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巢蛋白和神经元素3在人胚胎胰腺中的表达和分布 被引量:7
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作者 郑宗梅 陈东明 +5 位作者 李凌松 李健宁 沈丽 陆爱丽 王淑玲 鲍卫汉 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第23期1537-1540,共4页
目的探讨胰腺干细胞标志巢蛋白(nestin)和神经元素3(Ngn3)在人胚胎胰腺组织中的表达及其与内分泌细胞、导管细胞和外分泌细胞标志的共表达情况.方法以因病理因素行药物引产的12周~14周前人胚胎胰腺14例为材料,应用免疫荧光染色和逆转... 目的探讨胰腺干细胞标志巢蛋白(nestin)和神经元素3(Ngn3)在人胚胎胰腺组织中的表达及其与内分泌细胞、导管细胞和外分泌细胞标志的共表达情况.方法以因病理因素行药物引产的12周~14周前人胚胎胰腺14例为材料,应用免疫荧光染色和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测nestin和Ngn3的表达情况,免疫荧光染色检测胰腺内分泌标志胰岛素、胰高血糖素和外分泌标志CK-PAN和CK-19.结果 nestin和Ngn3在12~14周人胚胎胰腺组织均广泛表达.nestin和Ngn3阳性细胞中均无胰岛素及胰高血糖素表达;在胰岛中未见到nestin与Ngn3共表达,但在导管中可见共表达.RT-PCR 结果显示12~14周人胚胎胰腺中均有nestin和Ngn3的表达.结论Ngn3和nestin在人胚胎胰腺未分化细胞中表达,而具有分泌功能的内分泌细胞无表达. 展开更多
关键词 胰腺 胰岛 干细胞 巢蛋白 神经元素3
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Pdx-1、Ngn3联合MafA诱导干细胞分化为胰岛素分泌细胞移植治疗1型糖尿病大鼠的效果
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作者 闫淑芳 袁慧娟 《河南医学研究》 CAS 2024年第9期1553-1557,共5页
目的通过胰十二指肠同源盒1(Pdx-1)、神经元素3(Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)共转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs),移植治疗1型糖尿病大鼠并观察其疗效。方法Pdx-1、Ngn3和MafA共转染... 目的通过胰十二指肠同源盒1(Pdx-1)、神经元素3(Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)共转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs),移植治疗1型糖尿病大鼠并观察其疗效。方法Pdx-1、Ngn3和MafA共转染BMSCs诱导为IPCs,链脲佐菌素(STZ)制备45只1型糖尿病SD大鼠模型,BMSCs组(15只)肾被膜下移植2×10^(6) BMSCs,IPCs组(15只)大鼠肾被膜下移植2×10^(6) IPCs,sham-operation组(15只)大鼠肾被膜下注入等量生理盐水,另取15只健康SD大鼠肾被膜下注入等量生理盐水作为normal组。监测各组大鼠移植第0、7、14、21、28 d空腹血糖及体重;第21天对各组大鼠均行葡萄糖耐量试验;第28天取各组大鼠肾脏组织进行免疫组化。结果BMSCs和IPCs组大鼠血糖随时间下降,移植第21天两组大鼠空腹血糖低于移植第0天,且均低于同期sham-operation组(P<0.05),移植第28天IPCs组大鼠空腹血糖低于BMSCs组(P<0.05)。糖尿病大鼠中IPCs组和BMSCs组腹腔葡萄糖耐量实验曲线下面积小于sham-operation组,且IPCs组曲线下面积最小(P<0.05)。BMSCs组和IPCs组大鼠肾脏组织可见棕色荧光的胰岛素表达,且IPCs组胰岛素荧光光密度高于BMSCs组(P<0.05)。结论Pdx-1-Ngn3联合MafA诱导BMSCs形成的IPCs移植后在糖尿病大鼠体内可降低糖尿病大鼠的空腹血糖。 展开更多
关键词 胰十二指肠同源盒1 神经元素3 V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A 大鼠骨髓间充质干细胞 胰岛素分泌细胞 1型糖尿病
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Hes1在hUMSCs向胰岛前体细胞诱导过程中的表达改变 被引量:5
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作者 檀梦天 洪艳 +1 位作者 韩晶 蒋鑫 《世界华人消化杂志》 CAS 2016年第9期1357-1365,共9页
目的:探讨Notch信号节点分子Hes-1以及神经元素3(neurogenin 3,Ngn3)在人脐带间充质干细胞(human umbilicalcord mesenchyreal stem cells,h UMSCs)向胰岛前体细胞分化过程中的表达变化.方法:(1)分离培养并鉴定h UMSCs;(2)采用联合分阶... 目的:探讨Notch信号节点分子Hes-1以及神经元素3(neurogenin 3,Ngn3)在人脐带间充质干细胞(human umbilicalcord mesenchyreal stem cells,h UMSCs)向胰岛前体细胞分化过程中的表达变化.方法:(1)分离培养并鉴定h UMSCs;(2)采用联合分阶段诱导法,取P5代h UMSCs向胰岛前体细胞分化,倒置相差显微镜观察诱导前后细胞形态变化,免疫组织化学技术检测诱导后Insulin、Ngn3、胰高血糖素的表达;(3)诱导后7、14、21 d分别取细胞进行免疫组织化学法、Western blot检测Hes1以及Ngn3的表达变化.结果:h UMSCs经诱导后,细胞胞体呈现宽大形态,并出现胰岛前体细胞的集落,免疫组织化学技术检测诱导后细胞Ngn3、Insulin、胰高血糖素呈阳性表达;Western blot检测Ngn3在诱导过程中逐渐升高,诱导14 d(E2组)达到峰值,21 d(E3组)下降;Hes1的表达7-14 d与空白对照组(CG组)无明显差异,与21 d(E3组)下降.结论:在h UMSCs向胰岛前体细胞诱导过程中Notch信号通路节点分子Hes1表达改变可能参与诱导后细胞进一步分化的调节过程. 展开更多
