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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NM1株全基因测序及致病性分析 被引量:14
1
作者 冷雪 李真光 +3 位作者 王凤雪 温永俊 夏铭崎 武华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1752-1757,1762,共7页
从内蒙古自治区暴发猪"高热病"的猪场分离出1株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly pathogenicporcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV),命名为NMl株。根据GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病... 从内蒙古自治区暴发猪"高热病"的猪场分离出1株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly pathogenicporcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV),命名为NMl株。根据GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全基因序列设计引物进行RT-PCR扩增和序列测定,结果表明HP-PRRSV NMl株基因组全长15 356 bp(包括PolyA尾)。分析结果显示该毒株与PRRSV美洲型标准株(VR-2332)和欧洲型标准株(LV)全基因核苷酸同源性分别为89.4%和61.9%,说明NMl属于美洲型毒株。与VR-2332相比,NMl株非结果蛋白(nsp2)第481位和第533~561位氨基酸存在缺失,该毒株属于PRRSV变异株。动物接种试验结果表明,该毒株对猪具有高致病性。 展开更多
关键词 HP—PRRSV 全基因组 非结构蛋白 缺失
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冠状病毒非结构蛋白的研究进展 被引量:9
2
作者 汪梦俊(综述) 申硕(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期100-111,共12页
近20年来,动物冠状病毒(coronavirus,CoV)变异并传播于人,引起严重的烈性传染病,在全球造成巨大的经济损失。因此,对CoV进行基础研究非常重要。CoV的非结构蛋白(non-structural protein,NSP)在病毒复制过程中发挥着重要作用,如抑制宿主... 近20年来,动物冠状病毒(coronavirus,CoV)变异并传播于人,引起严重的烈性传染病,在全球造成巨大的经济损失。因此,对CoV进行基础研究非常重要。CoV的非结构蛋白(non-structural protein,NSP)在病毒复制过程中发挥着重要作用,如抑制宿主的固有免疫、帮助病毒逃避宿主细胞感应、形成复制转录复合物(replication transcription complex,RTC)等。本文主要以严重急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARSCoV)和严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)为例,对存在于CoV中的病毒编码蛋白,特别是16种NSP的结构以及在病毒复制过程中的作用作一综述。 展开更多
关键词 冠状病毒 非结构蛋白 严重急性呼吸综合征冠状病毒2
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口蹄疫病毒非结构蛋白3A、3B和2C基因的表达及产物纯化与活性检测 被引量:7
3
作者 付元芳 卢曾军 +5 位作者 曹轶梅 郭建宏 张小丽 田美娜 刘在新 才学鹏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期790-795,共6页
【目的】口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3A、3B和2C基因的表达及产物纯化与活性检测。【方法】利用原核表达系统表达了FMDV NSP 3A、3B和富含B细胞抗原位点序列的2C蛋白。利用高浓度尿素裂解包涵体,采用稀释法和氧化型、还原型谷胱甘... 【目的】口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3A、3B和2C基因的表达及产物纯化与活性检测。【方法】利用原核表达系统表达了FMDV NSP 3A、3B和富含B细胞抗原位点序列的2C蛋白。利用高浓度尿素裂解包涵体,采用稀释法和氧化型、还原型谷胱甘肽系统相结合方法对2C蛋白进行复性。用金属鳌合亲合层析的方法对表达的FMDV NSP 3A、3B和2C进行纯化。采用ELISA方法对比检测了3种纯化蛋白在检测羊血清NSP抗体的效果。【结果】检测得知3A和3B为可溶性表达蛋白,2C以包涵体形式表达。通过Western-blot分析,表明纯化后蛋白能与FMDV感染动物血清发生特异性反应。纯化的3A、3B和复性后的2C融合蛋白与3ABC抗原的检测结果具有很高的符合性。【结论】该研究为建立鉴别FMDV自然感染动物和灭活疫苗免疫动物的酶联免疫电转移印迹技术(EITB)提供了所需的材料。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 酶联免疫电转移印迹技术(EITB)
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口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:6
4
作者 李永亮 田美娜 +4 位作者 卢曾军 杨苏珍 付元芳 曹轶梅 刘在新 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第2期296-300,共5页
