期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到7篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
几种植物转基因表达载体的构建方法 被引量：16
1
作者 林春晶 韦正乙 +2 位作者 蔡勤安 侯敬尧 邢少辰 《生物技术》 CAS CSCD 2008年第5期84-87,共4页
表达载体的构建在植物基因工程研究中占据重要地位,直接关系到目的基因的表达效果。作者在收集整理前人的工作基础上,比较分析了5种不同载体构建方法的特点,给出了不同载体构建方法的适用性建议,期望能对植物基因工程中的载体构建工作... 表达载体的构建在植物基因工程研究中占据重要地位,直接关系到目的基因的表达效果。作者在收集整理前人的工作基础上,比较分析了5种不同载体构建方法的特点,给出了不同载体构建方法的适用性建议,期望能对植物基因工程中的载体构建工作提供有益帮助。在构建多片段连接的小载体的时候推荐用一步克隆法,在构建多片段连接的复杂的大载体时采用相应的复杂载体构建技术,在已获得无选择标记的转基因植株时采用三段T-DNA构建方法构建载体。在做基因功能验证时采用的Gateway技术,非常简单的载体构建可以采用传统的酶切连接的构建方式。现在的主流构建载体方式是利用结合其他手段的Gateway技术,未来载体的发展趋势将是无酶连接。 展开更多
关键词 载体 构建 GATEWAY技术 三段T-DNA 一步克隆法
下载PDF
一种载体构建的新方法:一步克隆法 被引量：13
2
作者 欧阳平 李玉 +1 位作者 严红 马立新 《湖北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2007年第2期178-181,共4页
报道一种载体构建的新方法,在PCR引物设计时,相连片断设计15 bp同源序列,PCR克隆目的片段后,产生多个首尾具同源末端的片段,然后进行多片段定向连接、转化和重组子鉴定.以4片段拼接的叶绿体单交换质体载体pSMGA(pBluescriptⅡSK(+)-man-... 报道一种载体构建的新方法,在PCR引物设计时,相连片断设计15 bp同源序列,PCR克隆目的片段后,产生多个首尾具同源末端的片段,然后进行多片段定向连接、转化和重组子鉴定.以4片段拼接的叶绿体单交换质体载体pSMGA(pBluescriptⅡSK(+)-man-gfp-aadA)的构建为例,应用上述方法构建仅需做一次连接、转化即可.该方法设计操作相对简便,无需中间载体的构建,减少连接和转化次数.利用该法构建了10多个6 kb以内的载体,证明这是一种简便、通用、高效并值得推广的构建小载体的方法. 展开更多
关键词 载体构建 一步克隆 新方法 同源片段 水稻
下载PDF
阴道毛滴虫RRas基因序列的cDNA一步克隆、表达及鉴定 被引量：2
3
作者 王文柯 贾鑫 +2 位作者 曹磊 王黎 薛长贵 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第11期999-1003,共5页
目的一步克隆、表达及鉴定阴道毛滴虫RRas基因,以了解其在组织细胞定位和功能。方法用PCR方法从阴道毛滴虫cDNA文库中扩增RRas片段,用一步克隆法构建RRas-PQE-80L载体,进行菌落PCR和酶切鉴定,阳性克隆提取质粒,经测序鉴定后转化至大肠... 目的一步克隆、表达及鉴定阴道毛滴虫RRas基因,以了解其在组织细胞定位和功能。方法用PCR方法从阴道毛滴虫cDNA文库中扩增RRas片段,用一步克隆法构建RRas-PQE-80L载体,进行菌落PCR和酶切鉴定,阳性克隆提取质粒,经测序鉴定后转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导。表达产物用NiAgarose His纯化试剂盒纯化,纯化产物经SDS-PAGE电泳鉴定和Western blot分析。结果从阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增的RRas基因片段长617bp,酶切及DNA测序证实RRas-PQE-80L重组质粒构建正确。表达的融合蛋白分子质量单位约为23.6ku,该蛋白能被抗His标签抗体识别。结论成功构建重组原核表达质粒RRas-PQE-80L载体,并能在E.coli BL21中表达,表达蛋白具有反应原性。 展开更多
