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模拟感染家蚕微粒子病的PCR分子诊断技术研究 被引量：26
1
作者 刘吉平 曹阳 +1 位作者 Smith J.E. 徐兴耀 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1925-1931,共7页
家蚕微粒子病病原为桑蚕微孢子虫(Nosema bombycis Nageli, N.b)。本文根据文献报道,选用了一对根据N.b孢子及其相近种属微孢子虫的SSU-rRNA保守区段设计的有效引物VIF/530R,从模拟感染不同浓度N.b孢子(3×101-7/ml)的蚕蛾、蚕卵的... 家蚕微粒子病病原为桑蚕微孢子虫(Nosema bombycis Nageli, N.b)。本文根据文献报道,选用了一对根据N.b孢子及其相近种属微孢子虫的SSU-rRNA保守区段设计的有效引物VIF/530R,从模拟感染不同浓度N.b孢子(3×101-7/ml)的蚕蛾、蚕卵的角度,较系统地研究了PCR诊断技术的可检测灵敏度和对模拟感染家蚕微粒子病的诊断效果,为PCR分子诊断家蚕微粒子病的实用化研究提供参考。在本实验的DNA制备方法和PCR反应条件下,分别对由不同浓度N.b纯孢子抽提的DNA模板和不同浓度N.b纯孢子(3×101～7ml-1)分别与蚕卵、蚕蛾混合抽提的DNA模板进行PCR扩增检测。结果表明:(1)对N.b纯孢子DNA模板,PCR可检测灵敏度为3×104N.bml-1(弱检测信号可到3102～3N.bml-1),对模拟染毒N.b孢子的蚕蛾DNA模板,PCR可检测灵敏度为3×105N.bml-1,两者分别已超过或达到目前生产上用显微镜的检毒水平;(2)对模拟染毒N.b孢子的蚕卵DNA模板,VIF/530R引物不能有效地检出蚕卵中染毒的N.b孢子DNA信号,推测在蚕卵DNA抽提物里可能含有抑制PCR扩增的未明因素,而蚕蛾DNA抽提物里则无此抑制因素。 展开更多
关键词 蚕卵 蚕蛾 微孢子虫 家蚕微粒子 DNA模板 引物 PCR 感染 染毒 分子诊断技术
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改良蚕沙静态好氧堆肥的发酵温度及对家蚕病原菌的灭活效果 被引量：19
2
作者 杨琼 廖森泰 +7 位作者 邢东旭 张发宝 李丽 罗国庆 肖更生 吴福泉 肖阳 李庆荣 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1018-1023,共6页
蚕沙是家蚕病原物的主要载体之一。为了探讨蚕沙产地无害化处理技术的可行性,调配80%蚕沙+20%蘑菇基料(蚕沙与蘑菇基料混合)、80%蚕沙+20%蘑菇基料+0.1%生物菌剂(蚕沙与蘑菇基料混合)、80%蚕沙+20%蘑菇基料+0.1%生物菌剂(蚕沙与蘑菇基... 蚕沙是家蚕病原物的主要载体之一。为了探讨蚕沙产地无害化处理技术的可行性,调配80%蚕沙+20%蘑菇基料(蚕沙与蘑菇基料混合)、80%蚕沙+20%蘑菇基料+0.1%生物菌剂(蚕沙与蘑菇基料混合)、80%蚕沙+20%蘑菇基料+0.1%生物菌剂(蚕沙与蘑菇基料不混合)3种静态好氧堆肥,调查3种改良蚕沙静态好氧堆肥的发酵温度以及对家蚕重要传染性病原的灭活效果。结果显示:3种蚕沙静态好氧堆肥上、中、下各部位发酵温度≥50℃的时间均超过10 d,发酵温度≥60℃有4～24 d;家蚕微孢子虫和家蚕核型多角体病毒在(60±1)℃堆温下经过3 d即被完全灭活。研究结果表明:3种配料的改良蚕沙静态好氧堆肥不同部位均具有良好的发酵条件,能产生杀灭家蚕传染性病原的高温,达到蚕沙无害化处理的目的。 展开更多
关键词 蚕沙 静态好氧堆肥 家蚕微孢子虫 家蚕核型多角体病毒 高温灭活
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家蚕微孢子虫研究10年回眸 被引量：18
3
作者 周泽扬 潘国庆 向仲怀 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期949-956,共8页
