黄芪甲苷对短暂性前脑缺血模型大鼠海马神经再生的影响 被引量：32

1

作者 王畅 张艳军 +4 位作者 冯英 庄朋伟 王静 刘慧 王林林 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期754-758,共5页

目的观察黄芪甲苷对短暂性前脑缺血大鼠海马神经干细胞增殖、分化的影响,探讨其促进神经发生和分化的作用。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,黄芪甲苷高、低剂量组(4、2 mg/kg),每组10只。短暂性前脑缺血后黄芪甲苷ip给药,模型... 目的观察黄芪甲苷对短暂性前脑缺血大鼠海马神经干细胞增殖、分化的影响,探讨其促进神经发生和分化的作用。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,黄芪甲苷高、低剂量组(4、2 mg/kg),每组10只。短暂性前脑缺血后黄芪甲苷ip给药,模型组和假手术组ip给予生理盐水,1次/d,ip BrdU 10 mg/kg,2次/d,标记增殖细胞。各组分别于第7、14天后取脑组织,冰冻切片,行BrdU免疫荧光染色显示海马区域增殖的细胞,BrdU与MAP-2,GFAP等免疫荧光双标染色显示海马区域干细胞来源的成熟神经细胞和星形胶质细胞;取海马组织,RealTime RT-PCR法检测基本成纤维细胞生长因子(bFGF)、神经生长因子(NGF)、脑源神经营养因子(BDNF)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。结果黄芪甲苷高、低剂量,作用7 d后,可增加海马DG和CA1区BrdU阳性细胞数量和海马CA1区BrdU/GFAP阳性细胞数量;作用14 d后,可显著增加海马DG区BrdU/MAP-2双阳性细胞数量。其中,黄芪甲苷低剂量(2 mg/kg)作用7 d后可显著上调NGF mRNA表达。结论黄芪甲苷能够促进海马区神经干细胞增殖、分化,很可能与其上调NGF mRNA表达有关。 展开更多

关键词 黄苠甲苷 神经再生 神经干细胞 增殖 分化

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黄芪甲苷上调HIF-1α表达促进氧糖剥夺/再灌注胚鼠海马神经干细胞增殖和分化的作用 被引量：15

2

作者 张艳丽 万凤 +1 位作者 田沫 司银楚 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期3358-3362,共5页

目的:探讨黄芪甲苷对离体氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)胎鼠海马神经干细胞(NSCs)自我更新、增殖和分化的作用及其机制。方法:分离、培养、鉴定胎鼠海马NSCs。建立NSCs体外OGD/R模型,通过Western blot和免疫荧光双标方法验证黄芪甲苷对NSCs的... 目的:探讨黄芪甲苷对离体氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)胎鼠海马神经干细胞(NSCs)自我更新、增殖和分化的作用及其机制。方法:分离、培养、鉴定胎鼠海马NSCs。建立NSCs体外OGD/R模型,通过Western blot和免疫荧光双标方法验证黄芪甲苷对NSCs的增殖与分化的作用及可能的机制。结果:筛选出黄芪甲苷促进NSCs增殖分化的最佳浓度为0.25μg/mL,作用的最佳时间点为24h。黄芪甲苷可促进海马NSCs中BrdU的表达,BrdU、Nestin、Tuj-1、Vimentin阳性细胞数的表达增多。与正常组比较,氧糖剥夺显著增加了NSCs中HIF-1α蛋白含量(P<0.01);与模型组比较,黄芪甲苷组HIF-1α蛋白含量显著增多(P<0.01)。结论:黄芪甲苷上调HIF-1α信号通路,增强氧糖剥夺NSCs增殖与分化的能力,而促进脑缺血损伤的结构和功能的修复。 展开更多

关键词 氧糖剥夺/再灌注 黄芪甲苷 神经干细胞 增殖 分化 缺氧诱导因子-1Α

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神经干细胞迁移的研究进展 被引量：13

3

作者 刘靖 曲静 +1 位作者 徐晓静 张焕相 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期201-211,共11页

神经干细胞的定向迁移是胚胎神经系统发育的先决条件,同时在成体组织的许多生理、病理过程中也起着重要作用;研究发现,许多神经退行性疾病都与神经干细胞迁移的缺陷相关。近年来,越来越多的证据表明,无论是内源性的还是移植的神经干细... 神经干细胞的定向迁移是胚胎神经系统发育的先决条件,同时在成体组织的许多生理、病理过程中也起着重要作用;研究发现,许多神经退行性疾病都与神经干细胞迁移的缺陷相关。近年来,越来越多的证据表明,无论是内源性的还是移植的神经干细胞都有向大脑损伤部位迁移的特性,显示出神经干细胞用于神经再生及损伤修复治疗的潜能。该文着重在神经干细胞的基本特性以及神经干细胞定向迁移的细胞与分子机制研究等方面进行了综述。 展开更多

