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禽多杀性巴氏杆菌C48-3株外膜蛋白H的致病作用 被引量:7
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作者 韦东 吾鲁木汗.那孜尔别克 +2 位作者 段世雄 严芳 恩特马克.布拉提白 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期31-39,共9页
目的:探讨禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H(OmpH)的致病作用。方法:用大肠杆菌表达系统表达强毒株C48-3的重组蛋白OmpH,亲和层析法纯化N端带有6个组氨酸标签的重组OmpH,通过皮下注射兔制备抗OmpH抗血清,用生物学功能实验比较野生株C48-3、突... 目的:探讨禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H(OmpH)的致病作用。方法:用大肠杆菌表达系统表达强毒株C48-3的重组蛋白OmpH,亲和层析法纯化N端带有6个组氨酸标签的重组OmpH,通过皮下注射兔制备抗OmpH抗血清,用生物学功能实验比较野生株C48-3、突变株ΔompH和互补株C48-3C的粘附能力、血清抵抗性和抗吞噬作用。结果:与野生株和互补株相比,突变株对CEF细胞的粘附能力显著降低,而抗OmpH抗体显著抑制野生株和互补株对CEF细胞的粘附,但该抗血清不影响突变株的粘附能力。野生株和互补株在鸡血清中的存活率显著高于突变株,但灭活鸡血清处理不影响它们的存活率。小鼠腹腔巨噬细胞对突变株的吞噬能力显著高于野生株和互补株,而抗OmpH抗体增强巨噬细胞对野生株和互补株的吞噬能力,但该抗体不影响巨噬细胞对突变株的吞噬能力。结论:OmpH是禽巴氏杆菌的致病因子,它在该菌对宿主的感染与致病过程中发挥重要的作用。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 omph 粘附 血清抵抗性 抗吞噬作用
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牦牛源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H重组亚单位疫苗对小鼠的免疫保护效果 被引量:4
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作者 田亮 康立超 +2 位作者 赵文娟 薄新文 马勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期290-293,共4页
为分析牦牛源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H的免疫保护效果,将纯化的牦牛源多杀性巴氏杆菌重组外膜蛋白H(rOmpH)制备成疫苗,用该重组疫苗和全菌灭活疫苗皮下免疫小鼠。首免后每周采血1次,用间接ELISA方法检测其抗体动态变化,并于三免后第9天... 为分析牦牛源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H的免疫保护效果,将纯化的牦牛源多杀性巴氏杆菌重组外膜蛋白H(rOmpH)制备成疫苗,用该重组疫苗和全菌灭活疫苗皮下免疫小鼠。首免后每周采血1次,用间接ELISA方法检测其抗体动态变化,并于三免后第9天用2LD50的分离株进行攻毒,比较两者的保护力。结果显示,全菌灭活疫苗组小鼠30h后死亡率为20%,重组疫苗组小鼠30h后100%死亡,PBS对照组小鼠24h后100%死亡。结果表明,全菌灭活疫苗具有保护力,而重组蛋白疫苗保护性微弱。 展开更多
关键词 牦牛 多杀性巴氏杆菌 omph 免疫保护力
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牛源多杀性巴氏杆菌pm0979-ompH融合表达及免疫效果 被引量:5
3
作者 马建伟 杜慧慧 +3 位作者 吉佳乐 李春明 冯思源 彭远义 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期30-34,共5页
分析获得pm0979、ompH基因的主要抗原表位,并将2种基因以3种不同长度的疏水性linker进行拼接融合(标记为pm0979-L6-ompH、pm0979-L10-ompH、pm0979-L15-ompH),分别克隆于pet-30a中构建原核表达载体,并转化至BL21(DE3)感受态细胞进行表... 分析获得pm0979、ompH基因的主要抗原表位,并将2种基因以3种不同长度的疏水性linker进行拼接融合(标记为pm0979-L6-ompH、pm0979-L10-ompH、pm0979-L15-ompH),分别克隆于pet-30a中构建原核表达载体,并转化至BL21(DE3)感受态细胞进行表达获得融合蛋白。以融合蛋白免疫小鼠后进行牛源多杀性巴氏杆菌(Pm)CQ2株、Pm B型攻毒试验,分别测定小鼠体内抗体产生情况以及对小鼠的交叉保护效果。结果显示:3种融合蛋白在小鼠体内都能诱导较高的抗体水平,但不同长度的linker对小鼠保护性不同,其中融合蛋白rPM0979-L10-OMPH、rPM0979-L15-OMPH对Pm CQ2株攻毒的小鼠保护率达70%,对Pm B型攻毒小鼠保护率为30%。结果表明:重组的pm0979-ompH融合基因疫苗具有良好的交叉免疫保护力;同时,不同长度linker的基因疫苗对小鼠的保护率有一定影响。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 pm0979 omph pm0979-omph融合基因 不同长度的linker