关键词 人脐带间充质干细胞 胰岛前体细胞 HES1 神经元素3 NOTCH信号通路
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Pdx1与Ngn3协同诱导LO2细胞分化为胰腺β样细胞 被引量:3
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作者 郭敏 唐小龙 张洹 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期351-356,共6页
目的:胰腺十二指肠同源框蛋白1(Pdx1)与神经源素3(Ngn3)联合诱导肝实质细胞向胰腺β样细胞分化。方法:以人胚胎胰腺组织基因组的mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdx1与Ngn3基因。应用分子生物学技术,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1的多克... 目的:胰腺十二指肠同源框蛋白1(Pdx1)与神经源素3(Ngn3)联合诱导肝实质细胞向胰腺β样细胞分化。方法:以人胚胎胰腺组织基因组的mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdx1与Ngn3基因。应用分子生物学技术,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1的多克隆位点中,构建pEGFP-C1/Pdx1与pEGFP-C1/Ngn3真核表达质粒,并共转染L02细胞,用RT-PCR、免疫组化、间接荧光法检测目的基因及胰岛素相关基因葡萄糖转运体2(GLUT2)与胰岛素的表达情况。结果:目的基因克隆正确,RT-PCR、免疫组化、间接荧光证实转染后LO2细胞中有Pdx1、Ngn3和胰岛素及胰岛素相关基因GLUT2的表达。结论:Pdx1与Ngn3协同作用可诱导肝实质细胞向胰腺β样细胞分化。 展开更多
关键词 胰腺十二指肠同源框蛋白1 神经源素3 LO2细胞 转分化 胰腺β样细胞
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Pdx1激活Ngn3和Pax6诱导iPS细胞向胰岛β细胞分化的实验研究 被引量:4
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作者 占小波 肖亮 +3 位作者 韩冬 蒋经柱 赵杭芬 周汉新 《中国现代普通外科进展》 CAS 2014年第8期589-593,共5页
目的:探讨胰十二指肠同源盒基因-1(Pdx1)在诱导多潜能干细胞(i PSCs)分化为胰岛β细胞中的作用及其机制。方法:体外培养人皮肤成纤维细胞来源的i PSCs,将该i PSCs定向诱导分化20 d;RT-PCR检测胰岛素相关基因的表达情况;比较诱导前后几... 目的:探讨胰十二指肠同源盒基因-1(Pdx1)在诱导多潜能干细胞(i PSCs)分化为胰岛β细胞中的作用及其机制。方法:体外培养人皮肤成纤维细胞来源的i PSCs,将该i PSCs定向诱导分化20 d;RT-PCR检测胰岛素相关基因的表达情况;比较诱导前后几个重要转录因子的表达情况;Ch IP检测胰岛β细胞发育过程中最重要的转录因子Pdx1结合启动子区域的具体位点。结果:体外成功培养人皮肤来源的i PSCs;胰岛素相关基因Maf A、insulin、Glut2、Nkx6.1、Glucokinase和Tcf1均呈现不同程度的表达增强,并在第20 d时表达基本达到高峰;实验组转录因子Pdx1、Ngn3与Pax6表达较对照组明显增强;Pdx1通过结合Insulin-P、Ngn3-P、Pax6-P区域激活下游基因Ngn3和Pax6。结论:Pdx1激活下游基因Ngn3和Pax6可能是其促进i PSCs定向诱导分化为胰岛β细胞的机制之一。 展开更多
关键词 诱导多潜能干细胞 胰岛Β细胞 胰腺十二指肠同源盒基因1 神经元素3 成对盒基因6 胰岛素
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miR-106b靶向调控胰岛素分泌细胞诱导分化过程中Ngn3基因的表达 被引量:3
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作者 陈修思 王涛 +2 位作者 穆长征 王小梅 田鹤 《解放军医学院学报》 CAS 2014年第4期365-368,共4页
目的实现骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,bMSCs)向胰岛素分泌细胞(insulin-producing cells,IPCs)的诱导分化并验证分化过程中miR-106b靶向调控Ngn3基因表达。方法首先,分离培养bMSCs,应用活化素A(activin A)和B... 目的实现骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,bMSCs)向胰岛素分泌细胞(insulin-producing cells,IPCs)的诱导分化并验证分化过程中miR-106b靶向调控Ngn3基因表达。方法首先,分离培养bMSCs,应用活化素A(activin A)和B细胞素(beta cellulin)将其诱导分化为IPCs。然后,采用靶基因预测软件miRanda和TargetScan对miR-106b和Ngn3基因的靶向匹配关系进行预测并通过双荧光素酶报告基因系统鉴定。qRT-PCR检测诱导分化过程中miR-106b和Ngn3的表达。结果诱导分化后的细胞双硫腙染色呈猩红色,免疫荧光化学显示有胰岛素表达。生物信息学方法预测发现miR-106b和Ngn3基因二者匹配良好,通过双荧光素酶报告基因系统检测发现miR-106b能结合到Ngn3 mRNA的3'UTR并有效抑制其表达。qRT-PCR检测结果表明,miR-106b的表达水平与Ngn3表达呈负相关。结论 miR-106b能调控IPCs诱导分化过程中Ngn3的表达。 展开更多
