载体后转化至大肠埃希菌表达宿主菌BL21中,IPTG诱导表达重组蛋白并进行纯化。结果 pET30a/ompW原核表达重组载体构建成功,基因测序鉴定,其在原核表达系统中高表达,表达产物分子质量单位约为43ku,与预期值相符。表达产物经8mol/L尿素和Tris-HCl处理纯化,得到高纯度的重组OmpW蛋白。结论成功构建鲍曼不动杆菌OmpW蛋白基因重组原核表达系统,并获得高纯度的重组OmpW蛋白,为研究鲍曼不动杆菌外膜蛋白W的生物学活性以及耐药机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 外膜蛋白W 表达纯化
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耶尔森氏菌外膜蛋1(Yop1)的提取纯化与鉴定 被引量:5
4
作者 于国林 戴翔 +3 位作者 王信惠 布仁明德 姚淑兰 王恩宇 《地方病通报》 1994年第1期7-11,共5页
耶尔森氏菌外膜蛋白(Yops)在菌体中所占比例甚小,因而提取与纯化均有一定难度,国内尚无成功的先例。我们使用了一种盐析加电泳的方法提取了Yop1蛋白。实验结果表明,该法简便、易行且重复性好、回收率高。使用本法提取假结... 耶尔森氏菌外膜蛋白(Yops)在菌体中所占比例甚小,因而提取与纯化均有一定难度,国内尚无成功的先例。我们使用了一种盐析加电泳的方法提取了Yop1蛋白。实验结果表明,该法简便、易行且重复性好、回收率高。使用本法提取假结核耶氏菌外膜蛋白1(Yop1),自每升培基增殖的菌体中(约4.5g湿重),可获得纯品6.3mg,回收率高于国外同类研究的6倍以上[1]。一次性提取的Yop1蛋白在十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中共显示出三条可辩认的蛋白带,其分子量依次为150KD,90~100KD及45~50KD。进一步的尿素-十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,样品中的约100KD和50KD两种蛋白实际为150KD蛋白解聚后的二聚体和单体,根据这一结果,推测该种蛋白系三聚体,其单体分子量为45~50KD。 展开更多
关键词 耶尔辛氏菌 外膜蛋白 纯化 鉴定
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霍乱弧菌EL-Tor35A3菌株外膜蛋白主区带的纯化 被引量:2
5
作者 林厚怡 陈慎宝 +2 位作者 宋兰珍 丁如宁 沈凤新 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第6期358-361,共4页
选用霍乱弧菌EL-Tor生物型35A3菌株(血清稻叶型)以EDTA-溶菌酶法与超速离心法提取其外膜蛋白,并将聚丙烯酰胺凝胶电泳后一条蛋白主区带分离。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该蛋白主区带的分子量为25kD,免疫电... 选用霍乱弧菌EL-Tor生物型35A3菌株(血清稻叶型)以EDTA-溶菌酶法与超速离心法提取其外膜蛋白,并将聚丙烯酰胺凝胶电泳后一条蛋白主区带分离。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该蛋白主区带的分子量为25kD,免疫电泳显示一条线,免疫双扩试验表明,不同的霍乱弧菌菌株均有该蛋白抗原存在。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 外膜蛋白 主区带 纯化
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鳗鲡病原菌外膜蛋白三联表达载体的构建、表达与表达产物的纯化 被引量:4
6
作者 赵金平 段丽华 郭松林 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期104-110,共7页