用E.coli原核表达并纯化的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)非结构蛋白3B免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,间接ELISA筛选出分泌鼠IgG的杂交瘤细胞株,将该杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水,用间接EL... 用E.coli原核表达并纯化的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)非结构蛋白3B免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,间接ELISA筛选出分泌鼠IgG的杂交瘤细胞株,将该杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水,用间接ELISA法筛选获得6株能稳定分泌抗3B蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3E5、4B1、4D7、4E11、7B2、8B11。鉴定结果显示,4B1和4E11细胞分泌IgG1,其余4株细胞分泌IgG2b;纯化后6株腹水单抗的纯度达90%以上,对3B蛋白的ELISA滴度均可达到1∶100000以上;6株单抗均不与FMDV结构蛋白VP1和3D非结构蛋白发生反应;间接免疫荧光试验证明所制备的单抗能够识别3B蛋白;杂交瘤细胞株连续培养3个月以及冻存6个月后复苏,细胞生长良好,杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 3B蛋白 单克隆抗体
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口蹄疫病毒非结构蛋白3B基因的克隆表达及3B-EL ISA鉴别诊断方法的初步建立 被引量:3
5
作者 阮力 钱平 +3 位作者 何启盖 王贵平 刘正飞 陈焕春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期490-493,共4页
从口蹄疫病毒(foot-and-m ou th d isease v irus,FM DV)细胞培养物中提取总RNA,经一步法RT-PCR获得了长约230 bp的3B基因片段,将PCR产物连接到pM D-18T载体上并测序,用B amHⅠ与H indⅢ双酶切后,将3B基因融合到pGEX-KG载体上形成表达质... 从口蹄疫病毒(foot-and-m ou th d isease v irus,FM DV)细胞培养物中提取总RNA,经一步法RT-PCR获得了长约230 bp的3B基因片段,将PCR产物连接到pM D-18T载体上并测序,用B amHⅠ与H indⅢ双酶切后,将3B基因融合到pGEX-KG载体上形成表达质粒pGEX-KG-3B,转化到BL 21(DE 3)中在27℃诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE和蛋白质斑点EL ISA。结果表明3B基因主要以可溶形式高效表达,表达产物具有免疫原性。以纯化的表达产物为抗原建立了间接酶联免疫吸附试验(I-EL ISA)。方阵滴定其最佳包被浓度是6.1μg/孔,最佳血清稀释倍数为1∶80,通过测定36份FM DV阴性血清,确定了该方法的阳性判定标准。结果表明,该方法特异性强、重复性好;用3B-EL ISA方法与美国联合生物医学公司(U B I)生产的合成肽检测试剂盒U B I○RFM DV N S-EL ISA对比检测44份血清样品,符合率为93.1%。证明3B-EL ISA方法可用于口蹄疫的鉴别诊断。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 3B基因 表达 鉴别诊断 酶联免疫吸附试验
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柯萨奇病毒B组5型非结构蛋白抑制NF-κB信号通路的作用机制研究
6
作者 张佳玉 滕培英 +2 位作者 吕维民 杨帆 陈伟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1403-1410,共8页
目的 柯萨奇病毒B组5型(CVB5)是手足口病的重要病原体之一,可导致发热、皮疹或疱疹等临床症状,重症者出现神经系统疾病,甚至死亡。天然免疫应答是机体抗病毒入侵的第一道防线,其中核因子κB (NF-κB)是宿主天然免疫反应中的重要蛋白质,... 目的 柯萨奇病毒B组5型(CVB5)是手足口病的重要病原体之一,可导致发热、皮疹或疱疹等临床症状,重症者出现神经系统疾病,甚至死亡。天然免疫应答是机体抗病毒入侵的第一道防线,其中核因子κB (NF-κB)是宿主天然免疫反应中的重要蛋白质,然而关于CVB5感染后调控NF-κB介导信号通路的研究尚鲜有报道。方法 本研究通过检测启动子活性、促炎因子水平以及通路中关键蛋白表达等,阐明CVB5对NF-κB信号通路的调控作用机制。结果 CVB5感染可抑制促炎因子表达和p65的磷酸化。CVB5非结构蛋白(NSP)可抑制促炎因子表达以及重要蛋白p65和IκBα的磷酸化。经STRING11.1数据库预测表明,CVB5 3CD蛋白与宿主多聚胞嘧啶结合蛋白1 (PCBP1)具有相互作用,且PCBP1可促进IκBα和p65的磷酸化,抑制病毒复制。结论 CVB5 NSP可负调控NF-κB信号通路,且与3CD相互作用的PCBP1蛋白可通过调控NF-κB通路抑制CVB5复制。本研究探索病毒与宿主天然免疫应答的调控作用,从而为研制抗CVB5感染的药物提供作用靶点。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒B组5型(CVB5) 核因子κB(NF-κB) 非结构蛋白(nsp) 3CD 多聚胞嘧啶结合蛋白(PCBP1)
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猪繁殖与呼吸综合征病毒强毒株HUB2株全基因组序列分析 被引量:1
7
作者 王斌 赵铁柱 +7 位作者 张云霞 候丽丽 曹振 邓小雨 遇秀玲 孙明 陈西钊 田克恭 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1505-1510,共6页