关键词 神经干细胞 定向迁移 脑室下区

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神经干细胞有丝分裂过程中nestin表达变化 被引量：13

4

作者 史冬梅 周畅 谢佐平 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期119-123,共5页

在哺乳动物胚胎早期发育过程中 ,中枢神经系统的神经干细胞 ( NSCs)首先通过对称分裂进行自身复制 ,然后通过不对称分裂产生神经元和胶质细胞的前体细胞 ,这些细胞都表达一种中间纤维蛋白 ( IF) -神经巢蛋白 ( nestin)。nestin的表达是... 在哺乳动物胚胎早期发育过程中 ,中枢神经系统的神经干细胞 ( NSCs)首先通过对称分裂进行自身复制 ,然后通过不对称分裂产生神经元和胶质细胞的前体细胞 ,这些细胞都表达一种中间纤维蛋白 ( IF) -神经巢蛋白 ( nestin)。nestin的表达是暂时的 ,一旦前体细胞分化成终末分化细胞如神经元或胶质细胞 ,nestin则被其他中间纤维蛋白所取代。不同中间纤维在体内不同时期表达的原因和执行的功能还不清楚 ,但可以肯定的是 nestin与 NSCs的多潜能性有关。本实验通过缩时显微成像和免疫组织化学技术观察了 NSCs在对称分裂过程中 nestin的表达变化 ,发现 nestin在前、中、后、末四期的荧光强度表达有不同程度的变化 ,分裂前期与分裂间期相同 ,前中期荧光强度有明显增强 ,到中期荧光强度反而有些下降 ,到末期荧光强度达到最大值 ,胞质分裂后荧光强度逐渐下降。这种波动表达现象将有助于揭示 展开更多

关键词 神经干细胞 有丝分裂 NESTIN 表达 中间纤维 大鼠

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龟板提取物调控Otx2基因促进神经干细胞向多巴胺神经元分化的研究 被引量：13

5

作者 周笑莉 刘忆思 +1 位作者 陈东风 李彩霞 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期171-176,共6页

目的探讨龟板提取物是否能够通过调控同源盒基因Otx2(orthodenticle homeobox 2)来促进神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺神经元的分化。方法分离培养孕14 d左右的SD胎鼠NSCs 7 d,随机设空白对照组和30μg·m L^(-1)的龟... 目的探讨龟板提取物是否能够通过调控同源盒基因Otx2(orthodenticle homeobox 2)来促进神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺神经元的分化。方法分离培养孕14 d左右的SD胎鼠NSCs 7 d,随机设空白对照组和30μg·m L^(-1)的龟板有效成分PTE(2B)组、龟板提取物十八酸乙酯(S6)组、4-甾酮(S9)组,诱导分化5~7 d,用免疫荧光法检测多巴胺酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)阳性神经元和Otx2的表达,用实时荧光定量PCR法检测Otx2的m RNA表达,蛋白质印迹法(Western Blot)检测Otx2的蛋白表达。结果与空白对照组比较,2B组、S6组和S9组Otx2和TH的荧光表达均升高(P<0.05),S6组Otx2的m RNA表达升高(P<0.05),S6组和S9组Otx2的蛋白表达升高(P<0.05)。结论龟板提取物可能通过调控Otx2基因促进神经干细胞向多巴胺神经元分化。 展开更多

关键词 龟板提取物 Otx2 神经干细胞 多巴胺酪氨酸羟化酶

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人参皂苷Rg1促进神经干细胞增殖的实验研究 被引量：12

6

作者 郑友生 廖联明 +2 位作者 江敏 寇世缨 李燕 《世界中西医结合杂志》 2011年第12期1021-1024,共4页

目的探讨人参皂苷Rg1是否对神经干细胞的增殖具有促进作用。方法从大鼠脑组织分离神经细胞,在培养液中加入10μg.L-1表皮生长因子(EGF)和10μg.L-1碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),使形成富含神经干细胞的神经球。在培养液中加入人参皂苷R... 目的探讨人参皂苷Rg1是否对神经干细胞的增殖具有促进作用。方法从大鼠脑组织分离神经细胞,在培养液中加入10μg.L-1表皮生长因子(EGF)和10μg.L-1碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),使形成富含神经干细胞的神经球。在培养液中加入人参皂苷Rg1,观察其对神经干细胞增殖的促进作用。采用大鼠缺血性中风后遗症模型,观察人参皂苷Rg1对大鼠神经功能恢复的影响。结果在表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子培养条件下可出现明显的神经球。在2μmol.L-1浓度下人参皂苷Rg1可以增加神经细胞中神经球的数量,表明人参皂苷Rg1可以促进神经干细胞的生存和增殖。2μmol.L-1浓度下人参皂苷Rg1可以显著促进神经球的形成。缺血性中风大鼠给与人参皂苷Rg1后其横木行走评分增加,在第14天实验中,中剂量和高剂量组行走评分分别为(4.09±0.49)分和(4.74±0.62)分,而模型对照组为(3.41±0.67)分,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。免疫组化显示对大脑组织的细胞增殖也有促进作用。结论人参皂苷Rg1对神经干细胞增殖的促进作用,表明其在神经系统损伤性疾病的康复中有潜在的治疗价值,值得进一步研究。 展开更多