关键词 微小RNA 神经元素3 胰岛素分泌细胞 小鼠
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胰升糖素样肽1和胃泌素协同促进胰岛素分泌细胞分化 被引量:3
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作者 闫淑芳 庞妩燕 袁慧娟 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期145-149,共5页
目的胰升糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)、胃泌素协同促进大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)转分化的胰岛素分泌细胞(insulin-producing cells,IPCs)分化。方法(1)制备IPCs模型:胰十二指肠同... 目的胰升糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)、胃泌素协同促进大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)转分化的胰岛素分泌细胞(insulin-producing cells,IPCs)分化。方法(1)制备IPCs模型:胰十二指肠同源盒1(pancreatic duodenal homeobox 1,Pdx-1)、神经元素3(neurogenin 3,Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(V-type tendon fibrosarcoma oncogene homolog A,MafA)共转染BMSCs转分化为IPCs;(2)IPCs分为4组:A组,未诱导组;B组,GLP-1诱导组;C组,胃泌素诱导组;D组,GLP-1联合胃泌素诱导组,高糖培养基培养7 d,RT-PCR检测各组胰岛素2(insulin2)、葡萄糖激酶(GK)、巢蛋白(nestin)、胰升糖素(glucagon)及Pdx-1表达水平,ELISA检测各组胰岛素分泌情况。结果在高糖条件下培养7 d,各组IPCs形态出现明显变化,逐渐聚集并形成散在细胞团块,联合诱导组形成大型细胞团块,双硫棕染色呈红棕色;各组在诱导第0、3、5、7、9天胰岛素分泌水平逐渐提高,且联合诱导组升高最为明显(P<0.05);与A组相比,B、D组Insulin2和GK表达明显上调,D组glucagon表达下调,C组Pdx-1表达下调,glucagon表达上调,(P<0.05);与B组相比,C组insulin2表达下调,glucagon表达水平明显上调,D组insulin2和GK表达水平明显上调,glucagon表达水平下调(P<0.05);与C组相比,D组Pdx-1、insulin2和GK表达水平明显上调,glucagon表达水平下调(P<0.05)。结论GLP-1和胃泌素通过上调insulin2和GK,下调glucagon协同促进IPCs向胰岛β细胞分化。 展开更多
关键词 胰升糖素样肽1 胃泌素 胰十二指肠同源盒1 神经元素3 V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A 胰岛素分泌细胞
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Pdx-1、Ngn3联合MafA诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛样细胞 被引量:3
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作者 闫淑芳 袁慧娟 +5 位作者 刘宏霞 杜少斐 吴敬 张会峰 马跃华 赵志刚 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期891-896,共6页
目的探讨胰十二指肠同源盒1(pancreaticandduodenalhomeobox1,Pdx.1)、神经元素3(neurogenin3,Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(v—marmuscu—loaponeuroticfibrosarcomaoncogenehomologA,MafA)诱导大鼠骨髓间充... 目的探讨胰十二指肠同源盒1(pancreaticandduodenalhomeobox1,Pdx.1)、神经元素3(neurogenin3,Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(v—marmuscu—loaponeuroticfibrosarcomaoncogenehomologA,MafA)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSC)分化为胰岛样细胞(insulin.producingcells,IPC)的机制。方法通过贴壁培养法纯化BMSC,分为4组(A:未感染组;B:MafA感染组;C:Pdx-1-Nsn3感染组;D:联合感染组),高糖条件下培养7d,荧光显微镜观察其感染效率。Western印迹检测各组细胞Pdx.1、NgIl3和MafA表达情况,RT-PCR检测各组胰岛素2、葡萄糖激酶、巢蛋白、胰升糖素及Pdx.1表达水平,ELISA法检测各组胰岛素分泌情况。结果分离的细胞表面高表达CD44、CDl05,而低表达CD34。诱导过程中各感染组BMSC逐渐聚集并形成细胞团块,双硫棕染色呈红棕色;各组在感染第0、3、5、7、9天胰岛素分泌水平逐渐提高,且联合感染组升高最为明显(P〈0.05);与A组相比,B、C和D组Pdx-1、胰岛素2、胰升糖素及葡萄糖激酶基因表达明显上调(P〈O.05);与B组相比,C组Pdx-1表达上调,D组Pdx-1和胰岛素2表达上调,胰升糖素表达下调(P〈0.05);与C组相比,D组胰升糖素表达上调(P〈0.05)。结论Pdx-1、Ngn3联合MafA共同感染BMSC可分化为IPC。 展开更多
