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隐孢子虫牛源分离株的分离和鉴定
被引量：
17
1
作者
刘海鹏
曹建平
+8 位作者
沈玉娟
陈有贵
李小红
卢潍媛
徐馀信
刘宜升
刘述先
周晓农
汤林华
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期81-86,共6页
目的分离和鉴定采自徐州自然感染奶牛粪便中的隐孢子虫卵囊。方法在徐州某奶牛场采集经改良抗酸染色镜检确认为隐孢子虫感染的奶牛粪便,用不连续Sheather’s蔗糖密度梯度离心法纯化卵囊。采用Chelex-100方法提取卵囊基因组DNA,设计引物...
目的分离和鉴定采自徐州自然感染奶牛粪便中的隐孢子虫卵囊。方法在徐州某奶牛场采集经改良抗酸染色镜检确认为隐孢子虫感染的奶牛粪便,用不连续Sheather’s蔗糖密度梯度离心法纯化卵囊。采用Chelex-100方法提取卵囊基因组DNA,设计引物扩增小亚基核糖体RNA(SSU rRNA)基因和卵囊囊壁蛋白(COWP)基因,分别克隆到pGEM-T和pGEM-T Easy载体,测定核苷酸序列,运用BLAST和MEGA软件进行序列同源性和种系发生分析。结果分离的隐孢子虫卵囊个体大小为(7．4±0．32)μm×(5．4±0．21)μm,长宽比为1．3±0．07(n=20)。徐州牛源隐孢子虫与Gen- Bank公布的安氏隐孢子虫比较,SSU rRNA和COWP基因序列同源性分别为100％和99％。种系发生分析显示该株隐孢子虫与安氏隐孢子虫处于同一分支。结论由徐州自然感染奶牛粪便中分离获得的隐孢子虫是安氏隐孢子虫。
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关键词
安氏隐孢子虫
小亚基核糖体RNA
卵囊囊壁蛋白
种系发生分析
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职称材料
隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的原核表达及抗血清的制备
被引量：
2
2
作者
于慧珠
岳城
+2 位作者
陈兆国
米荣升
夏延富
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期622-626,共5页
为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检...
为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检测目的蛋白,westernblot分析该重组蛋白的免疫活性。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录中的序列比较,同源性为90.5%,氨基酸序列同源性为87.57%。重组质粒转化菌在IPTG诱导下以包涵体形式高效表达,表达的融合蛋白大小约为46ku,westernblot分析显示,纯化复性后的重组蛋白可被辣根过氧化物酶标记的抗谷胱甘肽巯基转移酶(GST)单克隆抗体、隐孢子虫兔基因型感染兔血清特异性识别。ELISA检测结果表明,该蛋白3次免疫无特征病原体新西兰白兔后,兔血清特异性抗体达到较高水平,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。
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关键词
隐孢子虫鼠基因型
卵囊壁蛋白
CP41
克隆
原核表达
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职称材料
安氏隐孢子虫囊壁蛋白编码基因的克隆及原核表达
被引量：
2
3
作者
郑君
李建华
+3 位作者
张西臣
宫鹏涛
李明英
刘颖丽
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期901-903,共3页
为克隆和原核表达安氏隐孢子虫囊壁蛋白(COWP)的部分编码基因(AB),本研究根据COWP基因序列设计引物,RT-PCR扩增目的基因AB,从而构建重组原核表达质粒pET-AB。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE以及western blot鉴定...