关键词 人参皂苷RG1 神经干细胞 神经球

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骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经样细胞的机制 被引量：5

7

作者 褚倩 王亚平 +1 位作者 傅新巧 张苏明 《中国康复理论与实践》 CSCD 2004年第1期13-14,共2页

目的探索骨髓间充质干细胞 (MSCs)在体外诱导分化为神经样细胞的机制。方法分离培养大鼠MSCs ,用二甲基亚砜 (DSMO)和丁羟茴醚 (BHA)诱导分化 ,检测诱导分化前、预诱导 2 4h、诱导分化后 6h、2 4h和 48h神经细胞和神经干细胞的特异性标... 目的探索骨髓间充质干细胞 (MSCs)在体外诱导分化为神经样细胞的机制。方法分离培养大鼠MSCs ,用二甲基亚砜 (DSMO)和丁羟茴醚 (BHA)诱导分化 ,检测诱导分化前、预诱导 2 4h、诱导分化后 6h、2 4h和 48h神经细胞和神经干细胞的特异性标记蛋白的表达。结果诱导分化后 ,大部分MSCs变成双极、多极和锥形 ,并相互交织成网络结构 ,巢蛋白 (Nestin)在诱导分化前不表达 ,在诱导分化后 6h达到最高 ,2 4h和 48h逐渐降低。神经元特异性核蛋白 (NeuN )在诱导分化前不表达 ,在诱导分化后 6h出现表达 ,2 4h和 48h表达增强。结论MSCs经体外诱导先分化为神经干细胞 ,然后分化为神经元样细胞。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 分化 神经元样细胞 神经干细胞

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毛蕊花糖苷通过激活PI3K/AKT通路促进成年小鼠神经干细胞增殖 被引量：9

8

作者 林慧敏 段伟兵 +4 位作者 邵瑞 韩立峰 朱彦 高秀梅 王彧 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期836-840,共5页

目的观察毛蕊花糖苷对原代成年小鼠神经干细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法从成年C57BL/6小鼠脑室下区分离、培养原代神经干细胞,并通过神经干细胞标志蛋白Nestin免疫荧光染色,对分离得到的神经干细胞进行鉴定。不同浓度毛... 目的观察毛蕊花糖苷对原代成年小鼠神经干细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法从成年C57BL/6小鼠脑室下区分离、培养原代神经干细胞,并通过神经干细胞标志蛋白Nestin免疫荧光染色,对分离得到的神经干细胞进行鉴定。不同浓度毛蕊花糖苷(5、10、20、40μmol·L^(-1))在无有丝分裂原(EGF/bF GF)的条件下处理细胞24 h。采用CCK-8法检测细胞活力,免疫组化法计数BrdU阳性细胞率,检测细胞增殖能力,Western blot方法检测给药后神经干细胞Akt的磷酸化水平。结果毛蕊花糖苷在无有丝分裂原存在的条件下,能明显促进神经干细胞的增殖,并明显提高p-Akt的表达。而在加入PI3K/AKT信号通路阻断剂LY294002后,这一作用被明显抑制。结论毛蕊花糖苷对体外培养的神经干细胞具有明显促增殖作用,该作用机制可能与化合物激活Akt通路有关。 展开更多

关键词 毛蕊花糖苷 成年小鼠 神经干细胞 脑室下区 增殖 AKT通路

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创伤性脑损伤激活miR-124-3p/Notch通路促进大鼠神经干细胞增殖和分化 被引量：9

9

作者 白威 张欣 +5 位作者 苏鑫洪 孔垂广 杨永祥 叶玉勤 樊泽 贺晓生 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期49-55,共7页

