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人抗HER2单链抗体/精氨酸九聚体融合蛋白的基因构建、表达及鉴定 被引量：3
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作者 姜扩 陈锐 +5 位作者 王立锋 马琼 孟艳玲 杨安钢 马保安 裘秀春 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1201-1203,共3页
目的:构建人源性抗HER2单链抗体(scFv)/精氨酸九聚体(9R)融合蛋白基因,在大肠杆菌里表达纯化并检测该融合蛋白的活性。方法:采用PCR的方法,扩增融合基因scFv-9R,将获得的基因克隆入原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中表达,表达产物经SDS... 目的:构建人源性抗HER2单链抗体(scFv)/精氨酸九聚体(9R)融合蛋白基因,在大肠杆菌里表达纯化并检测该融合蛋白的活性。方法:采用PCR的方法,扩增融合基因scFv-9R,将获得的基因克隆入原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,通过Ni-NTA螯合层析纯化,透析复性,超滤浓缩。ELISA分析scFv-9R融合蛋白抗原亲和活性,凝胶迁移实验检测scFv-9R融合蛋白与siRNA结合活性。结果:成功构建了人源性抗HER2 scFv-9R融合基因,经IPTG诱导后在M15中以包涵体形式表达。表达的目的蛋白scFv-9R能与HER2抗原结合,同时具有siRNA结合能力。结论:scFv-9R具有结合抗原与siRNA双重活性,为靶向递送siRNA的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 HER2 单链抗体 精氨酸九聚体 融合蛋白 靶向输送
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