为克隆和原核表达安氏隐孢子虫囊壁蛋白(COWP)的部分编码基因(AB),本研究根据COWP基因序列设计引物,RT-PCR扩增目的基因AB,从而构建重组原核表达质粒pET-AB。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE以及western blot鉴定。回收并纯化重组蛋白,免疫BALB/c小鼠,检测细胞免疫和体液免疫水平。SDS-PAGE和western blot分析显示,重组蛋白约为16 ku,可以被HRP标记的抗组氨酸抗体和安氏隐孢子虫免疫的小鼠血清识别。经重组蛋白免疫的BALB/c小鼠抗体水平以及CD4+和CD8+的值均差异显著(p<0.05),表明获得的重组蛋白具有一定的免疫原性。
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关键词
安氏隐孢子虫
囊壁蛋白
克隆
免疫原性
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职称材料
题名
隐孢子虫牛源分离株的分离和鉴定
被引量：
17
1
作者
刘海鹏
曹建平
沈玉娟
陈有贵
李小红
卢潍媛
徐馀信
刘宜升
刘述先
周晓农
汤林华
机构
中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室
徐州医学院
出处
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期81-86,共6页
基金
国家"十五"科技攻关项目(No.2003BA712A03-06)~~
文摘
目的分离和鉴定采自徐州自然感染奶牛粪便中的隐孢子虫卵囊。方法在徐州某奶牛场采集经改良抗酸染色镜检确认为隐孢子虫感染的奶牛粪便,用不连续Sheather’s蔗糖密度梯度离心法纯化卵囊。采用Chelex-100方法提取卵囊基因组DNA,设计引物扩增小亚基核糖体RNA(SSU rRNA)基因和卵囊囊壁蛋白(COWP)基因,分别克隆到pGEM-T和pGEM-T Easy载体,测定核苷酸序列,运用BLAST和MEGA软件进行序列同源性和种系发生分析。结果分离的隐孢子虫卵囊个体大小为(7．4±0．32)μm×(5．4±0．21)μm,长宽比为1．3±0．07(n=20)。徐州牛源隐孢子虫与Gen- Bank公布的安氏隐孢子虫比较,SSU rRNA和COWP基因序列同源性分别为100％和99％。种系发生分析显示该株隐孢子虫与安氏隐孢子虫处于同一分支。结论由徐州自然感染奶牛粪便中分离获得的隐孢子虫是安氏隐孢子虫。
关键词
安氏隐孢子虫
小亚基核糖体RNA
卵囊囊壁蛋白
种系发生分析
Keywords
Cryptosporidium
andersoni
Small
subunit
ribosome
RNA（SSU
rRNA）
oocyst
wall
protein
Phylogenetic
analysis
分类号
R382.3 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的原核表达及抗血清的制备
被引量：
2
2
作者
于慧珠
岳城
陈兆国
米荣升
夏延富
机构
中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心
新疆农业大学动物医学院
湖南农业大学动物医学院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期622-626,共5页
基金
国家高技术研究发展计划(2006AA10A207)
国家“十一五”科技支撑计划(2007BAD40B05)
上海市科技兴农重点攻关项目[沪农科攻字(2005)第3-4号]
文摘
为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检测目的蛋白,westernblot分析该重组蛋白的免疫活性。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录中的序列比较,同源性为90.5%,氨基酸序列同源性为87.57%。重组质粒转化菌在IPTG诱导下以包涵体形式高效表达,表达的融合蛋白大小约为46ku,westernblot分析显示,纯化复性后的重组蛋白可被辣根过氧化物酶标记的抗谷胱甘肽巯基转移酶(GST)单克隆抗体、隐孢子虫兔基因型感染兔血清特异性识别。ELISA检测结果表明,该蛋白3次免疫无特征病原体新西兰白兔后,兔血清特异性抗体达到较高水平,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。
关键词
隐孢子虫鼠基因型
卵囊壁蛋白
CP41
克隆
原核表达
Keywords
Cryptosporidium
mouse
genotype
oocyst
wall
protein
CP41
cloning
prokaryotic
expression
分类号
S852.72 [农业科学—基础兽医学]
Q786 [农业科学—兽医学]
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职称材料
题名
安氏隐孢子虫囊壁蛋白编码基因的克隆及原核表达
被引量：
2
3
作者
郑君
李建华
张西臣
宫鹏涛
李明英
刘颖丽
机构
吉林大学畜牧兽医学院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期901-903,共3页
基金
国家科技支撑计划农业领域课题(2007BAD40B05)
文摘
为克隆和原核表达安氏隐孢子虫囊壁蛋白(COWP)的部分编码基因(AB),本研究根据COWP基因序列设计引物,RT-PCR扩增目的基因AB,从而构建重组原核表达质粒pET-AB。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE以及western blot鉴定。回收并纯化重组蛋白,免疫BALB/c小鼠,检测细胞免疫和体液免疫水平。SDS-PAGE和western blot分析显示,重组蛋白约为16 ku,可以被HRP标记的抗组氨酸抗体和安氏隐孢子虫免疫的小鼠血清识别。经重组蛋白免疫的BALB/c小鼠抗体水平以及CD4+和CD8+的值均差异显著(p<0.05),表明获得的重组蛋白具有一定的免疫原性。
关键词
安氏隐孢子虫
囊壁蛋白
克隆
免疫原性
Keywords
Cryptosporidium
andersoni
oocyst
wall
protein
clone
immunogenicity
分类号
S852.7 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
隐孢子虫牛源分离株的分离和鉴定
刘海鹏
曹建平
沈玉娟
陈有贵
李小红
卢潍媛
徐馀信
刘宜升
刘述先
周晓农
汤林华
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
17
下载PDF
职称材料
2
隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的原核表达及抗血清的制备
于慧珠
岳城
陈兆国
米荣升
夏延富
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
下载PDF
职称材料
3
安氏隐孢子虫囊壁蛋白编码基因的克隆及原核表达
郑君
李建华
张西臣
宫鹏涛
李明英
刘颖丽
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
下载PDF
职称材料
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