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多杀性巴氏杆菌OmpH对宿主Fn和Plg粘附作用的初步研究 被引量:2
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作者 陈露 朱伟峰 +7 位作者 魏后军 胡波 仇汝龙 范志宇 陈萌萌 薛家宾 索朗斯珠 王芳 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第10期13-16,19,共5页
多杀性巴氏杆菌是一种重要的多种动物共患病病原和人兽共患病病原。OmpH是多杀性巴氏杆菌的保护性抗原和宿主细胞粘附因子。很多细菌的粘附因子可以通过粘附Fn等宿主胞外基质分子或血浆纤维蛋白溶解酶原(Plg)从而促进粘附过程,OmpH可能... 多杀性巴氏杆菌是一种重要的多种动物共患病病原和人兽共患病病原。OmpH是多杀性巴氏杆菌的保护性抗原和宿主细胞粘附因子。很多细菌的粘附因子可以通过粘附Fn等宿主胞外基质分子或血浆纤维蛋白溶解酶原(Plg)从而促进粘附过程,OmpH可能也具有此功能。为了研究OmpH对宿主Fn和Plg的粘附作用,采用原核表达系统表达OmpH,通过Far Western Blot试验和招募抑制试验研究了OmpH对Fn和Plg的结合作用及OmpH多克隆抗体对多杀性巴氏杆菌结合这些分子的抑制作用。结果显示,重组OmpH对Fn和Plg有结合作用,OmpH抗体能够显著抑制多杀性巴氏杆菌对Fn和Plg的粘附。本研究初步证明OmpH能够通过结合宿主Fn和Plg促进多杀性巴氏杆菌的粘附作用,增加了多杀性巴氏杆菌毒力因子和分子致病机制的认识,对巴氏杆菌病防控具有积极意义。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 omph 纤维连接蛋白 血浆纤维溶解酶原
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禽巴氏杆菌OmpH外膜蛋白DNA疫苗的免疫效果 被引量:2
5
作者 宫强 牛明福 +4 位作者 王帅涛 秦翠丽 孙晓菲 马丽苹 侯玉泽 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期13-16,22,共5页
目的:研究禽多杀性巴氏杆菌omph DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫保护效果。方法:利用PCR技术扩增出禽多杀性巴氏杆菌的omph基因片段,克隆到pMD18-T上,再亚克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pOMPH,体外转染SP2/0细胞,RT-PCR、间接... 目的:研究禽多杀性巴氏杆菌omph DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫保护效果。方法:利用PCR技术扩增出禽多杀性巴氏杆菌的omph基因片段,克隆到pMD18-T上,再亚克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pOMPH,体外转染SP2/0细胞,RT-PCR、间接免疫荧光试验、Western blot检测其转录及表达情况。然后进行动物免疫,实验动物分为三组即:pOMPH组、pCDNA3.1(+)空载体组和PBS对照组,每组16只BALB/c小鼠,pOMPH组和pCDNA3.1(+)组以100μg/只的剂量肌注免疫,PBS组每只小鼠肌注100μl1×PBS,各组均进行了三次免疫,每次间隔两周。间接ELISA检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况,三免两周后检测脾淋巴细胞IFN-γ分泌情况。强毒攻击,计算小鼠存活数目及保护率。结果:间接免疫荧光试验、Western blot和RT-PCR检测结果均表明pOMPH可在体外培养的SP2/0细胞中表达目的蛋白。动物免疫后,pOMPH组免疫小鼠血清抗体水平持续上升,与pCDNA3.1(+)组和PBS组相比差异极显著(P<0.01)。经提取的外膜蛋白(Omps)刺激后,pOMPH组的刺激值(SI值)与pCDNA3.1(+)组及PBS免疫组相比均差异显著(P<0.05)。免疫小鼠脾细胞产生的IFN-γ极显著高于两对照组产生的IFN-γ(P<0.01)。攻毒后pOMPH组保护率明显高于两对照组,可达70%。结论:成功构建了禽多杀性巴氏杆菌omph DNA疫苗,该疫苗可诱导免疫小鼠产生较强的体液和细胞免疫应答及较好的保护效果。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 omph DNA疫苗 免疫应答 保护效果