目的观察创伤性脑损伤(TBI)大鼠伤侧海马区微小RNA-124-3p(miR-124-3p)的表达变化,探讨miR-124-3p对大鼠TBI后神经再生的影响。方法将健康雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组、 TBI组、 miR-124-3p激动剂(miR-124-3p agomir)组与miR-12... 目的观察创伤性脑损伤(TBI)大鼠伤侧海马区微小RNA-124-3p(miR-124-3p)的表达变化,探讨miR-124-3p对大鼠TBI后神经再生的影响。方法将健康雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组、 TBI组、 miR-124-3p激动剂(miR-124-3p agomir)组与miR-124-3p抑制剂(miR-124-3p antagomir)组,后3组大鼠应用控制性皮层撞击(CCI)法建立TBI模型。创伤后, miR-124-3p agomir组与miR-124-3p antagomir组通过由创伤对侧侧脑室分别注射miR-124-3p agomir或miR-124-3p antagomir各1 nmoL,假手术组和TBI组注入等量溶剂。造模后12 h、 1 d、 3 d、 7 d,实时定量PCR检测大鼠伤侧海马区组织miR-124-3p的表达, Western blot法检测Delta样分子1(DLL1)的表达水平,免疫荧光组织化学染色检测海马组织5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、神经元核抗原(NeuN)、神经上皮干细胞蛋白(nestin)的表达。生物信息学软件预测并通过荧光素酶报告实验验证miR-124-3p与DLL1之间的靶向结合作用。结果与假手术组相比, TBI组大鼠海马区miR-124-3p和DLL1的表达均显著升高;与TBI组比较, miR-124-3p agomir组miR-124-3p的表达量明显升高、 DLL1表达量明显减少, miR-124-3p antagomir组miR-124-3p表达量明显降低, DLL1表达量则明显升高。创伤后7 d, TBI大鼠海马组织BrdU^+NeuN^+细胞与BrdU^+nestin^+细胞数量明显多于假手术组, miR-124-3p agomir处理增加BrdU^+NeuN^+细胞与BrdU^+nestin^+细胞数量, miR-124-3p antagomir处理则减少BrdU^+NeuN^+细胞与BrdU^+nestin^+细胞数量。生物信息学分析证实DLL1为miR-124-3p的靶基因。结论创伤区miR-124-3p的高表达可靶向抑制DLL1蛋白表达,促进神经干细胞增殖和分化。 展开更多

关键词 创伤性脑损伤(TBI) 微小RNA-124-3p(miR-124-3p) 神经干细胞 NOTCH信号通路

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神经干细胞移植治疗神经系统疾病的研究进展 被引量：1

10

作者 仇静茹 林志 +5 位作者 霍桂桃 李双星 杨艳伟 张頔 耿兴超 屈哲 《药物评价研究》 CAS 2023年第12期2724-2728,共5页

神经系统疾病作为最大的医学挑战之一,目前尚无针对性的治疗方法。神经干细胞(NSCs)具有分化潜能,可通过组织修复替代、神经营养、免疫调节、抗炎、抗凋亡等达到治疗神经系统疾病的作用,为神经系统疾病的治疗提供了新思路。近年来针对N... 神经系统疾病作为最大的医学挑战之一,目前尚无针对性的治疗方法。神经干细胞(NSCs)具有分化潜能,可通过组织修复替代、神经营养、免疫调节、抗炎、抗凋亡等达到治疗神经系统疾病的作用,为神经系统疾病的治疗提供了新思路。近年来针对NSCs的研究愈发深入,NSCs移植成为神经系统疾病治疗方法的研究热点,大量临床前及临床研究数据证明NSCs移植治疗用于神经系统疾病是安全可行的。目前已有多个NSCs细胞系进入临床试验阶段,有望用于脑卒中、脑出血、脊髓损伤、帕金森病、阿尔茨海默病等常见神经系统疾病的治疗。总结了NSCs移植治疗中枢神经系统疾病的研究进展,以期为NSCs移植治疗神经系统疾病研究提供理论支持。 展开更多

关键词 神经干细胞(nscs) 神经干细胞移植 神经系统损伤性疾病 神经系统退行性疾病 脑肿瘤

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补阳还五汤通过调节自噬促进OGD/R损伤大鼠NSCs增殖、分化能力 被引量：6

11

作者 秦彬喻 彭冬 +3 位作者 王逸雪 章时杰 王奇 关莉 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期9-18,共10页