关键词 胰十二指肠同源盒1 神经元素3 V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A 大鼠骨髓间 充质干细胞 胰岛样细胞
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NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体的构建与表达 被引量:2
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作者 唐小龙 江振友 +2 位作者 庞雪云 蓝锴 欧财文 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期346-351,共6页
目的:运用pADxsi系统构建带人NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体。方法:采用基因克隆技术,将目的基因NGN3从pEGFP-N1-NGN3质粒上切下连到pShuttle-GFP-CMV上,替换GFP,得到pShuttle-CMV-NGN3;再将PAX4从pEGFP-N1-PAX4质粒上切下连到系统pSh... 目的:运用pADxsi系统构建带人NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体。方法:采用基因克隆技术,将目的基因NGN3从pEGFP-N1-NGN3质粒上切下连到pShuttle-GFP-CMV上,替换GFP,得到pShuttle-CMV-NGN3;再将PAX4从pEGFP-N1-PAX4质粒上切下连到系统pShuttle-CMV-NGN3上,得到pShuttle-CMV-NGN3/CMV-PAX4穿梭质粒;最后将CMV-NGN3/CMV-PAX4从pShuttle-CMV-NGN3/CMV-PAX4转移到ADxsi骨架载体上,得到pADxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4病毒质粒,然后在293细胞中进行包装与扩增活性病毒,并进行病毒滴度测定。体外感染人脐带间充质干细胞。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)与免疫印迹(Western blotting)检测目的基因在细胞内的表达情况,免疫细胞化学与间接荧光法检测目的分子在细胞内的定位。结果:酶切鉴定和PCR证明重组人NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体构建正确;RT-PCR与Western blotting结果显示目的基因在细胞持续稳定表达;间接荧光与免疫化学表明重组腺病毒可高效感染人脐带间充质干细胞,且目的基因特异性地定位于细胞核内。结论:应用重组技术成功构建人NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体,且在间充质干细胞内持续而稳定表达。 展开更多
关键词 腺病毒 神经元素3(NGN3) 成对盒基因4(PAX4) 间充质干细胞(MCS)
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神经元素3过表达对诱导人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的影响 被引量:2
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作者 孔吟皓 徐龙飞 +2 位作者 王琪 韩晶 洪艳 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期398-404,共7页
目的探讨神经元素3(Ngn3)的过表达能否促进人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)向胰岛素分泌细胞(IPCs)的诱导分化。方法分离培养HUCMSCs,流式细胞术鉴定其表面分子表达,成脂细胞、成骨细胞诱导鉴定其多向分化潜能;分阶段诱导HUCMSCs分化为IPCs... 目的探讨神经元素3(Ngn3)的过表达能否促进人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)向胰岛素分泌细胞(IPCs)的诱导分化。方法分离培养HUCMSCs,流式细胞术鉴定其表面分子表达,成脂细胞、成骨细胞诱导鉴定其多向分化潜能;分阶段诱导HUCMSCs分化为IPCs,该过程包括低糖诱导和高糖诱导两阶段共21 d;实验分为两组,对照组仅进行分阶段诱导,实验组在分阶段诱导第6天感染载有目的基因Ngn3的慢病毒过表达载体,感染完成后继续诱导;电子显微镜观察诱导前、后细胞结构变化;两组细胞诱导完成后收集mRNA和蛋白质,通过Realtime PCR和Western blotting法比较诱导后两组细胞的胰岛素和肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(Mafa)表达情况;收集诱导中后期培养基上清液,ELISA测定C肽含量。结果成功分离HUCMSCs,细胞阳性表达CD105、CD90,阴性表达CD34、CD45,具有成脂、成骨分化能力;通过分阶段诱导将HUCMSCs向IPCs诱导,细胞阳性表达Mafa和胰岛素;实验组在诱导过程中成功过表达Ngn3;电子显微镜观察显示,实验组诱导细胞结构更为成熟;实验组IPCs胰岛素和Mafa的表达量明显高于对照组;诱导过程中实验组细胞分泌的C肽量高于对照组。结论慢病毒介导的Ngn3过表达提高了HUCMSCs向IPCs的诱导分化效率。 展开更多
关键词 神经元素3 脐带间充质干细胞 胰岛素分泌细胞 基因过表达 实时定量聚合酶链反应
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人脂肪间充质干细胞向胰岛β样细胞分化的体外研究 被引量:2