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禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H受体的初步鉴定 被引量:1
6
作者 吾鲁木汗.那孜尔别克 韦东 +1 位作者 恩特马克.布拉提白 肖迪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期9-14,21,共7页
目的鉴定鸡胚成纤维(CEF)细胞膜禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H(OmpH)受体。方法用膜蛋白提取试剂盒制备CEF细胞的膜蛋白,通过SDS-PAGE和配体印迹检测CEF细胞膜蛋白中的OmpH受体,采用MALDI-TOF质谱技术鉴定蛋白种类,并用配体印迹、ELISA和... 目的鉴定鸡胚成纤维(CEF)细胞膜禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H(OmpH)受体。方法用膜蛋白提取试剂盒制备CEF细胞的膜蛋白,通过SDS-PAGE和配体印迹检测CEF细胞膜蛋白中的OmpH受体,采用MALDI-TOF质谱技术鉴定蛋白种类,并用配体印迹、ELISA和免疫荧光技术检测OmpH受体在不同宿主食管黏膜细胞表面的分布情况。结果在转印CEF细胞膜蛋白的NC膜上有一条明显的疑似受体条带,分子量约为49kDa。MALDI-TOF质谱鉴定结果表明该受体蛋白是ATP合成酶β亚基。在转印鸡和兔食管黏膜细胞膜蛋白的NC膜上检测到能够与OmpH结合的蛋白条带,但在牛和猪食管黏膜细胞膜蛋白中未见任何印迹条带,而OmpH与鸡和兔食管黏膜细胞膜蛋白的结合力高于猪和牛食管黏膜细胞膜蛋白。结论禽多杀性巴氏杆菌OmpH受体可能是CEF细胞膜表面的ATP合成酶β亚基。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 omph 受体 ATP合成酶β亚基
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Prediction of Protein OmpH in Structure of C47-8 Pasteurella multocida
7
作者 繁萍 张瑞强 +3 位作者 张卫 丰琳琅 陈忍霞 赵静 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第6期1186-1189,1206,共5页
[Objective] This study aimed to predict the structure of protein OmpH from Pasteurella multocida C47-8 (PmC47-8) strain of yak. [Method] Online BLAST, signal peptide prediction, secondary structure prediction and pr... [Objective] This study aimed to predict the structure of protein OmpH from Pasteurella multocida C47-8 (PmC47-8) strain of yak. [Method] Online BLAST, signal peptide prediction, secondary structure prediction and protein characteristics of sequencing result of gene OmpH from PmC47-8 strain were analyzed. [Result] The similarities of gene OmpH from PmC47-8 with the published 81 OmpH genes were between 84% and 99%; a signal peptide was found with the cleavage sites between 20 and 21 in the polypeptide; secondary structure prediction showed that folding structure accounted for 49.8% and loop structure for 50.2%; it predicted that there were 7 O-glycosylation sites in OmpH protein with the amino acid residual sites of 2, 45, 48, 330, 716, 721, 723, respectively, and 2 N-glycosylation sites with the amino acid residual sites of 15 and 35. [Conclusion] This study lays the foundation for the study on the immunity of OmpH gene from yak. 展开更多