目的:探讨补阳还五汤(BDT)对神经干细胞(NSCs)糖氧剥夺/复氧(OGD/R)损伤后增殖、分化的影响。方法:从SD大鼠海马区域分离培养NSCs,将细胞随机分为5组,分别为常氧组,模型组,BDT组,雷帕霉素(Rapa)组和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)联合BDT... 目的:探讨补阳还五汤(BDT)对神经干细胞(NSCs)糖氧剥夺/复氧(OGD/R)损伤后增殖、分化的影响。方法:从SD大鼠海马区域分离培养NSCs,将细胞随机分为5组,分别为常氧组,模型组,BDT组,雷帕霉素(Rapa)组和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)联合BDT组,常氧组和模型组使用20%空白血清,BDT组使用20%含药血清,Rapa剂量1μmol·L^(-1),3-MA剂量5 mmol·L^(-1)。除常氧组外,其余各组进行糖氧剥夺/复氧。光镜观察细胞形态的变化;免疫荧光检测巢蛋白(nestin)表达,鉴定NSCs;细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测NSCs的存活率;5-乙炔基-2-脱氧尿嘧啶苷(EdU)标记法检测NSCs增殖;Ad-mCherry-GFP-LC3B检测自噬活性;蛋白免疫印记法检测BDT对自噬相关蛋白的影响;免疫荧光法检测脑源性神经营养因子(BDNF),β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结果:与常氧组比较,糖氧剥夺/复氧会显著降低大鼠NSCs的细胞活力,与模型组比较,20%BDT含药血清明显改善了大鼠NSCs存活(P<0.01)。BDT可以诱导OGD后NSCs自噬小体的产生,与常氧组比较,微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ),Beclin-1表达升高(P<0.05,P<0.01),p62变化不明显;与模型组比较,BDT组LC3Ⅱ,Beclin-1明显上调(P<0.05,P<0.01),p62表达下调(P<0.01);Rapa组起到类似效果(P<0.05,P<0.01),3-MA组抑制了自噬的活性(P<0.01)。Ad-mCherry-GFP-LC3B结果显示,与常氧组比较,模型组荧光强度显著增加(P<0.01);与模型组比较,20%BDT含药血清和Rapa组显著增加自噬荧光强度(P<0.01),3-MA抑制了自噬活性(P<0.01)。免疫荧光结果显示,与常氧组比较,EdU,β-tubulinⅢ,GFAP和BDNF阳性细胞数显著减少(P<0.01);与模型组比较,20%BDT含药血清和Rapa起到了类似的保护和促进作用(P<0.05,P<0.01);3-MA组可以部分阻断BDT的神经保护和分化能力(P<0.05)。结论:BDT预保护可以通过上调自噬减少糖氧剥夺造成的大鼠NSCs损伤,促进增殖、分化。 展开更多

关键词 补阳还五汤 糖氧剥夺/复氧(OGD/R) 神经干细胞(nscs) 自噬 神经再生

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神经球内神经干/祖细胞活性与代谢研究 被引量：3

12

作者 刘天庆 戴明舒 +3 位作者 葛丹 李香琴 马学虎 崔占峰 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第6期811-818,共8页

为定量研究静态无血清悬浮培养的神经球内神经干/祖细胞的活性及代谢情况,取孕14 d的小鼠胚胎,从海马脑组织分离出神经干/祖细胞,培养过程中跟踪测定神经球直径的分布变化,利用CCK-8法测定活细胞数,同时对培养上清进行葡萄糖、乳酸、谷... 为定量研究静态无血清悬浮培养的神经球内神经干/祖细胞的活性及代谢情况,取孕14 d的小鼠胚胎,从海马脑组织分离出神经干/祖细胞,培养过程中跟踪测定神经球直径的分布变化,利用CCK-8法测定活细胞数,同时对培养上清进行葡萄糖、乳酸、谷氨酰胺和氨的定量测定,并对相关细胞代谢动力学参数进行计算和分析.结果表明在培养过程中,神经球内细胞活性及细胞代谢均随着球直径的增加而减弱.在神经球平均直径为100μm左右,培养基中葡萄糖、谷氨酰胺浓度分别为36.38 mmol/L和1.33 mmol/L时,球心细胞生长开始受到抑制;而当神经球直径主体分布于100-150μm,培养基中葡萄糖浓度为31.11 mmol/L、谷氨酰胺浓度为1.15 mmol/L时,神经球内部细胞死亡数开始大于增殖数,同时细胞代谢降低到很低水平.表明随着神经球直径的增加而造成的传质困难对于其内部细胞的活性和代谢有重要影响. 展开更多

关键词 神经干细胞 神经球 代谢 传质

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川续断皂苷Ⅵ含药血清对神经干细胞增殖分化的影响 被引量：5

13

作者 刘星 李丽娟 +4 位作者 彭莉萍 魏妮娜 刘银花 许佳伟 黎善铭 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1467-1473,共7页