家蚕微孢子虫研究在近10年取得了突飞猛进的发展,特别是其基因组学分析和侵染相关分子的研究不断推进,为深入开展家蚕微孢子虫功能基因组学研究奠定了基础。通过蛋白质组与功能基因组研究平台,对家蚕微孢子虫孢壁蛋白和分泌蛋白的鉴定... 家蚕微孢子虫研究在近10年取得了突飞猛进的发展,特别是其基因组学分析和侵染相关分子的研究不断推进,为深入开展家蚕微孢子虫功能基因组学研究奠定了基础。通过蛋白质组与功能基因组研究平台,对家蚕微孢子虫孢壁蛋白和分泌蛋白的鉴定以及在微孢子虫侵染中的生物学功能展开了系统的研究;同时,从分子生物学水平详尽研究了家蚕微孢子虫侵染相关分子机制,从蚕业生产实践着手构建家蚕微孢子虫检测防控技术体系,利用现代分子生物学技术探索针对家蚕微孢子虫的家蚕抗性种质材料创建。可以预期,在近10年的研究基础上,未来对家蚕微孢子虫的研究将在侵染与垂直传播机制、分子检测、抗性素材分子育种等方面取得重大突破,并为其它微孢子虫的研究提供信息支持。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 基因组框架图 功能基因组 侵染机制 垂直传播 检测技术
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家蚕微孢子虫PCR检测的研究 被引量：14
4
作者 蔡平钟 徐兴耀 +5 位作者 黄自然 卢铿明 庄楚雄 邵寒霜 刘志昕 郑学勤 《蚕业科学》 CAS CSCD 1997年第4期207-210,共4页
根据家蚕微孢子虫（Nosemebombycis,N．b）孢子的DNA序列，设计合成一对引物，对家蚕微孢子虫孢子及其近缘种孢子的DNA进行PCR检测。结果表明只有家蚕微孢子虫孢子DNA获得特异性扩增区带，大小为317bp，可以区别于Nosemasp.MG1和MG2、... 根据家蚕微孢子虫（Nosemebombycis,N．b）孢子的DNA序列，设计合成一对引物，对家蚕微孢子虫孢子及其近缘种孢子的DNA进行PCR检测。结果表明只有家蚕微孢子虫孢子DNA获得特异性扩增区带，大小为317bp，可以区别于Nosemasp.MG1和MG2、柞蚕微孢子虫、Vairimorphanecatrix及Pleistophoraanguillarum等。对N.b孢子DNA检测灵敏度达1ng水平。 展开更多
关键词 家蚕 微孢子虫 PCR检测 诊断 灵敏度
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家蚕微孢子虫抗体免疫荧光检测方法的建立及应用 被引量：16
5
作者 李艳红 谢俪 +3 位作者 潘国庆 吴正理 庞敏 周泽扬 《西南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2006年第6期990-993,共4页
通过制备家蚕微孢子虫总蛋白多克隆抗体,建立了多克隆抗体免疫荧光检测方法(IFA),并利用此方法特异性地检测出了体外培养细胞系(家蚕胚胎细胞系BmE-SWU1)中处于不同发育阶段的家蚕微孢子虫。结果在细胞爬片中可观察到呈较强的黄绿色荧... 通过制备家蚕微孢子虫总蛋白多克隆抗体,建立了多克隆抗体免疫荧光检测方法(IFA),并利用此方法特异性地检测出了体外培养细胞系(家蚕胚胎细胞系BmE-SWU1)中处于不同发育阶段的家蚕微孢子虫。结果在细胞爬片中可观察到呈较强的黄绿色荧光微孢子虫以及在BmE-SWU1细胞中的寄生分布情况,还可看到孢子极丝的弹出等现象。IFA检测方法鉴别诊断家蚕微粒子虫具有快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好、操作简便等特点,可以广泛应用于微孢子虫形态学、流行病学以及蛋白质的定位等研究领域。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 免疫荧光技术 IFA 多克隆抗体
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家蚕微粒子虫(Nosema bombycis)与其形态变异株的侵染性及孢子表面蛋白的比较研究 被引量：15
6
作者 黄少康 鲁兴萌 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1682-1687,共6页
用家蚕微粒子虫(Nosemabombycis,Nb)连续感染桑尺蠖(Hemerophilaatrilineata)24次后,获得孢子显著变粗短(P<0.01)的形态变异株(24Nbh)。Nb与24Nbh的侵染性及表面蛋白的比较研究表明,24Nbh感染2龄起蚕(Bombyxmori)的感染中浓度(IC50)... 用家蚕微粒子虫(Nosemabombycis,Nb)连续感染桑尺蠖(Hemerophilaatrilineata)24次后,获得孢子显著变粗短(P<0.01)的形态变异株(24Nbh)。Nb与24Nbh的侵染性及表面蛋白的比较研究表明,24Nbh感染2龄起蚕(Bombyxmori)的感染中浓度(IC50)为1.98×104spores/ml,而Nb为1.72×103spores/ml,即Nb连续感染桑尺蠖24次后对家蚕的侵染性下降了11.5倍。24Nbh回复感染家蚕一次后的孢子,对2龄起蚕的IC50与Nb对照相差6.9倍,即对家蚕的侵染性又快速恢复;与24Nbh相比,孢子长径及长短径比虽然显著回复(P<0.01),但仍小于Nb(P<0.05)。SDS-PAGE显示,Nb和24Nbh孢子表面蛋白的带型基本一致,均有4条主带(12kD、17kD、30kD、33kD),但在量上差异明显。2D-PAGE显示,当上样量均为120μg时,二者孢子表面蛋白都以中偏酸性蛋白(pI5～7)为主,但表面蛋白在量和种类上均存在明显差异,发现5个可疑的差异蛋白点,推测这种差异与微孢子虫的侵染性变异有关。 展开更多