从湖北省暴发猪“高热病”的猪场分离出1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),并命名为HUB2株。根据GenBank上已发表的PRRSV全基因序列设计引物进行RT—PCR扩增,获得PRRSV HUB2... 从湖北省暴发猪“高热病”的猪场分离出1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),并命名为HUB2株。根据GenBank上已发表的PRRSV全基因序列设计引物进行RT—PCR扩增,获得PRRSV HUB2株全基因组cDNA序列。测序结果表明PRRSV HUB2株基因组全长15320bp(不包括PolyA尾)。分析结果显示该毒株与PRRSV美洲型标准株(VR-2332)和欧洲型标准株(LV)全基因核苷酸同源性分别为89.6%和50.3%,说明HUB2属于美洲型毒株。与VR-2332相比,HUB2株非结构蛋白(Nsp2)存在2处不连续的缺失(共缺失30个氨基酸),其缺失位点位于推定氨基酸序列的第481位和532~560位。此次新出现的强毒株全基因组序列特性的揭示为科学防治猪高致病性蓝耳病奠定了理论基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 全基因组 非结构蛋白 缺失
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口蹄疫病毒非结构蛋白定量检测ELISA方法的建立 被引量:8
8
作者 李永亮 卢曾军 +3 位作者 杨苏珍 田美娜 谢宝霞 刘在新 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期70-73,共4页
目的:利用口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体建立液相阻断ELISA检测方法,进行定量检测口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白含量。方法:首先将工作浓度的3B单抗与待测病毒培养液过夜结合反应,然后取结合液转移至用3B蛋白包被好的酶标板上,用... 目的:利用口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体建立液相阻断ELISA检测方法,进行定量检测口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白含量。方法:首先将工作浓度的3B单抗与待测病毒培养液过夜结合反应,然后取结合液转移至用3B蛋白包被好的酶标板上,用标准3B蛋白做12个梯度做对照,同时设阴性对照和空白对照。通过回归分析算出口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白3B含量。结果:回归曲线呈典型的S形,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R=0.99,检测范围为5~1500ng/ml,半数抑制浓度(Ic50)为130ng/ml。结论:该方法能特异、敏感的检测到病毒培养液中的非结构蛋白3B成分,并进行定量。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 单克隆抗体 非结构蛋白 定量ELISA
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传染性支气管炎病毒非结构蛋白nsp5在真核细胞中的重组表达及鉴定 被引量:1
9
作者 耿阳 牟小东 +3 位作者 刘然 边葶苈 廖敏 周继勇 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第2期11-16,共6页
本文以嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)毒株的RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得IBV非结构蛋白5(non-structural protein,nsp5)基因片段后,构建了杆状病毒重组质粒IBVnsp5-Bacmid。IBVnsp5-Bacmid转染Sf9细胞... 本文以嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)毒株的RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得IBV非结构蛋白5(non-structural protein,nsp5)基因片段后,构建了杆状病毒重组质粒IBVnsp5-Bacmid。IBVnsp5-Bacmid转染Sf9细胞,获得nsp5重组杆状病毒,经(immunofluorescence assay,IFA)和Western blot检测到转染细胞表达的nsp5蛋白。进一步从感染的细胞中纯化重组蛋白,并用纯化的蛋白免疫小鼠制备了抗nsp5的多抗血清,该多抗血清可检测到IBV四川株SC021202感染的DF-1细胞中特异性的nsp5蛋白。结果表明IBV nsp5在Bac-to-Bac真核表达系统中获得了成功表达,而且具有良好的免疫原性和反应原性。 展开更多
关键词 传染性支气管炎病毒 非结构蛋白5 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统
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猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中非结构蛋白Nsp2表达分析 被引量:4
10