关键词 阴道毛滴虫 RRas基因 一步克隆 原核表达 WESTERN BLOT
原文传递
Hsa_circ_0008957靶MiRNA预测及其表达载体构建
4
作者 李仙仙 鲁艳芹 韩金祥 《罕少疾病杂志》 2022年第1期85-88,共4页
目的构建Ⅰ型胶原蛋白结构基因COL1A2的靶向circRNA hsa_circ_0008957其靶向miRNA的功能。方法采用circbase软件,获取hsa_circ_0008957序列,采用PCR进行circRNA克隆,通过同源重组接入circRNA表达载体pCD2.1。重组载体pCD2.1-hCOL1A2_cir... 目的构建Ⅰ型胶原蛋白结构基因COL1A2的靶向circRNA hsa_circ_0008957其靶向miRNA的功能。方法采用circbase软件,获取hsa_circ_0008957序列,采用PCR进行circRNA克隆,通过同源重组接入circRNA表达载体pCD2.1。重组载体pCD2.1-hCOL1A2_circ_0008957通过PCR、双酶切、Sanger测序进行验证。利用circBANK,circinteractome网站进行hsa_circ_0008957靶miRNA及其功能预测。结果pCD2.1-hCOL1A2-circ-0008957重组载体构建成功。Hsa_circ_0008957预测出该circRNA不具有蛋白编码功能,其靶miRNA hsa_miR_1305,hsa_miR_140-3p,hsa_miR_421,hsa_miR_548c_3p和hsa_miR_628-3p与成骨相关,预测hsa_circ_0008957可能通过这些miRNA参与成骨分化。结论Hsa_circ_0008957通过miR-1305、miR-140-3p、miR_421、miR_548c_3p和miR_628_3p参与成骨分化,且预测COL1A2靶向miRNA与17种miRNA取交集,得出hsa_miR_618,该miRNA与肿瘤疾病相关,为后续在细胞水平上进一步验证hsa_circ_0008957的调节功能奠定了基础。 展开更多
关键词 COL1A2 hsa_circ_0008957 快速克隆 生物信息学预测
下载PDF
热带假丝酵母高效利用甘油研究 被引量：2
5
作者 彭健 苏静 +3 位作者 杨晓慧 王腾飞 汪俊卿 王瑞明 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期38-45,共8页
目的：热带假丝酵母以油脂为底物发酵时会产生副产物甘油,研究对热带假丝酵母gk基因进行过表达,将副产物甘油转化为能量,提高油脂转化利用效率。方法：以热带假丝酵母Candida tropicalis 1798中的甘油激酶（gk）为研究对象,利用PCR技术... 目的：热带假丝酵母以油脂为底物发酵时会产生副产物甘油,研究对热带假丝酵母gk基因进行过表达,将副产物甘油转化为能量,提高油脂转化利用效率。方法：以热带假丝酵母Candida tropicalis 1798中的甘油激酶（gk）为研究对象,利用PCR技术获得同源臂基因gkpR,通过一步法无缝克隆将同源臂和G418抗性基因（kanr）连接至pPICzαA载体,同时将解脂假丝酵母Candida lipolytica 1457中的启动子基因pGAP无缝连接至载体中的gkpR,构成质粒pPICzαA-gkp,并电转化至C.tropicalis 1798感受态细胞中,通过一次同源单交换,将启动子pGK替换为pGAP。