关键词 家蚕微粒子虫 形态变异株 侵染性 孢子形态 孢子表面蛋白 双向电泳
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丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族的研究进展 被引量：18
7
作者 赵丽芳 陶美林 潘国庆 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期532-540,共9页
丝氨酸蛋白酶抑制剂（Serpin）是一类分子质量在40～50 kD的蛋白酶抑制剂。已知动物、植物、古细菌、细菌、病毒的基因组中都有serpin基因家族存在,Serpin被认为是参与免疫调节和其他生物学通路的重要因子。迄今为止,Serpin家族已发现了... 丝氨酸蛋白酶抑制剂（Serpin）是一类分子质量在40～50 kD的蛋白酶抑制剂。已知动物、植物、古细菌、细菌、病毒的基因组中都有serpin基因家族存在,Serpin被认为是参与免疫调节和其他生物学通路的重要因子。迄今为止,Serpin家族已发现了1 500余个成员,分为抑制型和非抑制型两大类。其中,抑制型Serpin采用不可逆的自杀性机制抑制靶蛋白酶,而非抑制型Serpin的作用方式多样。Serpin独特的构象变化使其易于发生突变而导致蛋白质的错误折叠、无活性聚合物形成等,且已证实一些Serpin家族成员因构象改变和聚合导致的疾病。家蚕（Bombyx mori）和家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）基因组中都存在多拷贝的serpin基因。本文综述Serpin在不同物种中的分布,Serpin的结构、功能、作用机制、与其相关的疾病等,以及家蚕和家蚕微孢子虫的Serpin的研究进展。 展开更多
关键词 丝氨酸蛋白酶抑制剂 结构 功能 作用机制 家蚕 家蚕微孢子虫
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家蚕微粒子病原虫(Nosema bombycis)小亚基核糖体RNA全基因的克隆及其二级结构的构建 被引量：15
8
作者 王见杨 黄可威 陆长德 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期290-295,共6页
在用PCR技术扩增、克隆、测序了家蚕微粒子病原虫Nosemabombycis (镇江株 )小亚基核糖体RNA基因核心序列(5′ 端起 12 0 0bp)的基础上 ,用SSP PCR技术克隆了核心序列 3′ 端下游序列 ,从而获得了家蚕微粒子病原虫小亚基核糖体RNA基因的... 在用PCR技术扩增、克隆、测序了家蚕微粒子病原虫Nosemabombycis (镇江株 )小亚基核糖体RNA基因核心序列(5′ 端起 12 0 0bp)的基础上 ,用SSP PCR技术克隆了核心序列 3′ 端下游序列 ,从而获得了家蚕微粒子病原虫小亚基核糖体RNA基因的全序列共 12 33bp。用RnaViz、Forcon、DCSE等生物软件构建了家蚕微粒子病原虫小亚基核糖体RNA的二级结构 ,与其它微孢子虫及真核生物小亚基核糖体RNA的二级结构相比 ,该二级结构缺乏螺旋 10、E10 1、 11、 18、E2 3 n和43。 展开更多
关键词 家蚕微粒子病原虫 SSP-PCR 小亚基核糖体RNA SSUrRNA 全基因 二级结构 螺旋
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干热空气处理防治家蚕微粒子病胚种传染的研究 被引量：13
9
作者 徐兴耀 邹宇晓 +5 位作者 卢铿明 孙京臣 黄星光 余爱群 郑祥明 方定坚 《蚕业科学》 CAS CSCD 1998年第3期149-155,共7页