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作者 相俐至 荣灿 +2 位作者 童国玉 徐兴全 胡云 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期46-50,共5页
目的探讨体外诱导人脂肪间充质干细胞(hADSCs)向胰岛β样细胞分化的方法。方法手术获取人脂肪组织,分离培养hADSCs,流式细胞术鉴定其分子表面标志。应用含胰十二指肠同源框因子1(PDX1)与神经元素3(Ngn3)的慢病毒转染hADSCs,并... 目的探讨体外诱导人脂肪间充质干细胞(hADSCs)向胰岛β样细胞分化的方法。方法手术获取人脂肪组织,分离培养hADSCs,流式细胞术鉴定其分子表面标志。应用含胰十二指肠同源框因子1(PDX1)与神经元素3(Ngn3)的慢病毒转染hADSCs,并联合乙基咔唑(NECA)及多种细胞因子进行诱导分化后,采用实时定量聚合酶链反应(Real—time PCR)检测胰岛素分泌细胞特异基因肌腱膜的纤维肉瘤肿瘤基因同系物A(Mafa)、胰岛素1(Insulin1)、葡萄糖转运体2(Glut2)及叉头蛋白转录因子01(Fox01)的表达,采用免疫荧光法鉴定诱导后细胞内胰岛素及C肽的表达,采用化学发光法检测诱导后细胞的胰岛素分泌水平。结果hADSCs、CD105、CD44、CD29及CD90表达阳性,CD45及CD34表达阴性。Real-time PCR结果显示诱导后的细胞高表达PDX1、Ngn3、Insulin1及Glut2;免疫荧光结果显示诱导后的细胞胞质内表达胰岛素及C肽;化学发光法测得诱导后的细胞胰岛素分泌量为(156.23±30.97)mIU/L,高糖刺激后分泌量为(836.50±231.22)mlU/L。结论人脂肪间充质干细胞在体外可以通过转染含PDX1和Ngn3慢病毒并联合NECA及多种细胞因子的方法诱导分化为胰岛B样细胞。 展开更多
关键词 胰岛β样细胞 脂肪间充质干细胞 胰十二指肠同源框因子-1 神经元素3
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消渴方对2型糖尿病模型大鼠胰腺组织Ca^(2+)/CaN/NFAT信号通路的影响 被引量:2
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作者 陈学麟 杨巧玉 胡剑卓 《中医杂志》 CSCD 北大核心 2021年第17期1526-1532,共7页
目的探讨消渴方治疗2型糖尿病的可能作用机制。方法采用高脂高糖饲料联合2%链脲佐菌素-柠檬酸缓冲液35mg/kg腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型,造模成功40只大鼠随机分为模型组、抑制剂组、消渴方组、消渴方+抑制剂组,每组10只,另取10只SD... 目的探讨消渴方治疗2型糖尿病的可能作用机制。方法采用高脂高糖饲料联合2%链脲佐菌素-柠檬酸缓冲液35mg/kg腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型,造模成功40只大鼠随机分为模型组、抑制剂组、消渴方组、消渴方+抑制剂组,每组10只,另取10只SD大鼠作为正常组。造模后消渴方组大鼠予消渴方17g/(kg·d)灌胃,抑制剂组予VIVIT 0.5mg/(kg·d)尾静脉注射,消渴方+抑制剂组予消渴方水煎剂灌胃联合VIVIT尾静脉注射,模型组及正常组给予1.9 ml生理盐水灌胃。5周后检测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血清蛋白(GSP)水平及胰腺组织钙离子(Ca^(2+))、钙调磷酸酶(CaN)水平;HE染色观察胰岛病理形态学改变;检测胰腺组织胰岛素及活化T细胞核因子c1(NFATc1)蛋白表达水平及神经元素3(Ngn3)和胰腺十二指肠同源盒因子1(PDX-1)mRNA表达。结果与正常组比较,模型组FBG、GSP水平升高,FINS、CaN、Ca^(2+)、NFATc1、Ngn3 mRNA、PDX-1 mRNA表达均降低(P<0.01),HE染色显示胰岛内细胞数量明显减少,形状不规则,间质增多,部分胰岛组织结构甚至完全萎缩、崩解。与模型组比较,消渴方组各指标均明显改善(P<0.01),HE染色显示胰岛数量明显增多,胰岛呈完整团块状分布,且胰岛内细胞质较丰富。与消渴方组比较,消渴方+抑制剂组FBG、GSP升高,FINS、CaN、Ca^(2+)、NFATc1、Ngn3 mRNA、PDX-1 mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。结论消渴方可调节血糖、保护胰岛β细胞,其作用机制可能与调节胰腺组织Ca^(2+)/CaN/NFAT信号通路,提高β细胞再生相关转录因子表达有关。 展开更多
关键词 2型糖尿病 消渴方 胰岛β细胞 T细胞活化因子抑制剂 钙调磷酸酶 神经元素3 十二指肠同源盒因子1
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神经元素3基因沉默对脐源性胰岛前体细胞MafA表达的影响 被引量:1
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作者 吴邢 檀梦天 +1 位作者 覃晓莉 洪艳 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期758-764,共7页
目的探讨神经元素3(Ngn3)基因在人脐带间充质干细胞(h UMSCs)向胰岛前体细胞分化过程中的作用以及对肌腱膜纤维肿瘤基因同系物A(MafA)表达的影响。方法组织块法分离培养并鉴定h UMSCs;采用分阶段联合诱导法诱导h UMSCs向胰岛前体细胞分... 目的探讨神经元素3(Ngn3)基因在人脐带间充质干细胞(h UMSCs)向胰岛前体细胞分化过程中的作用以及对肌腱膜纤维肿瘤基因同系物A(MafA)表达的影响。方法组织块法分离培养并鉴定h UMSCs;采用分阶段联合诱导法诱导h UMSCs向胰岛前体细胞分化,将其分为正常诱导组、基因沉默组、空病毒转染组,后两组在诱导第7天分别转染干扰病毒和空病毒,嘌呤霉素筛选后检测感染效果;21 d诱导结束后倒置相差显微镜和电子显微镜观察细胞形态变化;免疫细胞化学技术检测诱导后各组细胞胰岛素、胰高血糖素、Ngn3的表达;Real-time PCR、Western blotting检测Ngn3以及MafA的表达变化。结果成功分离培养h UMSCs;分阶段联合诱导使正常诱导组和空病毒转染组细胞分化为胰岛前体细胞,Ngn3、胰岛素、胰高血糖素呈阳性表达,电子显微镜观察可见分泌颗粒;成功沉默了基因沉默组细胞的Ngn3基因,且该组细胞Ngn3、胰岛素、胰高血糖素呈阴性表达;Ngn3、MafA在基因沉默组明显下降(P<0.05)。结论Ngn3基因沉默阻滞了h UMSCs向胰岛前体细胞的分化,并抑制了MafA的表达。 展开更多