关键词 PmC47-8 strain omph protein structure PREDICTION
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胸膜肺炎放线杆菌Apx Ⅳ与多杀性巴氏杆菌OmpH基因的表位筛选及真核表达载体的构建
8
作者 姚景丽 武静桥 +5 位作者 范真玮 张东超 赵微 陈婷 何敬文 金天明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2132-2140,共9页
为构建一种安全有效的传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)与多杀性巴氏杆菌二联亚单位疫苗,通过在线生物软件对APP的外毒素ApxⅣ与Pm的外膜蛋白H(OmpH)基因进行T细胞和B细胞表位筛选;将筛选的优势抗原表位序列通过连接肽连接后,构建新肽段(命... 为构建一种安全有效的传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)与多杀性巴氏杆菌二联亚单位疫苗,通过在线生物软件对APP的外毒素ApxⅣ与Pm的外膜蛋白H(OmpH)基因进行T细胞和B细胞表位筛选;将筛选的优势抗原表位序列通过连接肽连接后,构建新肽段(命名为New),并利用在线生物信息软件对其进行分析;分别将ApxⅣ、OmpH和New基因序列通过同源重组的方法构建至真核表达载体GV658,通过双酶切验证目的基因的大小;将新构建的3种重组质粒转染HEK293细胞,CCK-8试验评估其对细胞的安全性;RT-PCR和Western blot验证外源基因蛋白的转录和表达情况;免疫荧光(IFA)验证重组质粒中外源基因蛋白在细胞中的免疫定位。结果显示,New肽段具有较好的免疫源性,所构建的重组质粒GV658-ApxⅣ、GV658-OmpH和GV658-New双酶切结果与目的基因大小相符,可转染HEK293细胞并成功表达,且对HEK293细胞无明显损伤作用。本研究所构建的3种质粒等比混合,可用于制备APP与Pm二联亚单位疫苗。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅣ 多杀性巴氏杆菌 omph 表位 重组质粒
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创伤弧菌OmpU与嗜水气单胞菌OmpⅡ外膜蛋白二联表达及其初步免疫原性 被引量:1
9
作者 郭松林 陆盼盼 +1 位作者 冯建军 林鹏 《集美大学学报(自然科学版)》 CAS 2017年第3期1-7,共7页
从发病的养殖鳗鲡中分离出创伤弧菌(Vibrio vulnificus)和嗜水气单胞菌(Aeromona shydrophila),提取其基因组DNA,再通过PCR法克隆创伤弧菌外膜蛋白Omp U和嗜水气单胞菌外膜蛋白OmpⅡ的基因全长。采用融合PCR法体外连接这2个基因表达膜... 从发病的养殖鳗鲡中分离出创伤弧菌(Vibrio vulnificus)和嗜水气单胞菌(Aeromona shydrophila),提取其基因组DNA,再通过PCR法克隆创伤弧菌外膜蛋白Omp U和嗜水气单胞菌外膜蛋白OmpⅡ的基因全长。采用融合PCR法体外连接这2个基因表达膜外片段的序列并成功构建了二联表达载体(p GEX-2T-Vibr-Aero-his)。在大肠杆菌(BL21)的吸光度A_(600)为0.6~1.0时,采用1.0 mmol/L IPTG诱导剂,16℃过夜诱导表达。表达产物经离心柱亲和层析纯化后获得分子量为82.2 ku的外膜蛋白。蛋白经透析复性后免疫于鳗鲡以测定其血清抗体效价。结果表明,重组蛋白注射组的鳗鲡血清抗体效价在免疫后第14天和第21天显著(P<0.05)高于PBS对照组,第28天和第42天达到极显著(P<0.01)水平。 展开更多
关键词 创伤弧菌 迟缓爱德华氏菌 OmpU OmpⅡ 表达产物 免疫原性
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鹅多杀性巴氏杆菌OmpH的扩增与生物信息学分析
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作者 赵文娟 康立超 +2 位作者 田亮 薄新文 马勋 《黑龙江农业科学》 2012年第2期16-21,共6页