目的探讨川续断皂苷Ⅵ含药血清对神经干细胞增殖分化的影响。方法体外建立神经干细胞培养体系,川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中、低浓度)处理神经干细胞72 h。CCK-8和BrdU法检测NSCs增殖;细胞免疫荧光检测NSCs分化;DAPI染色检测NSCs的凋亡;... 目的探讨川续断皂苷Ⅵ含药血清对神经干细胞增殖分化的影响。方法体外建立神经干细胞培养体系,川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中、低浓度)处理神经干细胞72 h。CCK-8和BrdU法检测NSCs增殖;细胞免疫荧光检测NSCs分化;DAPI染色检测NSCs的凋亡;RT-PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白表达。结果川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中、低浓度)对NSCs增殖无影响(P>0.05)。川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中浓度)促进神经干细胞分化(P<0.05),促进Notch1、Tublin、caspase-3 mRNA表达(P<0.05),抑制Jagged1、Hes1、Sox2,Pax6 mRNA表达(P<0.05,P<0.01);高浓度川续断皂苷Ⅵ含药血清促进神经干细胞凋亡(P<0.05),促进GFAP mRNA表达(P<0.05),抑制Ngn1 mRNA表达(P<0.01)。中浓度川续断皂苷Ⅵ含药血清促进Tublin蛋白及Ngn1 mRNA表达,抑制GFAP、Jagged1蛋白及GFAP mRNA表达(P<0.05,P<0.01),而对caspase-3蛋白表达无影响。结论中浓度川续断皂苷Ⅵ含药血清通过抑制Jagged1的表达,阻断Notch信号通路,诱导NSCs向神经元方向分化。 展开更多

关键词 川续断皂苷Ⅵ 含药血清 神经干细胞 增殖 分化

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一种获得神经干细胞单细胞的新方法 被引量：5

14

作者 刘佳梅 陈东 孟晓婷 《中国康复理论与实践》 CSCD 2004年第1期19-20,共2页

目的寻找一种有效分离神经干细胞球以获得单个神经干细胞的方法。方法应用不同浓度的胰蛋白酶、EDTA及组织培养用酵素 (Dispase)分别对神经干细胞进行消化 ,免疫组织化学技术鉴定其分化。 结果应用Dispase消化神经球 ,可以得到大量单个... 目的寻找一种有效分离神经干细胞球以获得单个神经干细胞的方法。方法应用不同浓度的胰蛋白酶、EDTA及组织培养用酵素 (Dispase)分别对神经干细胞进行消化 ,免疫组织化学技术鉴定其分化。 结果应用Dispase消化神经球 ,可以得到大量单个神经干细胞 ,且浓度以 2 0 0 0U/ml为佳 ;而应用 0 2 5 %胰蛋白酶、0 2 5 %胰蛋白酶 /0 0 2 %EDTA混合液消化神经干细胞球则得不到大量状态较好的单细胞。结论应用Dispase消化神经干细胞球是一种理想的获得神经干细胞单细胞的好方法。 展开更多

关键词 神经干细胞 组织培养用酵素(Dispase) 分化

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星形胶质细胞诱导神经干细胞定向分化试验研究(英文) 被引量：3

15

作者 周向阳 邓永文 +5 位作者 方芳 伍军 李茗初 高峻玮 柳浩然 方加胜 《中国医学工程》 2005年第3期228-231,共4页

目的研究新生SD大鼠星形胶质细胞培养上清液对神经干细胞(neuralstemcells,NSCS)体外定向分化的影响,探讨神经干细胞分化条件。方法收集新生和成年SD大鼠星形胶质细胞培养的上清液,以1∶3比例同DMEM/F12培基混合,分别对胎鼠来源的神经... 目的研究新生SD大鼠星形胶质细胞培养上清液对神经干细胞(neuralstemcells,NSCS)体外定向分化的影响,探讨神经干细胞分化条件。方法收集新生和成年SD大鼠星形胶质细胞培养的上清液,以1∶3比例同DMEM/F12培基混合,分别对胎鼠来源的神经干细胞进行诱导分化,倒置相差显微境下观察细胞的生长情况,并采用免疫荧光检测方法对分化细胞鉴定和计数。结果新生鼠星形胶质细胞培养上清液与DMEM/F12的混合培基诱导神经干细胞分化为神经元的比例明显提高。结论新生鼠星形神经胶质细胞能促使神经干细胞向神经元方向分化。 展开更多

关键词 星形胶质细胞 神经干细胞 nscs 细胞培养 诱导分化 神经元

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体外三步法诱导胚胎干细胞定向生成神经干细胞的实验研究 被引量：2

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作者 周玉峰 方峰 +5 位作者 付劲蓉 董永绥 李革 甄宏 易文龙 向稚丹 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2005年第7期398-402,共5页

