目的:建立食品中阪崎肠杆菌双重PCR检测方法。方法:以食品中污染的阪崎肠杆菌为研究对象,以其基因组16 S rRNA-23 S rRNA的内部转录间隔区(ITS)基因和外膜蛋白A(OmpA)基因为靶标选择引物,进行双重PCR扩增,产物用琼脂糖凝胶电泳检测。结...目的:建立食品中阪崎肠杆菌双重PCR检测方法。方法:以食品中污染的阪崎肠杆菌为研究对象,以其基因组16 S rRNA-23 S rRNA的内部转录间隔区(ITS)基因和外膜蛋白A(OmpA)基因为靶标选择引物,进行双重PCR扩增,产物用琼脂糖凝胶电泳检测。结果:在优化的双重PCR条件下,阪崎肠杆菌的ITS基因和OmpA基因均可得到有效扩增,方法的灵敏度为1.6×102cfu/mL。所建立的方法用于实际食品样品检测,结果稳定。结论:本研究所建立的方法特异好、灵敏较高、分析周期短、结果准确,可用于食品中阪崎肠杆菌的日常检测。展开更多
文摘为建立创伤弧菌和副溶血弧菌的双重环介导等温扩增（loop—mediated isothermal amplification，LAMP）检测方法，本试验以创伤弧菌metalloprotease基因和副溶血弧菌ompA基因为靶点设计LAMP扩增引物，并在内引物间添加不同的酶切位点，通过对反应时间和温度的优化及酶切反应，成功建立了双重LAMP检测方法，并对其检测特异性、灵敏度和实际应用性进行了研究。结果显示，62℃反应45min时可同时检测到2种弧菌的存在，通过限制性内切酶酶切，可准确区分2种弧菌。该方法比普通PCR检测方法灵敏度高10^2～10^3倍。选择17株细菌菌株作为检测模板，发现除创伤弧菌和副溶血弧菌反应结果呈阳性外，其他均为阴性。以大菱鲆作为实验动物，检测双重LAMP技术的实际应用可能，该方法可准确检测并鉴定出组织和血液中感染的细菌种类，其灵敏度可达374～410CFU／g（mL）。SYBR Green Ⅰ是一种结合于DNA双链小沟中的荧光染料，反应产物加入该染料后，极易用肉眼判别。本试验成功建立了创伤弧菌和副溶血弧菌的双重LAMP检测方法，该方法可用于水产养殖中病原菌的早期诊断。
文摘目的:建立食品中阪崎肠杆菌双重PCR检测方法。方法:以食品中污染的阪崎肠杆菌为研究对象,以其基因组16 S rRNA-23 S rRNA的内部转录间隔区(ITS)基因和外膜蛋白A(OmpA)基因为靶标选择引物,进行双重PCR扩增,产物用琼脂糖凝胶电泳检测。结果:在优化的双重PCR条件下,阪崎肠杆菌的ITS基因和OmpA基因均可得到有效扩增,方法的灵敏度为1.6×102cfu/mL。所建立的方法用于实际食品样品检测,结果稳定。结论:本研究所建立的方法特异好、灵敏较高、分析周期短、结果准确,可用于食品中阪崎肠杆菌的日常检测。