为扩增鹅多杀性巴氏杆菌OmpH基因,预测OmpH蛋白二级结构和B细胞抗原表位,通过PCR扩增测序及生物信息学分析技术对该基因序列进行开放阅读框(ORF)的寻找、编码氨基酸的推导及蛋白质二级结构的初步预测等,探讨了鹅多杀性巴氏杆菌OmpH基因... 为扩增鹅多杀性巴氏杆菌OmpH基因,预测OmpH蛋白二级结构和B细胞抗原表位,通过PCR扩增测序及生物信息学分析技术对该基因序列进行开放阅读框(ORF)的寻找、编码氨基酸的推导及蛋白质二级结构的初步预测等,探讨了鹅多杀性巴氏杆菌OmpH基因在免疫保护中的作用。结果表明:鹅多杀性巴氏杆菌OmpH基因全长1537bp,ORF包含1056bp编码351个氨基酸;二级结构以无规则卷曲为主,有少量的α-螺旋和延伸带;推测OmpH蛋白有1个细胞黏附位点、3个糖基化位点。该研究为分析鹅多杀性巴氏杆菌外膜蛋白理化特性、制备单克隆抗体和设计表位疫苗等奠定了理论基础。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 外膜蛋白H 二级结构 B细胞抗原表位 功能预测
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猪源多杀性巴氏杆菌ompH基因的克隆、表达 被引量:11
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作者 吴斌 唐先春 +1 位作者 陈焕春 王大鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期701-704,共4页
利用已分离的菌株030224HB,根据NCBI上的序列(U52208)设计了一对引物,用PCR方法扩增了猪源多杀性巴氏杆菌的外膜蛋白基因(ompH),扩增的片段大小为1114bp(ORF为960bp),并克隆到载体pMD18T(TVector),测序表明该基因相当保守。用pET28b构... 利用已分离的菌株030224HB,根据NCBI上的序列(U52208)设计了一对引物,用PCR方法扩增了猪源多杀性巴氏杆菌的外膜蛋白基因(ompH),扩增的片段大小为1114bp(ORF为960bp),并克隆到载体pMD18T(TVector),测序表明该基因相当保守。用pET28b构建了原核表达载体pET28bompH,转化BL21并诱导表达,SDSPAGE结果显示表达蛋白约为35ku,与报道大小相近。Westernblot结果表明表达的蛋白质具有生物学活性,然后用所表达的蛋白做了ELISA检测方法的初步探讨。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 omph基因 克隆 原核表达 ELISA
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禽多杀性巴氏杆菌C48-3株ompH基因敲除突变株的构建及其生物学功能 被引量:8
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作者 吾鲁木汗.那孜尔别克 张宇凤 +2 位作者 龚凤娟 泽田拓士 恩特马克.布拉提白 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期66-73,共8页
【目的】探讨ompH基因在禽多杀性巴氏杆菌致病过程中的作用。【方法】利用同源重组原理构建中间为四环素抗性基因,两侧为ompH基因上下游同源序列同源的敲除载体pWSK29ΔompH,将敲除载体电击转入C48-3株感受态细胞中,通过四环素抗性和菌... 【目的】探讨ompH基因在禽多杀性巴氏杆菌致病过程中的作用。【方法】利用同源重组原理构建中间为四环素抗性基因,两侧为ompH基因上下游同源序列同源的敲除载体pWSK29ΔompH,将敲除载体电击转入C48-3株感受态细胞中,通过四环素抗性和菌落PCR筛选ompH基因的敲除突变株,并通过组合PCR、逆转录PCR和DNA测序对突变株进行验证。用生物学功能实验比较野生株、互补株和突变株在生长速率、荚膜结构、粘着能力和致病性等方面的差异。【结果】组合PCR、逆转录PCR和DNA测序结果证实ompH基因的敲除突变株C48-3ΔompH构建成功,电镜观察结果证实ompH基因的缺陷影响细菌的荚膜合成能力,粘附实验结果显示与野生株C48-3和互补株C48-3C相比突变株C48-3ΔompH对CEF细胞的粘附能力显著降低(P<0.01),而小鼠毒力实验结果表明突变株C48-3ΔompH的致病性相对减弱。【结论】本实验构建的突变株C48-3ΔompH,为进一步研究多杀性巴氏杆菌的致病机理奠定基础。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 omph基因 敲除突变 粘附 致病性
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多杀性巴氏杆菌分离鉴定及序列分析 被引量:8
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作者 康立超 黄新 +6 位作者 韩猛立 王正荣 何延华 谭鹏飞 薄新文 钟发刚 王新华 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期10-16,共7页