作者 温贵兰 张涵淞 +5 位作者 扈鸿霞 章先 张毅 王晓杜 李肖梁 方维焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1109-1116,共8页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2对病毒复制和致病具有重要作用,本研究旨在分析Nsp2在Marc-145细胞内的分布与表达。构建nsp2含PL2区域基因片段的原核表达载体,重组... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2对病毒复制和致病具有重要作用,本研究旨在分析Nsp2在Marc-145细胞内的分布与表达。构建nsp2含PL2区域基因片段的原核表达载体,重组蛋白纯化后作为免疫抗原,制备Nsp2特异性单克隆抗体。将携带nsp2基因的真核表达载体转染至Marc-145及HEK293细胞,或将PRRSV感染Marc-145细胞后不同时间点收集细胞样品。免疫荧光观察Nsp2在转染细胞中的亚细胞定位,免疫印迹分析Nsp2在真核细胞中的表达。筛选获得了1株稳定分泌特异性抗Nsp2的单克隆杂交瘤细胞株,能用于免疫荧光和印迹分析。重组真核表达质粒转染Marc-145与HEK293细胞后,Nsp2主要定位于细胞质中,免疫印迹检测到约为120与50ku的蛋白条带。PRRSV感染Marc-145细胞4h即可检测到Nsp2的表达,主要定位于细胞核周围,随着感染时间延长Nsp2分布范围逐渐扩大至整个细胞质。病毒感染8h,可检测到120ku左右的Nsp2蛋白条带,感染后12h可检测到70和50ku左右的Nsp2蛋白,且蛋白表达量随感染时间延长显著增多。PRRSV感染细胞中Nsp2的表达与剪切分析,为深入研究该蛋白在病毒复制和致病中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非结构蛋白nsp2 表达与剪切方式
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B组轮状病毒WH-1株NSP2基因序列和蛋白质结构分析 被引量:2
11
作者 李维琳 唐力 +5 位作者 王斌 唐少文 N.Kobayashi 李燕 段纪俊 杨继红 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期853-857,共5页
目的 克隆成人腹泻标本WH 1中B组轮状病毒组 (groupBrotavirus ,GBRV)非结构蛋白NSP2基因 ,分析其核苷酸序列 ,比较与其它GBRV基因同源性 ,预测其mRNA二级结构、蛋白质二级结构。方法 利用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,从成人... 目的 克隆成人腹泻标本WH 1中B组轮状病毒组 (groupBrotavirus ,GBRV)非结构蛋白NSP2基因 ,分析其核苷酸序列 ,比较与其它GBRV基因同源性 ,预测其mRNA二级结构、蛋白质二级结构。方法 利用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,从成人腹泻标本WH 1中扩增GBRVNSP2基因 ,克隆载体pUCmT ,对NSP2基因进行核苷酸序列分析。利用GeneBee软件比较与其它GBRV毒株NSP2基因同源性 ,Rnaviz2 .0软件绘制NSP2基因的二级结构 ,PredictProtein软件分析NSP2蛋白结构。结果 成人腹泻标本WH 1中GBRV非结构蛋白NSP2基因全长 10 0 7bp ,与ADRV核苷酸序列的同源性达 98% ,与印度加尔各达分离株CAL 1达 82 % ,与IDIR(鼠 )同源性仅为 79%。氨基酸序列与ADRV的同源性达 98.4 % ,与CAL 1达 97.7% ,而与IDIR仅为 89.0 %。其mRNA折叠形成多达 2 6个发卡环状结构。NSP2蛋白是由 30 1个氨基酸残基组成的多肽 ,含有 2个潜在的N 糖基化位点和多个磷酰化位点。结论 成人腹泻标本WH 1中GBRV非结构蛋白NSP2基因和氨基酸序列与人GBRV有较高的同源性 ,而与动物中GBRV同源性相对较低 ,其中与ADRV的同源性最高 ,推测GBRVWH 1株与ADRV具有相同起源。 展开更多
关键词 轮状病毒 WH-1株 nsp2 基因序列 蛋白质 结构分析
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人B组轮状病毒WH-1株NSP2基因片段的克隆与序列分析
12
作者 唐少文 叶临湘 +3 位作者 王斌 郑华英 李燕 杨继红 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期109-112,共4页
目的 了解人B组轮状病毒近 2 0年来基因变异情况 ,为轮状病毒疫苗的研制提供依据。方法 利用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术 ,扩增人B组轮状病毒WH - 1株NSP2基因 4 89bp的片断 ,并将其克隆到载体 pUCmT ,转化感受态细胞One-shot... 目的 了解人B组轮状病毒近 2 0年来基因变异情况 ,为轮状病毒疫苗的研制提供依据。方法 利用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术 ,扩增人B组轮状病毒WH - 1株NSP2基因 4 89bp的片断 ,并将其克隆到载体 pUCmT ,转化感受态细胞One-shotTop10F’ ,提取转化菌质粒经限制性内切酶PstI酶切分析 ,筛选出阳性菌提取质粒 ,对插入片段进行了测序和核苷酸序列分析。结果 利用GeneBee与其他B组轮状病毒株ADRV(人 )、CAL - 1(人 )及IDIR(鼠 )的NSP2基因进行同源性比较 ,发现毒株WH - 1与ADRV核苷酸序列的同源性达 99 8% ,与CAL - 1达 93 7% ,与IDIR(鼠 )的同源性为80 0 %。使用PredictProtein软件分析WH - 1NSP2的蛋白组成 ,发现其编码的 14 9个氨基酸组成的多肽中 ,含有 1个潜在的N -糖基化位点和多个磷酰化位点。从氨基酸序列的同源性看 ,WH - 1与ADRV的同源性达 99 3% ,与CAL - 1达 98 6 % ,而与IDIR为 86 2 %。结论 WH - 1与ADRV的起源相同 ,且B组轮状病毒NSP2基因保守性很高。对人B组轮状病毒NSP2基因序列分析将有助于B组轮状病毒的流行病学、基因进化以及轮状病毒疫苗的研制都将有重要意义。 展开更多