采用干热空气对广东现行10个家蚕品种进行热处理，结果表明，蚕卵产后常温（25～27℃）保护12h，46℃热处理60min或47℃热处理40min，不影响实用孵化率，而对微粒子病胚种传染的防治效果达到93％～100％；蚕卵的溶菌酶和超氧化物歧化酶... 采用干热空气对广东现行10个家蚕品种进行热处理，结果表明，蚕卵产后常温（25～27℃）保护12h，46℃热处理60min或47℃热处理40min，不影响实用孵化率，而对微粒子病胚种传染的防治效果达到93％～100％；蚕卵的溶菌酶和超氧化物歧化酶（SOD），过氧化物酶（POD），过氧化氢酶（CAT）等三种保护酶系统活力均升高；电子显微镜观察到治愈病卵正常发育至蚁蚕，未经热处理的病卵产下132h后形成孢子，孵化出带病蚁蚕。 展开更多
关键词 干热空气处理 蚕卵 家蚕 微粒子病 胚种传染
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Calcofluor White M2R荧光染色法识别家蚕微孢子虫 被引量：14
10
作者 刘吉平 曾玲 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1185-1186,共2页
本研究探讨应用荧光染色试剂Calcofluor White M2R染色鉴别家蚕微孢子虫Nosema bombycis。结果表明:在荧光显微镜下可见家蚕微孢子虫孢子被染上强烈的青蓝色荧光,而寄主组织碎片、病毒、细菌等不被染色。该法是一种快速有效鉴别微孢子... 本研究探讨应用荧光染色试剂Calcofluor White M2R染色鉴别家蚕微孢子虫Nosema bombycis。结果表明:在荧光显微镜下可见家蚕微孢子虫孢子被染上强烈的青蓝色荧光,而寄主组织碎片、病毒、细菌等不被染色。该法是一种快速有效鉴别微孢子虫的方法。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 CALCOFLUOR WHITE M2R 荧光染色 识别技术
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家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)表面蛋白提取法研究 被引量：6
11
作者 崔红娟 万永继 +1 位作者 周泽扬 鲁成 《西南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 1999年第4期367-369,共3页
对微孢子虫表面蛋白的提取法研究表明，在微孢子虫的纯化中采用蔗糖法、甘油法及Ｐｅｒｃｏｌ法，结果Ｐｅｒｃｏｌ法是纯化微孢子虫的理想方法。微孢子虫表面蛋白采用高盐法、碱法及ＳＤＳ法提取，其蛋白量的ＯＤ值分别为０．０９４，... 对微孢子虫表面蛋白的提取法研究表明，在微孢子虫的纯化中采用蔗糖法、甘油法及Ｐｅｒｃｏｌ法，结果Ｐｅｒｃｏｌ法是纯化微孢子虫的理想方法。微孢子虫表面蛋白采用高盐法、碱法及ＳＤＳ法提取，其蛋白量的ＯＤ值分别为０．０９４，０．０２１和０．２６８，ＳＤＳ法提取量最多。 展开更多
关键词 家蚕 微孢子虫 表面蛋白提取法
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家蚕微粒子病防控技术研究的发展现状与趋势 被引量：13
12
作者 鲁兴萌 邵勇奇 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期945-952,共8页
家蚕微粒子病是养蚕业的毁灭性病害之一。对家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)进入饲养家蚕群体的路径、在家蚕个体内繁殖扩散和在饲养家蚕群体中的扩散规律3个方面的研究进展,以及与此相关的家蚕微粒子病防控技术的发展进行了概述。提出... 家蚕微粒子病是养蚕业的毁灭性病害之一。对家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)进入饲养家蚕群体的路径、在家蚕个体内繁殖扩散和在饲养家蚕群体中的扩散规律3个方面的研究进展,以及与此相关的家蚕微粒子病防控技术的发展进行了概述。提出在防止家蚕微孢子虫进入饲养家蚕群体方面,必须根据生产实际并掌握病害流行规律构建因地制宜的防控技术体系;在家蚕个体抗病能力提升方面,家蚕微孢子虫与家蚕的互作机制解明,新型育种技术和微生态技术的应用等非常值得期待;在控制微粒子病在家蚕群体中扩散方面,解明感染个体在蚕座内传播的基本规律,构建新型检疫体系与研发检测技术是迫切需要解决的关键问题。 展开更多
关键词 家蚕 家蚕微孢子虫 微粒子病 流行规律 防控技术
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家蚕微孢子虫原位杂交诊断技术研究 被引量：11