旨在了解新疆地区多杀性巴氏杆菌主要流行株的特性。通过病原的分离纯化、PCR扩增及测序,分析8株多杀性巴氏杆菌的血清型,16SrDNA基因、ompH基因和ompA基因的差异。结果表明,3株羊源、2株牛源和1株禽源分离株为荚膜A型,1株牦牛源分离株... 旨在了解新疆地区多杀性巴氏杆菌主要流行株的特性。通过病原的分离纯化、PCR扩增及测序,分析8株多杀性巴氏杆菌的血清型,16SrDNA基因、ompH基因和ompA基因的差异。结果表明,3株羊源、2株牛源和1株禽源分离株为荚膜A型,1株牦牛源分离株为荚膜B型,1株标准株为荚膜E型,均具有很强的致病性。分离株与GenBank公布的代表株的16SrDNA基因、ompH及ompA基因同源性分别为93%~100%、93%~100%、98%~100%。ompH基因的ORF氨基酸C端最后10个氨基酸变化较大,分离到5株ompA基因的ORF氨基酸序列N端多出6个氨基酸(M-K-R-I-I-Q)替代原先的起始位置。可见:新疆主要流行株为强致病性的荚膜A型,且有出现变异趋势。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 16S RDNA omph基因 ompA基因 序列分析
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绵羊源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌的生物学特性及2种候选疫苗的免疫效果评价
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作者 汪阳 张凌 +8 位作者 金映红 汪萍 薛晶 梁芊芊 李晓卓 郑启铭 刘文锴 韩翔舒 夏俊 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第4期108-116,共9页
旨在研究新疆绵羊源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌(PmD)的生物学特性,探索其灭活疫苗与OmpH重组疫苗对小鼠的免疫保护效果,为防控新疆地区绵羊巴氏杆菌病提供参考。采用细菌分离鉴定、PCR鉴定、药敏试验、耐药与毒力基因检测、致病性试验... 旨在研究新疆绵羊源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌(PmD)的生物学特性,探索其灭活疫苗与OmpH重组疫苗对小鼠的免疫保护效果,为防控新疆地区绵羊巴氏杆菌病提供参考。采用细菌分离鉴定、PCR鉴定、药敏试验、耐药与毒力基因检测、致病性试验等方法初步明确PmD的生物学特性;并通过最佳灭活条件和佐剂筛选、安全性试验、原核表达等方法制备PmD灭活疫苗与PmD-OmpH重组疫苗,采取小鼠攻毒保护试验评价2种疫苗的免疫效力。结果:从绵羊肺脏中分离出1株PmD,药敏试验显示,该菌为7重耐药菌,未检测到耐药基因;毒力基因检测显示,该菌具有12种毒力基因(exbB、exbD、hgbA、tonB、fimA、Oma87、OmpH、Psl、sodA、sodC、tbpA、toxA);致病性较强,对小鼠的最小致死菌量为2.2×105 CFU;灭活疫苗和重组疫苗对相同血清型菌株攻毒的保护率分别为80%和10%;灭活疫苗对血清型A、F和未知菌株攻毒保护率分别为0、20%和0,而重组疫苗的保护率则全为0。本研究发现1株强耐药、强毒力的绵羊源PmD,灭活疫苗对同种血清型菌株的保护性远高于重组疫苗,发病地区羊场可采用同种血清型灭活疫苗进行预防和控制绵羊巴氏杆菌病,对多价疫苗和新型疫苗的研制还有待进一步发掘。 展开更多
关键词 绵羊 荚膜血清D型 多杀性巴氏杆菌 生物学特性 灭活疫苗 omph蛋白 重组疫苗
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牦牛源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白OmpH和OmpA重组亚单位疫苗对小鼠的免疫效果 被引量:3
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作者 田亮 康立超 +2 位作者 赵文娟 薄新文 马勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期146-151,共6页
为分析牦牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)外膜蛋白H(OmpH)和外膜蛋白A(Om-pA)的免疫效果,构建了牦牛源多杀性巴氏杆菌OmpH和OmpA的原核表达载体pET-28a-OmpH和pET-28a-OmpA,表达并纯化重组外膜蛋白H(rOmpH)和重组外膜蛋白A(r... 为分析牦牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)外膜蛋白H(OmpH)和外膜蛋白A(Om-pA)的免疫效果,构建了牦牛源多杀性巴氏杆菌OmpH和OmpA的原核表达载体pET-28a-OmpH和pET-28a-OmpA,表达并纯化重组外膜蛋白H(rOmpH)和重组外膜蛋白A(rOmpA),制备相应的单价疫苗和二价疫苗(rOmpH-A)以及全菌灭活疫苗,以PBS作为对照,皮下免疫小鼠。首免后每周采血1次,用间接ELISA检测抗体动态变化,并于三免后第9天用2LD50的分离菌株进行攻毒,比较保护力。结果,各试验组均能产生特异性抗体,全菌灭活组和rOmpA组小鼠的存活率分别为80%、40%,而rOmpH组、rOmpH-A组小鼠全部死亡,rOmpH和rOmpH-A组仅推迟小鼠死亡的时间,说明保护力微弱,不能抵抗同源菌株的致死性攻击。结果表明,rOmpA蛋白具有保护力,而rOmpH不具有保护力。 展开更多