为研制能同时预防鳗鲡3种常见病原菌感染的三联外膜蛋白疫苗,分别选择创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)外膜蛋白的ompU、ompA和omp porinП基因,设计特异性引物... 为研制能同时预防鳗鲡3种常见病原菌感染的三联外膜蛋白疫苗,分别选择创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)外膜蛋白的ompU、ompA和omp porinП基因,设计特异性引物后分别扩增基因中表达外膜蛋白膜外区域且抗原决定簇丰富的3个基因片段并通过融合PCR技术进行连接。根据表达载体(pGEX-2T-his)的限制性酶切位点,在连接片段的两端引入BamHⅠ和EcoRⅠ两个酶切位点,将3个外膜蛋白基因片段与质粒连接后成功构建了重组表达载体。重组表达载体成功转化大肠杆菌(E.coli BL21)后,当菌液浓度(D600nm)为0.8时加入0.25mmol/L IPTG,16℃培养过夜后得到了高效表达。表达产物用镍柱进行洗脱纯化后经梯度尿素复性获得了分子质量约85ku的高纯度蛋白。 展开更多
关键词 迟缓爱德华氏菌 创伤弧菌 嗜水气单胞菌 三联外膜蛋白 表达与纯化
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黄喉拟水龟肺炎克雷伯菌外膜蛋白A的原核表达与纯化 被引量:2
7
作者 莫超迪 覃呈欢 +3 位作者 戴龙喜 韩鹏夫 纪月鑫 韦友传 《广东农业科学》 CAS 2023年第3期137-143,共7页
【目的】克隆黄喉拟水龟肺炎克雷伯菌外膜蛋白A(KpOmpA)基因,构建重组质粒并诱导其表达,纯化获取重组蛋白KpOmpA,为黄喉拟水龟抗肺炎克雷伯菌的相关疫苗研究奠定基础。【方法】以黄喉拟水龟肺炎克雷伯菌DNA为模板,克隆获得KpOmpA基因后... 【目的】克隆黄喉拟水龟肺炎克雷伯菌外膜蛋白A(KpOmpA)基因,构建重组质粒并诱导其表达,纯化获取重组蛋白KpOmpA,为黄喉拟水龟抗肺炎克雷伯菌的相关疫苗研究奠定基础。【方法】以黄喉拟水龟肺炎克雷伯菌DNA为模板,克隆获得KpOmpA基因后与pET-32a表达载体连接;将构建的重组质粒pET-32aKpOmpA转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,通过SDSPAGE电泳检测KpOmpA重组蛋白的表达情况,并对重组蛋白进行可溶性分析;经Ni-IDA琼脂糖纯化树脂柱纯化KpOmpA重组蛋白,应用Western blot方法鉴定纯化蛋白。【结果】KpOmpA基因CDS序列全长为1071 bp,推定编码356个氨基酸,与其他肺炎克雷伯菌的OmpA氨基酸序列同源性超过99%,高度保守。重组质粒pET-32a-KpOmpA经双酶切、测序确认基因序列无移码或突变,表明重组质粒成功构建。转化后的BL21感受态细胞经终浓度为1 mmol/L IPTG在37℃下诱导4 h后进行SDS-PAGE检测,结果表明,KpOmpA重组蛋白大量表达,以包涵体形式存在,分子量约为57 kD。经Ni-IDA琼脂糖纯化树脂柱纯化,获得较高纯度的重组蛋白。Western blot检测结果显示有57 kD的条带,表明KpOmpA重组蛋白能被小鼠抗His-tag单克隆抗体识别。【结论】成功构建了重组质粒pET-32a-KpOmpA,在大肠杆菌表达系统中诱导其表达,并纯化得到较高纯度的KpOmpA重组蛋白,为制备预防肺炎克雷伯菌感染的疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 黄喉拟水龟 肺炎克雷伯菌 外膜蛋白A 原核表达 重组蛋白 蛋白纯化
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鲍曼不动杆菌外膜蛋白OmpK的原核重组表达与纯化 被引量:3
8
作者 郭三君 任珊 谢勇恩 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第9期837-839,共3页
目的通过分子克隆方法制备重组鲍曼不动杆菌外膜蛋白K(OmpK)并进行纯化,为进一步研究该蛋白的免疫活性奠定基础。方法采用PCR方法扩增鲍曼不动杆菌标准菌株ATCC19606外膜蛋白K编码基因,将该基因克隆入原核表达载体pColdI,构建重组质粒pC... 目的通过分子克隆方法制备重组鲍曼不动杆菌外膜蛋白K(OmpK)并进行纯化,为进一步研究该蛋白的免疫活性奠定基础。方法采用PCR方法扩增鲍曼不动杆菌标准菌株ATCC19606外膜蛋白K编码基因,将该基因克隆入原核表达载体pColdI,构建重组质粒pColdI/OmpK。将重组质粒转化至大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导表达重组蛋白,通过镍亲和层析柱进行纯化。