关键词 人脐带间充质干细胞 胰岛前体细胞 神经元素3 基因沉默 肌腱膜纤维肿瘤基因同系物A 实时定量聚合酶链反应
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沉默NEUROG3基因表达增强胃癌细胞恶性表型的实验研究 被引量:1
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作者 蒋丹丹 陈茜 +2 位作者 赵海霖 顾海涛 张剑波 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1008-1014,共7页
目的检测神经元素3(neurogenin3,NEUROG3)在胃癌临床标本和细胞系中的表达,探讨其对胃癌细胞恶性表型的影响。方法采用免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)检测NEUROG3在肠化生胃黏膜和胃癌组织中的表达。利用Real-time PCR和We... 目的检测神经元素3(neurogenin3,NEUROG3)在胃癌临床标本和细胞系中的表达,探讨其对胃癌细胞恶性表型的影响。方法采用免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)检测NEUROG3在肠化生胃黏膜和胃癌组织中的表达。利用Real-time PCR和Western blot检测NEUROG3在不同分化程度胃癌细胞系和人胃黏膜上皮细胞系GES-1中的表达。使用慢病毒转染沉默NEUROG3基因表达,Real-time PCR检测胃癌细胞分化抑制蛋白(inhibitor of DNA binding or differentiation,Id-1)的表达,利用EdU细胞增殖实验和细胞克隆形成实验检测胃癌细胞的增殖,划痕实验和Transwell实验检测胃癌细胞迁移和侵袭。结果NEUROG3在低分化胃癌组织中表达较低,而在癌旁组织、肠化生胃黏膜组织和中高分化胃癌组织中表达评分较高,评分差异有统计学意义(P<0.001)。NEUROG3的表达差异与患者性别、年龄和肿瘤大小无统计学意义(P>0.05),而与肿瘤分化程度(P<0.001,r=0.412)呈正相关,与淋巴结转移(P<0.05,r=-0.180)和TNM分期呈负相关(P<0.001,r=-0.431)。GES-1和高分化胃癌细胞系MKN-28中的NEUROG3表达明显高于中低分化胃癌细胞系SGC-7901、MKN-45和BGC-823(P<0.001)。MKN-28细胞沉默NEUROG3表达后,细胞分化程度降低,Id-1表达明显增高(P<0.001),细胞增殖、迁移和侵袭能力(P<0.01)明显增强。结论沉默NEUROG3基因表达,可抑制胃癌细胞的分化,促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 神经元素3 细胞分化 胃癌 恶性表型
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高糖在联合转录因子诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛样细胞中的作用
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作者 闫淑芳 杜少斐 +2 位作者 吴敬 刘宏霞 袁慧娟 《国际内分泌代谢杂志》 2017年第2期77-81,F0003,F0004,共7页
目的 探讨高糖在胰-十二指肠同源盒因子-1(Pdx-1)、神经元素3(Ngn 3)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分化为胰岛样细胞(IPC)中的作用.方法 构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/(zeo)-Ngn 3、pcDNA3.1(+)-Pdx-1,贴壁培养法分离... 目的 探讨高糖在胰-十二指肠同源盒因子-1(Pdx-1)、神经元素3(Ngn 3)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分化为胰岛样细胞(IPC)中的作用.方法 构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/(zeo)-Ngn 3、pcDNA3.1(+)-Pdx-1,贴壁培养法分离Sprauge-Dawley雄性大鼠BMSC,流式细胞术鉴定BMSC,脂质体介导转染BMSC,并筛选稳定转染细胞培养于高糖(4.5 g/L) DMEM培养液,RT-PCR检测Ngn 3、巢蛋白、Pdx-1 mRNA的表达,ELISA法检测胰岛素浓度.结果 分离的细胞表面高表达CD44、CD105,而低表达CD34,符合BMSC特征.诱导过程中BMSC形态上趋向IPC分化,高糖培养组较低糖培养组细胞上清胰岛素浓度明显提高(F=25.77,P<0.05),高糖质粒培养组Pdx-1、Ngn 3及巢蛋白mRNA表达水平明显高于高糖培养组及质粒转染组(F=35.12、12.76、8.34,P均<0.05).结论 高糖对Pdx-1联合Ngn 3诱导BMSC向IPC分化具有促进作用. 展开更多
关键词 神经元素3 胰-十二指肠同源盒因子-1 高糖 骨髓间充质干细胞 胰岛样细胞
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悬滴和悬浮法相结合培养胰腺祖细胞