关键词 牦牛 多杀性巴氏杆菌 ompA基因 omph基因 重组蛋白
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猪源多杀性巴氏杆菌荚膜分型及外膜蛋白H基因序列分析 被引量:4
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作者 李伟杰 魏财文 +3 位作者 田野 张媛 岂晓鑫 蒋桃珍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第1期32-37,共6页
为了解国内猪源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因的变异情况及与荚膜型之间的相关性,本试验采用PCR方法对44株猪源多杀性巴氏杆菌进行荚膜分型和ompH基因的扩增测序。结果显示,44株菌株中22株为荚膜A型,17株为荚膜B型,5株为荚膜D型;44株菌株... 为了解国内猪源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因的变异情况及与荚膜型之间的相关性,本试验采用PCR方法对44株猪源多杀性巴氏杆菌进行荚膜分型和ompH基因的扩增测序。结果显示,44株菌株中22株为荚膜A型,17株为荚膜B型,5株为荚膜D型;44株菌株的ompH基因开放阅读框在1 002~1 056bp之间;SignaIP 4.1预测结果显示,信号肽为N端20个氨基酸残基;ProtParam分析结果显示,成熟蛋白氨基酸残基数量在313~331aa之间,推测的分子质量在33.83~36.46ku之间。序列分析结果显示,44株菌株核苷酸同源性为86.2%~100.0%,氨基酸同源性为86.0%~100.0%;ompH基因核苷酸序列遗传进化树结果显示,荚膜A型、B型和D型菌株分别在不同的分支。试验结果表明,猪源多杀性巴氏杆菌ompH基因在不同血清型之间具有较高的同源性,与荚膜型之间存在相关性。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 荚膜分型 omph基因 序列分析
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多杀性巴氏杆菌OmpH2对宿主Fn和Plg黏附作用的研究 被引量:4
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作者 陈露 朱伟峰 +5 位作者 魏后军 仇汝龙 胡波 范志宇 陈萌萌 王芳 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第6期10-15,共6页
多杀性巴氏杆菌是危害多种畜禽和野生动物的重要病原并可造成人类发病。OmpH(包括OmpH1和OmpH2)是巴氏杆菌细胞壁中的一种主要外膜蛋白,过去对OmpH致病作用的研究主要集中于OmpH1,而有关OmpH2的报道较少。本研究对OmpH1和OmpH2一级结构... 多杀性巴氏杆菌是危害多种畜禽和野生动物的重要病原并可造成人类发病。OmpH(包括OmpH1和OmpH2)是巴氏杆菌细胞壁中的一种主要外膜蛋白,过去对OmpH致病作用的研究主要集中于OmpH1,而有关OmpH2的报道较少。本研究对OmpH1和OmpH2一级结构进行了比较,发现OmpH2一级结构上具有多个与OmpH1高度相似的局部区域。采用原核表达系统表达了rOmpH2,进而开展了Western blot、Far Western blot和招募抑制实验。OmpH2与巴氏杆菌感染康复血清发生了特异性反应。OmpH2能够结合宿主Fn和Plg,而且OmpH2多克隆抗体能够显著抑制多杀性巴氏杆菌对Fn和Plg的黏附。本研究表明OmpH2能够在多杀性巴氏杆菌结合宿主Fn和Plg的过程中发挥作用,增加了多杀性巴氏杆菌毒力因子和分子致病机制的认识,对巴氏杆菌病防控具有重要意义。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 omph2 纤维连接蛋白 血浆纤维溶解酶原
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西藏牦牛源多杀性巴氏杆菌OmpH基因的遗传进化、分子特征和抗原性分析
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作者 李义兴 孟朝轶 +6 位作者 符汉宇 王运路 刘博华 徐业芬 包玉花 牛家强 索朗斯珠 《高原农业》 2023年第1期40-49,共10页