结果 PCR扩增获得大小约726bp的目的基因片段,将其克隆入原核表达载体pColdI后进行酶切和DNA测序分析,pColdI/OmpK构建正确,重组质粒转化BL21经IPTG诱导后表达目的蛋白(相对分子质量约30×103),经镍亲和纯化得到高纯度的重组OmpK。结论通过分子克隆技术使鲍曼不动杆菌OmpK蛋白在构建的原核表达系统中得到高效表达,并获得了高纯度的重组蛋白,为进一步研究鲍曼不动杆菌OmpK的免疫活性奠定了基础。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 OmpK 表达 纯化
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纸盒饮品外包装底部霉菌的分离与鉴定 被引量:2
9
作者 莫嘉玲 周红丽 +2 位作者 刘小燕 谭纯良 何彪 《食品安全质量检测学报》 CAS 2018年第13期3448-3452,共5页
目的鉴别某纸盒饮品外包装底部所长霉菌的类别。方法从外包装底部生长的霉菌菌落中挑菌体,接种于马铃薯葡萄糖琼脂与平板计数琼脂,进行分离纯化培养,确定该霉菌是否为单一菌株;采用水浸片法观察菌落形态与结构特征,进行碳源、氮源实验... 目的鉴别某纸盒饮品外包装底部所长霉菌的类别。方法从外包装底部生长的霉菌菌落中挑菌体,接种于马铃薯葡萄糖琼脂与平板计数琼脂,进行分离纯化培养,确定该霉菌是否为单一菌株;采用水浸片法观察菌落形态与结构特征,进行碳源、氮源实验探究菌株生长特性,提取菌株基因组DNA进行转录间隔区(internal transcript spacer,ITS)鉴定及构建进化树分析对菌株进行分子生物学鉴定。结果该霉菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),可利用葡萄糖、蔗糖、乳糖等7类碳源及尿素、硝酸钾、硫酸铵等5类氮源,在无氮培养基仍可生长。结论尖孢镰刀菌繁殖速度快、生存能力极强,可产生紫红色物质,对食品外包装感官影响较严重。 展开更多
关键词 纸盒外包装 分离纯化 DNA提取 ITS鉴定 尖孢镰刀菌
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白果外种皮中银杏酚酸提纯及其抑菌活性初探 被引量:1
10
作者 黄莉清 张正红 +4 位作者 苏娇娇 胡珊 王黔阳 彭丽娟 何珺 《化学与粘合》 CAS 2023年第3期193-196,213,共5页
从白果外种皮中提取纯化银杏酚酸,并对其抑菌作用进行初步研究。采用正交实验筛选加热回流提取条件,有机溶剂萃取结合柱层析方法分离纯化银杏酚酸,生长速率法测定银杏酚酸对植物病原真菌菌丝抑制率。加热回流提取参数:提取溶剂为甲醇,40... 从白果外种皮中提取纯化银杏酚酸,并对其抑菌作用进行初步研究。采用正交实验筛选加热回流提取条件,有机溶剂萃取结合柱层析方法分离纯化银杏酚酸,生长速率法测定银杏酚酸对植物病原真菌菌丝抑制率。加热回流提取参数:提取溶剂为甲醇,40℃,料液比为1∶12,90 min;经乙酸乙酯萃取、脱酸树脂柱层析纯化,获得80.96%含量银杏酚酸;对5种植物病原真菌均有抑制作用,含量为0.293 mg/m L时对月季炭疽病菌(Colletotrichum boninense)抑制率为49.09%、对杜鹃炭疽病菌(C.fioriniae)为30.30%、对石榴干腐病菌(Coniella granati)为23.26%、对葡萄炭病疽菌(C.gloeosporioides)为21.70%和对烟草枯萎病菌(Fusarium redolens)为21.01%。结果表明,提纯工艺把白果外种皮中8%银杏酚酸提高至80.96%,确定银杏酚酸可较好抑制月季炭疽病菌菌丝生长。 展开更多
关键词 白果外种皮 银杏酚酸 提取纯化 抑菌活性
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创伤弧菌外膜蛋白OmpU的基因克隆与表达 被引量:2
11
作者 李素一 吴唯维 +5 位作者 李盼 柯翎 许斌福 林晨韬 林天龙 陈叙 《福建农业学报》 CAS 2013年第6期517-521,共5页