13
作者 韦亚东 张国政 陆长德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期64-68,共5页
根据家蚕微孢子虫rRNA基因高度保守的特点,设计合成了1对PCR引物,从家蚕微孢子虫基因组DNA上扩增出1个12kb片段,用同位素标记后作为检测家蚕微孢子虫的特异性探针。采用原位杂交的方法,对家蚕卵及感染家蚕微孢子虫4、6、10d的幼虫进行... 根据家蚕微孢子虫rRNA基因高度保守的特点,设计合成了1对PCR引物,从家蚕微孢子虫基因组DNA上扩增出1个12kb片段,用同位素标记后作为检测家蚕微孢子虫的特异性探针。采用原位杂交的方法,对家蚕卵及感染家蚕微孢子虫4、6、10d的幼虫进行原位杂交检测。实验结果表明,该方法可以从家蚕单粒卵内检测到296粒孢子,对感染家蚕微孢子虫4、6、10d的幼虫均有阳性杂交信号出现。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 家蚕卵 家蚕幼虫 原位杂交 诊断
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一种快速高效制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法 被引量：13
14
作者 蔡顺风 何欣怡 +4 位作者 何祥康 邱海洪 李光才 何永强 鲁兴萌 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1019-1024,共6页
家蚕微孢子虫孢子壁坚厚不易破碎,并对许多化学物质有很强的抵抗性,使用常规的核酸和蛋白抽提方法效果不够理想。研究建立玻璃珠破碎法快速制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法,采用琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析所得DNA的完整性... 家蚕微孢子虫孢子壁坚厚不易破碎,并对许多化学物质有很强的抵抗性,使用常规的核酸和蛋白抽提方法效果不够理想。研究建立玻璃珠破碎法快速制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法,采用琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析所得DNA的完整性和所得总蛋白的差异性,并对提取蛋白进行双向电泳试验。结果表明:使用玻璃珠破碎法对微孢子虫孢子壁的破碎率可达到90%以上,基因组DNA得率约为7.65 fg/粒,总蛋白得率约为788.3 fg/粒,均显著高于常用的发芽法和液氮冻融研磨法的得率。双向电泳结果显示玻璃珠破碎法能有效提取家蚕微孢子虫总蛋白,经考马斯亮蓝染色可检测到约350个蛋白点,蛋白信息丰富,可进一步用于质谱分析。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 核酸 蛋白 提取方法 珠磨式研磨器 双向电泳
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家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法及诊断试剂盒 被引量：9
15
作者 何永强 吴姗 +8 位作者 鲁兴萌 张弘 邱海洪 帅江冰 王素华 张晓峰 徐国群 李光才 董强 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期260-265,共6页
基于为蚕种生产与流通贸易提供快速、灵敏、准确检测家蚕微孢子虫的方法,以家蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA基因66 bp片段作为靶标,设计特异性引物和TaqMan探针,用构建的重组质粒制备标准品进行荧光定量PCR扩增,通过优化PCR反应体系,测... 基于为蚕种生产与流通贸易提供快速、灵敏、准确检测家蚕微孢子虫的方法,以家蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA基因66 bp片段作为靶标,设计特异性引物和TaqMan探针,用构建的重组质粒制备标准品进行荧光定量PCR扩增,通过优化PCR反应体系,测定线性范围,评价方法的特异性、灵敏度和重复性,成功构建了家蚕微孢子虫的荧光定量PCR检测方法,并研制出诊断试剂盒。该方法的检测线性范围为1×108～1×102拷贝/mL的7个线性梯度,检测家蚕微孢子虫的敏感度达1×102拷贝/mL,特异性高,3次重复性检测应用试验的批内变异系数为3.6%～7.2%,批间变异系数为5.2%～7.8%。结果表明,建立的家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法具有准确、灵敏、快速、特异性强的特点。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 荧光定量PCR 诊断试剂盒
