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人滑膜间充质干细胞的分离培养与鉴定 被引量：6
1
作者 陈松 符培亮 +2 位作者 丛锐军 吴海山 许震宇 《中国骨与关节外科》 2014年第2期146-151,共6页
背景:软骨一旦损伤将很难自我修复,组织工程学修复损伤软骨是目前的研究热点。组织工程学中找到合适的"种子细胞"至关重要。滑膜间充质干细胞(SMSCs)因较其他来源的间充质干细胞成软骨能力、增殖能力更强,且细胞容易获取、对... 背景:软骨一旦损伤将很难自我修复,组织工程学修复损伤软骨是目前的研究热点。组织工程学中找到合适的"种子细胞"至关重要。滑膜间充质干细胞(SMSCs)因较其他来源的间充质干细胞成软骨能力、增殖能力更强,且细胞容易获取、对机体损伤小等优点,越来越受到研究者的青睐。目的:探讨人SMSCs体外分离、培养的方法与步骤,探索对SMSCs进行鉴定的最新方法。方法:关节镜下获取11例行关节镜手术患者的滑膜组织,按照Pei等[6]的方法分离培养滑膜干细胞;从细胞形态学观察、细胞生长曲线分析、CCK-8测定增殖活力、流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面抗原、对SMSCs进行成脂/成骨/成软骨诱导、免疫细胞荧光染色以及RT-PCR检测成脂/成骨/成软骨相关基因的表达等方面对SMSCs进行鉴定。结果与结论:按照Pei等的方法可以成功地从人滑膜组织中分离出干细胞,分离出的干细胞具有间充质干细胞特异性表型和多向分化潜能。 展开更多
关键词 滑膜间充质干细胞 分离培养 鉴定 成脂诱导 成骨诱导 成软骨诱导
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维生素D对骨髓基质干细胞成骨分化的分子调控研究进展 被引量：6
2
作者 张尧 李晓莉 张岩 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1337-1340,共4页
骨髓基质干细胞(MSCs)是骨髓基质的组成成分,在骨骼的发育和代谢平衡中起重要作用。该文总结并综述了维生素D及其活性形式1,25二羟基维生素D_3[1,25(OH)_2D_3]通过Wnt信号通路、Wnt5a/ROR2轴、BMP/TGF-β/Samd信号通路、ROS/ERK信号通路... 骨髓基质干细胞(MSCs)是骨髓基质的组成成分,在骨骼的发育和代谢平衡中起重要作用。该文总结并综述了维生素D及其活性形式1,25二羟基维生素D_3[1,25(OH)_2D_3]通过Wnt信号通路、Wnt5a/ROR2轴、BMP/TGF-β/Samd信号通路、ROS/ERK信号通路对MSCs成骨分化的分子调控,阐明了维生素D对MSCs代谢调控的分子信号通路。 展开更多
关键词 维生素D 1 25(OH)2D3 骨髓基质干细胞 分子调控 信号通路 成骨分化
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miR-21诱导犬BMSCs骨向分化的体外实验研究 被引量：3
3
作者 王颖 张雷 +4 位作者 周咏 张凯 王元银 何家才 邹多宏 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第9期1318-1323,共6页
目的体外研究检测miR-21诱导拉布拉多犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用。方法构建LentimiR-21-Luciferase与Lenti-Lac Z-Luciferase慢病毒载体,分别转染犬BMSCs,将研究分为miR-21组与Lac Z组。利用体外细胞划痕实验来比较转染后... 目的体外研究检测miR-21诱导拉布拉多犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用。方法构建LentimiR-21-Luciferase与Lenti-Lac Z-Luciferase慢病毒载体,分别转染犬BMSCs,将研究分为miR-21组与Lac Z组。利用体外细胞划痕实验来比较转染后BMSCs的爬行迁移能力。在转染后的第0、1、4、7、14天分别提取miR-21组与Lac Z组BMSCs的mRNAs和蛋白。通过Real time-PCR技术和Western blot检测成骨分化关键因子骨钙素(OCN)和骨桥蛋白(OPN)的表达。结果Lenti-miR-21-Luciferase与LentiLac Z-Luciferase慢病毒载体成功转入BMSCs后,miR-21组的BMSCs细胞爬行迁移能力显著增强(P<0.001);Real timePCR和Western blot结果显示,miR-21可以显著上调BMSCs成骨分化关键因子OCN和OPN的表达(P<0.05)。结论miR-21可以显著促进BMSCs的成骨分化,为进一步的体内实验奠定基础。 展开更多