创伤弧菌是导致鳗鲡产生体表溃疡死亡的重要致病菌。本研究克隆了创伤弧菌FJ03-X2株外膜蛋白基因(ompU),构建含该基因的原核表达载体,命名为pET-32a-ompU,将其转化到大肠杆菌E.coli中进行融合表达。37℃,0.5mmol.L-1的IPTG诱导4h,融合蛋... 创伤弧菌是导致鳗鲡产生体表溃疡死亡的重要致病菌。本研究克隆了创伤弧菌FJ03-X2株外膜蛋白基因(ompU),构建含该基因的原核表达载体,命名为pET-32a-ompU,将其转化到大肠杆菌E.coli中进行融合表达。37℃,0.5mmol.L-1的IPTG诱导4h,融合蛋白rompU以可溶形式表达,采用Ni-NTA亲和层析法纯化融合蛋白,SDS-PAGE显示纯化后的rompU为与预期大小一致的单一条带。将纯化的rompU免疫SD级大鼠,ELISA检测收获的多克隆抗体血清效价,并通过Western-blot证实该OmpU多克隆抗体可以识别创伤弧菌FJ03-X2株中的天然外膜蛋白OmpU。 展开更多
关键词 创伤弧菌 外膜蛋白OmpU 克隆 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
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鲍曼不动杆菌外膜蛋白A的克隆表达及纯化 被引量:1
12
作者 魏常梅 王俊瑞 +1 位作者 孙鹏 张军力 《转化医学电子杂志》 2015年第5期1-5,8,共6页
目的:通过分子克隆方法制备鲍曼不动杆菌外膜蛋白A(OmpA)纯化蛋白,为进一步研究鲍曼不动杆菌OmpA蛋白的生物学活性提供基础.方法:首先采用PCR方法扩增鲍曼不动杆菌标准菌株ATCC19606株外膜蛋白A编码基因(OmpA),构建其原核表达载体pET30a... 目的:通过分子克隆方法制备鲍曼不动杆菌外膜蛋白A(OmpA)纯化蛋白,为进一步研究鲍曼不动杆菌OmpA蛋白的生物学活性提供基础.方法:首先采用PCR方法扩增鲍曼不动杆菌标准菌株ATCC19606株外膜蛋白A编码基因(OmpA),构建其原核表达载体pET30a/ompA,所得产物经PCR方法和测序进行鉴定.之后筛选阳性表达载体,将其转化至大肠杆菌表达宿主菌BL21,最后将表达的蛋白质进行纯化.结果:重组表达载体pET30a/ompA构建成功,并经PCR方法和测序方法进行鉴定;重组蛋白在所构建的原核表达系统中实现了高表达,纯化后得到了高纯度的OmpA蛋白.结论:本次试验通过分子克隆技术,使鲍曼不动杆菌OmpA蛋白在构建的原核表达系统中成功表达,并且获得了高纯度的目标蛋白,为进一步研究鲍曼不动杆菌外膜蛋白A的生物学活性及抗体的保护作用奠定了基础. 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 外膜蛋白A 表达及纯化
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高效离子交换液相色谱法分离绿脓杆菌外膜蛋白
13
作者 左联 周建忠 姚天爵 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期46-48,共3页
利用高效DEAE离子交换液相色谱法分离纯化了绿脓杆菌标准菌株PAO1外膜蛋白。流动相为pH8.0Tris-HCl缓冲液,色谱柱为TSKgel-DEAE-5PW(0.75cm×7.5cmi.d.)。通过纯化外膜蛋白... 利用高效DEAE离子交换液相色谱法分离纯化了绿脓杆菌标准菌株PAO1外膜蛋白。流动相为pH8.0Tris-HCl缓冲液,色谱柱为TSKgel-DEAE-5PW(0.75cm×7.5cmi.d.)。通过纯化外膜蛋白,可以为研究绿脓杆菌外膜通透性与抗生素耐药性之间的关系及缩短研究周期提供有效的方法。 展开更多
关键词 绿脓杆菌 外膜蛋白 分离 纯化 耐药机制
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禽源多杀性巴氏菌外膜蛋白的提取及其对小鼠的免疫原性观察
14
作者 汤国营 王信 邓定华 《兽医大学学报》 CSCD 1991年第2期140-143,共4页