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家蚕微粒子虫(Nosema bombycis)感染家蚕的病理学研究 被引量：8
16
作者 鲁兴萌 吴忠长 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CSCD 北大核心 2000年第5期547-550,共4页
Nosema bombycis感染家蚕后 ,家蚕中肠海藻糖酶活性显著下降 ,大量裂殖体的形成是其下降的重要原因 .血淋巴总糖和海藻糖等与能量代谢密切相关物质的含量也明显下降 .感染后血淋巴海藻糖酶活性略有上升 ,但对血糖总量无明显影响 .血淋... Nosema bombycis感染家蚕后 ,家蚕中肠海藻糖酶活性显著下降 ,大量裂殖体的形成是其下降的重要原因 .血淋巴总糖和海藻糖等与能量代谢密切相关物质的含量也明显下降 .感染后血淋巴海藻糖酶活性略有上升 ,但对血糖总量无明显影响 .血淋巴蛋白质含量的下降要滞后于与能量代谢有关的物质 ,其中贮存蛋白量的下降明显高于 30 展开更多
关键词 家蚕 微粒子虫 海藻糖酶 海藻糖 微粒子病
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不同DNA抽提方法对普通PCR和实时荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫的影响 被引量：9
17
作者 何永强 吴姗 +7 位作者 鲁兴萌 邱海洪 帅江冰 张晓峰 王素华 徐国群 李光才 董强 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1329-1334,共6页
为了优选快速、灵敏、特异的家蚕微孢子虫Nosema bombycis分子检测方法和DNA抽提方法,本文通过对家蚕微孢子虫TaqMan探针荧光定量PCR检测方法和SYBRGreen荧光定量PCR检测方法的建立以及反应体系优化,并与普通PCR方法进行比较;再采用4种... 为了优选快速、灵敏、特异的家蚕微孢子虫Nosema bombycis分子检测方法和DNA抽提方法,本文通过对家蚕微孢子虫TaqMan探针荧光定量PCR检测方法和SYBRGreen荧光定量PCR检测方法的建立以及反应体系优化,并与普通PCR方法进行比较;再采用4种不同DNA抽提方法分别对PCR和实时荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫悬浮液的效果评价。结果显示:不经过DNA抽提,直接将家蚕微孢子虫发芽液进行PCR反应的效果优于其他方法,检测灵敏度由高到低依次为直接法、酚/氯仿抽提法、动物组织DNA试剂盒抽提法和植物组织DNA试剂盒抽提法;TaqMan探针法检测家蚕微孢子虫发芽液的灵敏度和SYBRGreen法相近,达到微孢子102个/mL,两者均优于普通PCR方法。实验表明,直接采用发芽液结合荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫最为简便、快速、灵敏。该研究结果将有助于提高家蚕微粒子病监控技术和检疫能力,对家蚕微粒子病的检疫和防治具有积极意义。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 DNA抽提方法 PCR 荧光定量PCR 家蚕微粒子病 检疫
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家蚕微孢子(Nosema bombycis)对菜青虫(Pieris rapae)的感染与致病性研究 被引量：8
18
作者 孙胜 宗浩 杨小蓉 《四川师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2001年第1期69-71,共3页
利用家蚕微孢子不污染蔬菜与环境 ,不感染人、畜 ,甚至不会伤害害虫天敌的特点 ,首次用其作为生物农药进行试验 ,并对重要蔬菜害虫菜青虫做了感染与致病性研究 ,结果证明微孢子能大量寄生在菜青虫体内 ,并得到理想的防治效果 .