关键词 MIR-21 骨髓间充质干细胞 慢病毒转染 成骨分化
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人牙龈成纤维细胞和牙周膜韧带细胞多向分化潜能的比较 被引量：2
4
作者 苏瑞 宋立婷 +2 位作者 董允允 邓嘉胤 蒋少云 《天津医药》 CAS 2016年第2期137-141,共5页
目的 体外培养人牙周膜韧带细胞（HPDLCs）和人牙龈成纤维细胞（HGFs）,对比两者成骨、成软骨以及成脂的多向分化潜能的差异。方法 运用酶消化结合组织块法体外培养HPDLCs和HGFs,选择生长状态良好的3~4代HPDLCs和HGFs,进行成骨、成软骨... 目的 体外培养人牙周膜韧带细胞（HPDLCs）和人牙龈成纤维细胞（HGFs）,对比两者成骨、成软骨以及成脂的多向分化潜能的差异。方法 运用酶消化结合组织块法体外培养HPDLCs和HGFs,选择生长状态良好的3~4代HPDLCs和HGFs,进行成骨、成软骨、成脂诱导,未分化诱导的细胞作为对照组。分别用茜素红染色、油红O染色以及阿利新蓝染色分别检测两种细胞的成骨、成软骨及成脂分化能力。半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HPDLCs和HGFs中相关标志基因骨钙素（OCN）、Ⅰ型胶原蛋白（Col1）、runt相关转录因子2（RUNX2）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ2（PPARγ2）、X型胶原蛋白（Col 10）m RNA的表达。结果 成骨诱导两种细胞培养至28 d时,细胞周围均有红染钙结节形成,HPDLCs形成的钙结节明显多于HGFs;成软骨诱导两种细胞14 d时均可见胞质蓝染的细胞,HGFs较HPDLCs明显;成脂诱导两种细胞21 d时,可见红色脂肪滴形成,HPDLCs形成的脂肪颗粒明显少于HGFs。HGFs和HPDLCs分化培养7d和14d后,均有OCN、Col 1、RUNX2、PPARγ2和Col 10的表达,在14 d时的表达均高于7 d;HPDLCs中OCN、Col 1、RUNX2的表达高于HGFs,PPARγ2、Col 10的表达低于HGFs（均P〈0.05）。结论 HPDLCs的成骨能力较HGFs强,成软骨和成脂能力较HGFs弱。 展开更多
关键词 人牙周膜韧带细胞 人牙龈成纤维细胞 细胞分化 成骨分化 成脂分化 成软骨分化
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脂多糖预处理的牙囊细胞外泌体对牙周炎牙周膜细胞成骨分化的影响 被引量：3
5
作者 石维薇 丁一 +1 位作者 田卫东 郭淑娟 《口腔疾病防治》 2021年第2期81-87,共7页
目的探究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)预处理牙囊细胞(dental folic cells,DFCs)外泌体(exo⁃somes,Exos)在不同浓度条件下对牙周炎患者的牙周膜细胞(periodontal ligament cells of periodontitis,p⁃PDLCs)成骨分化能力的影响,为牙... 目的探究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)预处理牙囊细胞(dental folic cells,DFCs)外泌体(exo⁃somes,Exos)在不同浓度条件下对牙周炎患者的牙周膜细胞(periodontal ligament cells of periodontitis,p⁃PDLCs)成骨分化能力的影响,为牙周病的防治提供基础。方法组织块酶消化法培养DFCs及p⁃PDLCs,提取经250 ng/mL LPS刺激DFCs 24 h后的Exos,Exos的表征通过透射电镜扫描、粒径分析以及蛋白印记法进行鉴定;通过逆转录⁃聚合酶链反应(reverse transcription⁃polymerase chain reaction,RT⁃PCR)、茜素红染色等方法检测10μg/mL以及100μg/mL浓度的Exos对p⁃PDLCs成骨向分化能力的影响。结果LPS预处理的DFCs外泌体(L⁃Exos)为直径30~100 nm之间的囊泡样结构,高表达CD63和相互作用蛋白X(ALG⁃2 interacting protein⁃X,Alix)。100μg/mL L⁃Exos上调p⁃PDLCs骨膜蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原基因的表达(P<0.05);而10μg/mL L⁃Exos仅上调p⁃PDLCs的转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)基因的表达(P<0.01)。在成骨诱导7 d后,L⁃Exos组的矿化结节明显多于对照组(P<0.01),并且100μg/mL L⁃Exos组的矿化效果更佳(P<0.01)。结论100μg/mL L⁃Exos较10μg/mL L⁃Exos更有利于增强p⁃PDLCs成骨向分化能力。 展开更多