本研究旨在分析一株西藏牦牛源多杀性巴氏杆菌OmpH基因的遗传进化、分子特征和抗原性。从一株西藏牦牛源B型多杀性巴氏杆菌的全基因组测序中获得OmpH基因序列,对其核苷酸序列进行遗传进化分析,通过生物信息学软件在线对OmpH基因编码的... 本研究旨在分析一株西藏牦牛源多杀性巴氏杆菌OmpH基因的遗传进化、分子特征和抗原性。从一株西藏牦牛源B型多杀性巴氏杆菌的全基因组测序中获得OmpH基因序列,对其核苷酸序列进行遗传进化分析,通过生物信息学软件在线对OmpH基因编码的氨基酸序列进行理论分子质量、理论等电点、亲水性和疏水性、跨膜结构、结构域、二、三级结构及抗原性分析。结果表明OmpH基因全长1002 bp,编码333个氨基酸;遗传进化分析发现,西藏牦牛源Pm的OmpH基因与新疆牦牛源的同源性最近。OmpH蛋白的分子特性分析发现该蛋白为亲水性蛋白,较为稳定,具有信号肽结构,所有序列均在膜外,无跨膜结构,属于分泌型蛋白,在PFAM数据库中存在Porin_1结构域及低复杂性区域;该蛋白的二、三级蛋白结构分析发现分子同源三聚体构成,其中无规则卷曲占比45.35%,结构较为稳定。抗原性分析OmpH蛋白的保护性抗原的总体预测为0.6945,高出正常阈值0.2945。OmpH具有抗原性的可能性较大,可作为免疫原性蛋白和多杀性巴氏杆菌疫苗的较佳候选抗原。 展开更多
关键词 牦牛 多杀性巴氏杆菌 omph基因 遗传进化 分子特征 抗原性
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8株禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因序列分析 被引量:3
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作者 高明燕 徐步 +4 位作者 龚建森 王鑫 俞燕 范建华 刘学贤 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第12期43-47,共5页
为了解国内禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)流行株外膜蛋白 H(OmpH)基因的变异情况,参考GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌序列设计1对特异性引物,采用PCR方法对不同来源的8株禽Pm菌株和3个荚膜型参考株(A、B、D)的... 为了解国内禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)流行株外膜蛋白 H(OmpH)基因的变异情况,参考GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌序列设计1对特异性引物,采用PCR方法对不同来源的8株禽Pm菌株和3个荚膜型参考株(A、B、D)的OmpH基因进行扩增、测序。结果显示,11个菌株的OmpH基因开放阅读框在1002-1071 bp 之间;SignalIP 4.0预测结果表明,信号肽均为N端20个氨基酸残基,成熟蛋白氨基酸残基数量在314-337 aa之间,推测的分子质量在33.76-37.04 ku之间。与GenBank中15个菌株OmpH基因序列比对结果发现,核苷酸同源性在84.9%-100.0%之间;氨基酸同源性在81.5%-100.0%之间;其中C48-1、1010、9003、890920、921012、XJ-e 6个国内禽Pm分离株OmpH序列同源性为100.0%。试验结果表明,国内禽Pm菌株OmpH基因非常保守。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 omph基因 序列分析 同源性
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牦牛源多杀性巴氏杆菌血清型鉴定及ompH基因序列分析 被引量:1
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作者 田亮 康立超 +3 位作者 赵文娟 王平福 薄新文 马勋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期152-154,共3页
为分析牦牛多杀性巴氏杆菌(P.multocida)分离株与疫苗株的血清型和ompH基因差异,本研究利用PCR方法鉴定其血清型,并克隆、测序ompH全长基因,用DNAMAN、DNAStar对其进行生物信息学分析。结果显示,分离株与疫苗株血清型为B型,标准株血清型... 为分析牦牛多杀性巴氏杆菌(P.multocida)分离株与疫苗株的血清型和ompH基因差异,本研究利用PCR方法鉴定其血清型,并克隆、测序ompH全长基因,用DNAMAN、DNAStar对其进行生物信息学分析。结果显示,分离株与疫苗株血清型为B型,标准株血清型为E型。分离株和疫苗株ompH基因编码氨基酸有2个缺失和2个突变,同源性为99.4%。研究表明ompH基因具有很高的同源性,但氨基酸的缺失和突变可能使抗原表位发生变化,也是导致免疫失败的原因之一。 展开更多
关键词 牦牛 多杀性巴氏杆菌 血清型 omph基因 序列分析
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