用EDTA—溶菌酶系统处理无荚膜的5:A型禽多杀性巴氏菌,得到无粘肽层的细胞膜.蔗糖密度梯度离心,将细胞膜分成3部分.琥珀酸脱氢酶、还原型辅酶I-2,6 二氯酚靛酚(NADH-DICP)氧化还原酶和NADH氧化酶的活性以及脂多糖含量测定表明,这3部分... 用EDTA—溶菌酶系统处理无荚膜的5:A型禽多杀性巴氏菌,得到无粘肽层的细胞膜.蔗糖密度梯度离心,将细胞膜分成3部分.琥珀酸脱氢酶、还原型辅酶I-2,6 二氯酚靛酚(NADH-DICP)氧化还原酶和NADH氧化酶的活性以及脂多糖含量测定表明,这3部分分别是细胞内膜、细胞外膜和混合膜.用高压液相色谱法从分离的外膜中提纯外膜蛋白,获得2个主要成分P_1和P_2.将P_1和P_2分别免疫小鼠,其保护率分别为20%和90%.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,P_2是一种主要的外膜蛋白,分子量为52000. 展开更多
关键词 多杀性 巴氏杆菌 外膜蛋白 免疫
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鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa)的表达与纯化 被引量:1
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作者 王慧璇 蔡伟 +2 位作者 程建军 王胜军 许化溪 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第8期887-890,896,共5页
目的利用pET-28a蛋白表达载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS中重组表达鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa)。方法 PCR扩增获得鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa)基因,克隆入pET-28a表达载体,构建重组表达质粒pET28a/O... 目的利用pET-28a蛋白表达载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS中重组表达鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa)。方法 PCR扩增获得鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa)基因,克隆入pET-28a表达载体,构建重组表达质粒pET28a/Omp33-36aa20-299,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS中,经IPTG诱导蛋白表达,对包涵体表达的蛋白进行变性复性处理,用镍柱亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳分析。结果PCR扩增获得大小约862bp的目的片段,构建的重组表达质粒pET28a/Omp33-36aa20-299,经双酶切鉴定成功插入目的基因片段,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导成功表达Omp33-36aa20-299 6His重组蛋白,SDS-PAGE电泳显示重组蛋白分子质量单位约为31.5ku,经镍亲和纯化得到高纯度的重组Omp33-36。结论成功重组表达鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa),为进一步研究其对免疫系统的影响奠定了实验基础。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 外膜蛋白Omp33-36 蛋白纯化
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结核分枝杆菌Rv1973重组载体构建及其异源性表达
16
作者 王晓彤 李飞娜 +1 位作者 陈豪 申晨 《标记免疫分析与临床》 CAS 2022年第12期2107-2111,2153,共6页