结果：经过G418抗性筛选和PCR鉴定,成功获得pGAP基因替换菌株C.tropicalis 1798-gkPr;发酵验证结果显示,启动子基因替换C.tropicalis 1798在以甘油为底物培养时重组菌OD600值比野生型菌株高46.4%,重组菌培养基中甘油剩余量比野生菌降低56.1%,表明启动子替换能促进C.tropicalis1798对甘油的吸收利用。此外,以油脂为底物进行发酵实验时还发现重组菌产长链二元酸的量比野生菌提高32.7%。结论：通过启动子替换手段构建的重组菌C.tropicalis 1798-gkPr,提高了热带假丝酵母对油脂组分中甘油成分的利用效率。 展开更多
关键词 gk基因 热带假丝酵母 一步法无缝克隆 pGAP基因
原文传递
Red/ET同源重组系统介导的质粒载体快速构建
6
作者 苏春 余佳 +1 位作者 邱荣国 唐莉 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期12-17,共6页
Red/ET重组技术是近年来建立的一种基于高效率体内同源重组的新型遗传工程技术,该技术简便、快速.首先,通过一步融合的方法将链霉素抗性基因和氯霉素抗性基因同时克隆至pUC19上,从而构建出含有正反选择标记的载体pRC;其次,用安普霉素抗... Red/ET重组技术是近年来建立的一种基于高效率体内同源重组的新型遗传工程技术,该技术简便、快速.首先,通过一步融合的方法将链霉素抗性基因和氯霉素抗性基因同时克隆至pUC19上,从而构建出含有正反选择标记的载体pRC;其次,用安普霉素抗性基因或者氯霉素抗性基因替换了常用表达载体pET-28b上的卡那霉素抗性基因,改变了其抗性选择标记,得到的表达载体pMT和pCT可以更广泛地应用于不同宿主中;最后,还将启动和终止表达的区域定点插入pACYC184载体中,使其成为可以独立表达蛋白的表达载体p184.本研究所得到的载体为大肠杆菌宿主菌中的基因克隆和蛋白表达提供了基础. 展开更多
关键词 RED ET技术 同源重组 抗性基因 一步融合 正反选择标记 克隆
下载PDF
基于FPLC-LC-MS/MS分析嗜盐古菌Haloarcula hispanica胞内类泛素化底物
7
作者 吴一飞 韦露莎 陈辉 《质谱学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期272-281,共10页
本研究结合SLIC克隆技术和快速蛋白质液相色谱-高效液相色谱-串联质谱(FPLC-LC-MS/MS)法,对嗜盐古菌Haloarcula hispanica类泛素蛋白ThiS的泛素化底物和缀合位点进行鉴定分析。采用SLIC克隆法构建类泛素蛋白ThiS表达质粒/整合质粒,经转... 本研究结合SLIC克隆技术和快速蛋白质液相色谱-高效液相色谱-串联质谱(FPLC-LC-MS/MS)法,对嗜盐古菌Haloarcula hispanica类泛素蛋白ThiS的泛素化底物和缀合位点进行鉴定分析。采用SLIC克隆法构建类泛素蛋白ThiS表达质粒/整合质粒,经转染后的菌株在DMSO呼吸作用诱导下表达并纯化His6-ThiS蛋白缀合体。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,质粒型类泛素ThiS的表达远远高于基因型菌株的表达量,而通过定点突变,将ThiS的第89号位点突变成赖氨酸K和精氨酸R,进而使用胰蛋白酶对ThiS肽段上的赖氨酸残基-双甘氨肽标签进行酶切处理,采用LC-MS/MS法鉴定其底物和底物修饰位点。鉴定得到钼喋呤合成酶MoaE,蛋氨酸亚砜还原酶MsrA和其同系物MsrB,以及Fe-S簇组装蛋白SufB等4种底物蛋白。该方法通过结合蛋白位点突变和质谱检测,能够准确、有效地检测泛素/类泛素蛋白的修饰底物及其修饰位点,为深入泛素的生物性功能研究提供了切入点。 展开更多
关键词 类泛素 LC-MS/MS SLIC克隆 嗜盐古菌 蛋白缀合
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部