目的探讨体外定向诱导胚胎干细胞(embryonicstemcells,ESCs)生成高纯度神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)的方法。方法模拟体内神经细胞分化发育的不同阶段及微环境,以脑星形胶质细胞为支持细胞,用全反式维甲酸(All-transretinoicacid,A... 目的探讨体外定向诱导胚胎干细胞(embryonicstemcells,ESCs)生成高纯度神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)的方法。方法模拟体内神经细胞分化发育的不同阶段及微环境,以脑星形胶质细胞为支持细胞,用全反式维甲酸(All-transretinoicacid,ATRA)等分三阶段诱导ESCs定向生成NSCs。形态学观察及畸胎瘤形成试验对ESCs的全能性进行鉴定;形态学观察结合免疫组织化学、流式细胞术和RT-PCR检测胚胎干细胞标志OCT-4和神经干细胞标志Nestin蛋白和(或)基因表达对诱导全过程进行动态监测;NSCs分化试验对所诱导的NSCs的分化潜能进行检测。结果⑴体外培养的小鼠ESC-D3细胞在胚胎成纤维饲养层细胞上连续传代培养,仍保持向三胚层分化的能力;⑵随着诱导的进行,OCT-4表达逐渐减弱并消失,而Nestin表达逐渐增强,经三步法最终可诱导形成纯度高达90%以上的Nestin阳性细胞;⑶所诱导生成的细胞在NSCs选择性培养基中反复传代,仍表现为Nestin阳性和具有生成神经球的能力,在含血清培养基中可进一步分化为神经元、星形神经胶质细胞和少突胶质细胞。结论采用星形胶质细胞作为诱导基质,模拟体内神经分化过程的三步诱导法,可诱导ESCs生成较高纯度的NSCs,并能较好维持其干细胞特性和具有进一步分化的能力。 展开更多

关键词 神经干细胞 胚胎干细胞 三步法 实验研究 Nestin蛋白 RT-PCR检测 NESTIN表达 星形神经胶质细胞 脑星形胶质细胞 nscs cells 形态学观察 体外定向诱导 全反式维甲酸 ESCs 免疫组织化学 选择性培养基 含血清培养基 少突胶质细胞

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神经生长因子对穹窿海马伞切割后海马自体神经干细胞增殖和向神经元分化的影响 被引量：4

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作者 董传明 金国华 +4 位作者 秦建兵 田美玲 邹琳清 谭雪锋 朱蕙霞 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期642-646,共5页

目的探讨切割穹窿海马伞及脑室给予神经生长因子(NGF)后,对大鼠海马自体神经干细胞增殖和分化为神经元的影响。方法12只SD大鼠,随机分成给药组和对照组,每组6只,切割右侧穹窿海马伞,两组切割后即时及第2d、4d向侧脑室分别注射NGF和人工... 目的探讨切割穹窿海马伞及脑室给予神经生长因子(NGF)后,对大鼠海马自体神经干细胞增殖和分化为神经元的影响。方法12只SD大鼠,随机分成给药组和对照组,每组6只,切割右侧穹窿海马伞,两组切割后即时及第2d、4d向侧脑室分别注射NGF和人工脑脊液,并在术后第3～7d每日腹腔注射2次BrdU。于术后28d灌注取脑、冷冻切片,行BrdU/NF-200免疫荧光双标检测。结果海马齿状回内BrdU阳性细胞数,给药组和对照组切割侧明显多于正常侧,给药组切割侧和正常侧分别多于对照组切割侧和正常侧;海马齿状回内的BrdU/NF-200双标神经元数,给药组切割侧最多,给药组正常侧和对照组切割侧较少,而对照组正常侧则无。结论切割穹窿海马伞后,可致大鼠海马齿状回自体神经干细胞增殖加快并向神经元分化,脑室施加NGF可促进其增殖和分化。 展开更多

关键词 神经生长因子 穹窿海马伞切割 海马 神经干细胞 增殖 分化 免疫荧光 大鼠

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缺氧培养对大鼠神经干细胞体外增殖影响及其机制的研究 被引量：4

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作者 孙崇毅 姚猛 +2 位作者 刘庆鹏 吉光荣 王岩松 《现代生物医学进展》 CAS 2006年第11期18-19,66,共3页