关键词 蚕微孢子 生物农药 感染 致病性 生物防治 菜青虫
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经营桑园和蚕室环境内家蚕微粒子病原消长和分布的研究 被引量：8
19
作者 穆莉 黄晨 +2 位作者 李东升 宋建民 张军 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期73-77,共5页
通过对桑园家蚕微粒子病原消长和分布的调查,发现经营桑园内蚕微粒子病原的发生量为:收蚁前<收蚁<三龄盛食<五龄盛食,五龄期的发生量最大。在桑树上的分布量为:桑叶<枝条<树干;在桑园土层中的分布量:表层>1cm>2cm&... 通过对桑园家蚕微粒子病原消长和分布的调查,发现经营桑园内蚕微粒子病原的发生量为:收蚁前<收蚁<三龄盛食<五龄盛食,五龄期的发生量最大。在桑树上的分布量为:桑叶<枝条<树干;在桑园土层中的分布量:表层>1cm>2cm>3cm。对蚕室环境的调查分析认为:蚕室内存在着微粒子病原严重污染的情况;病原孢子的发生量在蚕室内随蚕龄增加明显上升;凡与桑叶相关的场所病原孢子的发生量明显高于其它场所;种场外原蚕饲育区室病原孢子发生量高于场部。 展开更多
关键词 分布 桑园 蚕室 家蚕 消长动态 微粒子病 微粒子原虫孢子
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家蚕微孢子虫孢壁蛋白与其发芽的相关性 被引量：8
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作者 谭小辉 潘国庆 +4 位作者 吴正理 李艳红 张瑞芝 许金山 周泽扬 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1068-1074,共7页
为了研究孢壁蛋白与家蚕微孢子虫发芽(孢原质弹出)的相关性,我们采用碳酸钾诱导微孢子虫体外发芽结合密度梯度离心的方法(简称GDGC法),收集纯化发芽后的孢子空壳(简称孢壳),对发芽液、纯化的孢壳及成熟孢子的孢壁蛋白组分进行了分析。... 为了研究孢壁蛋白与家蚕微孢子虫发芽(孢原质弹出)的相关性,我们采用碳酸钾诱导微孢子虫体外发芽结合密度梯度离心的方法(简称GDGC法),收集纯化发芽后的孢子空壳(简称孢壳),对发芽液、纯化的孢壳及成熟孢子的孢壁蛋白组分进行了分析。结果表明:GDGC法可以获得高纯度孢壳,计算出其密度为1.130g/cm3;与发芽前成熟孢子提取的孢壁蛋白相比,空孢壳可以提取到主要孢壁蛋白SWP32、SWP30、SWP25,同时发现SWP32、SWP25丰度有所降低;结合碳酸钾发芽液的蛋白电泳分析,发现孢壳上丰度降低的SWP32在发芽液蛋白样品中存在,LC-MS/MS数据分析也发现SWP32、SWP30、SWP25在碳酸钾处理液中都有存在;而用碳酸钾溶液处理冷冻孢子时,未观察到发芽现象,电泳结果显示此时K2CO3溶液中只有SWP30条带,说明在碳酸钾溶液诱导的发芽过程中SWP32和SWP25从孢壳上脱落可能与发芽相关而不是被碱性的碳酸钾溶解下来的。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 孢壳 孢壁蛋白 发芽 宿主病原互作
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