关键词 人B组轮状病毒 WH-1株nsp2 基因片段 克隆 序列分析
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猪繁殖与呼吸综合征病毒GS15株NSP2蛋白多位点缺失病毒的拯救与体外生长特性分析
13
作者 张兴民 张婧 +13 位作者 孙普 李娇阳 崔占鼎 李国秀 王健 李平花 袁红 李坤 曹轶梅 付元芳 李冬 赵志荀 曾巧英 卢曾军 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期2307-2322,共16页
【目的】本实验室前期在高致病性毒株PRRSV/GSWW/2015的感染性克隆上,拯救获得了非结构蛋白(non-structural protein 2,NSP2)第519-565位和第628-747位氨基酸双缺失的工程病毒(r GS15-?2)。本研究旨在在双缺失病毒的感染性克隆上,构建... 【目的】本实验室前期在高致病性毒株PRRSV/GSWW/2015的感染性克隆上,拯救获得了非结构蛋白(non-structural protein 2,NSP2)第519-565位和第628-747位氨基酸双缺失的工程病毒(r GS15-?2)。本研究旨在在双缺失病毒的感染性克隆上,构建拯救获得NSP2三个位点缺失的工程病毒。【方法】在前期双缺失病毒感染性克隆的基础上,利用融合PCR方法分别构建缺失NSP2第323-364位和第372-433位优势抗原表位的两个3个位点缺失的重组质粒。经脂质体介导,转染Marc-145细胞拯救病毒,通过电子显微镜观察、免疫荧光实验、测定病毒滴度、绘制生长曲线等方法对缺失病毒的生长特性进行分析。【结果】成功获得拯救病毒r GS15-?3-1和r GS15-?3-2。电子显微镜下可以观察到直径大小为50-80 nm的病毒粒子;免疫荧光实验检测表明,拯救病毒与亲本病毒GS15一致,都能检测到PRRSV N蛋白表达;缺失区域RT-PCR扩增鉴定,拯救病毒传至40代缺失标记稳定存在;r GS15-△3-1与r GS15-△3-2病毒滴度分别为2.00×10^(6.0)TCID_(50)/m L和2.25×10^(5.8)TCID50/m L,与亲本病毒相比病毒滴度差异显著(P<0.05);生长曲线分析表明拯救病毒复制水平低于亲本病毒达到最高滴度的培养时间比亲本病毒延迟24 h。【结论】本研究通过对PRRSV基因2型非结构蛋白NSP2多位点缺失病毒的体外生长特性分析,为研制新型PRRSV标记疫苗奠定了基础,也为猪繁殖与呼吸综合征的防控提供新的策略。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 感染性克隆 非结构蛋白2(nsp2) 缺失标记 生长特性
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Nsp2 and GP5-M of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Contribute to Targets for Neutralizing Antibodies 被引量:4
14
作者 Jia Su Lei Zhou +5 位作者 Bicheng He Xinhui Zhang Xinna Ge Jun Han Xin Guo Hanchun Yang 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2019年第6期631-640,共10页
Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV)is characterized by its genetic variation and limited cross protection among heterologous strains.Even though several viral structural proteins have been regar... Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV)is characterized by its genetic variation and limited cross protection among heterologous strains.Even though several viral structural proteins have been regarded as inducers of neutralizing antibodies(NAs)against PRRSV,the mechanism underlying limited cross-neutralization among heterologous strains is still controversial.In the present study,examinations of NA cross reaction between a highly pathogenic PRRSV(HP-PRRSV)strain,JXwn06,and a low pathogenic PRRSV(LP-PRRSV)strain,HB-1/3.9,were conducted with viral neutralization assays in MARC-145 cells.None of the JXwn06-hyperimmuned pigs’sera could neutralize HB-1/3.9 in vitro and vice versa.To address the genetic variation between these two viruses that are associated with limited crossneutralization,chimeric viruses with coding regions swapped between these two strains were constructed.Viral neutralization assays indicated that variations in nonstructural protein 