目的Rv1973是人型结核分枝杆菌(M.tuberculosis,Mt)RD区(region of differences)基因表达的一个外膜蛋白(OMP),其功能尚不明确。分枝杆菌和革兰氏阴性菌的外膜结构与其毒力、耐药性等常密切相关。本研究拟构建Mt-Rv1973及其耻垢分枝杆菌... 目的Rv1973是人型结核分枝杆菌(M.tuberculosis,Mt)RD区(region of differences)基因表达的一个外膜蛋白(OMP),其功能尚不明确。分枝杆菌和革兰氏阴性菌的外膜结构与其毒力、耐药性等常密切相关。本研究拟构建Mt-Rv1973及其耻垢分枝杆菌(M.smegmatis,Ms)同源基因MSMEG_0353(Ms-Rv1973)重组表达载体并建立其异源性表达的菌株,用于目的蛋白的诱导表达及其生物学功能的相关研究。方法将密码子优化的Mt-Rv1973与Ms-Rv1973的编码序列重组入pMAL-c6T载体并转化入低内毒素的ClearColi BL21(DE3)大肠杆菌中获得异源性Mt-Rv1973与Ms-Rv1973融合表达菌株,并通过对目的蛋白进行诱导表达、SDS-PAGE分析和液相色谱-质谱(LC-MS)鉴定、Ni2+亲和层析和标签切割等获得纯化的目的蛋白。结果成功构建了Mt-Rv1973与Ms-Rv1973表达载体和异源性表达菌株,并经诱导表达和纯化获得了目的蛋白。结论为研究该蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 外膜蛋白 载体构建 蛋白纯化
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奶牛乳房炎大肠杆菌分离株主要免疫原性蛋白纯化
17
作者 辛凤艳 侯喜林 朴范泽 《黑龙江八一农垦大学学报》 2007年第4期63-66,共4页
应用奶牛乳房炎大肠杆菌分离株灭活菌苗免疫健康家兔,制备兔抗大肠杆菌高免血清。对该大肠杆菌菌体裂解产物进行SDS-PAGE并进行Westernblot分析,结果该菌株与稀释一定倍数的兔高免血清反应,产生3条特异性带,其中约33ku蛋白为主要免疫原... 应用奶牛乳房炎大肠杆菌分离株灭活菌苗免疫健康家兔,制备兔抗大肠杆菌高免血清。对该大肠杆菌菌体裂解产物进行SDS-PAGE并进行Westernblot分析,结果该菌株与稀释一定倍数的兔高免血清反应,产生3条特异性带,其中约33ku蛋白为主要免疫原性蛋白。对其进行电洗脱纯化,得到单一条带的目的蛋白。 展开更多
关键词 大肠杆菌 外膜蛋白 纯化
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不同培养基条件来源空肠弯曲菌外膜蛋白纯化及其表达差异
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作者 冯胜军 孙万邦 +3 位作者 肖政 姚新生 米娜 刘仿 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期615-619,共5页
目的探讨不同培养基培养条件下空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,CJ)Mr28000~31000外膜蛋白的纯化方案及表达差异。方法分别采用改良布氏血琼脂培养基(以下简称Bull’s)、改良卵黄培养基(以下简称Yolk)培养CJ,比较两者的生长特征。制... 目的探讨不同培养基培养条件下空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,CJ)Mr28000~31000外膜蛋白的纯化方案及表达差异。方法分别采用改良布氏血琼脂培养基(以下简称Bull’s)、改良卵黄培养基(以下简称Yolk)培养CJ,比较两者的生长特征。制备CJ全菌抗血清。0.2mol/L、pH2.2甘氨酸-HCl缓冲液抽取CJ外膜蛋白,Sephadex G-75层析法纯化其中的Mr28000~31000蛋白。SDS-PAGE技术检测Mr28000~31000外膜蛋白表达情况和含量差异,Western-blotting检测该类蛋白的抗原性。结果卵黄培养基培养的细菌生长更典型,SephadexG-75层析能够稳定可靠地纯化CJ细菌Mr28000~31000外膜蛋白,卵黄培养基培养来源的CJ的Mr28000~31000表达量占酸提取物的70%,大于改良布氏血琼脂培养基培养来源的表达量48%,两种培养基来源的CJ的Mr28000~31000蛋白成分均与CJ全菌兔抗血清发生免疫反应。结论不同培养基来源CJ的Mr28000~31000外膜蛋白均能被SphadexG-75分子筛纯化,该类蛋白能够在改良卵黄培养基上更高效表达,不同培养基来源的该类蛋白均具有良好的抗原性,该培养基的使用和该类蛋白有效提取为CJ感染的血清学特异性诊断及疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 培养基 外膜蛋白 SephadexG-75 纯化