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作者 马凤霞 陈芳 +3 位作者 池颖 杨少光 卢士红 韩忠朝 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期270-274,共5页
目的建立悬滴和悬浮法相结合培养胰腺祖细胞的方法,研究该方法能否诱导胰腺祖细胞在体外分化为成熟的内分泌细胞。方法体外分离小鼠12.5d胚胎胰腺,消化成单个细胞,悬滴法培养24h后细胞形成球体,将细胞球转移到下层为培养基漂浮的膜上培... 目的建立悬滴和悬浮法相结合培养胰腺祖细胞的方法,研究该方法能否诱导胰腺祖细胞在体外分化为成熟的内分泌细胞。方法体外分离小鼠12.5d胚胎胰腺,消化成单个细胞,悬滴法培养24h后细胞形成球体,将细胞球转移到下层为培养基漂浮的膜上培养6d。培养过程中,采用免疫组织化学方法检测胰腺十二指肠同源盒基因1(PDX-1)和神经源素3(Ngn3)的表达及胰岛素、胰高血糖素、羧肽酶(CPA)的表达,酶联免疫吸附法检测葡萄糖刺激后细胞球分泌胰岛素的变化,定量PCR检测培养过程中胰腺标志表达的变化。结果细胞球培养1d后,有大量PDX-1表达,而且这些PDX-1阳性细胞增殖。细胞球培养3d后,Ngn3大量表达,Ngn3阳性细胞不增殖。培养7d后,分化的胰腺细胞表达成熟内、外分泌细胞的标志,而且胰腺标志的表达与体内表达模式一致。高糖能刺激细胞球分泌胰岛素。结论悬滴和悬浮法相结合能诱导胰腺祖细胞在体外分化为成熟的内分泌细胞。 展开更多
关键词 胰岛素 腺十二指肠同源盒基因1 神经源素3 胰腺祖细胞
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巢蛋白及神经元素3在胚胎早期发育中的表达与分布
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作者 杨开明 王东 张静华 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期342-344,共3页
目的:比较巢蛋白(Nestin)与神经元素3(Ngn3)在胚胎早期发育各组织中的表达与分布。方法:采用免疫组织化学SABC法对30例5-10周人胚胎发育中各器官组织中Nestin与Ngn3的表达与分布进行定位研究。结果:5周时,肝造血干细胞Nestin、N... 目的:比较巢蛋白(Nestin)与神经元素3(Ngn3)在胚胎早期发育各组织中的表达与分布。方法:采用免疫组织化学SABC法对30例5-10周人胚胎发育中各器官组织中Nestin与Ngn3的表达与分布进行定位研究。结果:5周时,肝造血干细胞Nestin、Ngn3阳性,胰芽原始导管上皮细胞、皮肤上皮细胞也呈Ngn3阳性反应;8周后,胚胎皮肤、椎间盘及肾上腺组织Nestin阳性,而Ngn3表达为阴性。结论:Nestin、Ngn3在胚胎早期发育不同组织细胞的表达有不同的时空性,确切意义及机制有待进一步研究。 展开更多
关键词 巢蛋白 神经元素3 胚胎早期发育 表达 分布
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Gastrointestinal neuroendocrine peptides/amines in inflammatory bowel disease 被引量:11
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作者 Magdy El-Salhy Tefera Solomon +2 位作者 Trygve Hausken Odd Helge Gilja Jan Gunnar Hatlebakk 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2017年第28期5068-5085,共18页
Inflammatory bowel disease(IBD) is a chronic recurrent condition whose etiology is unknown,and it includes ulcerative colitis,Crohn's disease,and microscopic colitis. These three diseases differ in clinical manife... Inflammatory bowel disease(IBD) is a chronic recurrent condition whose etiology is unknown,and it includes ulcerative colitis,Crohn's disease,and microscopic colitis. These three diseases differ in clinical manifestations,courses,and prognoses. IBD reduces the patients' quality of life and is an economic burden to both the patients and society. Interactions between the gastrointestinal(GI) neuroendocrine peptides/amines(NEPA) and the immune system are believed to play an important role in the pathophysiology of IBD. Moreover,the interaction between GI NEPA and intestinal microbiota appears to play also a pivotal role in the pathophysiology of IBD. This review summarizes the available data on GI NEPA in IBD,and speculates on their possible role in the pathophysiology and the potential use of this information when developing