2(nsp2)and structural proteins together contribute to weak cross-neutralization activity between JXwn06 and HB-1/3.9.Furthermore,we substituted the nsp2-,glycoprotein2(GP2)-,GP3-,and GP4-coding regions together,or nsp2-,GP5-,and membrane(M)protein-coding regions simultaneously between these two viruses to construct chimeric viruses to test cross-neutralization reactivity with hyperimmunized sera induced by their parental viruses.The results indicated that the swapped nsp2 and GP5-M viruses increased the neutralization reactivity with the donor strain antisera in MARC-145 cells.Taken together,these results show that variations in nsp2 and GP5-M correlate with the limited neutralization reactivity between the heterologous strains HP-PRRSV JXwn06 and LP-PRRSV HB-1/3.9. 展开更多
关键词 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) Neutralizing antibody(NA) non-structural protein 2(nsp2) structural proteins(SPs)
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与PRRSV nsp11互作的宿主细胞蛋白鉴定及生物信息学分析 被引量:2
15
作者 靳换 李逸 +4 位作者 姜楠 周磊 盖新娜 杨汉春 郭鑫 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2856-2870,共15页
【目的】研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)nsp11与宿主细胞蛋白之间的相互作用,对于揭示nsp11在病毒复制过程中发挥的功能至关重要。【方法】在病毒感染细胞的基础上,利用nsp11... 【目的】研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)nsp11与宿主细胞蛋白之间的相互作用,对于揭示nsp11在病毒复制过程中发挥的功能至关重要。【方法】在病毒感染细胞的基础上,利用nsp11的单克隆抗体,采用免疫沉淀结合串联质谱的方法,筛选与PRRSV nsp11相互作用的宿主细胞蛋白,并对所筛选出的宿主细胞蛋白进行了GO注释、COG注释和KEGG代谢通路注释;选取筛选出的宿主细胞蛋白IRAK1,利用免疫共沉淀技术和激光共聚焦技术鉴定其与nsp11之间的相互作用。【结果】与空白对照组相比,病毒感染组中出现3条差异带;经质谱分析共筛选得到了201个与nsp11相互作用的宿主细胞蛋白,分别与蛋白质代谢、细胞信号通路转导以及病原致病性等密切相关;在生物信息学分析的基础上,实验验证了nsp11确与宿主细胞蛋白IRAK1进行相互作用。【结论】鉴定出与PRRSV nsp11相互作用的宿主细胞蛋白,生物信息学分析显示它们在病毒的复制和致病过程中发挥重要作用。研究结果为探究nsp11的生物学功能指明了方向,也为研究宿主细胞蛋白与病毒蛋白间的相互作用及其调控病毒复制和致病性的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非结构蛋白11 宿主细胞蛋白 相互作用 生物信息学分析
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hPRRSV GD07株Nsp2基因真核表达载体的构建和表达
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作者 牛晓芸 王艳丽 +1 位作者 钟望 贺东生 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期22-25,共4页
为了深入研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2蛋白的免疫特性、结构与功能,试验根据GenBank公布的PRRSV CH-1a株Nsp2基因的核苷酸序列设计1对特异性引物,PCR扩增目的基因,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)... 为了深入研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2蛋白的免疫特性、结构与功能,试验根据GenBank公布的PRRSV CH-1a株Nsp2基因的核苷酸序列设计1对特异性引物,PCR扩增目的基因,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Nsp2,并对其进行经PCR、双酶切鉴定及DNA序列测定;将构建的重组质粒转染到Marc-145细胞中,用SDS-PAGE、Western-blot对表达产物进行鉴定。结果表明:RT-PCR扩增出的Nsp2基因大小与预期一致,经SDS-PAGE及Western-blot鉴定Nsp2蛋白在Marc-145细胞中成功表达。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS) 非结构蛋白-2(nsp2) 真核表达
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