关键词 脂多糖 牙囊细胞 牙周膜细胞 外泌体 成骨分化 胶原纤维 矿化 牙周再生
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涉及主动脉瓣钙化的潜在易感基因的生物信息学分析
6
作者 张丁文 刘霖如 +6 位作者 吕磊 吴宗吕 李昊天 唐攀力 易斌 杨淞然 华平 《岭南现代临床外科》 2020年第1期48-54,共7页
目的通过对主动脉瓣钙化相关差异表达基因及其生物学过程的研究,探索主动脉瓣钙化潜在的易感基因。方法差异表达分析基于统计学方法筛选出基因表达量上存在显著性差异的基因。功能学的分析有目的的筛选成骨过程及钙离子代谢过程中存在... 目的通过对主动脉瓣钙化相关差异表达基因及其生物学过程的研究,探索主动脉瓣钙化潜在的易感基因。方法差异表达分析基于统计学方法筛选出基因表达量上存在显著性差异的基因。功能学的分析有目的的筛选成骨过程及钙离子代谢过程中存在显著富集的基因,并认为该基因可能参与这些生物学过程导致主动脉瓣的钙化。PPI互作网络分析则进一步诠释这些基因内部的调控关系。结果差异分析的结果显示共有133个差异表达的基因,其中包括51个表达上调的基因以及82个表达下调的基因。GO和KEGG富集分析筛选成骨细胞分化,骨骼系统开发以及骨化三个生物学过程。整合功能学分析和PPI互作网络的结果,最终确定SPP1和COL5A2为关键基因。结论本研究通过生物信息学的分析方法确定了SPP1和COL5A2可能为主动脉瓣钙化的潜在易感基因。 展开更多
关键词 主动脉瓣钙化 主动脉瓣狭窄 SPP1 COL5A2 成骨分化
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TGF-β2和geneX对BrdU标记骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的作用 被引量：5
7
作者 胡正雄 李彪 +3 位作者 蓝天 杨毅 王晓东 龚跃昆 《昆明医科大学学报》 CAS 2016年第2期10-14,共5页
目的研究TGF-β2和gene X对Brd U标记的骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化作用的影响.方法采用全骨髓贴壁培养法分离骨髓间充质干细胞,传代并鉴定,设实验组和空白对照组,实验组分4组:A组:Brd U标记后的BMSCs组;B组:Brd U标记后的BMSCs+TGF... 目的研究TGF-β2和gene X对Brd U标记的骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化作用的影响.方法采用全骨髓贴壁培养法分离骨髓间充质干细胞,传代并鉴定,设实验组和空白对照组,实验组分4组:A组:Brd U标记后的BMSCs组;B组:Brd U标记后的BMSCs+TGF-β2组;C组:Brd U标记后的BMSCs+gene X组;D组:Brd U标记后的BMSCs+gene X+TGF-β2组.空白对照组为Brd U标记后的单纯BMSCs加入基础培养基避光培养.诱导培养后观察骨髓间充质干细胞生长形态、检测生长动力学(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)、碱性磷酸酶(ALP)和钙定量、进行细胞Von-Kossa法染色,观察成骨分化作用.结果 (1)4组BMSCs吸光度值(OD)分析比较显示:细胞组间差异有统计学意义(P<0.05);(2)各组BMSCs成骨诱导后碱性磷酸酶(ALP)和钙定量检测结果显示:细胞组间差异有统计学意义(P<0.05);(3)进行细胞Von-Kossa法染色,D组可见大量钙结节;C组可见较多钙结节;B组可见部分钙结节;A组可见少量钙结节;空白对照组未见钙结节.结论 (1)TGF-β2可促进骨髓间充质干细胞的增殖和诱导其向成骨细胞分化;(2)gene X可促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,且在细胞因子TGF-β2联合作用下成骨分化作用更明显. 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 TGF-Β2 GENE X 细胞增殖 成骨分化
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