treatments. GI NEPA serotonin,the neuropeptide Y family,and substance P are proinflammatory,while the chromogranin/secretogranin family,vasoactive intestinal peptide,somatostatin,and ghrelin are antiinflammatory. Several innate and adaptive immune cells express these NEPA and/or have receptors to them. The GI NEPA are affected in patients with IBD and in animal models of human IBD. The GI NEPA are potentially useful for the diagnosis and follow-up of the activity of IBD,and are candidate targets for treatments of this disease. 展开更多
关键词 Enteric nervous system Enteroendocrine cells Immune cells Inflammatory bowel disease MUSASHI-1 neurogenin 3 Stem cells
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番石榴叶总黄酮促进糖尿病模型小鼠胰岛再生机制 被引量:9
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作者 李杰 李东华 +5 位作者 涂正伟 傅予 刘洪斌 张一 宗春辉 于强 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期116-121,共6页
目的:观察番石榴叶总黄酮对链脲佐菌素(streptozocin,STZ)糖尿病模型小鼠胰腺组织中胰腺十二指肠同源盒因子-1(pancreas-duodenumhomeobox-1,PDX-1),神经元素3(neurogenin 3,Ngn3),NK6转录因子相关基因座1(NK6 transcription factor rel... 目的:观察番石榴叶总黄酮对链脲佐菌素(streptozocin,STZ)糖尿病模型小鼠胰腺组织中胰腺十二指肠同源盒因子-1(pancreas-duodenumhomeobox-1,PDX-1),神经元素3(neurogenin 3,Ngn3),NK6转录因子相关基因座1(NK6 transcription factor related locus 1,Nkx6.1)表达的影响,探讨其促进胰岛β细胞再生的机制。方法:将STZ糖尿病模型小鼠随机分为模型组和治疗组,治疗组包括番石榴叶总黄酮低、高剂量组及二甲双胍组,另设10只正常小鼠为正常组。番石榴叶总黄酮低、高剂量组按小鼠体重分别以番石榴叶总黄酮0.198,0.396 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,二甲双胍组以二甲双胍0.087 5 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,正常组和模型组以等体积蒸馏水灌胃,2周后检测其空腹血糖、体重,苏木素-伊红(HE)染色观察胰岛病理形态学改变,实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测胰腺组织内胚胎期胰岛β细胞发育相关转录因子PDX-1,Ngn3,Nkx6.1 mRNA相对表达量。结果:与正常组比较,STZ糖尿病模型小鼠胰腺组织中PDX-1,Ngn3,Nkx6.1表达量明显下降(P<0.01);与模型组比较,番石榴叶总黄酮治疗组PDX-1,Ngn3,Nkx6.1 mRNA表达升高(P<0.05)。结论:番石榴叶总黄酮能上调糖尿病小鼠胰腺组织中PDX-1,Ngn3,Nkx6.1的表达;胰岛β细胞再生机制可能与PDX-1,Ngn3,Nkx6.1 mRNA表达的上调有关。 展开更多
关键词 番石榴叶总黄酮 糖尿病 胰岛再生 胰腺十二指肠同源盒因子-1 神经元素3 NK6转录因子相关基因座1
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谷胱甘肽修饰的金纳米粒子探针比色法检测神经元素3 被引量:6
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作者 柯庆青 裴继影 +2 位作者 杨帆 张汉昌 杨秀荣 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第7期955-961,共7页
采用柠檬酸钠还原法合成了粒径为13 nm 的金纳米粒子,并在其表面修饰上谷胱甘肽( GSH-AuNPs)。在一定的盐浓度范围内,谷胱甘肽能保护金纳米粒子免受盐诱导的聚集。当神经元素3( Neuroge-nin3,ngn3)多肽片段存在时,在一定的盐浓度下,... 采用柠檬酸钠还原法合成了粒径为13 nm 的金纳米粒子,并在其表面修饰上谷胱甘肽( GSH-AuNPs)。在一定的盐浓度范围内,谷胱甘肽能保护金纳米粒子免受盐诱导的聚集。当神经元素3( Neuroge-nin3,ngn3)多肽片段存在时,在一定的盐浓度下,ngn3片段能够诱导GSH-AuNPs发生聚集,使金纳米粒子溶液由红色变成蓝色。以谷胱甘肽修饰的金纳米粒子为探针,建立了快速检测ngn3片段的比色方法。通过优化得到的最适实验条件为:ngn3与 GSH-AuNPs 的平衡反应时间10 min,缓冲液pH=6.0, NaCl 浓度100 mmol/L。在优化条件下,检测ngn3的线性范围为20~300μg/L,检出限( LOD)为8μg/L。结果表明,本方法具有良好的选择性,可用于实际样品的检测。 展开更多
关键词 神经元素3 多肽 金纳米粒子 比色
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