目的:研究应用缺氧对体外培养的大鼠神经干细胞增殖的影响。方法:将细胞分为4小时缺氧组、12小时缺氧组、促红细胞生成素(EPO)中和抗体组、IgG组以及对照组,测定大鼠神经干细胞经缺氧培养后的各组细胞克隆形成率以及EPO的表达变化。结果... 目的:研究应用缺氧对体外培养的大鼠神经干细胞增殖的影响。方法:将细胞分为4小时缺氧组、12小时缺氧组、促红细胞生成素(EPO)中和抗体组、IgG组以及对照组,测定大鼠神经干细胞经缺氧培养后的各组细胞克隆形成率以及EPO的表达变化。结果:单细胞培养条件下,与对照组相比,4小时缺氧组和IgG组克隆形成率明显增高;中和抗体组无明显变化;12小时组克隆形成率降低,但无统计学意义。缺氧4小时后,EPO蛋白在预处理后即刻出现表达,4h达高峰,8h仍有部分表达。结论:短时间缺氧可以促进神经干细胞增殖,长时间缺氧则作用相反。缺氧对NSCs增殖作用的影响可能是由EPO介导产生。 展开更多

关键词 缺氧 神经干细胞 促红细胞生成素

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丹参酮ⅡA促进氧糖剥夺再灌注神经干细胞的增殖作用 被引量：2

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作者 武爽 吴晓丽 +4 位作者 曹玉成 孙景波 黄燕 乔利军 程骁 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期27-32,共6页

目的观察丹参酮ⅡA对原代培养的小鼠神经干细胞(NSCs)在氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤条件下增殖作用的影响。方法对原代小鼠NSCs进行培养、鉴定;采用CCK-8法测定细胞活力;通过检测神经球细胞直径来观察NSCs的增殖情况;对OGD/R损伤条件进... 目的观察丹参酮ⅡA对原代培养的小鼠神经干细胞(NSCs)在氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤条件下增殖作用的影响。方法对原代小鼠NSCs进行培养、鉴定;采用CCK-8法测定细胞活力;通过检测神经球细胞直径来观察NSCs的增殖情况;对OGD/R损伤条件进行筛选,建立OGD/R NSCs模型。结果与溶剂对照组相比,0.03、0.1、0.3、1、3、10、30μmol·L^(-1)丹参酮ⅡA干预48 h后,NSCs的细胞活力显著提高(P<0.01);0.3、1、3μmol·L^(-1)丹参酮ⅡA干预48 h后,NSCs神经球细胞透光性良好,神经球细胞直径明显增大(P<0.05,P<0.01)。NSCs糖氧剥夺4 h再灌注后的细胞活力介于40%~60%之间,故选择OGD/R(4 h/20 h)作为NSCs的OGD/R损伤条件。与溶剂对照组比较,模型组NSCs神经球细胞直径明显缩小、细胞活力明显下降(P<0.01);与模型组比较,3μmol·L^(-1)丹参酮ⅡA干预48 h后,NSCs神经球细胞直径明显增大、细胞活力明显升高(P<0.01)。结论丹参酮ⅡA可促进正常条件及OGD/R损伤条件下NSCs的增殖及其细胞活力,丹参酮ⅡA对脑缺血损伤的保护作用机制值得进一步探讨。 展开更多

关键词 丹参酮ⅡA 神经干细胞(nscs) 氧糖剥夺再灌注(OGD/R) 细胞活力 增殖

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胚胎神经干细胞对脑损伤治疗作用的实验研究 被引量：3

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作者 高伟东 李晓冬 《解剖学研究》 CAS 2010年第1期39-42,F0003,F0004,共6页

目的近年来,脑损伤的发病率呈不断上升的趋势,而有关脑损伤后的修复机制尚不完全清楚。本研究旨在探讨胚胎神经干细胞(NSCs)在脑损伤修复过程中的作用,为临床利用胚胎NSCs治疗脑损伤提供理论依据。方法通过冷冻伤的方法建立小鼠颅脑损... 目的近年来,脑损伤的发病率呈不断上升的趋势,而有关脑损伤后的修复机制尚不完全清楚。本研究旨在探讨胚胎神经干细胞(NSCs)在脑损伤修复过程中的作用,为临床利用胚胎NSCs治疗脑损伤提供理论依据。方法通过冷冻伤的方法建立小鼠颅脑损伤模型,体外分离、培养和纯化E14d的绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠胚胎神经干细胞,对NSCs进行诱导分化,通过眶后静脉丛将NSCs移植到脑损伤模型鼠体内,通过转轮式疲劳实验等多种方法进行神经功能评估,并通过形态学方法检测移植的NSCs在鼠脑组织的生长及分布情况。结果采用脑冷冻伤模型,致小鼠脑损伤导致了小鼠行为学和病理学改变。体外实验证明分离、培养并纯化的NSCs具有自我增殖能力,并且可以分化为神经元和星形胶质细胞。移植后的NSCs不仅可以与小鼠脑组织较好的整合,并可定向迁移到损伤部位,替代损伤脑组织。结论外源性NSCs可以在脑损伤小鼠脑内存活,并能促进脑损伤小鼠的神经功能恢复。 展开更多

关键词 神经干细胞 脑损伤 细胞移植

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