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伤寒沙门菌外膜蛋白YncD的重组表达、纯化及其免疫保护作用观察
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作者 何金芮 王佳 +4 位作者 邓冲 王泽军 杨天 丛延广 熊坤 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期951-955,共5页
目的通过基因重组表达方法制备伤寒沙门菌外膜蛋白YncD,观察其免疫保护效果。方法通过PCR方法扩增伤寒沙门菌Ty2野生株的外膜蛋白YncD编码基因,构建原核表达载体pET28a-yncD,并测序鉴定。表达载体转入大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达重组蛋... 目的通过基因重组表达方法制备伤寒沙门菌外膜蛋白YncD,观察其免疫保护效果。方法通过PCR方法扩增伤寒沙门菌Ty2野生株的外膜蛋白YncD编码基因,构建原核表达载体pET28a-yncD,并测序鉴定。表达载体转入大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达重组蛋白,并通过亲和层析和离子交换柱进行纯化。获得的重组蛋白免疫接种小鼠,以Ty2株进行攻击,观察重组蛋白的免疫保护效果。结果经DNA测序鉴定,p ET28a-yncD原核表达重组载体构建成功,其在原核表达系统中表达量高,产物蛋白相对分子质量约为79 000,与预期相符。表达产物经亲和层析和离子交换柱纯化后,得到高纯度重组YncD蛋白。小鼠经重组YncD免疫接种后,可抵抗致死剂量的毒株攻击。结论成功构建伤寒沙门菌外膜蛋白YncD基因重组原核表达系统,并获得高纯度重组YncD蛋白,动物实验初步显示重组蛋白具有良好的免疫保护作用,为进一步的免疫保护效能评价奠定基础。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 外膜蛋白YncD 表达纯化 免疫保护
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重组布鲁菌外膜蛋白Omp19的制备方法及免疫原性研究
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作者 辜彦霏 殷瑛 +2 位作者 李玉杰 宰晓东 徐俊杰 《畜牧与饲料科学》 2022年第3期1-7,共7页
[目的]探索重组布鲁菌Omp19蛋白的制备方法,评价其在实验动物中的免疫原性,为中试工艺放大奠定基础。[方法]利用摇瓶培养对重组Omp19蛋白进行原核诱导表达,对培养基类型、诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间、诱导时的菌体密度等条件进行筛... [目的]探索重组布鲁菌Omp19蛋白的制备方法,评价其在实验动物中的免疫原性,为中试工艺放大奠定基础。[方法]利用摇瓶培养对重组Omp19蛋白进行原核诱导表达,对培养基类型、诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间、诱导时的菌体密度等条件进行筛选;利用阳离子交换层析、疏水层析和阴离子交换层析对重组Omp19蛋白进行纯化制备;利用SDS-PAGE和分子排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC)对重组Omp19蛋白的纯度进行鉴定;利用动物实验评价制备的重组Omp19蛋白的免疫原性。[结果]摇瓶培养试验表明,重组布鲁菌Omp19蛋白较优的表达条件为:使用LB培养基,在菌密度OD600 nm值为0.6~1.0时加入0.5 mmol/L的IPTG,于28℃诱导5 h;经3步纯化后,获得了高纯度的重组Omp19蛋白;免疫原性研究表明,经方法优化后制备的重组Omp19蛋白联合佐剂可以较好地刺激BALB/c小鼠产生特异性抗体。[结论]优化了重组布鲁菌外膜蛋白Omp19的制备方法,评价了其在小鼠中的免疫原性,为重组布鲁菌疫苗的研发提供了实验基础。 展开更多
关键词 布鲁菌 外膜蛋白Omp19 制备方法 蛋白纯化 免疫原性
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